4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.2162—4.1.2176—07

Издание официальное

7./.5. Очистка этилового эфира уксусной кислоты.

Этиловый эфир уксусной кислоты промывают равным объемом 5% раствора соды, сушат над безводным хлористым кальцием (Беккер г.и др. Органикум, Москва 1979 г., с.372), кипятят в течение 1 часа с прокаленным сульфатом магния и затем перегоняют.

7.1.6. Очистка бидиетшлированнои воды

Бидистиллят кипятят в течение б часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 r/л, и затем перегоняют.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа.

7.2. L Приготовление растворов для жидкостной хроматографии.

Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанкые ацетонитрил и очищенную воду.

7.2.1. 1. Приготовление 3,1 мМраствора ортофосфорной кислоты.

В мерную колбу объемом 2,0 дм³ помещают 500 см³ очищенной воды и 0,42 см³ концентрированной (85%) ортофосфорной кислоты, перемешивают, доводят до метки очищенной водой и еще раз перемешивают.

7.2.1.2.    Приготовление подвижной фазы для ВЗЖХ

В плоскодонную колбу объемом I дм³ помещают 650 см³ ацетонитрила и 350 см³ 3,1 мМ раствора ортофосфорной кислоты в очищенной воде. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см³/мин в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов ва 1 минуту.

7.2.2.    Приготовление градуировочных растворов

7.2.2. L Стандартный раствор с концентрацией Фамоксадона 1,0мг/см³.

Взвешивают 100 мг Фамоксадона в мерной колбе объемом 100 см³. Навеску растворяют

в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.2.2.2.    Стандартный раствор с концентрацией Фамоксадона 10,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора Фамоксадона с концентрацией 1,0 мг/см³ отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.

7.2.2.3.    Стандартные растворы Фамоксадона с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ для построения калибровочной кривой и внесения в растительные образцы( за исключением масличных культур).

Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ и используют эти растворы для хроматографического исследования.

/хгг

7.2.2.4. Стандартные растворы Фамоксадона с концентрацией 5,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/см* для внесения в образу семян и масло подсолнечника.

Для внесения в исследуемые образцы семян и масла подсолнечника готовят растворы Фамоксадона в ацетоне. № раствора Фамоксадона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мг/см³ методом последовательного разведения ацетоном готовят растворы, содержащие 5,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/см³ Фамоксадона.

7.3.    Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Фамоксадона. в растворе устанавливают методом абсолютной калибровки по стандартным растворам с концентрациями 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³.

Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и хроматографируют в условиях п. 9.6, Проводят не менее 3 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации Фамоксадона в растворе в мкг/см³.

7.4.    Подготовка концентрирующих патронов Диапак С, Диапак С16, ДиапакАмин и колонок с Флоризилам для очистки экстрактов.

7.4.1.    Подготовка концентрирующего патрона Диапак С и Диапак Амин для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должка превышать 5 см³/мин.

Патрон Диапак-С устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 см³ смеси гексан- ацетон в соотношении 1:1 и 10 гексана. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.4.1.1.    Проверка хроматографического поведения Фамоксадона на концентрирующем патроне Диапак-С и Диапак Амин.

Из стандартного раствора Фамоксадона в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/ см³ отбирают 1 см³, помещают в круглодонную колбу объемом 100 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30°С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона, помещают на 10 секунд в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 см³ гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

П6

Исходный концентратор обмывают 10 см³ смеси гексан-ацетон в соотношении 9:1 и дву* мя порциями по 5 см³ смеси гексан-ацетон в соотношении 9:1 и последовательно вносят на патрон. Эдюаты после прохождения каждой порции собирают в отдельные концентраторы, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Фамоксадон, и объединяют их.

7.4.2.    Подготовка концентрирующего патрона Диапак-С16 для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через

патрон не должна превышать 5 см³/мин. При работе на патронах Диапак-С 16 используют очищенную воду.

Патрон Диапак-С 16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1 и 20 см³ воды. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!

7.4.2.1.    Проверка хроматографического поведения Фамоксадона на концентрирующем патроне Диапак-Cl 6.

Из стандартного раствора Фамоксадона в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/ см³, отбирают 1 см³, помещают в круглодонную колбу объемом 100 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30°С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетонитрила и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 см³ воды, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

Исходный концентратор обмывают 10 см³ смеси ацетоншрил-вода в соотношении 1:4 и смесь вносят на патрон. Элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

Исходный концентратор вновь обмывают 10 см³ смеси ацетоншрил-вода в соотношении 1:2 и смесь вносят на патрон. Элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют.

Тот же концентратор обмывают двумя порциями по 10 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1 и вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Фамоксадон, и объединяют их.

7.4.3.    Подготовка колонки с Флоризмом для очистки экстракта.

7.4.3.1.    Подготовка Флоризила.

ilf

Для получения стандартизованного сорбента Флоризил выдерживают в сушильном шкафу при температуре +120°С в течение 4 часов, а затем при постоянном перемешивании в стеклянной колбе с притертой пробкой к 95 г Флоризила (60-100 меш, Merck) добавляют постепенно 5 г очищенной воды.

7.4.3.2.    Подготовка колонки с Флоризшом.

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помешают 4 г стандартизованного Флорнзила. Сверху на Флоризил насыпают 1 г безводного сульфата натрия. Перед использованием колонку промывают 10 см³ смеси гексан-этилацетат в соотношении 3:1, избыток растворителя с колонки удаляют путем продавливания воздуха. Затем колонку дополнительно промывают 10 см³ гексана. Перед внесением образца колонку увлажняют 5 см³ гексана.

7.4.3.3.    Проверка хроматографического поведения Фамоксадона на колонке.

В круглодонную колбу объемом 50 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора Фамоксадона с концентрацией 1 мкг/см³ и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С, Сухой остаток растворяют в 0,5 см³ этилацетата, затем добавляют в колбу 5 см³ гексана и полученную смесь вносят на колонку. Колонку промывают 15 см³ смеси гексан-этилацетат 10:1 и элюат отбрасывают. Фамоксадон элюируют с колонки последовательно 6-ю порциями объемом 5 см³ смеси гексана с этилацетагом в соотношения 3:1, каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С

Сухой остаток после упаривания каждой фракции растворяют в 1 см³ ацетонитрила и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: Хроматографическое поведение Фамоксадона на колонке обязательно проверяют при отработке методики, и каждый раз при использовании новой партии Флоризила.

7.5. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии.

Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с лредколонкой Symmetry Cl 8 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25^СС и скорости потока подвижной фазы 1 см³/мин 3-4 часа.

8. ОТБОР ПРОБ И ХРАНЕНИЕ.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (Ха 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 1725-85 «Томаты свежие. ТУ», ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. ТУ», ГОСТ 22391-89 «Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках», ГОСТ 1129-93 «Масло подсолнечника. ТУ», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правило приемки и методы отбора проб».

Пробы томатов, винограда и зеленой массы подсолнечника хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0-4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С.

ум

Пробы семян подсолнечника подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов не более 6 месяцев. Влажные семена замораживают и хранят в морозильной камере при -18°С до 1 года.

Пробы масла подсолнечника хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре О- 4°С в течение 10 суток.

9. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЙ.

9.1 Л годы винограда.

9.1.1.    Экстракция.

Образец измельченных ягод винограда массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 см³, прибавляют 30 см³ ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 минут. Затем колбу выдерживают 5 минут на механическом встряхивателе при комнатной температуре, экстракт фильтруют в плоскодонную колбу объемом 250 см³ с 5 г сухого хлорида натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза в тех же условиях, используя по 30 см³ ацетонитрила. Экстракты объединяют в плоскодонной колбе объемом 250 см³ с 5 г сухого хлорида натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 минут, переносят в делительную воронку объемом 250 см³ и отбрасывают нижний водный слой.

9.1.2.    Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся раствори-

телей.

К адетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 30 см³ гексана и интенсивно встряхивают воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой помещают в химический стакан объемом 150 см³, верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще двумя порциями гексана объемом по 30 см³. Гексан отбрасывают.

Ацетонитрильный экстракт (нижний слой) собирают в концешратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Осушитель затем обмывают 10 см³ ацетонитрила, смыв объединяют с основным экстрактом в концентраторе и ацетонитрильный экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С. Далее проводят очистку на концентрирующих патронах.

9.1.3.    Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак С16.

Сухой остаток , полученный по п.9.1.2., растворяют в 1 см³ ацетонитрила, добавляют 9 см³ воды и наносят на патрон Диапак С 16. Элюат отбрасывают

Концентратор обмывают 10 см³ смеси ацетонитрил : вода в соотношении 1:4, смесь наносят на патрон и элюат отбрасывают.

Обмывают концентратор 20 см³ смеси ацетонитрил : вода в соотношении 1:1, смесь наносят на латрои и элюат собирают в чистый концентратор. Жидкость выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

9. 1.4. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак С,

Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона, помещают на 10 секунд в ультразвуковую ванну и обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 см³ гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор наносят на патрон Диапак С. Элюат собирают в чистый концентратор. Концентратор еще раз тщательно обмывают двумя порциями смеси гексан-ацетон в соотношении 9:1 по 10 и 5 см³ и элюат также вносят на патрон. Элюахы собирают, объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30° С,

Сухой остаток растворяют в 4 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

После хроматографирования каждой пробы следует промывать хроматографическую колонку в ВЭЖХ-системе не менее 10 минут.

9.2.    Плоды томата,

9.2J. Экстракция.

Образец измельченных плодов томата массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 см³, прибавляют 30 см³ ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 минут. Затем колбу выдерживают 5 минут на механическом встряхивателе при комнатной температуре, фильтруют в плоскодонную колбу объемом 250 см³ с 5 г сухого хлорида натрия. Далее экстракцию проводят как описано в п. 9.1.1 (Ягоды винограда).

9.2.2.    Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Очистку экстракта перераспределением проводят как описано в п 9.1.2.

9.2.3.    Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Амин и Диапак С16.

Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона, помещают на 10 секунд в ультразвуковую

ванну и обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 см³ гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон Диапак Амин. Концентратор тщательно обмывают двумя порциями смеси гексан-ацетон в соотношении 9:1 по 10 и 5 см³ и также вносят на патрон. Элюаты собирают, объединяют, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30° С.

Сухой остаток , полученный по п.9 Л .2., растворяют в 1 см³ ацетонитрила, добавляют 9 см³ воды и наносят на патрон Диапак С16. Элюат отбрасывают.

Концентратор обмывают 10 см³ смеси ацетонитрил: вода в соотношении 1:4, смесь наносят на патрон и элюат отбрасывают.

SfP

Концентратор еще раз обмывают 10 см³ смеси ацетонитрил : вода в соотношении 1 : 2, смесь наносят на патрон и элюат отбрасывают.

Обмывают концентратор 20 см³ смеси ацетонитрил ; вода в соотношении 1:1, смесь наносят на патрон и элюат собирают в чистый концентратор. Жидкость выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

Сухой остаток растворяют в 4 см³ ацетонитрила и аликвоту 20 мм³ вводят в хроматограф.

После хроматографирования каждой пробы следует промывать хроматографическую колонку в ВЭЖХ-системе не менее 10 минут.

9.5. Семена подсолнечника.

9.3. L Экстракция.

Образец измельченных семян подсолнечника массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 см³, прибавляют 75 см³ смеси ацетонитрила с ацетоном в соотношении 9:3 и помещают в ультразвуковую ванну на 10 минут. Затем колбу выдерживают 5 минут на механическом встряхивателе при комнатной температуре и фильтруют в концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя по 75 см³ смеси растворителей. Экстракты объединяют в концентраторе и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

9.3.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешиеающихея растворителей.

К маслянистому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.3.1., прибавляют 20 см³ гексана, обмывают стенки колбы и переносят смыв в сухую делительную воронку объемом 250 см³. Концентратор обмывают еще двумя порциями гексана объемом по 20 и 10 см³ и объединяют все смывы в делительной воронке.

Фамоксадон экстрагируют из гексанового раствора тремя порциями ацетонитрила объемом по 20 см³. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Гексан отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

Маслянистый остаток растворяют в 50 см³ гексана, переносят в сухую делительную воронку объемом 250 ем³ и экстрагируют Фамоксадон тремя порциями ацетонитрила объемом по 20 см³, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия толщиной 1 см. Гексан отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С,

9.3.3.    Очистка экстракта на колонках с Флоризилом.

Сухой остаток , полученный по п.9.3.2., растворяют в 0,5 см³ зтилацетата, обмывая стенки концентратора, затем в концентратор прибавляют 5 мл гексана, тщательно перемешивают и полученную смесь вносят на колонку. Колонку промывают 15 см³ смеси гексан-этилацетат в соотношении 10:1 и элюат отбрасывают. Фамоксат элюируют с колонки 20 см³ смеси гексан-этилацетат в соотношении 3:1, собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 30°С.

9.3.4.    Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С иДиапак С16.

Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетонитрила, добавляют 9 см³ воды и очищают на патроне Диапак С 16, как указано в п.9.1.3. После очистки элюат выпаривают досуха,, растворяют в 1 см³ ацетонитрила, добавляют 9 см³ воды и еще раз очищают на патроне Диапак С. После очистки элюат выпаривают досуха, растворяют в 5 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

9.4.    Масло подсолнечника.

9.4.1.    Экстракция.

Образец масла подсолнечника массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 см³, прибавляют 100 см³ гексана и 5 г безводного сульфата натрия и помещают на 15 минут на механический встряхиватель. Затем гексаново-масляный раствор декантируют в делительную воронку объемом 250 см³, осушитель оставляют в колбе и отбрасывают. Из гексана Фамоксадон экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 см³, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия толщиной 1 см. Экстракты объединяют в концентраторе и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

9.4.2.    Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Маслянистый остаток, полученный по п. 9.4.1растворяют в 50 см³ гексана, переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Из гексановой фазы Фамоксадон экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 20 см³, встряхивая делительную воронку по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия толщиной 1 см. Гексан отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

9.4.3.    Очистка экстракта на колонках с Флоризтом и на концентрирующих патронах Диапак С иДиапак С16

Маслянистый остаток, полученный по п.9.4.2., растворяют в 0,5 см³ зтилацетата, добавляют 5 см³ гексана и очищают на колонках с Флоризилом, как указано в п.9.3,3. После очистви

элюат выпаривают досуха, растворяют в 1 см³ ацетонитрила, добавляют 9 см³ воды и очищают на патроне Диапак С 16, как указано в п.9.1.3. После очистки элюат выпаривают досуха, растворяют в 1 см³ ацетонитрила, добавляют 9 см³ воды и еще раз очищают на патроне Диапак С 16 как указано в п.7.5.2.2. После очистки элюат выпаривают досуха, растворяют в 5 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

Я 5. Зеленая масса подсолнечника,

9.5.1.    Экстракция.

Образец измельченной зеленой массы подсолнечника массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 минут. Затем колбу выдерживают 5 минут на механическом встряхивателе при комнатной температуре и фильтруют в плоскодонную колбу объемом 250 см³ с 5 г сухого хлорида натрия. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя по 50 см³ ацетонитрила. Экстракты объединяют в плоскодонной колбе объемом 250 см³ с 5 г сухого хлорида натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 минут. Затем экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 см³ и отбрасывают нижний водный слой.

9.5.2.    Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 50 см³ гексана и интенсивно встряхивают воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой помещают в химический стакан объемом 150 см³, верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом 50 см³. Гексан отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт (нижний слой) собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Осушитель затем обмывают 10 см³ ацетонитрила, смыв объединяют с основным экстрактом и ацетонитрильный экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

К сухому остатку в концентраторе прибавляют 40 см³ хлористого метилена, обмывают стенки концентратора и переносят смыв в делительную воронку объемом 500 см³. Затем концентратор обмывают еще двумя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³ и все смывы объединяют в делительной воронке.

Туда же прибавляют 100 см³ дистиллированной воды, 10 см³ 0,1% раствора перманганата калия и встряхивают воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой хлористого метилена помещают в химический стакан объемом 150 см³, верхний водный слой отбрасывают.

Хлористый метилен из химического стакана переносят в чистую делительную воронку, прибавляют 100 см³ дистиллированной воды, 10 см³ 0,1% раствора перманганата калия и повто-

ряют процедуру промывки. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Верхний водный слой отбрасывают. Осушитель обмывают 10 см³ хлористого метилена, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

9.5,3. Очистка экстракта па колонках с Флоризилом и па концентрирующих патронах ДиапакС J6.

Сухой остаток, полученный по п.9.5.2., растворяют в 0,5 см³ этилацетата, добавляют 5 см³ гексана и очищают на колонках с Флоризилом, как указано в п.9.3.3. После очистки элюат выпаривают досуха, растворяют в 1 см³ ацетонитрила, добавляют 9 см³ воды и очищают на патроне Диапак СI б, как указано в n.9.1.3. После очистки элюагг выпаривают досуха, растворяют в 5 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

После хроматографирования каждой пробы следует промывать колонку не менее 12 минут.

9.6. Условия хроматографирования.

Хроматограф “Waters” или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.

Колонка стальная Symmetry Shield RP18,4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм.

Предколонка стальная Symmetry С18,3,9 мм х 2 см, зернением 5 мкм Температура колонки: 25°С.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 3,1 мМ ортофосфорная кислота в соотношении 65:35 Длина волны 245 нм

Время удерживания Фамоксадона 10,6-11,07 мин.

Чувствительность 0,003 ед. оптической плотности на шкалу.

Объем вводимой пробы 20 мм³.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2-20 нг

10, ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ.

Содержание Фамоксадона рассчитывают по формуле:

Snp•А•V

-хР

100 • Sct * га

где    X - содержание Фамоксадона в пробе, мг/кг или мг/дм³;

Sct - высота (площадь) пика стандарта, мм;

Содержание

1.    Определение остаточных количеств 2,4-Д в масле кукурузы методом капиллярной

газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2162-07..................................................4

2.    Определение остаточных количеств галоксифопа-р-метила и галохсифопа-р в воде,

галоксифопа-р в почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, корнеплодах сахарной, кормовой и столовой свеклы, семенах и масле льна, рапса, сои, подсолнечника методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2163-07.................17

3.    Определение остаточных количеств дифеноконазола в картофеле, моркови и томатах

методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2164-07....................42

4.    Определение остаточных количеств зета-циперметрина в семенах рапса, масле рапса (горчицы) методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2165-07............................................................................................56

5.    Определение остаточных количеств ипродиона в огурцах и томатах методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2166-07...........................69

6.    Определение остаточных количеств каптана и фолпета в воде, почве, каптана в

яблоках, фолпета в клубнях картофеля и винограде методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2167-07.......................................................................83

7.    Определение остаточных количеств клопиралида в капусте, семенах и масле

рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2168-07...... 99

8.    Определение остаточных количеств метамитрона в ботве и корнеплодах столовой

и кормовой свеклы методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2169-07...........113

9.    Определение остаточных количеств лрометрина в семенах кориандра методом

газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2170-07....... 125

10.    Определение остаточных количеств римсульфурона в клубнях картофеля

методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2171-07..............138

11.    Определение остаточных количеств тау-флувалината в зерне и соломе зерновых культур, в ягодах и соке винограда, зеленой массе пастбищных трав, семенах и масле рапса, сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2172-07...........................................................................................147

12.    Определение остаточных количеств тиаметоксама в луке, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2173-07...........................................................................................163

13.    Определение остаточных количеств фамоксадона в плодах томатов, ягодах

винограда, зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2174-07..........................178

14.    Определение остаточных количеств цимоксанила в томатах, винограде,

зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2175-07.....................................................................198

15.    Измерение концентраций 2,4 D этилгексилозого эфира в атмосферном воздухе

населенных мест методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2176-07.............212

s

Snp - высота (площадь) пика образца, мм;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; ш - масса анализируемого образца, г (см³);

Р - содержание Фамоксадона в аналитическом стандарте, %.

11. проверка ттмлтост результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2’[Х1-Ха1»100 <r (1)

(Х,+Х₂)

где Х|, Х₂- результаты параллельных определений, мг/кг; г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом г = 2.8 сг_г.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предел повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результат анализа представляют в виде:

(Х± Д) мг/кг при вероятности Р- 0.95,

где АТ- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; Д - храница абсолютной погрешности, мг/кг;

Д “5*Х/100,

5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: агсодержание вещества в пробе менее 0.05мг/кг»*

- 0,05 мг/кг - предел обнаружения.

13. КОШТОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13Л. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из храдуировочных растворов.

/ЯГ

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный вран Российской федерации.

Руководитель федеральной службы

Д Г.Г. Онищенко

Определение остаточных количеств Фамоксадона в плодах томатов, ягодах винограда, зеленой массе, семенах и масле подсол* нечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК4Д.г//М)7

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Фамоксадона в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг в плодах томатов и ягодах винограда и в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг в зеленой массе, семенах и масле подсолнечника.

Фирма производитель: Дюпон де Немур Интернэшнл С.А.

Торговое название: Такое (смесевой препарат с Цимоксанилом)

Название действующего вещества по ИСО: Фамоксадон

Название действующего вещества по ИЮПАК: 3-анилино-5-метил-5-(4-феноксифе1гал)-2₁4* оксазолидиндион.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C22H1&N2O4.

Молекулярная масса: 374,4.

Химически чистый Фамоксадон представляет собой светлый кремовый порошок. Давление паров: 6,4х 1 О*⁷ Па при 20° С    _Q

Температура плавления: 141,3-142,3 °С.

Коэффициент распределения н-октанол-вода: 4,8 (pH 5); 4,65 (pH 7); 5,55 (pH 9).

Растворимость в воде зависит от кислотности среды и составляет 243x10 * г/дм³ при pH 5; И 1x10^е6 г/дм³ при pH 7» при pH 9 вещество быстро гидролизуется.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³ при 20°С); ацетон - 274, ацетонитрил -125, гексан - 0,0476, дихлорметан - 239, метанол - 10, толуол - 13,3, этилацетат - 124, н-октан о л -1,78.

Фамоксадон нестабилен в водных растворах. Гидролиз наблюдается в диапазоне pH 5-9, и время полураспада составляет 41 день, 2 дня и 93 минуты при pH 5,0; 7,0 и 9,0 соответственно. Период полураспада при фотолизе составляет 4,6 дней и 3,9 часов при pH 5 и 7,75 соответственно. В лабораторной почве период полуразложения DT50 составлял 6 дней в аэробных условиях и 28 - в анаэробных.

Краткая токсикологическая характеристика.

Фамоксадон относится к малоопасным веществам по острой пероральной токсичности (ЛД50 крысы - >5000 мг/кг), по дермальной (ЛД50 крысы - >2000 мг/кг) токсичности, но к умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛД50 крысы >5300 мг/м³). Не обладает геноток-сичностью и онкогенными свойствами, не оказывает влияния на репродуктивную функцию.

В винограде, томатах и картофеле остаточные количества Фамоксадона обнаруживаются до сбора урожая, в клубнях картофеля остатков не было обнаружено.

В России для Фамоксадона установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД 0,01мг/кг массы тела человека; ОДК в почве - 0,1 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,01 (общ.) мг/дм³; МДУ в картофеле - 0,05 мг/кг. Для плодов томатов, ягод винограда, зерна хлебных злаков, семян и масла подсолнечника МДУ не установлен.

Область применения: Фамоксадон - фунгицид контактного действия из группы оксазо-лидиндиоиов. Является ингибитором митохондриального дыхания, высокоэффективен против широкого спектра патогенных грибов с рекомендуемой нормой расхода 50-200 г/га.

Зарегистрирован в России компанией Дюпон дс Немур Интернэшнл С, А. под торговым названием Танос (смесевой препарат с Цимоксанилом) для борьбы против фитофтороза и аль-тернариоза на картофеле с нормой расхода 0,6 кг/га, также разрешено применение препарата в личных подсобных хозяйствах против фитофтороза и альтернариоза на картофеле с нормой расхода 15г/10л воды.

у*?

I- МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕХАРАКТЕРИСТИт

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р ** 0,95 не превышает значений, приведенных в Таблице I для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица U

Метрологические параметры для Фамоксадона

Анализируе мьгй объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±5, % Р-0,95 Стандартное отклонение повторяемости, ог,% Предел повторяемости, г, % Предел воспроизводимости, R, % Плоды томатов 0,02-0,1 100 5,0 14,0 20,0 0,1-0,2 50 3,5 9,8 11,7 Ягоды винограда 0,02-0,1 50 5,0 14,0 20,0 0,1-ОД 25 4,5 12,6 15,0 Семена подсолиеч ника 0,05-0,1 50 5,5 15,4 18,3 0,1-0,5 25 4,0 11,2 13,4 Масло подсолнеч ника 0,05-6,1 50 6,0 16,8 26,8 0,1-0,5 25 5,0 14,0 20,0 Зеленая масса подсолнеч ника 0,05-6,1 50 5,5 15,4 18,3 0,1-0,5 25 4.0 U.2 13,4

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п - 20) приведены в Таблице 2.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение.

Таблица 2. доверительный интервал среднего результата для Фамоксадона

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р ™ 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, °/о Стандартное отклонение, S,% Доверительный интервал среднего результата, ±, % Плоды томатов 0,02 0,02-0,2 85,1 2,1 0,85 Ягоды винограда 0,02 0,02-0,2 85,8 2,1 0,90 Семена подсолнечника 0,05 0,05-0,5 76,4 2,8 и Масло подсолнечника 0,05 0,05-0,5 76,9 3,7 1.3 Зеленая масса подсолнечника 0,05 0,05-0,5 74,2 2,2 0.9

2. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ.

Методика основана на определении Фамоксадона методом высокоэффективной жидко* стной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистке перераспределением между двумя несмешиваюхцимкся фазами, на колонках с Флоризилом и на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диалах С, Диапак С16 и Диалак Амин).

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен и может применяться для определения остатков Фамоксадона в присутствии других пестицидов. Избирательность метода достигается за счет подбора колонки и состава подвижной фазы.

3. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ.

3.1.    Средства измерений.

Хроматограф жидкостной Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 24104-2001

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности + 0,038 г, ГОСТ 19491-74.

Колбы мерные на 25,50 и 100 см³, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50-100 мм³.

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; и 5,0 см³, ГОСТ 20292-74

Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2.    Реактивы.

Фамоксздон, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 97,7% ( фирме Дюпон де Немур Интернэшнл, С «А)

Ацетон, осч. ТУ 2633-00-4-11291058-94 Ацетонитрил осч., УФ-205 нм, ТУ 6-09-2167-84.

Вода бидистиллированная. деионизированная, ГОСТ 7602-72.

Гексан, х.ч. для спектроскопии, ТУ 6-09-06-657-84 Калий марганцовокислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75.

Кальций хлористый, х.ч. ГОСТ 4161-76.

Кислота ортофосфорная , х.ч. ГОСТ 6552-80 Метилен хлористый, х.ч. ТУ 6-09-2662-77 Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, х.ч, ГОСТ 4233-77.

Этиловый эфир уксусной кислоты, чщ.а.., ГОСТ 223000-76.

Концентрирующие патроны Днапак С (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94 Концентрирующие патроны Диапак С16 (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94 Концентрирующие патроны Диапак Амин (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94 Флорнзил для колоночной хроматографии, 60-100 меш, фирма Мерк.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

J.J. Вспомогательные устройства и материалы*

Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Диапак С, Диапак С 16 и Диапак Амин.

Аппарат для встряхивания проб АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73;

Банки с крышками для экстракции на 250 см³, полипропилен, катЛЬЗ 120-0250, NALGENE. Ванна ультразвуковая UM-4, фирма Unitra.

Воронки делительные на 250 и 500 см\ ГОСТ 25336-82Е.

Воронки конические, стеклянные диаметром 50-60 мм, ГОСТ25336-082Е Испаритель ротационный Rola vapor R110 Buchi с водяной баней В-480;

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм. Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.

Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 15 см, диаметр 1,5 см.

Колбы конические, плоскодонные на 500 и 1000 см³, ГОСТ 9737-70 Концентраторы грушевидные и круплодонные, объемом 100 и 250 см³, ГОСТ 10394-75 Насос вакуумный диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport.

Предколонка хроматографическая стальная. Symmetry С 18 ,

длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма Уотерс

Стаканы стеклянные на 100-500 см³, ГОСТ 25366-80Е.

Установка для перегонки растворителей

Фильтры бумажные, “красная лента”, ТУ-6-09-1678-86.

Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма Уотерс Допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками

4. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ.

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по гост 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГО 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

/гз

5. ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРОВ.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хромато|рафе.

К проведению проболодготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°с и относительной влажности не более 80%.

-выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ОПРЕДЕЛЕНИЙ.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей ( при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диалах С, Диалак С 3 б и Диапак Амин и колонок с Флоризилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на патронах, колонках с Флоризилом, построение калибровочной кривой.

7.2. Подготовка органических растворителей.

7.1.1.    Очистка ацетона.

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия (А.Гордон, Р.Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с.438-439)

7.1.2.    Очистка ацетонитрила.

Ацетонитрил перегоняют.

7.1.3.    Очистка гексана.

Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (АГордон, Р.Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с.441).

7.1.4.    Очистка хлористого метилена.

Хлористый метилен встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают водным раствором карбоната натрия, водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют над оксидом(У) фосфора (А.Гордон, Р.Форд Спутник химика, Москва, 1976 г., с.440)

/Sfr