МУК 4.1.2164-07
Определение остаточных количеств Дифеноконазола в картофеле, моркови и томатах методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.2162—4.1.2176—07

Издание официальное

ББК 51.21 037

037 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009 — 221с.

1.    Сборник подготовлен Федеральным научным ucirrpoM гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В. Н. Ракитский. проф. Т. В. Юдина); при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защити прав потребителей и благополучия человека. Разработчики методов указаны в каждом из них.

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г. Г. Онищенко.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

Формат 60x88/16

Тираж 100 экз.

Печ. л. 14

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, телефакс 952-50-89

Содержание

I. Определение остаточных количеств 2.4-Д в масле кукурузы методом капиллярной

газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2162-07..................................................4

2.    Определение остаточных количеств галоксифопа-р-метила и галохсифопа-р в воде,

галоксифопа-р в почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, корнеплодах сахарной, кормовой и столовой свеклы, семенах и масле льна, рапса, сои. подсолнечника методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2163-07.................17

3.    Определение остаточных количеств дифеноконазола в картофеле, моркови и томатах

методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2164-07....................42

4.    Определение остаточных количеств зста-цилерметрина в семенах рапса, масле рапса (горчицы) методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2165-07............................................................................................56

5.    Определение остаточных количеств ипродиона в огурцах и томатах методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2166-07...........................69

6.    Определение остаточных количеств калтана и фолпста в воде, почве, калтана в

яблоках, фолпета в клубнях картофеля и винограде методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2167-07 .......................................................................83

7.    Определение остаточных количеств клопиралида в капусте, семенах и масле

рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2168-07.............99

8.    Определение остаточных количеств метамитрона в ботве н корнеплодах столовой

и кормовой свеклы методом газохшдкостной хроматографии. МУК 4.1.2169-07...........113

9.    Определение остаточных количеств прометрина в семенах кориандра методом

газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2170-07................................................125

10.    Определение остаточных количеств римсульфурона в клубнях картофеля

методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2171-07..............138

11.    Определение остаточных количеств тау-флувалината о зерне и соломе зерновых культур, в ягодах и соке винограда, зеленой массе пастбищных трав, семенах и масле рапса, сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2172-07...........................................................................................147

12.    Определение остаточных количеств тиамстоксама в луке, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2173-07.......................................................................................„..163

13.    Определение остаточных количеств фамоксадона в плодах томатов, ягодах

винограда, зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.    МУК 4.1.2174-07..........................178

14.    Определение остаточных количеств цимоксанила в томатах, винограде,

зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2175-07.....................................................................198

15.    Измерение концентраций 2,4 D этилгексилоэого эфира в атмосферном воздухе

населенных мест методом газожидкостной хроматографии.    МУК 4.1.2176-07.............212

3

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,

Руководитель Федеральной службы по нала®р>УЙвфи>е защиты прав

1кя человека

Г.Г. Онищенко

штп_______

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.ХИМИЧЕСКИЕ фШтоРБГ^Т^

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИФЕНОКОНАЗОЛА В КАРТОФЕЛЕ, МОРКОВИ И ТОМАТАХ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Методические указания

МУК 4.1.24607

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации дифеноконазола в клубнях картофеля, корнеплодах морхови и плодах томата в диапазоне 0,02-0Д мгУкг.

Дмфеноконазол - действующее вещество гербицида Скор, КЭ (250 г/л), фирма производитель Сингента Кроп Протекши АГ (Швейцария).

4-хлорфениловый эфир els,/гая.г-3-хлор-4-(4'Метил-2*( IН-1,2,4-триазол-1 -илметнл)-1,3-диоксолан-2-ил]фенила (ИЮ ПАК)

1 -(2'(4-(4-хлорфенокси)-2-хлорфенил]-4-метил-1,3-диоксолан-2-илметил]-1Н-1,2,4-триазол (С. А.)

Мол. масса: 406,3

Кристаллическое вещество от белого до светло-бежевого цвета. Температура плавления:    78,6°С.    Давление    паров при 25°С: 3,3 х 10'⁵ мЛа. Коэффициент

К

распределения н-охтанол/вода: Kow log Р “ 4,20. Растворимость (г/дм³) при 25°С: этанол - 330, ацетон - 610, толуол - 490, н-гексан - < 3,4, н-октанол - 95, вода - 0,015.

Вещество устойчиво к гидролизу и фотолизу (при естественном солнечном свете DTjo“145 дней).

Дифеноконазол быстро сорбируется почвой и медленно разрушается.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - 1453, для мышей - >2000 мг/кг, острая дермальная токсичность (LDso) для кроликов - >2010 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC$o) для крыс - > 3300 мг/м³ воздуха. LC50 для рыб 0,8-1,2 мг/дм³ (96 час.). Фунгицид нетоксичен для птиц, пчел и дождевых червей.

Гигиенические регламенты применения дифспоконазола: ОДК в почве - 0,1 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,001 мг/дм³; МДУ в свехле сахарной, яблоках и грушах - 0,1 мг/кг, в зерне хлебных злаков - не допускается в пределах чувствительности метода контроля. В МДУ в картофеле, моркови и томатах - 0,1 мг/кг.

Область применения препарата

Дифеноконазол - системный фунгицид и протравитель семян. Обладает длительным защитным и лечебным действием против широкого круга растительных патогенов из классов аскомицстов, баэидиомицетов, дсйтсромицетов, включая возбудителей альтериариоза, септориоза, церкоспороза, парши, антракноза, ржавчины, мучнистой росы, а также некоторых патогенов, обитающих на семенах шпешщы, сахарной свеклы, картофеля, семечковых плодовых и овощных культур.

Зарегистрирован в России под торговым названием Скор, КЭ (250 г/л) в качестве средства борьбы с возбудителями парши, мучнистой росы н церкоспороза на посадках яблони, груши и посевах сахарной свеклы с нормой расхода препарата 0,15-0,4 кг/га. В настоящее время препарат проходит регистрационные испытания в качестве фунгицида на посадках картофеля и томатов, посевах моркови.

1. Метрологические характеристики метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (н ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р=0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Метрологические параметры

Таблица I

Анализируемый объект

Диапазон определяемых концентраций мг/дм³, мг/кг

Показатель точности (граница относительной погрешности ), ±6, % Р-0,95

Стандартное отклонение повторяемости о„ %

Предел повторяемости, г. %

Предел воспроизводимости, R, %

Картофель

от 0,02 до 0,1 вкл.

50

3,5

9.8

15.2

более 0,1 до __ 0,2

25

1.5

4,2

6.6

Морковь

от 0,02 до 0,1 вкл.

50

2.4

6,7

10.5

более 0,1 до г- °'²

25

1.7

4.8

7.5

Томаты

от 0,02 до 0,1 вкл.

50

3.4

9.5

14,5

более 0,1 до

_Р,2 , ..

25

2.2

6,2

9.5

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (п=20) приведены в таблице 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал _ среднего    результата    для    n^a20,    Р    -    0,95___

Анализируемый объект

Метрологические параметры, Р - 0,95, п - 20

Предел обнаружения, мг/кг

Диапазон

определяемых

концентраций

мг/кг

Среднее

значение

определения

%

Стандартное

отклонение,

S.%

Довери

тельный

интервал

среднего

результата,

±%

Картофель

0,02

0,02-0,2

83,0

2,7

±2.6

Морковь

0,02

0,02-0,2

83,8

3.1

±2,9

Томаты

0,02

0,02-0,2

84,5

3.5

±3,3

2. Метод измерений Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с элсюронозахватным детектором (ЭЗД). Контроль дифеноконазола в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из растительного материала ацетоном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диалак-диол.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с ЭЗД (СКБ «Хроматэк», Россия)

Весы аналитические ВЛА-200

Номер Госреестра № 14516-95 ГОСТ 24104

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,036 г

ГОСТ 7328

Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2

ГОСТ 1770

Меры массы

ГОСТ 7328

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см³

ГОСТ 29227

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 см³

ГОСТ 1770

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью

ГОСТ 1770

25, 50,100, 500 и 1000 см³ Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Дифеноконазол, аналитический стандарт фирмы Сингента (Швейцария) с

содержанием д.в. 99,5% Ацетон, чда

ГОСТ 2603-79

Вода бидистилпированная пли деионизованная н-Гексан, хч

Натрий сернокислый, безводный, хч

№

ГОСТ 7602 ТУ 6-09-3375 ГОСТ 4166

Натрий хлористый, хч    ГОСТ 4233

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч    ГОСТ    22300

Эфир диэтиловый медицинский    ГОСТ 6265

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Азот газообразный (баллон), осч    ГОСТ    9293

Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Со. (США) Воронка Бюхнера    ГОСТ 0147

Воронки делительные вместимостью 100 и 250 см³    ГОСТ 25336

Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм    ГОСТ 25336

Г омогенизатор    МВТУ    42-1505

Дефлегматор елочный    ГОСТ 9737

Колба Бунзена    ГОСТ 5614

Колбы плоскодонные вместимостью 250 см³    ГОСТ 9737

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 и 100 см³ ГОСТ 9737 Колонка кварцевая капиллярная НР-1 (типа SE-30), длиной 5 м, внутренним диаметром 0,53 мм, толщина пленки 0,88 мхм, фирма Хьюлетт-Паккард (США) или аналогичная Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 см,    ГОСТ 9737

внутренним диаметром 8-10 мм

Насос водоструйный вакуумный    ГОСТ 10696

Патроны концентрирующие Диалак-диол (0,6 г) ТУ 4215-001-05451931-94 (ЗАО “БиоХимМак СТ", Москва)

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или    ТУ 25-11 -917

ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария) Силикагель для адсорбционной хроматографии (Ведьм, Германия) I степени активности

Стаканы химические вместимостью 100 и 500 см³    ГОСТ 25336

Стекловата

Установка для перегонки растворителей

Фильтры бумажные «красная лента», обеззоленные ТУ 6-09-2678-77 или фильтры из хроматографической бумаги Ватман ЗММ Шприц для ввода образцов для газового хроматографа

к*

вместимостью 1 - 10 мм³ (Hamilton, США)

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования злсктробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 22.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исслсдователя с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допусхают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20+5)°С и относительной влажности не более 80®/с.

•    выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующих патронов Диапак-диол.

7.1.1. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

4. Требования безопасности

5. Требования к квалификации операторов

б. Условия измерений

7. Подготовка к выполнению измерепнй

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.2.    Очистка этилацеmama

Этилацстат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

7.1.3.    Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г КМлО< и 2 г К₂СОз).

7.1.4.    Очистка силикагеля

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130°С в течение 3 часов.

7.2. Подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак-диол для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при отхрьгтом кране) суспензию 3 г силикагеля I степени активности в 15 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 см³ смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек., после чего она готова к работе.

Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают последовательно с помощью медицинского шприца 10 см³ ацетона и 6 см³ смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 5 см’/мин.

7.3. Проверка хроматографического поведения дифеноконазола на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,2 см³ градуировочного раствора № 1 дифеноконазола с концентрацией 2 мкг/см³ в смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) (п. 7.5.2). Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 см³ смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему), помещая в ультразвуковую ванну не 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п.7.2. Промывают колонку 30 см³ смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек., элюат отбрасывают. Затем колонку с силикагелем промывают 40 см³ смеси гексан-этилацетат (3:7, по объему). Фракционно (по 5 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 см³ смеси гексан-ацетон (8:2, по объему), помещая в

Н

ультразвуковую ванну на I мин., и анализируют на содержание дифенохоназола по п.9.5.

7.4. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки

Капиллярную кварцевую колонку НР-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280°С и скорости газа-носителя 2 см’/мин в течение 8-10 часов.

7.5. Приготовление градуировочных растворов

7.5.1.    Исходный раствор дифеноконазола для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,010 г дифеноконазола, растворяют в 40-50 см³ смеси гексан-ацстон (8:2, по объему), доводят объем раствора этой же смесью до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение 3-х месяцев.

7.5.2.    Раствор дифеноконазола Nal для градуировки (концентрация 2 мкг/см³).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 2 см³ исходного раствора дифенохоназола с концентрацией 100 мкг/см³ (п.7.6.1.), разбавляют смесью гсксан-ацетои (8:2, по объему) до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов Na№ 2-5.

Для приготовления проб плодов и корнеплодов с внесением при оценке полноты извлечения дифеноконазола из исследуемых образцов используют ацетоновый раствор дифеноконазола с концентрацией 1 мкг/см³.

Градуировочный раствор № 1 и ацетоновый раствор дифеноконазола хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение месяца.

7.5.3.    Рабочие растворы    2-5    дифеноконазола    для    градуировки

(концентрация 0,02-0,2 мкг/см*).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 1.0, 2.0, 5.0 и 10.0 см³ градуировочного раствора № 1 дифеноконазола с концентрацией 2 мхг/см³ (п.7.5.2), доводят до метки смесью гексаи-ацетон (8:2, по объему), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы Xs№ 2-5 с концентрацией дифеноконазола 0.02, 0.04,0.1 и 0.2 мкг/см³, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.6. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ*с) от концентрации дифеноконазола в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора (п.7.5.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб ссльскохозяйсгвигной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичсств пестицидов» (Х« 2051-79 от 21.08.79 г.) и правилами, определенными ГОСТами 1725-85 «Томаты свежие», 1721-85 «Морковь столовая, свежая, заготавливаемая и поставляемая. Технические условия», 51808-2001 «Картофель свежий продовольственный, реализуемый в розничной торговой сети. Технические условия», 7176-85 «Картофель свежий, продовольственный, заготовляемый и поставляемый. Технические условия», 26832-86 «Картофель свежий для переработки на продукты питания. Технические условия», 6014-68 «Картофель свежий для переработки. Технические условия».

Пробы клубней картофеля, корнеплодов моркови и плодов томата хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре -18°С до анализа.

Перед анализом образцы измельчают ножом или на терке.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция дифеноконазола

9.1.1. Плоды, корнеплоды, клубни. Образец измельченного растительного материала массой 25 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см³, добавляют 100 см³ ацетона и гомогенизируют 3 мни. при 10000 об/мин. Раствор (с осадком) фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 50 см³ ацетона. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают 1/5 объема экстракта (эквивалентна 5 г образца), переносят в круглодонную холбу вместимостью 100 см³ и добавляют 30 см³ деионизованной воды. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

яо

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся

растворителей

Экстракт, полученный по пп. 9.1.1. и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (10-20 см³) при температуре не выше 40°С. К водному остатку прибавляют 10 см¹ деионизованной воды, 15 см³ насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 30 см³ смеси гексан-диэтиловый эфир (4:1, по объему), интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После разделения фаз верхний органичесхий слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 150 см³. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 25 см³ смеси гексан-диэтиловый эфир (4:1). Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30°С и подвергают дополнительной очистке на колонке с силикагелем по п.9.3, и концентрирующем патроне Диапак-днол по п.9.4.

9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2., растворяют в 0,9 см¹ этил ацетата, помещая в ультразвуковую ванну на I мин., добавляют 2,1 см³ гексана, перемешивают, вновь помешают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают 2 см³ смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 30 см³ смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек., элюат отбрасывают. Дифеноконазол элюируют с колонки 35 см³ смеси гексан-этилацетат (3:7, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30°С. Сухой остаток экстракта клубней картофеля и плодов томата растворяют в 5 см³ смеси гексан-ацетон (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание дифеноконазола по п. 9.5. Экстракт корнеплодов моркови дополнительно очищают с помощью концентрирующего патрона Диапак-диол.

9.4. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак-диол Сухой остаток экстракта корнеплодов моркови в круглодонной холбе, полученный по п.9.3., растворяют при помощи ультразвуковой ванны в 2 см³ смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) и переносят в подготовленный концентрирующий патрон Диапак-диол (п. 7.3.). Патрон промывают 2,5 см³ смеси гексан-ацетон (8:2, по

я

объему), этоат отбрасывают. Дифеноконазол элюируют 9 см³ смеси гексан-ацетон (7:3, по объему) в круглодонную колбу вместимостью 25 см³. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Остаток в колбе растворяют в 5 см³ смеси гексан-ацетон (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание дифеноконазола по п.9.5.

9.5. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с электронозахватным детектором с пределом детектирования не выше 8,2х10'¹⁵ г/см³.

Колонка капиллярная кварцевая HP-1 (типа SE-30), длина 5 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 0,88 мкм, фирма Хьюлетт-Паккард (США)

Температура термостата испарителя - 270°С, детектора - 320°С, термостата колонки - 245°С

Расход газов: газа-носителя (азот) - 2,5 см³/мик; поддувочного газа через детектор - 25 см³/мнн

Деление потока: 1:2

Время удерживания дифеноконазола: 3 мин.35 сек

Объем вводимой пробы: I мм³.

Линейный диапазон детектирования: 0,02 -0,4 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика дифеноконазола.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 2,0 мкг/см³, разбавляют смесью гексан-ацетон (8:2).

10. Обработка результатов анализа

Содержание дифеноконазола рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Н| х Ах V

X ®----,    где

Н₀хш

X - содержание дифеноконазола в пробе, мг/кг;

Hi - площадь пика образца, мВ*с;

Но - площадь пика стандарта, мВ*с;

А - концентрация стандартного раствора дифеноконазола, мкг/см³;

V - обьем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m • масса анализируемой часта образца ( г) / для корнеплодов, плодов, клубней

-5 г/.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2;}Х_гХ_г\'100

(*,+*,) ⁽⁾* где X), Xj- результаты параллельных определений, мг/кг (дм³); г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом г ^я 2.8о_г.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± Л) мг/кг (дм³) при вероятности Р- 0.95, гдеЛГ- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг (дм³);

Л- граница абсолютной погрешности, мг/кг (дм³);

Д =5 *Х/100,

6- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе вменее нижней границы определения» менее 0,02мг/кг для корнеплодов, плодов и клубней*.

* - 0,02 мг/кг - предел обнаружения для корнеплодов, плодов и клубней.

13. Контроль качества результатов измерений Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 « Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Я

13.2. Плановый вяугрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки C_t должна удовлетворять условию:

результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг (дм³), при этом:

Д« • ± 0,84 Д, где Д- граница абсолютной погрешности, мг/кг (дм³);

Д »б*Х/100,

б- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Результат контроля процедуры К« рассчитывают по формуле:

(признанных приемлемыми по п.11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг (дм³);

Норматив контроля К рассчитывают по формуле

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К*) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях

где ± Д_л^Д±Д^] - характеристика погрешности (абсолютная погрешность)

К*" X ' - X ~с_д,

где X', Х_гС_л- среднее арифметическое результатов параллельных определений

Ik.Uk. (2)

воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)

2-|ЛГ,-ДГ,|-100

(3)

где X|, Xj - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг (дм¹);

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

14. Разработчики

Дубовая Л.В., иауч. сотр.; Макеев А.М., зав. лаб., канд- биол. наук.

ГНУ ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская об^иГпТр Большие Вяземы, тел. 592-92-20.    /\

Q'f?'

Подпись руки Дубовой Л.

лис Г.Г.)

яг