Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.2048—4.1.2061—06

Издание официальное

Москва, 2009

анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТом 25896-83 «Виноград свежий столовый», ГОСТом 13907-86 «Бахлажаны свежие. Технические условия», ГОСТом 13908 «Перед сладкий свежий. Технические условия» Пробы плодов и ягод анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше -18°С.

9. Выполнение определения 9,1. Экстракция абамсктина

9.LL Плоды, ягоды. Образец растительного материала массой 25 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см³, добавляют 125 см³ метанола и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об/мин. Раствор (с осадком) фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 500 см³. Осадок на фильтре промывают 80 см³ метанола. Экстракт и промывную жидкость объединяют в мерном цилиндре, перемешивают, измеряют объем раствора, отбирают 1/5 объема этой фазы (эквивалентна 5 г образца) и переносят в грушевидную колбу вместимостью 100 см³. Далее проводят очистку экстракта по п.9.2.

9.1.2. Сок. Образец сока массой 50 г вносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 50 см³ бидистиллированной воды, 10 см³ насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают. В воронку вносят 30 см³ гексана, интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в мерный цилиндр вместимостью 100 см³. Операцию зхсхракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 20 см³ гексана. Измеряют объем объединенной гексановой фракции, пропущенной через слой сульфата натрия, отбирают 1/10 объема этой фазы (эквивалентна 5 г образца) к переносят в грушевидную колбу вместимостью 50 см³. Раствор упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 30°С и остаток подвергают дериватизации по п. 9.3. Присутствие влаги в остатке недопустимо!

9,2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

№

Экстракт, полученный по л.9.1.1. и помешенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С до водного остатка (2-3 см³). К водному остатку прибавляют 40 см³ бидистиллированной воды, 10 см^э насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 20 см³ гексана, интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин. После разделения фаз верхний гексановый слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в грушевидную колбу вместимостью 100 см³. Экстракцию водной фазы повторяют еще дважды» используя по 10 см³ гексана. Объединенную гексановую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С и подвергают дериватизации по п.9.3. Присутствие влаги в остатке недопустимо!

9.3, Дериватизация

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по пп. 9.1.2. и 9.2., растворяют в 1 см³ ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, Переносят раствор в градуированную пробирку вместимостью 5 см³, добавляют 0,1 см³ 1-N-метилимидазола, перемешивают» вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Смесь охлаждают до 0-5°С, добавляют по каплям 0,3 см³ реактива для дериватизации (п.7.2.), перемешивают и выдерживают 10 мин. при комнатной температуре. Доводят объем раствора до метки ацетонитрилом, перемешивают и аликвоту раствора анализируют на содержание абамектина по п.9.4.

9,4, Условия хроматографирования Жидкостной хроматограф фирмы Altex (США), мод. 322 с флуоресцентным детектором фирмы Shimadzu (Япония), мод. RJF-530.

Колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасфср 110-С 18, зернением 5 мкм

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: метанол

Скорость потока элюента: 0,8 см³/мин

Длина волны:    возбуждения    365 им, Хтп эмиссии 470 нм

Чувствительность детектора: 2

Объем вводимой пробы - 50 мм³

Ориентировочное время выхода абамектина: 7,0 - 7,2 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,5-10 нг

Образцы, дающие лики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/см³, разбавляют ацетонитрилом.

Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 13 0-С 16 Ориентировочное время выхода абамектина: 7,5 мин.

10. Обработка результатов анализа Содержание абамектина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Hi х А х V

X ---------------,где

НоХ m

X - содержание абамектина в пробе, мг/кг;

Hi - высота пика образца, мм;

Н₀ - высота пика стандарта, мм;

А - концентрация стандартного раствора абамектина, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; ш - масса анализируемой части образца /для плодов, ягод и сока - 5 г/.

11. Контроль погрешности измерений Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12. Разработчики

Микитюк О.Д., ст. науч. сотр., канд. биол. наук; Назарова Т.А., науч. сотр., канд. биол. наук; Макеев А.М., зав. лаб., канд. биол. наук.

ГНУ ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы,

Содержание

1.    Методические указания по определению остаточных количеств

сульфометурон-метнла в воде и почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2048-06........................................................................4

2.    Методические указания по измерению концентраций глифосата в атмосферном воздухе населенных мест методом газожидкостной хроматографии. МУК

4 Л.2049-06...................................................................................................17

3.    Методические указания по измерению концентраций Карбосульфака в воздухе

рабочей зоны методом газожидкостной хроматографии. МУК 4Л .2050-06...................28

4.    Методические указания по измерению концентраций тефлутрина в воздухе рабочей

зоны методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2051-06..............................35

5.    Определение остаточных количеств метальдегида в воде, почве, овощах (капуста,

салат, Китайская капуста, шпинат, редис и др.), фруктах (яблоки, сливы и др.), ягодах (земляника, смородина и др.) и винограде методом газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2052-06.......................................................................44

6.    Методические указания по определению остаточных количеств метамитрона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2053-06............................................................................................58

7.    Методические указания по определению остаточных количеств Прохлораза в воде,

почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2054-06......................................................67

8.    Методические указания по определению остаточных количеств флудиоксонила в

зерне и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.2055-06...................................................................................................80

9.    Методические указания по определению остаточных количеств оксифлуорфена в семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2056-06............................................................................................91

10.    Методические указания по определению остаточных количеств карбоксила в клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2057-06..........................................................................................101

11.    Методические указания по определению остаточных количеств флуазифоп-п-бутила

в семенах и масле рапса, подсолнечника, зерне и масле сои, зерне гороха и луке по основному метаболиту флуазифоп-п кислоте методом капиллярной газожидкостной хроматографии. МУК 4.1.2058-06.....................................................................109

12.    Методические указания по определению остаточных количеств прометрина в

семенах и масле подсолнечника и сои, зерне и масле кукурузы, зерне гороха, клубнях картофеля и корнеплодах моркови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4,1.2059-06.....................................................................117

13.    Методические указания по определению остаточных количеств никосульфурона в масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2060-06..........................................................................................126

14.    Методические указания по определению остаточных количеств абамектина в

ягодах и соке винограда, перце и баклажанах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, МУК 4,1.2061-06.....................................................137

з

Руководитель Федеральной службы ло надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия чело|

Главный государственный!

Российской 1

МУК 4.1

« jO )>

Дата введения: с I

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АБАМЕКТИНА В ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА, ПЕРЦЕ И БАКЛАЖАНАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации абамектина в ягодах и соке винограда, перце и баклажанах в диапазоне 0,002-0,05 мг/кг.

Абамектин - действующее вещество инсектицида Вертимек, КЭ (18 г/л), фирма производитель Сингента Кроп Протекши АГ (Швейцария)

Смесь 5-О-деметилавермектина Аи (авермектин Big) и 5-0*деметил-25-де(1 -метил-пропил^ЗЧ^метилэтилЭавермектина А|_а (авермектин Вп,) в соотношении 4:! (С.А.)

Авермектин Ви - СдяН^Он. мол. масса 873,1 Авермектин Bib - С47Н70О14, мол. масса 859Л

Белое кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления: 161,8 -169,4°С (с разложением). Давление паров при 25°С: <3,7 х КГ* мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow log Р - 4,4. Растворимость (г/дм³) при 20°С:

/3¥

дихлорметан - 470, этилацстат - 160, ацетон - 72, толуол - 23, метанол -13, гексан -0,11, вода-0,001.

Стабильно при хранении на воздухе, не гидролизуется в водных растворах при pH

5*9.

При облучении УФ-светом абамектин превращается в 8,9-2*изомер.

В биологически активных почвах абамектин прочно связывается и затем быстро разлагается почвенными микроорганизмами.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LDjo) для крыс и мышей составляет соответственно 10,0xi 13,6 мг/кг; острая дермальная токсичность (LDso) для кроликов более 2000 мг/кг. Острая пероральная токсичность (LD50) препарата Вертимек, содержащего 1,8% абамектина, составляет 650 мг/кг.

Абамектин слабо раздражает слизистую оболочку глаз кролика.

LCso для рыб 3-10 мкг/дм³ (96 час.). Инсектицид нетоксичен для диких животных, земляных червей и водорослей; токсичен для пчел при прямом контакте (LDso® 0,017-0,54 мкг/особь), но становится практически не опасным для них через несколько часов после применения.

Рекомендуемый гигиенический норматив для абамектина в ягодах и соке винограда, перце к баклажанах - 0,005 мг/кг.

Область применения препарата

Абамектин - инсектоакарицид широкого спектра действия, -эффективно уничтожает членистоногих, включая клещей и насекомых, на хлопчатнике, сое, овощных и декоративных культурах, семечковых плодовых, картофеле и табаке в течение вегетационного периода.

Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Вертимек, КЭ (18 г/л) на картофеле, огурцах и томатах защищенного грунта, перце, баклажанах, в яблоневых садах и на виноградниках с нормой расхода препарата до 1,0 л/га при 1-2-кратной обработке за сезон.

1, Метрологические характеристики метода

Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и 2

т

Метрологические параметры Таблица 1

Анализи руемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п « 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S, % Относительное отклонение DS, % Довери тельный интервал среднего, % Ягоды винограда 0,002 0,002-0.02 82,9 3.9 1.7 ±3,6 Сок винограда 0,002 0,002-0,02 81,2 4,2 1.9 ±4,2 Перец 0,002 0,002 - 0,02 82,9 З.б 1,6 ±3,6 Баклажаны 0,002 0,002 - 0,02 82,7 3,8 1.7 ±3,7

Таблица2 Полнота определения абамектина в модельных матрицах (п = 5)

Матрица Внесено абамектина, мг/кг Открыто абамектина, % Доверительный интервал среднего, % Ягоды 0,002 79,4 ±3,7 0,004 82,6 ±3,6 0,01 84,4 ±3,2 0,02 85,2 ±2,9 Сок 0,002 78,6 ±3,8 0,004 83,8 ±3,3 Перец 0,002 81,8 ±4,0 0,004 84,0 ±3,9 Баклажаны 0,002 81,9 ±4,6 0,004 83,5 ±4.1

2. Метод измерения

Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флуоресцентным детектором. Контроль

абамектна в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из плодов и ягод метанолом, а из сока гексаном, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и дериватизация, приводящей к образованию флуорогенного производного абамектина.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы J.S. Средства измерений

Жидкостной хроматограф с флуоресцентным    Номер Госреестра

детектором (фирма Altex, США)    №

Весы аналитические ВЛА-200    ГОСТ 24104

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим    ГОСТ 7328

пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,036 г

Колбы мерные вместимостью 2-100-2,2-1000-2    ГОСТ    1770

Меры массы    ГОСТ 7328

Пипетки градуированные 2-го класса точности    ГОСТ 29227

вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см³

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой ГОСТ 1770 вместимостью 5 см³

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью ГОСТ 1770 25,50,100,500 и 1000 см³

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

J.2. Реактивы

Абамектин, аналитический стандарт с содержанием д.в. 92,4% (Сингента, Швейцария)

Ангидрид трифторуксусной кислоты, ч.    ТУ 6-09-4135-75

Ацетонитрил для хроматографий, хч    ТУ 6-09-3534-82

Вода бидистиллированная    ГОСТ 6702

н-Гексан, хч    ТУ 6-09-3375

Метиловый спирт (метанол), хч    ГОСТ 6995

N-метилимндазол (Мерк, Германия)

Натрий сернокислый, безводный, хч    ГОСТ    41 бб

Натрий хлористый, хч    ГОСТ    4233

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3*3* Вспомогательные устройства, материалы Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Со. (США)

Воронка Бюхнера    ГОСТ 0147

Воронки делительные вместимостью 100 и 2S0 см³    ГОСТ    25336

Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм    ГОСТ    25336

Гомогенизатор    МРТУ 42-1505

Дефлегматор елочный    ГОСТ 9737

Колба Бунзена вместимостью 500 см³    ГОСТ 5614

Колбы грушевидные на шлифе вместимостью 50 и 100 см³    ГОСТ 9737

Колонка хроматографическая, стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Диасфер 110-С18, зернением 5 мкм Насос водоструйный вакуумный    ГОСТ 10696

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или    ТУ 25-11-917

ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария)

Стаканы химические вместимостью 100 и 500 см³    ГОСТ 25336

Установка для перегонки растворителей

Фильтры бумажные «красная лента», обездоленные    ТУ 6-09-2678

или фильтры из хроматографической бумаги Ватман ЗММ Шприц для ввода образцов в жидкостной хроматограф вместимостью 50-100 мм³ Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования злектробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-

■м

03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда* по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов К выполнению измерений допускают специалистов» имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению проболодготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений При выполнении измерений соблюдают следующие условия;

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20+5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, реактива для дериватизации, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление храдуировочной характеристики.

7. /, Очистка органических растворителей 7.LL Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, Перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7,L2, Очистка н~гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения ее окрашивания в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Приготовление реактива для дериватизации Смешивают 1 объем свежеперегнанного ангидрида трифторуксусной кислоты и 2 объема свежеперегнанного ацетонитрила. Реактив годен к употреблению в течение рабочего дня.

7.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ Используемый в качестве подвижной фазы метанол фильтруют через мембранный фильтр.

7.4. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (метанолом) при скорости подачи растворителя 1 см³/мин не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.

7.5. Приготовление градуировочных растворов

7.5. L Исходный раствор абамектина для градуировки (концентрация 100 мкг/см*). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,011 г абамектина, содержащего 92,4% действующего вещества, растворяют в 40-50 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение 3-х месяцев.

7.5.2.    Раствор абамектина №1 для градуировки (концентрация 1 мкг/см*).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1 см³ исходного раствора абамектина с концентрацией 100 мкг/см³ (п.7.5Л.), разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов №№ 2-5, а также проб ягод и сока с внесением при оценке полноты извлечения абамектина из исследуемых образцов.

Градуировочный раствор Ха 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение месяца.

7.5.3.    Рабочие растворы №Кз 2-5 абамектина для градуировки (концентрация 0,01*0,1 мкг/см³).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 1.0, 2.0, 5.0 и 10.0 см³ градуировочного раствора Xs 1 абамектина с концентрацией 1 мкг/см³ (п.7.5.2), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы XsXs 2-5 с концентрацией абамектина 0.01, 0,02, 0.05 и 0.10 мкг/см³, соответственно. Растворы хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение недели.

7.6. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость высоты пика (мм) от концентрации абамектина в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

Для построения калибровочного графика в градуированные пробирки вместимостью 5 см³ вносят по 1 см³ каждого из 4 градуировочных растворов абамектина (п. 7.5.3.) и подвергают дериватизации по п. 9.3. В инжектор хроматографа вводят по 50 мм³ каждого дериватизированкого градуировочного раствора и

№