УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения Главный Государственный санитарный врач Российской Федерации
П №fTfjr.n ОНИЩЕНКО 2005 г.
МУК4ЛТ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Методические указания по определению остаточных количеств Прометрина в зерне гороха, масле сои, кукурузы и подсолнечника методом газожидкостной хроматографии.
1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ Фирма-производитель. Сгпгента Лимитед.
Торговое название Гезагррд,
Название действующего l ,‘щества по ИСО: Прометрин.
Название действующей вещества по ИЮПАК* Ы2,К*-дтгоопропил-6-метилтяо-1,3,5’ триазин~2,4~диамин.
Структурна! формула:
CH3S м NHCHCCHjJz
NHCH(CH3)2
Эмпирическая формула: CioH^NjS.
Молекулярная масса* 241 1.
Химически чистый Пром^фин представляет собой белое кристаллическое вещество без запаха
Давление паров 0,165 тРс Температура плавления 1'?-120 °С.
Коэффициент распределения н-окганол-вода: Kow log Р “ 3,1. Растворимость в воде составляет 33,0 мг/л при 25°С и ртт 7,0 .
Растворимость в органических растворителях (г/л при 20°С): ацетон - 300,0; гексан - 6,3; эта* нал - 140,0; толуол - 200,0; н-октанол -110,0.
Прометрин стабилен в водных растворах в нейтральной, слабощелочной н слабокислой ере* де, быстро гидролизуется сильными кислотами и щелочами.
Период полураспада в по*тве в полевых условиях от 14 до 158 дней (в среднем 50 дней). Основным путем разложения вещества в почве является микробиологическое деалкилирование и окисление метидтио-грулпы.
Краткая гигиеническая характеристика: Прометрив относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД$о /крысы / 5233 мг/кг), дермальной (ЛДзо /крысы/ свыше 3100 мг/кг) токсичности и умеренно опасным по ингаляционной (ЛД50 /крысы/ более 5170 мг/м3) токсичности. Может оказывать побочные неблагоприятные токсикологические эффекты.
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
ДСД - 0,01 мг/кг/сут.
ПДК в почве - 0,5 (тр.); в! оде - 0,002 мг/кг.
ПДК в воздухе рабочей зс ш - 5,0, ОБУВ в воздухе атмосферы - 5,0 мг/м3.
МДУ в зерне кукурузы, гороха, фасоли, чечевицы, семенах и масле подсолнечника и сои, клубнях картофеля, в тш ■' ?, кориандре и чесноке -0,1.
Область применения: Прометрин - гербицид из группы производных 1,3,5 - триазина системного почвенного действия с длительным защитным эффектом, может проникать через листья растений, передав гясь по ксилеме. Высокоэффективен против малолетних злаковых а двудольных сорняков в период их прорастания в посевах хлопчатника, зернобобовых, подсолнечника, сои, морковг и других зонтичных. Широко используется для приготовления смесевых промышленных препаратов.
Зарегистрирован под торговой маркой Гезагард - 50 в России в качестве гербицида для подавления сорняков в посевах подсолнечника, сои, зернобобовых, лекарственных кормовых бобовых культур, моркови и других зонтичных, чеснока, посадках картофеля с нормой расхода 2-5 кг/га, однократная обработка.
2. Методика определения остаточных количеств Прометрина в зерце гороха, масле сон, кукурузы н подсолнечника методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положение
2.1.1. Принцип метода.
Методика основана на определении Прометрина методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после экстракции веществ органическим растворителем, очистки экстрактов путем перевода соединений в ионизированную форму и последующего перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода.
Метрологическая характеристика метода приведена в таблицах 1 и 2.
Метрологическая характеристика метода.
Таблица 1 |
Метрологические параметры, р=0,95, п=20 |
Анализируемый
объект |
Предел обнг ру-жен~1л, мг/ic* |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг |
Среднее значение определения, % |
Стандартное отклонение, S |
Доверительный интервал среднего результата, %± |
Зерно гороха |
(02 |
0,02-0,32 |
75,9 |
1,45 |
1,35 |
Масло сои |
0,01 |
0,01-0,2 |
80,5 |
1,73 |
1,02 |
Масло кукурузы |
0,01 |
0,01-ОД |
79,4 |
1,25 |
0,76 |
Масло подсолнечника |
0,01 |
0,01 -0,2 |
79,5 |
1,56 |
0,94 |
|
/*г
Таблица 2.
Доверительный интервал и полнота определения Прометрина в зерне гороха и луке-репке. |
Среда |
Добавлено
Прометрина,
мг/кг |
Обнаружено
Прометрина,
мг/кг |
Доверительный интервал, + |
Полнота определения, % |
Зерно гороха |
0,02 |
0,016 |
0,0010 |
76,7 |
0,04 |
0,030 |
0,0020 |
75,2 |
Масло
сон |
0,01 |
0,0082 |
0,0005 |
81,6 |
0,02 |
0,016 |
0,0005 |
81,4 |
0,10 |
0,080 |
0,0050 |
79,9 |
0,20 |
0,158 |
0,0120 |
79,0 |
Масло
кукурузы |
0,01 |
0,0079 |
0,0002 |
78,9 |
0,02 |
0,016 |
0,0008 |
78,9 |
о,ю |
0,080 |
0,004 |
80,1 |
С,20 |
0,159 |
0,008 |
79,5 |
Масло подсолнечника |
0.01 |
0,0080 |
0,0007 |
79,0 |
С,02 |
0,016 |
0,0005 |
80,7 |
одо |
0,079 |
0,0044 |
79,4 |
С,20 |
0,0158 |
0,0067 |
79,0 |
|
2.1.3. Избирательность метода.
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для защиты овощных и полевых культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорор-ганические пестициды» амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование.
22.1. Реактивы, материалы и растворы.
Аналитический стандарт Прометрина с содержанием не менее 95 % д.в., фирма Сингента.
Азот особой чистогы, ГОСТ 9293-74.
Ацетон, ТУ 6-09-3513-86.
Ацетонитрил, ТУ С -Э9-3534-87.
Гексан, ТУ 649-33*75-78.
■/&
Гелий, очищенный марки “А*\ ТУ-51*940-80 Кислота хлороводородная, 0,1 н водный раствор.
Кислота хлороводородная, конц., х.ч., ГОСТ 3118*77.
Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76.
Натрия хлорид, насыщенный водный раствор.
Натрия хлорид, х.ч, ГОСТ 4233-77
Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60 - 80 меш, фирма Мерк или аналогичный.
Хлороформ ч., ГОСТ 20015-74.
Этил ацетат, ГОСТ ?2300-76.
Эфир диэтиловый (гдя наркоза, Фармакопея СССР).
2.2.2. Посуда и оборудование.
Вакуумный ротационный испаритель МР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80 Е или аналогичные.
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности + 0,038 г, ГОСТ 19491-74.
Водоструйный нас'с, ГОСТ 10696-75,
Воронки делительгче 250 мл, 500 мл, ГОСТ 25336-82Е.
Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Встряхиватель мех ыический ТУ 64-1-1081*73.
Колбы конические Плоскодонные на 100 и 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая НР-5 (5 % феннленликона + 95 % метил силикона}., длина 15 м, внутренний диаметр 0.32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма Хьюлс гг Пакард или аналогичная.
Концентраторы грушевидные (конические) 250 мл, ГОСТ 10394-72,
Микрошприц для гиового хроматографа на 1-10 мкл.
Пипетки мерные на 1; 2,0; 5,0; 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Фильтры бумажны*Г”красная лента", ТУ 6-09-2678-77.
Хроматограф газогый “Кристалл 2000м” с термоионным детектором на азот и приспособлениями для капиллярной колонки или другой с аналогичными характеристиками. Центрифужные бе гчи полипропиленовые с крышками объемом 250 мл, Nalgene, cat № 3120-0250.
2.3. Подготовка к с "редслению.
2.3.1. Приготовление стандартных растворов.
Взвешивают 50 мг Прометрина в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Получают стандартный исходный раствор >fe 1 с концентрацией 1 ыг/мл, который хранят в холодильнике в течение б месяцев.
Методом последовательного разведения готовят стандартный раствор № 2 с концентрацией Прометрина 10 мкг/мл в ацетоне, который можно хранить в холодильнике 30 дней.
2.3.2. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика из стандартного раствора № 2 готовят методом последовательного разбавления ацетоном стандартные растворы с концентрацией: 4,0; 2,0; 1,0; 0.5; 0,25 мкг/мл. Вводят в хроматограф по 2-3 мкл каждого стандартного раствора, измеряют высоту пиков и строят график зависимости высоты пика от концентрации раствора.
2.3.3. Подготовка колонки для очистки экстракта.
2.З.З.1. Подготовка колонки с Флоризилом.
В стеклянную или пластмассовую колонку длинной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно стекловату и заполняют колонку Флоризилом на высоту 10 см. На слон Флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. За день до очистки экстракта колонку промывают последовательно 20 мл ацетона и 1C мл гексана После промывки колонка готова к работе.
2.33.2. Проверка хроматографического поведения Прометрина на колонках с Флоризилом.
При отработке методики или поступлении новой партии сорбента (Флоризил) проводят изучение поведения Грометрнна на колонке.
Для этого в концентратор (или пробирку) вносят 1 мл стандартного раствора Прометрина концентрацией 4 мю'нл, выпаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе при температуре банане выше 40°С досуха или в токе теплого воздуха.
Затем растворяют Прометрин в 1мл смеси растворителей - гексашацетон в соотношении 4:1 и наносят его на подготовленную, как указано выше, колонку. Промывают колонку 15 мл гексана, смыв отбрасывают. Затем пропускают через колонку 25 мл смеси гексан: этил ацетат в соотношение 3:2, отбирая последовательно по 5 мл элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не шие 40°С досуха.
Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 -3 мкл. По результатам обнаружения Пром.прина в каждой фракции определяют объем смеси гексан: этилаце-тат, необходимой для пол :?го вымывания Прометрина.
т
2.4. Отбор, хранение и доставка проб.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 20051-79 от 21.08.79). Пробы корнеплодов и зеленой массы хранятся при температуре 0-4°С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18°С. Пробы растительного масла хранятся в плотно закрытой стеклянной таре в холодильнике при температуре О- 4°С.
2.5. Проведение определении.
2.5.1. Зерно гороха.
2.5.1 Л. Экстракция и предварительная очистка. Навеску измельченного зерна гороха массой 25 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл и прибавляют в нее 20 мл дистиллированной воды. Колбу встряхивают от руки и выдерживают 10-15 мин. для впитывания воды в муку. Затем в колбу наливают 70 мл ацетонитрила и встряхивают ее в течение 30 мин. Экстракт отфильтровывают через воронку с бумажным фильтром в концентратор емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 50 мл ацетонитрила и встряхивая смесь в течение 30 мин.
Экстракты отфильтровывают и объединяют в концентраторе. Растворитель выпаривают на ротационном ва: уумном испарителе при температуре бани не выше 40°С досуха. (Упариваипе проводить осторожно, т.к. возможно вспенивание ацетонитрила).
Водный остаток в концентраторе растворяют в 25 мл 0,1 н раствора соляной кислоты и фильтруют через бумаэг ?ый фильтр в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор еще раз ополаскивают 25 мл ОД н раствора соляной кислоты и через фильтр переносят в ту же делительную воронку Объединенный в делительной воронке раствор промывают смесью гексан : эфир в соотношении 7:1 по объему, 2 раза порциями по 20 мл. Сливают из делительной воронки нижний зэдный слой в химический стакан объемом 100 мл, а смесь гексан: эфир отбрасывают. После промывания водную фазу в стакане подщелачивают 3 н раствором едкого натрия (около 4,5 t л) до рН=8.
Переносят полученный раствор в делительную воронку и реэкстрагируют Прометркн 3-мя порциями хлороформа по 20 мл каждая. Сливают из делительной воронки каждый раз нижний слой (хлороформ) в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С досуха.
2.5.1.2. Очистка образцов на хроматографической колонке.
Сухой остаток в концентраторе, полученный при упаривании хлороформа, растворяют в 1 мл смеси гексан:ацетон в соотношении 4:1 и наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 15 мл гексана и 5 мл смеси гексан:этилацетат - 3:2, смывы отбрасывают.
Элюируют Прометрин 15 мл смеси гексан:этилацетат (3:2). Элюат собирают в концентратор и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С досуха. Сухой остаток разводах в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл.
2.5.2. Масло сои, кукурузы и подсолнечника.
2.5.2Л. Экстракция и предварительная очистка.
Навеску масла 10 г в конической колбе объемом 100 мл разводят 50 мл гексана (при анализе подсолнечного масла используют 30 мл гексана) и тщательно перемешивают. Содержимое колбы переносят в делительную воронку емкостью 250 мл, и обмывают колбу 10 мл ацетонитрила. В воронку добавляют 40 мл ацетонитрила и встряхивают в течение 2 минут. После разделения фаз ацетонитрил сливают в концентратор через безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 мл ацетонитрила. Объединенный экстракт с концентраторе упаривают до объема 5-10 мл при температуре бани не выше 40° С.
Добавляют в конце&хр&гор 50 мл. ОДн соляной кислоты, перемешивают содержимое и переносят в чистую делительную воронку емкостью 250 мл, обмывая концентратор 10 мл соляной кислоты. К проб* в воронке приливают 30 мл смеси гексан : этиловый эфир в соотношении 7:1. Осторожно встряхивают воронку и после разделения слоев нижний водный слой сливают в стакан емкостью 100 мл, а верхний слой отбрасывают. Водную фазу возвращают в воронку и повторяют операцию еще раз, используя 30 мл смеси гексан : этиловый эфир в соотношении 7:1. Водную фракцию объединяют и подщелачивают 1н едким натром до pH 7-8 (около 4,5 мл).
Прометрин из водтой фракции экстрагируют хлороформом 3 раза по 20 мл. Хлороформ сливают в концентратор через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха при температуре бани не вьшп 40° С.
Пробу в концентраторе разводят в 1мл смеси гексан:апетон - 4:1 и наносят на колонку с Флоризшхом. Проводах очистку пробы, как указано в разделе 2.5.1.2.
Сухой остаток в кс тцентраторе разводят в 2 мл ацетона и ввод ят в хроматограф 1 мкл
пробы.
2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов.
2.6.1. Условия хроматографирования.
Хроматограф газовый “Кристалл 2000м” с термоионным детектором на азот.
Капиллярная кварцевая колонка НР-5 (5 % фенилсиликона + 95 % метил силикона), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.
Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 160° С, выдержка - 2 мин; нагрев колонки по 35° С/мин., до 25СР С; выдержка 5 мин.
Температура испарителя - 260° С, детектора - 350° С.
Регулятор расхода гелия - РРГ-11; режим - Splitless.
Газ 1 - гелий, линейная скорость - 20 см/сек, давление на входе - 27,29 кПа.
Газ 2 - гелий (прод^ка испарителя), расход -1,0 мл/мин; сброс 1:50.
Газ 3 - азот (поддув з детектор), расход во время анализа - 40 мл/мин.
Расход водорода -16 мл/мин, воздуха -180 мл/мин.
Абсолютное время удерживания Прометрива - 4 мин 30 сек.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,25 - 4,0 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Промет-рина 4,0 мкг/мл соответственно, разбавляют.
2.6.2. Обработка результатов анализов.
Содержание Продгггрина рассчитывают по формуле:
Snp ■ А•V
X---хР
100 * Sct ■ m
где X - содержание Прометрина в пробе, мг/кг;
Sct - высота (площадь) пика стандарта, мВ;
Snp - высота (площадь) пика образца, мВ;
А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; ш - масса анализу уемого образца, г;
Р - содержание Пре метрика в аналитическом стандарте, %.
№
3. Требования техники безопасности.
Необходимо соблюдать требования безопасности при работе в химических лабораториях в соответствии с “Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы М3 СССР” (>Га 2455-81 от 20.10.81 г.), а также требования, изложенные в документации на приборы.
4. Разработчики.
Калинин ВА-, профессор, канд. с-х. наук, Довшлевич Е.В., ст. н. сотр., канд. биол наук, Калинина Т.С., сънхотр., канд. с-х. наук, Довгилевич А.В., ст. и. сотр., канд. хнм. наук.
Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов»,
127550, Москва, Тимирязевская ул. 53, стр. 1,
Телефон: 976-37-68; факс: 976-43-26.
•да