УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения Главный Государственный санитарный врач

|ента утверждения

Методические указания ио определению остаточных количеств Хлорпирнфоса в корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

1 .Вводная часть.

Фирма производитель: ДауАгроСаенссс.

Торговое название: Дурсбан.

Название действующего вещества по ИСО: Хлорпирифос.

Название по ИЮПАК: 0,0-двэтил 0-{3,5,6-трихлоро-2-пиридил) фосфоротиоат Структурная формула: ¹

Растворимость: в бензоле - 7900, ацетоне - 6500, хлороформе - 6300, диэтиловом эфи-))С - 5100, ксилоле **. 4С00, этаноле - 630 в воде -1,4 (при 25°С) мг/л.

Устойчив в нейтральгой и кислой средах, относительно быстро гидролизуется в щелочной среде. Период полураспада в почве: ДТ50 - 60-120 дней.

Краткая токсикологическая характеристика: Хлорпирифос относится к веществам опасным по острой пероральной (ЛД50 крысы -135-163мг/кг), умеренно опасным по дермальной (ЛД50 крысы -2000 мгУкг) и опасным по ингаляционной токсичности (ЛД50 крысы - 4 часа - 0,2 мг/л). Следует предотвращать попадание препарата на открытые участки кола^-; при попадании на кожу немедленно емьпъ водой с мылом и промыть кожу содовц‘4 раствором.

ПДК в воздухе рабочей зоны - 0,3 мг/м^{2 3}; в воде санитарно-бытового назначения - 0,002 мг/л; в почве 0,2 т/кг. МДУ (в мг/кг) в сахарной свекле и кукурузе - 0,0006; в картофеле - 0,006; в яблоках - 0,01.

Токсичен для пчел и других полезных насекомых - LD50 для пчел - 0,114 мкг/особь. Умеренно тпасен для диких животных, токсичен для птиц. СК50 для радужной форели - 0,003 мг/п.

Область применения: Хлорпирифос - инсектицид контактного и кишечного действия из группы ф-.сфорорганических соединений, обладающий длительным защитным эффектом. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, перепончатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки), а также почвообитающих вредителей в посевах зерновых и овощных культур, кукурузы, хлопчатника, на плантациях картофеля, технических в плодовых культур при норме расхода 0,5-1,5 кг/га.

Зарегистрирован в России под торговый названием Дурсбан, КЭ 480 г/л, для применения на сахарной свекле, картофеле, хмеле, многолетних бобовых и пастбищных травах, на яблоне и персике с нормой расхода препарата от 0,5-3,0 л/га (до 2-х обработок за сезон).

Методика основана на определении Хлорпирифоса методом газожидкостной хро-мато)рафии с использованием детектора по захвату электронов после его экстракции из растительных проб ацетонитрилом и очистки проб на колонках с Флоризилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2.    Избирательность метода.

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании выше упомянутых культур.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 - 2.

Таблица].

Анализируемый объект Метрологические параметры, р=0,95; п=20 Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение S, % Доверительный интервал среднего результата %,± ... 1 2 3 4 5 6 свекла 0,0006 0,0006-0,012 84,6 1,04 1,85

Таблица 2.

Доверительный интервал и полнота определения Хлорпирифоса в корнеплодах

сахарной свеклы.

Среда	Добавлено Хлорпирифос мг/кг	Обнаружено Хлорпирифос мг/кг	Доверительный интервал,!	Полнота определен}
свекла	0,012	0,010	0,001	82,6
	0,006	0,005	0,0002	86,8
	0,0012	0,001	0,00003	83,6
	0,0006	0,0005	0,00004	85,6

2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование.

2.2.1. Реактивы, материалы и растворы.

Хлорпирифос, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,8%. Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

тСЯ

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

Нода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Гексан, ч, ТУ 2631-003-05807999-98.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Флоризил для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш, фирмы Флюка.

2.2.2.Прнборы, аппаратура, посуда.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081 -73 или аналогичный.

Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат.№3120-0250, NALGENE. Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Еили аналогичные Воронки делительные на 250 и 500 мл, ГОСТ 23336-82.

Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Колбы мерные на 10,25,50 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические на шлифе на 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колонка газохроматографическая капиллярная кварцевая длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мхм.

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 мл НШ29 КГУ-100 (250), ГОСТ 10394-72. Микрошприц на 10 мкл, ТУ Е-2.833.0.24.

Пипетки мерные на 1,0,2,0 и 5,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Испаритель ротационпый, вакуумный ИР-1 М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный.

Фильтры бумажные "Красная лента" ТУ 6-09-1678-86.

Хроматограф газовый с детектором по захвату электронов (^Ni) "Кристалл 2000 М" с пределом детектирования по Линдану не выше 4 КГ¹⁴ и капиллярной колонкой.

Цилиндры мерные емкостью 25 и 50 мл, ГОСТ 1770-74.

2.3. Подготовка к определению.

2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии.

Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе гелия при температуре ва 20°С ниже предельного значения для выбранной неподвижной фазы в течение 8-10 часов.

/49

2.3.2. Приютовление стандартных растворов.

Взвешивают 50 Mi- Хлорлирифоса в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/мл). Стандартный раствор № 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы Хлорлирифоса в ацетоне с концентрацией 0,1; 0,05; 0,01; 0,005; мкг/мл для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец и стандартный раствор в гексане с концентрацией 0,1 мкг/мл для проверки хроматографического поведения Хлорлирифоса на колонке с Флоризилом.

2.3.3.    Подготовка колонки с Флоризилом.

В пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно чистую стекловату и заполняют колонку 5 г Флоризила 60/100 меш, уплотняя его путем вибрации колонки. На слой Флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см. За день до определения Флоризил в колонке промывают 20 мл ацетона, а в день определения - 10 мл гексана.

2.3.4.    Проверка хроматографического поведения Хлорпирифоса на колонке с Флоризилом.

В подготовленную колонку вносят 1 мл стандартного раствора Хлорпирифоса в гексане с концентрацией 0,1 мкг/мл (раздел 2.32) и 4 мл гексана. Смыв отбрасывают. После этого последовательно пропускают через колонку 3-4 порции смеси гексан:ацетон (10:1) по 5 мл каждая, собирая их в отдельные концентраторы. Собранные фракции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл гексана и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Фракции, содержащие Хлорпирифос, объединяют, выпаривают досуха, сухой остаток вновь растворяют в 1 мл гексана и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Рассчитывают содержание вещества з элюате, определяют полноту смыва с колонки и необходимый для очистки объем элюата.

2.4. Отбор проб.

Отбор проб производится в соответствии с "У ни филированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения макроколичеств пестицидов” (№ 2051-79 от 21.08.79). Пробы корнеплодов сахарной свеклы хранят в запаянных пластиковых пакетах в замороженном виде. Перед анализом свеклу измельчают на терке.

2.5.    Описание определения.

Навеску измельченного материала - 25 г помещают в пластиковую банку с крышкой емкостью 250 мл и заливают 50 мл ацетонитрила. Встряхивают 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу емкостью 250 мл, на дно которой предварительно насыпают 10 г хлористого натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, заливая пробу 50 мл ацетонитрила и встряхивая каждый раз по 15 минут. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку емкостью 250 мл, нижний водный слой отбрасывают. Ацетонитрил сливают через слой безводного сульфата натрия в концентратор и выпаривают при температуре не выше 40°С. Остаток в концентраторе разводят в 5 мл гексана, тщательно обмывают концентратор и ваносят пробу на колонку с Флоризилом. Смыв отбрасывают.

Хлорпирифос элюируют 15 мл смеси гексан:ацетон-10:1. Смыв выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, разводят в 3 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

2.6.    Условия хроматографирования и обработка результатов.

2.6.1. Условия хроматографирования.

Хроматограф «Кристалл 2000 м» детектором по захвату электронов (^Ni) с пределом детектирования по Линдану не выше 4x10’¹⁴.

Колонка капиллярная кварцевая HP-5 (Crosslinked 5% фенил силоксана, 95 % метил силоксана); длиной 30 м с внутренним диаметром 0,25 мм; толщина пленки 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная.

Начальная температура - 140°С, выдержка 2 минуты; нагрев колонки по 10 градусов в минуту до температуры 190°С, выдержка 10 минут; нагрев колонки по 30 градусов в минуту до температуры 260°С выдержка 5 минут.

Газовый режим - Splitless.

Газ-носитель - гелий (Г1). Тип регулятора расхода гелия - РРГ 11, линейная скорость -17 см/сек, давление на входе 72,52 кПа.

Газ 2 (Г2) - гелий (продувка испарителя), расход 0,5 мл/мин, сброс 1:80, начало сброса -10 секунд, длительность сброса - 2 минуты.

Газ 3 (ГЗ) - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 45 мл/мин.

Продувка системы после анализа при температуре 260°С в течение 2 минут: продувка испарителя гелием - 50 мл/мин; продувка детектора азотом - 50 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Хлорпирифоса - 18минут 22 секунды.

Температура испарителя - 250°С\ детектора - 320°С.

Объем вводимой пробы - J мкл.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,005 - 0,1 иг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрациями Хлорпирифоса 0,1 мкг/мл, разбавляют.

2.6.2. Обработка результатов анализов.

Содержание Хлорпирифоса в пробах сахарной свеклы рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Н ] • А* V

Х=--Р

Н₀* га* 100

X - содержание Хлорпирифоса в пробе, мг/кг;

Hj - площадь пика образца, мВ;

Но - площадь пика стандарта, мВ;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования (мл); ш - масса или объем анализируемого образца, г или мл.

Р - содержание Хлорпирифоса в аналитическом стандарте.

3.    Требования техники безопасности.

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4.    Разработчики.

Калинин В.А., профессор, канд. с-х. наук, Калинина Т.С., ст.н. сотр., канд. с-х. наук, Фролова Н.С., ст. инж.

Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов», 127550, Москва, Тимирязевская ул. д. 53, стр. 1,

Телефон/факс: 976-37-68 / 976-43-26.

1

CI м п¥>(ОСН₂СНз)₂

:|

Эмпирическая формула: C9H11CI3NO3PS.

Молекулярная масса: 350,6.

Химически чистый Хлорпирифос представляет собой белое кристаллическое вещество. Точка плавления: 42-43,5°С.

Давление паров: 2,7 мПа при 25°С.

Коэффициент перераспределения октавол/вода Ко* logP - 4,7 (20 °С).

2

Методика определения остаточных количеств Хлорпирифоса в корнеплодах сахарной

свеклы.

3

2.1.    Основные йоложения.

2.1.1.    Принцип метода.