УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главный государственный санитарный врач

Россий

« /?    » okjs

Дата введен и

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по определению остаточных количеств Диметенамида в воде, почве, зерне, масле и зеленой массе кукурузы, семенах, жмыхе, масле, зеленой массе подсолнечника, семенах и масле сои, корнеплодах и ботве кормовой, сахарной и столовой свеклы методом газожидкостной хроматографии

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в воде, почве, зерне, масле и зеленой массе кукурузы, семенах, жмыхе, масле, зеленой массе подсолнечника, семенах и масле сои, корнеплодах и ботве кормовой, сахарной и столовой свеклы массовых концентраций диметенамида в диапазонах 0,001 - 0,02 мг/дм³ (вода); 0,02 - 0,2 мг/кг (почва, зерно и зеленая масса кукурузы, растительные масла); 0,01-0,2 мг/кг (семена подсолнечника и сои, жмых и зеленая масса подсолнечника, корнеплоды и ботва свеклы).

Диметенамид-Р - действующее вещество препаратов ФРОНТЬЕР ОПТИМА. КЭ (720 г/л) и ФРОНТЬЕР Х2, КЭ (720 г/л), фирма производитель «БАСФ» (Германия). (Л5)-2-хлор-Ы-(2,4-диметил-3-тиенил)-14-(2-метокси-1-метилэтил)ацетамид (IUPAC)

Диметенамид-Р - S-изомер диметенамида рацемического

C12HI8CINO2S Мол. масса 275.8

Вязкая желто-коричневая жидкость со слабым ароматическим запахом. Плотность 1,187 (при 25°С). Температура кипения 127°С (при 26.7 Па). Давление паров при 25°С: 36,7 мПа. Растворимость в органических растворителях (при 25°С): гептан - 282 г/кг; изооктан - 220 г/кг, диэтиловый эфир, керосин, этанол - более 50%. Растворимость в воде - 1,2 г/дм³.

Диметенамид стабилен при хранении при температуре 54°С не менее 4-х недель, при 70°С - не менее 2-х недель. В водном растворе при pH 5-9 (25°С) стабилен в течение 30-ти дней.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD so) для крыс - 429 мг/кг (самцы). 531 мг/кг (самки); острая дермальная токсичность (LD so) для кроликов > 2000 мг/кг: острая ингаляционная токсичность (LK50) для крыс > 2200 мг/м³.

Область применения препарата

Диметенамид - довсходовый гербицид класса хлорацетамида, используемый для борьбы с однолетними злаковыми и некоторыми двудольными сорными растениями.

Препараты Фронтьер Оптима, КЭ (720 г/л) и Фронтьер Х2, КЭ (720 г/л) рекомендуются к применению на посевах свеклы сахарной, столовой, кормовой, кукурузы, сои, подсолнечника при однократной обработки почвы с нормой расхода 0.8-1,4 л/га.

Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/дм³; ОДК в почве -0,1 мг/кг; МДУ в кукурузе, сое (семена, масло), свекле (сахарная, столовая, кормовая) -0,02 мг/кг; подсолнечнике (семена, масло) - 0,04 мг/кг.

1. Метрологические характеристики метода

Метрологические характеристики метода представлены в таблице.

SX

7.8. Проверка хроматографического поведения диметенамида на колонке с оксидом алюминия В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,5 см³ раствора № I для градуировки с концентрацией диметенамида 10 мкг/см³ (п. 7.4.1.), растворитель отдувают потоком теплого воздуха, к остатку добавляют 10 см³ ацетона, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Промывают колонку 120 см³ тгилацетата со скоростью 1-2 капли в сек. Фракционно (по 10 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в I см³ гексана, анализируют содержание лиметенамида по п. 9.7.1.

Фракции, содержащие диметенамид, объединяют и вновь анализируют. Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

7.9. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 400 мм, внутренним диаметром 15 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 6 г силикагеля в 20 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 20 мм. После этого колонка готова к работе.

7.10. Проверка хроматографического поведения диметенамида на колонке с силикагелем В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,5 см³ раствора № 1 для градуировки с концентрацией диметенамида 10 мкг/см³ (п. 7.4.1.), растворитель отдувают потоком теплого воздуха, к остатку добавляют 5 см³ смеси гексан-диэтиловый эфир (1: 1, по объему), перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.8. Промывают колонку 70 см³ смеси гексан-диэтиловый эфир (I : 1, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек. Фракционно (по 10 см³) отбирают тлюат, упаривают, остатки растворяют в 1 см³ гексана, анализируют содержание лиметенамида по п. 9.7.2.

Фракции, содержащие диметенамид, объединяют и вновь анализируют. Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

ПРИМЕЧАНИЕ: Проверку хроматографического поведения диметенамида следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами Р 51592-2000, 1743.01-83, 26950-89, 13586.3-83, Р 50436-92, 10852-86 и 17421-82.

Отобранные пробы воды анализируют в день отбора или хранят при 4°С в течение 30-ти дней.

Отобранные пробы зерна кукурузы и зеленой массы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 10-ти дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18°С.

Пробы семян сои и подсолнечника подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре не более 3-х месяцев.

Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в течение месяца.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение 3-х месяцев.

Перед анализом образцы зерна, семян и зеленой массы, жмыха измельчают, воду фильтруют через неплотный бумажный фильтр, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

9. Выполнение определения

9.1. Вода

Образец анализируемой воды объемом 500 см³ помещают в делительную воронку вместимостью 1000 см³, добавляют 20 см³ гептана, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 см³, фильтруя его через 2-х см слой безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром «красная лента». Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды порциями гептана

а

по 20 см³. Отстоявшийся слой гептана (верхняя фаза) фильтруют в колбу с ранее полученным экстрактом.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С, подвергают очистке в соответствии с п. 9.2.2.

9.2. Почва, зерно и зеленая масса кукурузы

9.2.1.    Экстракция

Образец почвы, измельченного зерна или зеленой массы кукурузы массой 25 г помешают в коническую колбу вместимостью 250 см³, вносят 150 см³ ацетона и помещают на встряхиватель на 1 час. Отстоявшийся раствор осторожно переливают в круглодонную колбу вместимостью 500 см³, фильтруя его через складчатый фильтр «красная лента». Операцию экстракции повторяют еше дважды порциями ацетона по 50 см³, встряхивая каждый раз по 30 мин. Отстоявшуюся надосадочную жидкость также фильтруют в круглодонную колбу, объединяя с первым экстрактом. Объединенный экстракт упаривают до объема 10-15 см³ и подвергают очистке по п.

9.2.2.

9.2.2.    Очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия

Сконцентрированный ацетоновый экстракт, полученный по п. 9.1. и 9.2.1.,

наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают трижды порциями этилаиетата по 5 см³, которые также наносят на колонку. Диметенамид элюируют с колонки 100 см³ этилацетата (3:2, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек, собирая элюат в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 45°С, остаток в колбе дериватизируют по п. 9.2.3.

9.2.3.    Дериватизация

К сухому остатку в колбе приливают 1 см³ бензола и 1 см³ трифторуксуснго ангидрида. Колбы подсоединят к обратным холодильникам и выдерживают при 60°С в течение 1,5 часов. После охлаждения растворитель отгоняют досуха, остаток растворяют в 2 см³ гексана и анализируют содержание диметенамида по п. 9.7.1.

9.3. Зеленая масса (корзинки, стебли) подсолнечника

9.3.1. Экстракция

Образец измельченного растительного материала массой 20 г помешают в коническую колбу вместимостью 250 см³, вносят 100 см³ смеси ацетон-вода (80:20. по объему) и помещают на встряхиватель на 30 мин. Отстоявшийся раствор осторожно переливают в делительную воронку вместимостью 500 см³, фильтруя его через

14

складчатый фильтр «красная лента». Операцию экстракции повторяют еще дважды порциями 80%-ного ацетон по 50 см³, встряхивая каждый раз по 30 мин. Отстоявшуюся над осадочную жидкость также фильтруют в делительную воронку, объединяя с первым экстрактом. Далее объединенный экстракт подвергают очистке по п. 9.3.2.

9.3.2.    Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К экстракту, полученному по п. 9.3.1. и помешенному в делительную воронку, приливают 50 см³ насыщенного раствора хлористого натрия, тщательно перемешивают. Вносят в делительную воронку 30 см³ гексана, интенсивно ее встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помешенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 см³.

Водную фазу вновь переносят в делительную воронку. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 30 см³ гексана. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха при температуре 40°С и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.3.

9.3.3.    Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.3.2. растворяют в 5-ти см³ смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1, по объему) и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.9. Колбу обмывают 3-мя см³ смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 50 см³ смеси гексан-диэтиловый эфир. Первые 20 см³ элюата отбрасывают, последующие 30 см³ элюата собирают в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре нс выше 35°С, остаток в колбе растворяют 2-х см³ гексана и анализируют содержание диметенамида поп. 9.7.2.1.

9.4. Семена и жмых подсолнечника, семена сои

9.4.1. Экстракция

Образец измельченного растительного материала массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³, вносят 100 см³ ацетонитрила и помещают на встряхиватель на 1 час. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу вместмостью 250 см³. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см³ ацетонитрила и встряхивая каждый раз по 15 минут.

7^

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³, добавляют 35 см³ гексана, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки, используя 50 см³ гексана. Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см³, упаривают досуха при температуре 40°С и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.3.

9.5. Растительное масло (кукурузы, сои, подсолнечника)

9.5.1. Экстракция

Образец масла массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³, растворяют в 100 см³ гексана, выдерживают 20 мин, затем переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³, добавляют 100 см³ ацетонитрила, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку, вносят 50 см³ гексана, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и операцию промывки повторяют, используя 50 см³ гексана. Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 см³, упаривают досуха при температуре 40°С и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.3.

9.6. Корнеплоды и ботва свеклы Образец измельченного растительного материала массой 20 г помешают в коническую колбу вместимостью 250 см³, вносят 80 см³ смеси ацетон-вода (2:1. по объему) и помещают на встряхиватель на 1 час. Отстоявшийся раствор осторожно переливают в коническую колбу вместимостью 250 см³, фильтруя его через складчатый фильтр «красная лента». Операцию экстракции повторяют еще дважды порциями по 50 см³ смеси ацетон-вода (2:1, по объему), встряхивая каждый раз по 15 мин. Отстоявшуюся надосадочную жидкость также фильтруют в коническую колбу, объединяя с первым экстрактом. Объединенный экстракт помещают в морозильную

$9

камеру на 1 час. Выпавший осадок отфильтровывают через фильтр «красная лента», раствор переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³. Вносят в делительную воронку 60 см³ гексана, интенсивно встряхивают ее в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний гексановый слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 250 см³.

Водно-ацетоновую фазу вновь переносят в делительную воронку. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 60 см³ гексана. Объединенную гексановую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха при температуре 40-45°С, остаток в колбе растворяют 2-х см³ гексана и анализируют содержание диметенамида по п. 9.7.2.2.

9.7.    Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

9.7.    /. Условия хроматографирования трифторацетильного производного диметенамида

9.7.1.1.    Газовый хроматограф «Цвет-500», снабженный детектором постоянной скорости рекомбинации ионов

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хромосорб-750 (0,16-0,20 мм) c3%OV-17

Температура термостата колонки - 180°С детектора - 300°С испарителя -200°С

Скорость газа-носителя (азота) - 60 ± 1 см³/мин

Рабочая шкала электрометра - 64 х Ю^,0ом

Объем вводимой пробы - 2 мм³

Ориентировочное время удерживания производного диметенамида: 7 мин 28 сек

9.7.1.2.    Газовый хроматограф «Цвет-500», снабженный детектором постоянной скорости рекомбинации ионов

Колонка стеклянная длиной I м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хроматон N-AW-DMCS (0,16-0,20 мм) c5%SE-30

Температура термостата колонки - 220°С детектора - 300°С

Яб

Таблица

Метрологические параметры

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р ■ 0,95 Предел обнаружения, мг/кг, мг/дм3 Диапазон определяемых концентраций, мг/кг, мг/дм3 Среднее значение определения % Доверительный интервал среднего результата, ± % Вода 0,001 0,001 -0,02 98 Почва 0,02 0,02-0,2 96 12 j Зерно кукурузы 0,02 0,02-0,2 95 13 Зеленая масса кукурузы 0,02 0,02-0,2 90 8 Семена подсолнечника 0,01 о 0 1 о к> 86 ч Жмых подсолнечника 0,01 0,01-0,2 88 10 Зеленая масса подсолнечника (корзинки, стебли) 0,01 0,01-ОД 89 8 ! Семена сои 0,01 о 0 1 о То 85 >2 Масло растительное (кукурузное, подсолнечное, соевое) 0,02 0,02-0,2 84 " 1 13 Корнеплоды свеклы (сахарной, столовой, кормовой) 0,01 0,01-0,2 88 1! ботва свеклы 0,01 0,01-0,2 87 9

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов (ДПР) или термоионным детектором (ТИД) после экстракции из анализируемой пробы воды гептаном, растительного материала ацетоном или смесью ацетон-вода, растительного масла и семян масличных - ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами (зерно и зеленая масса кукурузы, ботва и корнеплоды свеклы) и на колонке с силикагелем (зеленая масса, семена и жмых подсолнечника, семена сои, растительное масло) или оксидом

S3

алюминия (почва, зерно, зеленая масса кукурузы). Идентификацию действующего вещества осуществляют прямым хроматографированием очищенного экстракта или после его дериватизации с образованием трифторухсусного производного.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы: 0,2 - 0.5 нг (в зависимости от способа детектирования).

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания кукурузы, подсолнечника, сои. сахарной, столовой и кормовой свеклы.

3 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Газовый хроматограф серии «Цвет», снабженный детектором постоянной скорости рекомбинации ионов с пределом детектирования по линдану 4 х 10 *^м г/см³ Газовый хроматограф «Кристалл-2000М», снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту в азобензоле не более 5*10'¹³ г/с Весы аналитические ВЛА-200

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500    г и    пределом

допустимой погрешности +/- 0,038 г Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2 Меры массы

Микрошприц МШ-10, МШ-1

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 0,1; 0,2; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см³ Пробирки градуированные вместимостью 10 см³ Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25,50.100 и 200 см³

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими

характеристиками.

3.2. Реактивы

Диметенамид с содержанием действующего вещества 99,9% (фирма «БАСФ»)

Алюминий оксид, активированный, нейтральный, для колоночной хроматографии, 50-200 мкм («Акрос

Органике», Бельгия) Ацетон, чда	ГОСТ 2603
Ацетонитрил для хроматографии, хч	ТУ-6-09-4326-76
Бензол, чда	ГОСТ 5955

Вода бидистиллированная, деионизованная или

перегнанная над КМпО< н-Гексан, хч ТУ-6-09-3375 Гептан ТУ 6-09-4520-77 Метилен хлористый (дихлорметан), хч ГОСТ 12794

Натрий сернокислый, безводный, хч, предварительно ГОСТ 4166 прокаленный в муфельной печи при 500°С в течение 2-х

часов Натрий хлористый, хч Силикагель Л 100/250 меш	ГОСТ 4233
Трифторуксусный ангидрид, purum; £98.0% (GC), Fluka Этиловый эфир уксусной кислоты, ч	ГОСТ 22300
Эфир диэтиловый	ГОСТ 6265

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Азот газообразный из баллона, о.с.ч. Аквадистиллятор	ГОСТ 22340
Аппарат для встряхивания типа АВУ-бс	ТУ 64-1-2851-78
Баня водяная	ТУ 61-1-2850-76
Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Воронка Бюхнера	ГОСТ 25336
Воронки делительные вместимостью 250 и 500 см3 6f	ГОСТ 25336

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовкн допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

б. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7 Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции:    очистка

органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов и растворов внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка колонок с оксидом алюминия и силикагелем для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках.

а

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1.    Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над небольшими количеством КМпО< и прокаленным карбонатом калия.

7.1.2.    Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.3.    Очистка этилацетата

Этил ацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.1.4.    Очистка н-гексана и гептана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Подготовка и кондиционирование колонки Готовую насадку (Хроматон N-AW-DMCS с 5% SE-30 или OV-I7; Хроматон-супер с 5% SE-30; Хромосорб-750 с 3% OV-17; Хромосорб W-HP с 3% OV-10I) засыпают в стеклянную колонку, предварительно промытую последовательно этиловым спиртом, ацетоном и гексаном, уплотняют под вакуумом, колонкч устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота в режиме программирования температуры от 50 до 270°С со скоростью нагрева 1 1рад./мин, затем в изотермическом режиме при температуре 270°С в течение 8-10 часов.

7.3. Приготовление смеси растворителей для экстракции

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 800 см³ ацетона и 200 см³ дистиллированной воды, тщательно перемешивают.

7.4. Приготовление градуировочных растворов

7.4.1.    Исходный раствор диметенамида для градуировки (концентрация 100

мкг/см³)    В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,01 г диметенамида.

растворяют в 50-70 см³ гексана, доводят гексаном до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 6-ти месяцев.

Растворы № 1-7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2.    Раствор № 1 диметенамида для градуировки (концентрация 10 мкг/см³).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10,0 см³ исходного раствора с

концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.4.1.), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике в течение 6-ти месяца.

7.4.3.    Рабочие растворы NzNs 2-7 диметенамида для градуировки (концентрация 0.1 - 2.5 мкг/см³).

В 6 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 1.0, 2.0, 2.5, 5.0, 10.0 и 25.0 см³ раствора Ns 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.4.2.), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NsNs 2 - 7 с концентрацией диметенамида 0.1, 0.2,0.25, 0.5, 1.0 и 2.5 мкг/см³, соответственно. Растворы хранятся в холодильнике не более 2-х недель.

7.5. Приготовление растворов внесения для оценки полноты извлечения диметенамида из исследуемых образцов растительного материала

7.5.1.    Исходный раствор диметенамида (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,01 г диметенамида, растворяют в 50-70 см³ ацетона, доводят им же до метки, тщательно перемешивают.

7.5.2.    Основной раствор диметенамида для внесения (концентрация 10 мкг/см³).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10,0 см³ исходного раствора с

концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.5.1.),    доводят до метки ацетоном, тщательно

перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике не более 2-х недель.

Для внесения в образцы растительных масел используют раствор № 1 лиметенамида в гексане (для градуировки), приготовленный по п. 7.4.2.

7.6. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации диметенамида в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки №№ 2, 3, 5, 6 или 4-7.

7.6.1.    Определение методом прямого хроматографирования

В испаритель хроматографа вводят по 2-4 мм³ каждого градуировочного раствора №№ 2, 3, 5, 6 и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.7.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

7.6.2.    Определение с помощью трифторуксусного производного

В 4 круглодонные колбы вместимостью 10 см³ помещают по 1 см³ каждого градуировочного раствора №№ 4-7, растворитель упаривают или отдувают потоком теплого воздуха. К сухому остатку в колбах приливают 1 см³ бензола и I см³ трифторуксусного ангидрида. Колбы подсоединят к обратным холодильникам и выдерживают при 60°С в течение 1,5 часов. После охлаждения растворитель отгоняют досуха, остаток растворяют в 1 см³ гексана.

В испаритель хроматографа вводят по 2 мм³ каждого градуировочного раствора трифторуксусного производного, соответствующего концентрации диметенамида 0.25. 0.5, 1.0 и 2.5 мкг/см³, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.7.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

7.7. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта

Оксид алюминия предварительно высушивают в течение суток в сушильном шкафу при 110°С. После охлаждения добавляют по весу 4% дистиллированной воды и встряхивают в закрытом сосуде на механическом встряхивателе в течение часа.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 400 мм, внутренним диаметром 15 мм уплотняют тампоном из стекловаты и при постукивании по стенкам колонки стеклянной палочкой наполняют ее на высоту 130 мм подготовленным оксидом алюминия, сверху сорбента помещают слой безводного сульфата натрия высотой 20 мм. После этого колонка готова к работе.