4.1. Методы контроля. Химические факторы
Методические указания МУК 4.1.1973-05
"Определение остаточных количеств эпоксиконазола
в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005
г.)
Дата введения: 1 июля 2005
г.
Введены впервые
1. Вводная часть
Действующее вещество: эпоксиконазол.
(2RS,3SR)-1-[3-(2-хлорфенил)-2,3-эпокси-2-(4-фторфенил)пропил]-1Н-1, 2,4-триазол (ИЮПАК).
цис-1-[[3-(2-хлорфенил)-2-(4-фторфенил)оксиранил] метил]-1Н-1,2,4-триазол
(С.А.).
Структурная формула:
Эмпирическая формула: C17H13ClFN3O.
Молекулярная масса: 329,8.
Бесцветное кристаллическое вещество без запаха.
Температура плавления: 136,2 °С.
Давление паров при 20 °С: менее 0,01
мПа.
Коэффициент распределения н-октанол/вода:
KowlogP = 3,44 (рН 7).
Растворимость (г/л) при 20 °С: ацетон
- 144, дихлорметан - 291, н-гептан
- 0,4; вода - 6,6 мг/л.
Вещество стабильно при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в водном растворе при различных значениях температуры
и рН.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - более
5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс - более
2000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс - более 5,3 мг/л
воздуха. Эпоксиконазол не оказывает раздражающего действия
на кожу и слизистую оболочку глаз кролика. LC50 для рыб - 2,2 -
6,8 мг/кг (96 ч).
Эпоксиконазол нетоксичен
для пчел, дождевых червей, птиц, дафний и водорослей.
Гигиенические нормативы
МДУ в сахарной свекле 0,1 мг/кг.
Область применения препарата
Эпоксиконазол - системный фунгицид
широкого спектра действия из класса триазолов. Высокоэффективен против возбудителей ржавчины, мучнистой росы,
пятнистостей листьев и колоса зерновых культур.
2. Методика определения остаточных количеств эпоксиконазола
в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на газохроматографическом определении эпоксиконазола на неподвижной фазе SE-30 с использованием электронозахватного
детектора (ЭЗД) после экстракции его из растительного материала водным ацетоном,
очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на
колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов,
применяемых в интенсивной технологии выращивания сахарной свеклы.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Таблица
Метрологическая характеристика метода
Анализируемый объект
|
Метрологические параметры, Р
= 0,95, n = 20
|
предел обнаружения, мг/кг
|
диапазон определяемых концентраций, мг/кг
|
среднее значение определения, %
|
стандартное отклонение S, %
|
относительное отклонение DS, %
|
доверительный интервал среднего, %
|
Ботва
|
0,05
|
0,05 - 0,5
|
83,5
|
3,9
|
1,7
|
±3,7
|
Корнеплоды
|
0,05
|
0,05 - 0,5
|
83,1
|
2,9
|
1,3
|
±2,7
|
2.2. Реактивы, растворы и материалы
Эпоксиконазол
с содержанием д.в. 99,8 % (БАСФ, Германия)
|
|
Ацетон
|
ГОСТ 2603-79
|
Вода дистиллированная или деионизованная
|
ГОСТ 7602-72
|
н-Гексан,
ч
|
ТУ 6-09-3375-78
|
Калия перманганат
|
ГОСТ
20490-75
|
Кальция хлорид, хч
|
ГОСТ 4161-77
|
Калий углекислый, хч
|
ГОСТ 4221-76
|
Кислота серная, хч
|
ГОСТ 4204-77
|
Натрий двууглекислый
|
ГОСТ 83-79
|
Натрия гидроксид,
хч
|
ГОСТ 4328-77
|
Натрия сульфат безводный, хч
|
ГОСТ
4166-76
|
Натрия хлорид, хч
|
ГОСТ
4233-77
|
Этилацетат
|
ГОСТ
22300-76
|
Элюент № 1 для колоночной
хроматографии: смесь гексан-ацетон (8:2, по объему)
|
|
Элюент № 2 для колоночной
хроматографии: смесь гексан-ацетон (6:4, по объему)
|
|
Азот газообразный, осч
|
ГОСТ
9293-74
|
Силикагель (0,063 - 0,2 мм) для адсорбционной
хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности
|
|
Стекловата
|
|
Целит 535 (2 - 15 мкм)/Серва, Германия/
|
|
Фильтры бумажные, синяя лента
|
ТУ 6-09-1678
|
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Хроматограф газовый "Кристалл
2000М" с ЭЗД с пределом детектирования по линдану
не выше 8,2×10-15
г/см3 или аналогичный
|
|
Колонка хроматографическая
1500×3 мм, неподвижная
фаза 3 % ОV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)
|
|
Колонка хроматографическая
1500×3 мм, неподвижная
фаза 3 % SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)
|
|
Колонка капиллярная для ГЖХ ZB-1,
длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная
фаза SE-30, фирма Phenomenex, США или аналогичная
|
|
Микрошприц
емкостью 10 мкл МШ-10Ф
|
ТУ 64-1-2850
|
Весы аналитические типа ВЛР-200
|
ГОСТ
19401-74
|
Гомогенизатор или аналогичный
|
МРТУ 42-1505-63
|
Ротационный испаритель, тип ИР-1М
|
ТУ 25-11-917-76
|
Прибор для перегонки при
атмосферном давлении
|
|
Вакуумный водоструйный насос
|
ГОСТ 10696-75
|
Воронка Бюхнера
|
ГОСТ 0147-73
|
Колба Бунзена
|
ГОСТ 5614-75
|
Воронки делительные вместимостью
100 и 500 мл
|
ГОСТ
25336-82
|
Колбы конические с притертыми
пробками, вместимостью 250 мл
|
ГОСТ
25336-82
|
Колбы мерные, вместимостью 50 и
100 мл
|
ГОСТ
1770-74
|
Колбы грушевидные, вместимостью
50, 100, 250 мл
|
ГОСТ
25336-82
|
Цилиндры мерные, вместимостью 50,
100 и 250 мл
|
ГОСТ
1770-74
|
Пробирки
градуированные с притертыми пробками, вместимостью 5 и 10 мл
|
ГОСТ 10515-75
|
Пипетки мерные, вместимостью 1, 2
и 5 мл
|
ГОСТ 20292-74Е
|
Воронки стеклянные
|
ГОСТ 9737-70
|
2.4. Отбор проб
Отбор образцов проводится в соответствии с "Унифицированными
правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов
окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов"
(№ 2051-79 от 21.08.79).
Отобранные пробы ботвы и корнеплодов хранят в стеклянной или
полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней; при длительном хранении (не
более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре
-18 °С. Перед анализом ботву и корнеплоды измельчают и отбирают усредненную пробу.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат
и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан
встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока
свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно
промывают водой, 2,5 %-м раствором гидроксида натрия и
снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и
перегоняют.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона
10 г KMnO4
и 2 г K2CO3).
Этилацетат промывают равным объемом 5 %-го раствора двууглекислого
натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом
очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера
через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем
высушивают при температуре 150 °С в течение 3 ч.
2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки
Готовую насадку (3 % SE-30 на Хромосорбе
W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают
в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота
при температуре 270 °С в течение 8 - 10 ч.
2.5.3. Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор эпоксиконазола
с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,8
% д.в., в ацетоне в мерной колбе
емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл
готовят из основного стандартного раствора эпоксиконазола
соответствующим последовательным разведением ацетоном. Рабочие растворы хранят в
холодильнике не более недели.
2.5.4. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа
вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора эпоксиконазола
с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных
измерений и находят среднее значение площади хроматографического
пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости
площади хроматографического пика в мВ х с от концентрации эпоксиконазола
в растворе в мкг/мл.
2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем
для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром
0,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля
в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края
сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку
последовательно промывают 20 мл смеси гексан-ацетон (8:2,
по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 -
2 капли в с, после чего она готова к работе.
2.5.6. Проверка хроматографического поведения эпоксиконазола на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 мл
отбирают 1 мл стандартного раствора эпоксиконазола с концентрацией
1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл
смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) и наносят на колонку.
Промывают колонку 50 мл смеси гексан-ацетон (8:2) и затем
40 мл смеси гексан-ацетон (6:4) со скоростью 1 - 2 капли
в с. Отбирают фракции по 10 мл
каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на
содержание эпоксиконазола по п. 2.7.1.
Фракции, содержащие эпоксиконазол,
объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют
по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание
эпоксиконазола в элюате, определяют
полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем
элюента.
Примечание. Профиль вымывания эпоксиконазола
может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1. Экстракция эпоксиконазола и очистка экстракта
К навеске (25 г) измельченной ботвы или корнеплодов добавляют
100 мл смеси ацетон-вода (80:20, по объему), гомогенизируют 3 мин при 10000 об/мин. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок
на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (80:20). Из объединенного
экстракта отбирают аликвоту раствора (около 32 мл), эквивалентную
5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на роторном вакуумном
испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку
емкостью 100 мл, приливают 15 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 30 мл гексана и содержимое встряхивают в течение 1 мин. После разделения
слоев отделяют гексановую фазу и собирают ее в
колбу емкостью 100 мл. Оставшуюся водную фазу обрабатывают гексаном
еще два раза (по 30 мл). Объединенный гексановый экстракт
фильтруют через слой безводного сульфата натрия в грушевидную колбу емкостью 200
мл и затем упаривают досуха на роторном испарителе при температуре
30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.2.
2.6.2. Очистка на колонке с силикагелем
Остаток в колбе, полученный при упаривании экстракта растительного
материала из п. 2.6.1, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-ацетон (8:2) в подготовленную хроматографическую
колонку (п. 2.5.5).
Промывают колонку 40 мл элюента № 1, элюат отбрасывают.
Эпоксиконазол элюируют 30 мл
элюента № 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью
100 мл. Полученный раствор упаривают досуха на роторном испарителе
при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл этилацетата и анализируют
на содержание эпоксиконазола по п. 2.7.1.
2.7. Условия хроматографирования
2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками
Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с электронозахватным
детектором с пределом детектирования
по линдану не выше 8,2×10-15 г/см3.
Колонка хроматографическая, стеклянная,
1 500×3 мм; неподвижная фаза - 3 % SE-30 на Хромосорбе
W/HP (0,12 - 0,15 мм).
Температура детектора 320 °С, испарителя
270 °С, термостата колонки 230 °С.
Скорость потока газа-носителя (азота) - 40 мл/мин.
Объем вводимой пробы - 2 мкл.
Время удерживания эпоксиконазола -
2 мин 10 с.
Предел детектирования - 0,1 нг.
Линейный диапазон детектирования - 0,1 - 1,0 нг.
Альтернативная фаза: 3 % OV-17 на Хромосорбе
W/HP (0,12 - 0,15 мм), хроматографическая колонка 1 500×3
мм; температура детектора 320 °С, инжектора 270 °С, термостата
колонки 255 °С.
Время удерживания эпоксиконазола -
3 мин 25 с.
Каждую анализируемую пробу вводят три раза и вычисляют среднюю
площадь пика.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией
0,5 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.
2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками
Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с электронозахватным
детектором с пределом детектирования
по линдану не выше 8,2×10-15 г/см3.
Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м×0,32 мм×0,5
мкм (SE-30).
Температура термостата испарителя - 270 °С,
детектора - 320 °С, термостата колонки по следующей программе: 170 °С - 2 мин; 25
°С/мин до 250 °С; выдержка - 10 мин.
Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 22,5 мл/мин;
газ для поддува в детектор - азот, расход - 19,3 мл/мин.
Деление потока: 1:6.
Абсолютное время удерживания эпоксиконазола:
9 мин 10 с.
Объем вводимой пробы - 1 мкл.
Линейный диапазон детектирования: 0,025 - 0,5 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют
среднюю площадь пика.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией
0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание эпоксиконазола рассчитывают
методом абсолютной калибровки по формуле:
где
Х - содержание эпоксиконазола в пробе, мг/кг;
Н1
- площадь пика анализируемой пробы, мВ х с;
H0 - площадь пика стандартного
раствора, мВ х с;
А - концентрация стандартного
раствора эпоксиконазола, мкг/мл;
V - объем экстракта,
подготовленного для хроматографирования, мл;
m
- масса анализируемой части образца, г (для ботвы и корнеплодов
- 5 г).
3. Требования техники безопасности
Соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с легко
воспламеняющимися жидкостями, токсичными веществами, электронагревательными приборами,
сосудами, работающими под вакуумом.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости
измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний
контроль качества результатов количественного химического анализа.
5. Разработчики
Назарова Т.А., Микитюк О.Д., Л.В. Дубовая,
А.М. Макеев,
ВНИИ фитопатологии, 143050 Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
|
Г.Г.
Онищенко
|