УТВЕРЖДАЮ
Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,
|
Дата введенил*_г—.—.-г—"" |
Первый заместитель ми»*#етра здрафохранения Российс>
т. Онищенко
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по определению остаточных количеств ленацила в воде, корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы методом газожидкостной хроматографии
Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в воде, корнеплодах и ботве сахарной, столовой и хормовой свеклы массовой концентрации ленацила в диапазонах 0,0005 - 0,005 мг/дм3 (вода); 0,02 - 0,2 мг/кг (корнеплоды свеклы); 0,05 -0,5 мг/кг (ботва).
Ленацил - действующее вещество препарата ЛЕНАЦИЛ, СП (800 г/кг) фирма производитель Кеминова А/S, Дания.
3-Циклогексил-1,5.6.7-тетрагидроциклопентапиримидин-2,4(3//)*Дион (IUPAC)
C,jH„N202
Мол. масса 234,3
Кристаллическое вещество белого или бежевого цвета. Температура плавления 315,6 - 315,8°С. Давление паров при 25°С: 2*10"4 мПа. Растворимость в органических растворителях при 25°С (г/кг): диэтиловый эфир. - 0,3; гексан - 0,5; бензол - 0,7; ацетон, хлороформ - 0,9; ксилол -2; этанол - 2,4, диметилформамид - 8. Растворимость в воде при 25°С - 6 мг/ дм3.
Ленацил стабилен в водной кислой среде, разрушается в щелочной среде при нагревании. Скорость гидролитического распада (pH 5 - 9): DT$o > 30 дней (25°С). рКа 10.3.
Коэффициент распределения н-октанол/вода K^logP и 2,31.
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая пероральная токсичность (LD so) для крыс > 5000 мг/кг; Острая дермальная токсичность (LD so) для крыс > 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LKso) Д^я крыс >5120 мг/м3(4 часа).
Область применения препарата
Ленацил рекомендуется к применению в качестве селективного довсходового или послевсходового гербицида против однолетних двудольных и злаковых сорняков ив посевах свеклы сахарной, столовой, кормовой.
Гигиенические нормативы:
ПДК в воде водоемов - 0,001 мг/дм3.
ПДК в почве - 0,25 мг/кг
МДУ в свекле сахарной, столовой и кормовой - 0,1 мг/кг
1. Метрологические характеристики метода Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1
Метрологические параметры |
—
Л и минируемый объект |
Метрологические параметры, Р - 0,95, п = 24 |
Предел
обнару
жения.
мг/кг
(дм5) |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (дм3) |
Среднее
значение
определения
% |
Стандартное
отклонение,
S,% |
Доверительный интервал среднего результата, % |
Подл |
0,0005 |
0,0005 - 0,005 |
94,26 |
1,66 |
3,5 |
|>«»1'иемлоды (♦мирной свеклы |
0,02 |
0,02 - ОД |
92,31 |
2,43 |
5,1 |
jjiMI'llcnnOAbl Нилиной свеклы |
0,02 |
0,02-0,2 |
91,29 |
2,87 |
6.0 |
ИС|ЖГПЛОДЫ
(нрмоиой свеклы |
0,02 |
0,02-0,2 |
93,22 |
1,93 |
4,0 |
jfolnrt кормовой Вилы |
0,05 |
0,05 - 0,5 |
91,34 |
2,31 |
4.8 |
|
Колонка капиллярная НР-50, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм Температура детектора: 350°С испарителя: 280°С колонки: 270°С
Скорость воздуха 200 см5 /мин; водорода 14,0 см3/мин, газа 3 (азот) 30 см3/мин Скорость газа 1 (азот): 35 см/сек, давление 174 кПа, поток 1,8535 см3/мин, деление потока 1 : 5,395, сброс 10 см3/мин Хроматографируемый объем; 2 мм3 Ориентировочное время выхода ленацила: 6 мин 43 сек;
Линейный диапазон детектирования 1 - 20 нг
Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор ленацила с концентрацией 10 мкг/см3, разбавляют ацетоном.
10. Обработка результатов анализа
Содержание ленацила в пробе рассчитывают по формуле:
А* V
X =--------- , где
ш
X - содержание ленацила в пробе, мг/кг(дм3);
А - концентрация ленацила, найденная по градуировочному графику, мкг/см3;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3; ш - масса (объем) анализируемого образца, г(см3);
11. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
12. Разработчики.
Юдина Т В., Федорова Н.Е., Волчек С.И., Рогачева С К.
Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (ФНЦГ им.Ф Ф.Эрисмана)
141000, г. Мытищи Московской обл., ул. Семашко, д. 2, лаборатория аналитических методов контроля.
Телефон: (095) 586-1276
Таблиц» 2
Полнота извлечения ленацила из воды, корнеплодов сахарной, столовой и кормовой свеклы, ботвы кормовой свеклы __(6 повторностей для каждой концентрации)_ |
Среда |
Внесено ленацила мг/кг |
Обнаружено
ленацила
мг/кг |
Полнота извлечения, % |
Вода |
0,0005 |
0,00047 ± 0.00002 |
94,25 |
|
0,001 |
0,00095 ± 0.00004 |
95,04 |
|
0,002 |
0,00188 + 0,00008 |
94,05 |
|
0,005 |
0,00468 ± 0,00028 |
93,71 |
Корнеплоды |
0,02 |
0,01892 + 0,00099 |
94,60 |
сахарной свеклы |
0,04 |
0,03602 + 0,00189 |
90,06 |
|
0,1 |
0,09298 + 0.00476 |
92,98 |
|
0,2 |
0,18318 ± 0,00915 |
91,59 |
Корнеплоды |
0,02 |
0,01861 ±0,00125 |
93,06 |
столовой свеклы |
0,04 |
0,03671 ±0,00192 |
91,78 |
|
0,1 |
0,08913 ±0,00476 |
89,13 |
|
0,2 |
0,18234 ±0,01007 |
91,17 |
Корнеплоды |
0,02 |
0,01870 ±0,00103 |
93,49 |
кормовой свеклы |
0,04 |
0,03711 ±0,00178 |
92,78 |
|
0,1 |
0,09379 ±0,00591 |
93,79 |
|
0,2 |
0,18661 ±0,01021 |
92,81 |
Ботва кормовой |
0,05 |
0,04512 ±0,00331 |
90,25 |
свеклы |
0,1 |
0,09108 ± 0,00608 |
91,08 |
|
0,25 |
0,23046 ±0,01370 |
92,18 |
|
0,5 |
0,45930 ± 0,02848 |
91,86 |
|
2. Метод измерений |
Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором после экстракции из анализируемой пробы воды хлористым метиленом, растительного материала - смесью ацетон-вода, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешнвающимися фазами и на колонке с флорисилом
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки
Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы - 2 нг.
В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания свеклы кормовой, столовой, сахарной.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту в азобензоле не более 5*10'13 г/с, предназначенный для работы с капиллярной колонкой Весы аналитические ВЛА-200
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 см3 Меры массы Микрошприц МИМОМ
Пипетки градуированные 2-го класса точности иместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10 см3
11робирки градуированные (с пришлифованной пробкой) иместимостью 10 см3
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25. 100, 250, 500 и 1000 см3 Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими ||>актеристиками.
3.2. Реактивы Иснацил с содержанием действующего вещества 99,5% (Кеминова, Дания)
Ацетон, осч ГОСТ 2306
Вола дистиллированная ГОСТ 6709
и Гексан, хч ТУ-6-09-3375
/6?
Допускается использование реаюгивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Азот газообразный из баллона, о.с.ч. Аппарат для встряхивания типа АВУ-бс Баня водяная |
ТУ 64-1-2851-78 |
Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные |
ТУ 6-09-2678-77 |
Воронки делительные вместимостью 250 и 1500 см1 |
ГОСТ 25336 |
Воронка Бюхнера |
ГОСТ 25336 |
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм Генератор водорода Гомогенизатор Груша резиновая |
ГОСТ 25336 |
Аквадистиллятор |
ГОСТ 22340 |
Колба Бунзена |
ГОСТ 25336 |
Колбы плоскодонные вместимостью 400 - 500 см3 |
ГОСТ 9737 |
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 150 и 500 см3
Колонка капиллярная НР-50, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм Компрессор |
ГОСТ 9737 |
Насос водоструйный |
ГОСТ 10696 |
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, |
ТУ 25-11-917-74 |
Швейцария
Стаканы химические, вместимостью 100 и 400 см3 Стекловата
Стеклянная колонка длиной 25 см, внутренним диаметром |
ГОСТ 25336 |
IS мм
(/геклянные палочки
Установка для перегонки растворителей
Флорисил, адсорбент для хроматографии L 60-100 меш
(фирмы «Флука», Швейцария)
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с реактивами по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.
• выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка
органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов.
кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с флорисилом для очистки экстрактов, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с флорисилом
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1. Очистка ацетона
Ацетон перегоняют над небольшими количеством КМпО< и прокаленным карбонатом калия.
7.1.2. Очистка н-гексана
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
7.2. Приготовление смеси растворителей для экстракции
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 900 см3 ацетона и 100 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают
7.5. Приготовление градуировочных растворов
7.3.1. Исходный раствор пенаципа для градуировки (концентрация 100 мкг/см3)
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,01 г ленацила, растворяют в
50-70 см3 ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
Растворы № 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.
7.3.2. Рабочие растворы №№ 1-5 ленацила для градуировки (концентрация 0,5 -
10мкг/см3) В 5 мерных колб вместимостью 100 см3 помещают по 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 и 10.0 см3 исходного раствора с концентрацией 100 мкг/см3 (п. 7.3 1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы 1 - 5 с
концентрацией ленацила 0.5,10, 2.5, 5.0 и 10.0 мкг/см3, соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике не более 10-ти дней
Эти растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения ленацила из исследуемых образцов.
7.4. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации ленацила в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки №№ 1 - 5.
В испаритель хроматографа вводят по 2 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.
7.5. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстрактов
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 15 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г флорисила в 20 - 25 см3 гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 25 см3 смеси гексан-ацетон (8:2 по объему), затем 25 см3 гексана со скоростью 1-2 капли в сек. После этого колонка готова к работе.
7.6. Проверка хроматографического поведения ленацила на колонке с флорисилом
В круглодонную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 стандартного раствора № 5 в концентрации 10 мкг/см3. Упаривают растворитель досуха, остаток растворяют в 5-ти см3 смеси гексан-ацетон (9:1, по объему) и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.5. Промывают колонку 30 см3 смеси гексан-ацетон (9:1, по объему), затем 30 см3 смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек. Фракционно (по 10 см3) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1-м jm3 ацетона, анализируют на содержание ленацила по п. 9.4.
Фракции, содержащие ленацил, объединяют вместе и вновь анализируют по
п 9 4
Рассчитывают содержание вещества в элюатах, определяют полноту смывания ; колонки и необходимый для очистки объем элюента.
ПРИМЕЧАНИЕ: Проверку хроматографического поведения ленацила следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичсств пестицидов" (№ 2051-79 от 21.08.79 г).
Отобранные пробы воды анализируют в день отбора или хранят при 4°С в течение 10-ти дней.
Пробы ботвы и корнеплодов свеклы, хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 5-ти дней Для длительного хранения пробы растительного материала замораживают и хранят при температуре -18°С
Перед анализом воду фильтруют через неплотный фильтр, образцы корнеплодов и ботвы свеклы измельчают.
9. Выполнение определения
9.1. Экстракция
9.1.1. Вода
1000 см3 анализируемого образца воды помешают в делительную воронку вместимостью 1500 см3, добавляют 150 см3 хлористого метилена, интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин После полного разделения фаз нижний органический слой сливают в коническую колбу вместимостью 500 см3. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 75 см3 хлористого метилена. Объединенную органическую фазу фильтруют через хлопковую вату, помещенную в конусную химическую воронку, в круглодонную колбу вместимостью 500 см3 И упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35°С. Сухой остаток в колбе растворяют в 5-ти см3 смеси растворителей гексан-ацетон (9:1) и подвергают очистке по п. 9.3.
9.1.2. Корнеплоды и ботва свеклы
Образец измельченных корнеплодов свеклы массой 50 г или ботвы массой 20 г помещают в коническую колбу (или химический стакан) вместимостью 400 см3, вносят 75 см3 смеси ацетон-вода (9:1, по объему), гомогенизируют в течение 1 мин, затем добавляют 75 см3 смеси ацетон-вода (9:1, по объему) и помешают на встряхиватель на 30 мин
Раствор (с осадком корнеплодов, ботвы свеклы) фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр «красная лента» под вакуумом Осадок на фильтрг
*72
промывают 50 см3 смеси ацетон-вода (9:1, по объему). Экстракт и промывку объединяют, помещая в круглодонную колбу. Далее проводят очистку по п. 9.2.
9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмемивающихся растворителей
Экстракт, полученный по п. 9.1. и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (-20 см3) при температуре не выше 35°С, внимательно следя за процессом и не допуская переброса жидкости при вспенивании. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3, добавляют 20 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, 50 см3 хлористого метилена, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 см3. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 20 см3 хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, и помещенную в круглодонную колбу, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.
9.3 Очистка экстракта на колонке с флорисилом
Остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2. или 9.1.1. растворяют в 5-ти см3 смеси гексан-ааетон (9:1, по объему) и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 см3, которые также наносят на колонку Промывают колонку 20 см3 гексана, затем 20 см3 смеси гексан-ацетон (9:1, по объему), элюат отбрасывают. Ленацил элюируют с колонки 30 см3 смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1-2 капли в сек, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35°С. Остаток в колбе, растворяют 1 см3 ацетона и анализируют на содержание ленацила по п. 9.4.
9.4. Условия хроматографирования
Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
Газовый хроматограф «Кристалл-2000М», снабженный термоионным
детектором
/73