Главный Г нын врач РФ,
Первый )анения РФ
_ Онищенко
«_3 г.
Дата введения: с I uu.is куч \
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЦИМОКСАНИЛА В ТОМАТАХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1. Вводная часть
Фирма производитель: ЗАО Фирма «Август» Торговое наименование: Ордан Действующее вещество: цимоксанил (ISO). Структурная формула:
CNCH3CH2NHC(0)NHC(0)C = NOCH3
I -(2-циано-2метоксииминоацетил)-3-этилмочевина (IUPAC).
Трутго формула: C7H10N4O3 Мол. Масса: 198.2
Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество.
Температура плавления: 160°С Давление паров при 20°С - 15x10'2 шРа
Коэффициент распределения н-окганол/вода: K<>w log Р * 0,59 (pH 5); 0,67(рН 7)
Константа Генри - 3,8хЮ'5 (pH 7), 3,Зх10'5(рН 5).
Растворимость в воде при 20°С - 890 мг/л (pH 5); в ацетоне - 62,4 г/л; в ацетонитриле - 57 г/л; в этилацетате - 28 г/л; н-октаноле - 1,43 г/л; метаноле - 22,9 г/л.
Нешсство стабильно в интервале pH 2-7,3, в щелочных растворах быстро разлагается.
1УГ*о*1 8 дня; рКа=9,7
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая оральная токсичность (LD50) для крыс =960 мг/кг.
Острая дермальная токсичность (LD50) > 2000 мг/кг.
Острая ингаляционная токсичность (LC50) > 5060 мг/м3.
Не раздражает слизистую глаз и легко раздражает кожу кроликов.
LCjo (96 часов) для рыб - 61 мг/л (радужная форель); 91 мг/л (карп)
LCjo (48 часов) для дафний - 27 мг/л
Не токсичен для пчел: LDjo (48 часов контактно)> 25 мкг/лчелу LDjo (48 часов орально)> 1000 мкг/пчелу Черви: LCso (14 дней) > 2208 мг/кг почвы Класс токсичности по ВОЗ - III (д.в.), ЕПА - III (преп. форма).
В России установлены следующие гигиенические нормативы для цимоксанила:
ДСД - 0,02 мг/кг, ОДК в почве - 0,04 мг/кг; ПДК в воде - 0,3 мг/л (орг.); ОБУВ в воздухе
рабочей зоны - 1,0 мг/м3; в атмосферном воздухе - 0,003 мг/м3
МДУ (мг/кг) в картофеле, огурцах - 0,05; ВМДУ (мг/кг) в томатах и винограде - 0,1.
Область применении:
Контактный фунгицид с местным системным эффектом, обладающий защитным и лечащим действием. Высокоактивен против грибов, вызывающих фитофтороз и пероноспороз, не действует на возбудителей настоящей мучнистой росы. Длительность защитного действия составляет 4-6 дней, поэтому рекомендуется его использование в смеси с другими фунгицидами защитного контактного действия.
2. Методика определения цимоксанила в томатах методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на определении цимоксанила с помощью газожидкостной хроматографии при использовании термоионного детектора на неподвижной фазе ХЕ-60 после экстракции органическим растворителем, очистки экстракта путем перевода действующего вещества в водную фазу и повторной экстракции органическим растворителем. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
В условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании томатов (дитиокарбаматы, пиретроиды и др.).
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и 2.
|
Метрологическая характеристика метода
Таблица 1 |
|
| Н)ьект анализа |
Предел
обнаруже
ния
мг/кг |
Диапазон
определяемых
концентраций
мг/кг |
Среднее значение определения, %(для каждого объекта п=24) |
Относитель
ное
стандартное
отклонение
S,% |
Доверительный интервал среднего, п*=24, Р“0.95 |
|
шматы |
0,025 |
0.025 - 0.250 |
82.0 |
6.5 |
6.0 |
|
Полнота определения цимоксанила в томатах (N=5 для каждой концентрации)
|
Таблица 2 |
|
Среда |
Внесено,
мг/кг |
Найдено,
мг/кг |
Стандартное
отклонение,
S, мг/кг |
Доверительный
интервал,
(Р=0.95, п*6),% |
Полнота определения, % |
|
|
0.025 |
0.023 |
-ТПГО7- |
7.9 |
80.2 |
|
|
0.050 |
0.047 |
-иш- |
5.8 |
81.4 |
|
юматы |
0.100 |
0.094 |
0.005 |
5.7 |
82.6 |
|
|
0.250 |
0.238 |
0.010 |
4.6 |
84.0 |
|
I Реактивы и материалы
ммлм I нческий стандарт цимоксанила 99.4% тон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.
|| лоный эфир уксусной кислоты, ч.д.а., ГОСТ 22300-76. фий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76, свежепрокаленный. и дистиллированная, ГОСТ 6709-79.
|» шная кислота, ГОСТ 857-88, 0,1 н раствор.
•роформ, ГОСТ 20015-74.
редка для колонки: 5% ХЕ-60 на хроматонс N-Super, размер частиц 0,125-0,160 мм, молол (Чехия).
| сообразный особой чистоты, ГОСТ 9293-74. юрод технический. ГОСТ 3022-70. лух ГОСТ 11882-73.
• У Приборы и посуда
ЕоиыЙ хроматограф Цвет-500 или аналогичный.
Ганоака ультразвуковая "Серьга” УЗМ002 или аналогичная.
ационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный.
/43
Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75 Баня водяная, ТУ 46-22-603-75
Колбы круглодонные на 100 и 250 мл. КГШ1-100, КГШ1-250,, ГОСТ 10394-72.
Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75 Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 10054-75.
Концентраторы конические НШ29 КГУ 100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72 Пипетки мерные на 0,1; 1,0; 5,0; 10 и 25 мл ГОСТ 20292-74 Стаканы стеклянные на 100 мл, ГОСТ 6236-72 Колбы мерные на 25,50,100 см3, ГОСТ 1770-74.
Фильтры бумажные «Красная лента» ТУ 6-09-1678-86
2.4. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора npflfl сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды Ш определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79). Отобранные проб] хранят в морозильной камере при -18°С в течение 10 месяцев.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют. Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 м* растворителя испаряют с помощью вакуумного ротационного испарителя при температур! 40°С до объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могу) мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.
2.5.2. Кондиционирование колонки
Готовую насадку (5% ХЕ-60 на хроматоне N-AW) засыпают в стеклянную колоиш уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа и# подсоединяя к детектору, и выдерживают при температуре 220°С в течение 8 часов в азота.
2.5.3. Приготовление стандартного и градуировочных растворов
Основной раствор цимоксанила готовят, количественно перенося 10 мг аналитическое стандарта в мерную колбу на 100 мл, растворяют навеску в ацетоне. Из полученное! раствора с концентрацией 100 мкг/мл готовят рабочие растворы с концентрациями 2.0 мкг/мл, 4.0 мкг/мл, 8.0 мкг/мл, 20 мкг/мл последовательным разведением в ацетоне.
Для внесения цимоксанила в образец при определении полноты извлечения использущ соответствующий стандартный раствор в ацетоне.
2.5.4. Построение граду ировочного графика
Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика Of концентрации цимоксанила в растворе в хроматограф вводят по 2 мкл градуировочпм! растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 * точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты (площади) пиков и стр«><»
график зависимости среднего значения высоты, мм (площади, мв/сек) пика от концентрации цимоксанила в градуировочном растворе (мкг/мл).
2.S.S. Подготовка приборов и средств измерения.
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Экстракция и очистка экстракта
Навеску (40 г) измельченных томатов помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 50 мл этилацетата и экстрагируют цимоксанил на ультразвуковой бане в течение 15 мин. Затем раствор методом декантации переносят в делительную воронку через фильтр ((красная лента». После разделения слоев нижнюю водную фракцию помещают в колбу для повторной экстракции, верхний слой этилацетата собирают в концентратор.
Повторно экстрагируют цимоксанил 50 мл этилацетата. Органический экстракт объединяют, добавляют в концентратор 20 мл дистиллированной воды и отгоняют этил ацетат на роторном вакуумном испаригеле при температуре не выше 50°С.
2.6.2. Очистка экстракта
Водный экстракт помещают в делительную воронку, ополаскивая концентратор 30 мл поды. Добавляют в воронку 20 мл хлороформа и интенсивно встряхивают 2 минуты. После разделения фаз нижний хлороформный слой собирают в стакан объемом 100 мл. Экстракцию повторяют дважды, используя по 20 мл хлороформа. Объединенный хлороформный экстракт помещают в делительную воронку, добавляют туда 10 мл 0,1 н соляной кислоты и интенсивно встряхивают 2 минуты. После разделения фаз нижний хлороформный слой собирают в конический концентратор, пропуская его через слой безводного сернокислого ипгрия. Осушитель ополаскивают 10 мл хлороформа. Экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50°С. Последние капли растворителя удаляют током азота. Сухой остаток растворяют в Кмл ацетона и 2 мкл раствора вводят в Ч|юматограф.
2.6.3. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф «Цвет-500М» с ТИД (азотным) или аналогичный с пределом детектирования не выше 5x10'13 г/см3 по азоту в азобензоле.
Шкала электрометра 16x109.
К'олонка стеклянная, длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм. Носитель - Хроматон N-Super, размер частиц 0,125-0,160 мм, неподвижная фаза 5% ХЕ-60.
Температура термостата колонки 170°С, детектора 390°С, испарителя 340°С.
Расход водорода - 16, азота - 38, воздуха - 200 мл/мин. объем пробы, вводимой в испаритель - 2 мкл.
Абсолютное время удерживания цимоксанила - 1 мин 40 сек.
2.6.4. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание цимоксанила в образце томатов (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
H2*C*V
x --,H,*P
где Hi- высота (площадь) пика цкмоксанила в стандартном растворе, мм;
Hj - высота (площадь) пика цимоксанила в анализируемой пробе, мм;
V - объём экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
Р - навеска анализируемого образца, г;
С - концентрация цимоксанила в стандартном растворе, мкг/мл.
Содержание остаточных количеств цимоксанила в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 20 мкг/мл, разбавляют.
3. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции «ОсноМН правила безопасной работы в химической лаборатории», общепринятые пращн безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а тан инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов кзмср<^| осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний коетрщ качества результатов количественного химического анализа.
5. Разработчики
Должеико В.И., Цибульская И.А., Блинова Т.Ф.
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений (Санкт-Петербург).
