УТВЕРЖДАЮ
Главный государственный санитарный врач
ской Федерации
рййской Федерации ^>Г. Г. ОНИЩЕНКО
4j).
Первый за* дравоохрансния
4 А. г? <
Дата введения: i 0lu-o^ Ieoh
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по определению остаточных количеств десмедкфама и фенмедифама в корнеплода! и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы методом капиллярной газожидкостной хроматографии
1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ
Название препарата: Витал AM, Сннбетшг Прогресс ОФ. Бифор Прогресс. Фирма производитель: ФМРус, РосАгроХим, АгроЭксперт групп. Действующие вещества: десыеднфам и фенмедифам-
1. Десмедифам (ISO).
3-этоксихарбоннламипофенкл фен ил карбамат (Ц/РАС).
Структурная формула:
Эмпирическая формула: C^Hi^O*.
Молекулярная масса: 300,3.
Химически чистое вещество: бесцветные кристаллы. Температура плшшения: 120°С. Растворимость (г/1000мл) при 20°С: в поде - 0,007, ацетоне - 400, метаноле - 180 , этил ацетате - 149 , хлороформе - 80, днхлорметаьс - 17,8, беизоле - 1,6, гексане - 0,5. 2. Фенмедифам (ISO).
З-мстоксикарбонкламияофеннл З'мстхлкар-баиилат (ГОРАС).
Структурная формула:
Н3С
Эмпирическая формула: CiiHjeNjO*-Молекулярная масса: 300,3.
Химически чистое вещество: бесцветные кристаллы. Температура плавления: 140 ]44°С.
3
Растворимость (г/1000мл) при 20°С: в воде - 0,006, ацетоне - 200, метаноле - 50, этил-ацетате - 56,3 , хлороформе - 20, дихлорметане - 16,7, бензоле - 2,5 , гексане - 0,5. Гигиенические нормативы: ВМДУ дссмедифама в свекле сахарной, столовой и кормовой- 0,1 мг/кг; МДУ фенмедифама в свекле сахарной, столовой и кормовой 0.2 мг/кг. Область применения препарата: послевсходовый гербицид для борьбы с однолетними двудольными и некоторыми злаковыми сорными растениями на свекле.
2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕСМЕДИФАМА И ФЕНМЕДИФАМА В КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ САХАРНОЙ, СТОЛОВОЙ И КОРМОВОЙ СВЕКЛЫ
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода.
Метод основан на извлечении остаточных количеств десмедифама и фенмедифама из анализируемого объекта ацетоном, проведении очистки экстракта перераспределением в системе растворителей, получении производных путем гидролитического расщепления десмедифама в анилин, а фенмедифама в метиланилин, их бромировании и газо-хро^алгографическом анализе с использованием капиллярной колонки и детектора электронного захвата (ДЭЗ).
2.1.2, Избирательность метода.
Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование селективного детектора и капиллярной колонки позволяет устранять влияние на анализ коэкстрактивных веществ.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода.
Метрологические параметры метода представлены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1. |
Метрологические параметры, р=0,95» п=6 |
Анализи
руемый
объект |
1
Предел j
обнаруже- | ния, ] мг/кг |
! Диапазон ! определяемых концентраций, мг/кг |
Среднее
значение
определе
ния,
% |
Стандартное
отклонение,
% |
Доверительный интервал среднею результата, % |
Корнеплоды |
I 0,02 |
0,02-0,16 |
82,7 |
6,1 |
±5,6 |
Ботва |
О
о |
0,02-0,16 |
85,3 |
4,7 |
±4,3 |
|
4
Таблица 2.
Полнота определения десмедифама и фенмедифама в корнеплодах и ботве свеклы
(п = 6 для каждой концентрации). |
Анализируемый |
Внесено, |
Найдено. |
Стандартное |
Полнота |
объект |
мг/кг |
мг/кг |
отклонение,± |
определения, % |
Корнеплоды |
0,020 |
0,015 |
0,0015(7,3%) |
77,0 |
свеклы |
0,040 |
0,032 |
0,0026 (6,4%) |
80,8 |
|
0,080 |
0,068 |
0,0045 (5,6%) |
85,0 |
|
0,160 |
0,141 |
0,0082 (5,1%) |
88 2 |
Ботва свеклы |
0,020 |
0,016 |
0,00 П (5,4%) |
80,7 |
|
0,040 |
0,033 |
0,0019(4,9%) |
83,3 |
|
0,080 |
0,069 |
0,0036 (4,5%) |
86,7 |
|
0,160 |
0,145 |
0,0064 (4,0%) |
90,5 |
|
2.2. Реактивы, материалы
Аналитические стандарты десмедифама и фенмедифама.
Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-25*89.
Ацетон, осч, ТУ 2633-004-11291058-94.
Вода дистиллированная и перегнанная над КМп04и щелочью.
Калий бромистый, ч, ГОСТ 4160-74.
Калий бромноватокислый, ч, ГОСТ 4457-74.
Калия гидроокись, чда, ГОСТ 24363-80.
Кислота серная, хч, ГОСТ 4204-77.
Натрий сернистокислый (сульфит), чда, ГОСТ 195-77.
Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда, ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.
Этиленгликоль, чда, ГОСТ 10164-75.
Эфир этиловый (серный), ГОСТ ФС 42-3643-98.
Фильтры бумажные, красная лента, ТУ 2642-001-42624157-98.
Фильтры бумажные, белая лента, ТУ 2642-001-42624157-98.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда.
Газовый хроматограф с ДЭЗ и хроматографической колонкой капиллярной кварцевой длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52, толщиной слоя 0,4 мкм.
5
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73 или аналогичный.
Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80.
Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.
Воронки делительные емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.
Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 25336-82.
Инструментарий для первичной подготовки проб к определению ( нож, ножницы, шпатели, кюветы и др.)*
Колбы-концентраторы емкостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы плоскодонные емкостью 300 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.
Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.
Приспособление для обжима колпачков на флаконах, ТУ 42-2-2442-73.
Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный.
Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Стаканы химические емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.
Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.
Установка для упаривания растворителей в токе азота.
Установка ультразвуковая ’’Серьга" УЗМ002 или аналогичная.
Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 20,0 мл.
Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411 -76.
Электроплитка, ГОСТ 14919-83.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1. Очистка органических растворителей и воды.
Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Дгп этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40°С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
В обязательном порядке проводят дополнительную очистку воды, используемой при обработке проб к проведению определения. Для этого 150 мл (из расчета обработки I пробы) дистилированной воды, перегнанной над КМп04 и щелочью, помещают в делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку вносят 50 мл насыщенного водного
6
раствора хлористого натрия, 1,0 мл 10% водного раствора гидроокиси калия и после перемешивания 50мл этилового эфира. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После разделения слоев нижний водно-солевой слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, а верхний эфирный слой отбрасывают. К водно-солевой фракции, находящейся в колбе, добавляют (до pH 3-4) - 1,5 мл 5% водного раствора серной кислоты. Содержимое колбы перемешивают встряхиванием, переносят в делительную воронку емкостью 500 мл и добавляют 50 мл этилового эфира. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После разделения слоев нижний водно-солевой слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, а верхний эфирный слой отбрасывают. Очищенный водно-солевой раствор используют при обработке пробы к проведению определения по п. 2.6.
2.4.2. Приготовление щелочного этиленгликоля.
В мерной колбе емкостью 25 мл растворяют 1,0 г гидроокиси калия в 1,0 мл дистиллированной воды и доводят объем до 25 мл этиленгликолем.
2.4.3. Приготовление стандартных растворов десмедифама и фенмедифама.
Основные растворы десмедифама и фенмедифама с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в ацетоне 0,01 г каждого препарата в мерных колбах на 100 мл. Растворы хранят в холодильнике при 4-6°С не более 3-х месяцев.
Смеси рабочих стандартных растворов десмедифама и фенмедифама с концентрациями
4.0, 2,0, 1,0 и 0,5 мкг/мл готовят во флаконах емкостью 20 мл (типа пенициллиновых) из основных стандартных растворов соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Ацетон упаривают в токе азота досуха и проводят гидролиз стандартных веществ с получением их бромпроизводных по п. 2.6.2.
Экстракты, приготовленные по п. 2.6.2 для построения калибровочного графика, хранят в холодильнике при 4-6°С не более месяца.
2.4.4. Построение калибровочного графика.
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1 мкл приготовленных по пп. 2.4.3. и 2.6.2. экстрактов, содержащих смеси стандартных растворов десмедифама и фенмедифама (в виде бромпроизводных) с концентрациями 0,5.
1.0, 2,0 и 4,0 мкг/мл. Осуществляют не менее З-.ч параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (мм2) от концентрации десмедифама и фенмедифама в растворе в мкг/мл.
7
2.5. Отбор и храпение проб
Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.1979г., №2051-79.
Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру с температурой -18°С.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Экстракция десмедифама и фенмедифама
Аналитическую пробу корнеплодов или ботвы массой 25,0±0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл ацетона, слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане два раза по 5 мин. Ацетоновый экстракт фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент фильтруют в колбу-концентратор.
При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой массой 25,0±0,1 г вносят 150 мл ацетона и содержимое колбы встряхивают в течение 60 мин. После этого эксгракт фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент фильтруют в колбу-концентратор.
Колбу-юонцентратор с объединенным экстрактом устанавливают в ротационный вакуумный испаритель и упаривают ацетон при температуре 40°С до объема экстракта 20-30 мл. К остатку экстракта в колбе добавляют 200 мл водно-солевого раствора, приготовленного по п. 2.4.1. Содержимое колбы-концентратора фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. Затем в делителы1ую воронку вносят 50 мл этилового эфира, содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут и после разделения слоев нижний водно-солевой слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, а верхний эфирный слой в колбу-концентратор емкостью 100 мл. Процедуру экстрагирования десмедифамэ и фенмедифама из водно-солевого раствора повторяют с использованием 25 мл этилового эфира.
8
Колбу-концентратор с объединенным эфирным экстрактом устанавливают в ротационный испаритель и упаривают этиловый эфир при температуре 40°С до объема экстракта 10-15 мл. Остаток экстракта количественно переносят во флакон (типа пенициллинового) емкостью 20 мл и упаривают этиловый эфир в токе азота.
2.6.2. Проведение гидролиза и бромирования производных десмедифама и фенмедифа-ма.
К остатку во флаконе прибавляют 1 мл щелочного этиленгликоля* приготовленного по п.
2.4.2., флакон герметизируют и термостатируют при 150°С в течение 30 мин. После охлаждения во флакон последовательно добавляют 10 мл 1н водного раствора серной кислоты, 0,25 мл 20% раствора (в 1н водном растворе серной кислоты) бромистого калия и 0.25 мл 1% водного раствора бромноватокислого калия (хранят в темноте). Содержимое флакона перемешивают, флакон закрывают пробкой и выдерживают в темноте 15 мин. После этого во флакон последовательно добавляют небольшое количество ("на кончике шпателя") порошкообразного сульфита натрия до обесцвечивания содержимого, 1,0 мл 50% водного раствора гидроокси калия и после перемешивания - 2*5 мл толуола. Флакон закрывают пробкой, интенсивно встряхивают в руке и оставляют в покое на 10-15 минут до разделения слоев содержимого флакона. Аликвотную часть верхнего толуольиого слоя хроматографируют по п. 2.7.
В том случае, если через 10-15 минут верхний толуольный слой остается мутным, аликвотную его часть (1,5-2,0 мл) пропускают через слой (толщина 0,3-0,5 см) безводного сульфата натрия и затем анализируют на содержание десмедифама и фенмедифама по п.2.7.
2.7. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф с ДЭЗ.
Колонка хроматографическая капиллярная длиной 15 м* внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE -52 толщиной слоя 0,4 мкм.
Температура колонки с программированием от 80°С (3 мии) до 280°С (15 мин) со скоростью 10°С/мин.
Температура испарителя: 250°С.
Температура детектора: 300°С.
Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) - 2,0 см3/мин, дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ - 40 см3/мин.
Объем хроматографируемой пробы: 1 мкл.
9
Время удерживания: десмедифама (в виде бромпроизводиого) - 14,3±0,1мин. феп-медифама (в виде бромпроизводиого) -15,9±0,1 мин.
Линейный диапазон детектирования (по бромлроизводным): 0,25-8,0 нг.
2.8. Обработка результатов анализа.
Содержание десмедифама нли фенмедифама рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
H,xA*V
X =-. где:
Нохш
X - содержание десмедифама или фенмедифама в пробе, мг/кг,
Н( - высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм (мм2).
Но - высота (площадь) пика стандартного вещества, мм (мм2),
А-концентрация смеси стандартных растворов десмедифама и фенмедифама, мкг/мл,
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл, ш - масса (г) аналитической пробы.
3. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ.
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "Внутренний контроль качества результатов количественного химическою анализа".
4. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ.
Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.
5. РАЗРАБОТЧИКИ.
П.А. Тарарин, Т.А. Маханькова, Л.В. Григорьева (ВНИИ защиты растений).