Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник методических указаний

Выпуск 3 Часть 6 МУК 4.1.1408—4.1.1411—03

ББК 51.23+51.21 060

060 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005.— Вып. 3.—Ч. 6.—52 с.

1.    Сборник подготовлен:    Федеральным научным центром гигиены

им. Ф. Ф. Эрисмана (акад. РАМН, проф. В. Н. Ракитский, проф. Т. В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К. А. Тимирязева (проф.

В. А. Калинин, к. хим. н. А. В. Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А. П. Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.

2.    Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3.    Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г. Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4.    Введены с 30 июня 2003 г.

5.    Введены впервые.

ББК 51.23+51.21

Редакторы Аванесова Л. И., Максакова Е. И. Технический редактор Климова Г. И.

Подписано в печать 12.05.05

Печ. л. 3,25 Заказ 12

Тираж 3000 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18/20

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован Издательским отделом Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отдел реализации, тел. 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2005 © Федеральный центр гигиены

и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005

МУК 4.1.1410—03

смолу многократно промывают водой до нейтральной реакции. Отмытый катионит переносят на воронку Бюхнера, отфильтровывают и подсушивают до сыпучего состояния.

7.7. Приготовление градуировочных растворов

7.7.1. Исходный раствор диквата для градуировки (концентрация 250 мкг/см³).

В мерную колбу вместимостью 25 см³ помещают 0,0123 г диквата дибромида (моногидрат), растворяют в 15 см³ насыщенного водного раствора хлорида аммония, доводят насыщенным раствором хлорида аммония до метки, тщательно перемешивают.

7.7.2. Раствор диквата № 1 для градуировки (концентрация 10 мкг/см³)

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают 2 см³ исходного стандартного раствора диквата с концентрацией 250 мкг/см³ (п. 7.7.1), разбавляют насыщенным раствором хлористого аммония до метки.

Растворы хранят при комнатной температуре в темноте.

Этот стандартный раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения диквата из исследуемых образцов.

7.8. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость интенсивности оптической плотности (единицы оптической плотности) от содержания диквата в растворе (мкг), устанавливают методом абсолютной калибровки по 8 растворам для градуировки.

7.8.1. Выполнение измерений в кюветах с толщиной поглощающего слоя 50 мм

В 8 градуированных пробирок (цилиндров) с пришлифованной пробкой помещают по 10 см³ насыщенного раствора хлорида аммония и вносят по 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,6, 1,0, 1,5 и 2,0 см³ стандартного раствора диквата № 1 с концентрацией 10 мкг/см³, что соответствует содержанию 1, 2, 3, 4, 6, 10, 15 и 20 мкг диквата. Доводят объём в каждой пробирке до 20 см³ насыщенным раствором хлорида аммония, приливают по 4 см³ раствора дитионита натрия, перемешивают (путем 2 кратного переворачивания пробирок, без встряхивания!) и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 379 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 50 мм относительно холостой пробы,

МУК 4.1.1410—03

содержащей 20 см³ насыщенного раствора хлорида аммония и 4 см³ раствора дитионита натрия.

7.8.2. Выполнение измерений е кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм

В 8 градуированных пробирок (цилиндров) с пришлифованной пробкой помещают по 10 см³ насыщенного раствора хлорида аммония и вносят по 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 3,0, 5,0, 7,5 и 10,0 см³ стандартного раствора диквата № 1 с концентрацией 10 мкг/см³, что соответствует содержанию 5, 10, 15, 20, 30, 50, 75 и 100 мкг диквата. Доводят объем в каждой пробирке до 20 см³ насыщенным раствором хлорида аммония, приливают по 4 см³ раствора дитионита натрия, перемешивают (путем 2 кратного переворачивания пробирок, без встряхивания!) и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 379 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм относительно холостой пробы, содержащей 20 см³ насыщенного раствора хлорида аммония и 4 см³ раствора дитионита натрия.

С использованием обеих кювет осуществляют не менее 3 параллельных измерений и находят среднее значение для каждой концентрации. Строят градуировочный график зависимости величины оптической плотности раствора при длине волны 379 нм от содержания диквата в мкг.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79).

Отобранные пробы почвы и картофеля, хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 3 дней. Для длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в холодильнике.

Пробы клубней картофеля для длительного хранения замораживают и хранят при температуре -18° С.

Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, образцы картофеля измельчают.

МУК 4.1.1410—03

9. Выполнение определения

9Л. Экстракция

9.1.1. Почва

К образцу воздушно-сухой почвы массой 25 г в круглодонной колбе емкостью 500 см³ добавляют 65 см³ дистиллированной воды и затем осторожно приливают 35 см³ концентрированной серной кислоты. Колбу с подсоединенным к ней елочным дефлегматором и обратным холодильником помещают на электрический колбонагреватель (плитку) и кипятят ее содержимое в течение 5 ч. Реакционную массу охлаждают. На этой стадии можно оставить раствор на ночь. Остывшую суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через фильтр из хроматографической бумаги Ватман 3 ММ. Осадок на фильтре промывают тремя порциями дистиллированной воды по 200 см³. Фильтраты объединяют и подвергают очистке по п. 9.2.

9.1.2. Картофель

Образец измельченного картофеля массой 250 г помещают в стакан вместимостью 1 000 см³, добавляют 200 см³ воды и гомогенизируют в течение 2 мин. Полученную массу переносят в круглодонную колбу вместимостью 2 000 см³, обмывают стакан 50 см³ воды, раствор также переносят в колбу. Осторожно приливают 15 см³ концентрированной серной кислоты. Колбу с подсоединенным к ней обратным холодильником и елочным дефлегматором помещают на электрический колбонагреватель и кипятят ее содержимое в течение 5 ч. Реакционную массу охлаждают. На этой стадии можно оставить раствор на ночь. Остывшую суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через фильтр из хроматографической бумаги Ватман 3 ММ (или бумажный фильтр «красная лента» в 2 слоя). Осадок на фильтре промывают двумя порциями дистиллированной воды по 100 см³. Переливают фильтрат в химический стакан вместимостью 2 дм³, доводят pH до 8—9 (по индикаторной бумаге) добавлением твердого гидроксида натрия (70—20 г) при постоянном перемешивании. Добавляют 50 см³ раствора ЭДГУ (приготовленного по п. 7.4), перемешивают, контролируют pH раствора (по индикаторной бумаге), если его значение выходит из диапазона 6—7, доводят его значение до указанных показателей, добавляя по каплям раствор ЭДГУ. Снова фильтруют раствор через фильтр, промывая стакан и фильтр 100 см³ дистиллированной воды. Фильтраты объединяют и подвергают очистке по п. 9.2.

МУК 4.1.1410—03

9.2. Очистка экстракта на колонке с катионитом

9.2.1.    Почва

Объединенный фильтрат, полученный по п. 9.1, вводят со скоростью 3 см³/мин в хроматографическую колонку, подготовленную по п.

7.6.    С этой целью фильтрат переносят в делительную воронку, помещенную над колонкой, устанавливают (регулируя кран) скорость пропускания раствора 3 см³/мин. Последовательно промывают колонку 50 см³ воды, 100 см³ 2 н хлороводородной кислоты, 50 см³ воды, 50 см³ 2,5 %-ного раствора хлорида аммония и 1 дм³ воды, которые отбрасывают. На этой стадии можно оставить колонку на ночь, при условии, что слой ионообменной смолы покрыт раствором. Дикват элюируют из колонки 50 см³ насыщенного раствора хлорида аммония со скоростью не более 1 см³/мин в мерную колбу вместимостью 50 см³. Раствор перемешивают.

9.2.2. Картофель

Объединенный фильтрат, полученный по п. 9.1, вводят со скорость 5—10 см³/мин в хроматографическую колонку, подготовленную по п.

7.6.    С этой целью фильтрат переносят в делительную воронку, помещенную над колонкой, устанавливают (регулируя кран) скорость пропускания раствора 5—10 см³/мин. Промывают колонку 200 см³ 2,5 %-ного раствора хлорида аммония, которые отбрасывают. На этой стадии можно оставить колонку на ночь, при условии, что слой ионообменной смолы покрыт раствором. Дикват элюируют из колонки 50 см³ насыщенного раствора хлорида аммония со скоростью не более 1 см³/мин в мерную колбу вместимостью 50 см³. Раствор перемешивают.

9.3. Условия фотометрирования

9.3.1.    Почва

20 см³ полученного по п. 9.2.1 элюата переносят в пробирку с притертой пробкой вместимостью 25 см³, добавляют 4 см³ восстанавливающего реактива (приготовленного по п. 7.3), осторожно перемешивают (двухкратным переворачиванием пробирки, без встряхивания). Одновременно во вторую пробирку вносят 20 см³ насыщенного раствора хлорида аммония и 4 см³ 0,3 М раствора гидроксида натрия, перемешивают (раствор сравнения). Через 3 мин после добавления восстанавливающего реактива измеряют оптическую плотность анализируемого

МУК 4.1.1410—03

образца на спектрофотометре в кюветах с толщиной поглощающего слоя 50 мм при длине волны 379 нм относительно раствора сравнения.

9.3.2. Картофель

При проведении измерений в кюветах с толщиной поглощающего слоя 50 мм аликвоту полученного по п. 9.2.2 элюата объемом 8 см³ переносят в пробирку (мерный цилиндр) вместимостью 25 см³, доводят объем раствора до 20 см³ насыщенным раствором хлористого аммония.

При проведении измерений в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм аликвоту полученного по п. 9.2.2 элюата объемом 20 см³ переносят в пробирку с притертой пробкой вместимостью 25 см³.

В каждую пробирку добавляют 4 см³ восстанавливающего реактива (приготовленного по и. 7.3), осторожно перемешивают (двухкратным переворачиванием пробирки, без встряхивания). Одновременно во вторую пробирку вносят 20 см³ насыщенного раствора хлорида аммония и 4 см³ 0,3 М раствора гидроксида натрия, перемешивают (раствор сравнения). Через 3 мин после добавления восстанавливающего реактива измеряют оптическую плотность анализируемого образца на спектрофотометре в кюветах с толщиной поглощающего слоя 50 мм (или 10 мм) при длине волны 379 нм относительно раствора сравнения.

10. Обработка результатов анализа

Содержание диквата в пробе рассчитывают по формуле:

X - содержание диквата в пробе, мг/кг;

А - содержание диквата, найденное по калибровочному графику,

мкг;

В - общий объем элюата, см³;

С - объем элюата, взятого для фотометрирования, см³;

Р - масса анализируемого образца, г.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335—95.

37

МУК 4.1.1410—03

ГСИ «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».

12. Разработчики

Картофель - Юдина Т. В., Федорова Н. Е., Волкова В. Н., Рогачева С. К. (ГУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана Минздрава России», г. Мытищи Московской обл.).

Почва - Микитюк О. Д.. Макеев А. М. (ВНИИ фитопатологии, Московская область, п/о Большие Вяземы).

38

МУК 4.1.1408—4.1.1411—03

Содержание

Определение остаточных количеств десмедифама в почве, корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии. МУК 4.1.1408—03........................................4

Измерение концентраций десмедифама в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.1409—03.......................................................................................16

Определение остаточных количеств диквата в почве и клубнях картофеля спектрофотометрическим методом.

МУК 4.1.1410—03.......................................................................................26

Определение остаточных количеств имазапира в дикорастущих грибах и ягодах методами высокоэффективной жидкостной и газожидкостной хроматографии.

МУК 4.1.1411—03.......................................................................................39

3

МУК 4.1.1410—03

Эмпирическая формула: Ci2Hi₂N₂Br₂    М. м.: 344Д

Химически чистый дикват дибромид представляет гигроскопическое белое кристаллическое вещество с температурой разложения 300° С. Давление паров: менее 0,01 мПа (моногидрат). Коэффициент распределения н-октанол/вода: K₀wlog Р = - 4,60.

Хорошо растворим в воде (700 г/л), плохо в спиртах и практически нерастворим в неполярных органических растворителях.

Вещество стабильно в нейтральном и кислом растворах, но легко гидролизуется в щелочной среде. Разлагается под действием УФ -облучения (DT₅₀ менее недели).

Сильно связывается почвами и быстро разрушается почвенными микроорганизмами (DT₅₀ не адсорбированного диквата менее недели).

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - 408, для мышей - 234 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс >800 мг/кг. Вызывает раздражение кожи и глаз у кроликов.

Гигиенические нормативы для дикват дибромида: ОДК в почве -0,2 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/дм³; МДУ в картофеле 0,05 мг/кг.

Область применения препарата. Дикват дибромид - контактный гербицид сплошного действия. Используется для уничтожения однолетних широколистных сорняков в виноградниках, садах, посевах овощных и декоративных культур, водной растительности в водоемах, а также для предуборочной десикации семенников сахарной свеклы, клевера, сорго, подсолнечника, льна, хлопчатника, рапса, сои, риса. Применяется в дозах от 0,4 до 1,0 кг/га.

27

МУК 4.1.1410—03

1. Метрологические характеристики метода

Метрологические характеристики метода представлены в табл. 1 и

Метрологические параметры Таблица 1

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S,% Относительно отклонение, % Довери тельный интервал среднего, % Дерново-подзолистая почва 0,2 0,2—2,0 70,9 5,7 2,5 ±5,3 Черноземная почва 0,2 0,2—2,0 71,7 7,3 3,3 ±6,8 Картофель 0,05 0,05—0,5 78,5 6,4 2,8 ±5,7

Таблица 2 Полнота извлечения диквата из модельных матриц ( п = 5)

Матрица Внесено, мг/кг Найдено, % Доверительный интервал среднего, % Дерново- подзолистая почва 0,2 68,9 ±7,0 0,4 67,6 ±5,5 1,0 70,5 ±3,0 2,0 76,5 ±3,0 Черноземная почва 0,2 69,0 ± 10,0 0,4 68,6 ±9,4 1,0 72,2 ±3,5 2,0 76,9 ±7,1 Картофель 0,05 75,4 ±6,4 0,10 79,5 ±5,2 0,15 77,6 ±6,3 0,5 81,5 ±4,9

МУК 4.1.1410—03

2. Метод измерений

Методика основана на спектрофотометрическом определении диквата после его восстановления дитионитом натрия в элюате, полученном при извлечении вещества из образцов почвы и картофеля серной кислотой при кипячении и очистке экстракта на колонке с катионитом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в современной технологии выращивания картофеля.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Спектрофотометр двулучевой «Hitachi», мод. 124 (Япония) или спектрофотометр СФ-46 (ЛОМО, Россия)

Весы аналитические ВЛА-200    ГОСТ    24104

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой

погрешности +/- 0,038 г    ГОСТ    7328

Колбы мерные вместимостью

25, 50, 100, 250, 1 000 и 2 000 см³    ГОСТ    1770

Пипетки градуированные 2 класса

точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10 см³ ГОСТ 29227

Пробирки градуированные с пришлифованной

пробкой, вместимостью 20 см³    ГОСТ 1770

Цилиндры мерные 2 класса точности вместимо-

стью 10, 25, 50, 100, 200, 500 и 1 000 см³    ГОСТ    1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Дикват дибромид (моногидрат) с содержанием д. в. 99,7 % (50,9 % катионов) (Зенека, Великобритания)

Аммония хлорид, хч

29

МУК 4.1.1410—03

Стекловата Стеклянные палочки

Холодильник водяной обратный    ГОСТ 9737

Часовые стекла

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При работе с реактивами соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1005.

4.2.    При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на спектрофотометре.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5)° С и относительной влажности не более 80 %.

•    выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: приготовление растворов, установление градуировочной характеристики, подготовка хроматографической колонки.

7.7. Приготовление 0,3 Мраствора гидроксида натрия

Навеску гидроксида натрия массой 3 г помещают в мерную колбу вместимостью 250 см³, растворяют в 100—150 см³ дистиллированной воды, доводят водой до метки, перемешивают.

31

МУК 4.1.1410—03

7.2. Приготовление 2,5%-ного раствора хлорида аммония

В мерную колбу вместимостью 1 ООО см³ помещают 25 г хлорида аммония, растворяют в 600—700 см³ дистиллированной воды, доводят водой до метки, перемешивают.

7.3. Приготовление восстанавливающего реактива

Навеску дитионита натрия массой 0,1 г растворяют в 0,3 М водном растворе гидроксида натрия (приготовленном по и. 7.1) в мерной колбе вместимостью 50 см³. Восстанавливающий реактив используют в течение 30 мин после приготовления.

7.4. Приготовление 5 %-ного раствора этилендиаминтетрауксусной

кислоты (ЭДТУ)

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 50 г двунатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, растворяют в 600—700 см³ дистиллированной воды, доводят водой до метки, перемешивают.

7.5. Приготовление 2 н соляной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 500 см³ дистиллированной воды, вносят 158 см³ концентрированной соляной кислоты, доводят водой до метки дистиллированной водой.

7.6. Подготовка хроматографической колонки

Навеску катионита Дауэкс 50 в натриевой форме* массой 5 г (при анализе почвы), 3,5 г (при анализе картофеля) помещают в стакан вместимостью 100 см³, заливают 40—25 см³ воды. Через 30 мин суспензию переносят в хроматографическую колонку длиной 25 см, внутренним диаметром 10 мм, нижняя часть которой уплотнена тампоном из стекловаты. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, затем колонку последовательно промывают 20 см³ насыщенного раствора хлорида натрия и 50 см³ дистиллированной воды со скоростью 5 см³/мин, после чего она готова к работе.

Примечание. При отсутствии катионита в натриевой форме используют ионообменную смолу в Н+-форме, подготовив ее по следующей методике.:

Образец катионита Дауэкс 50 в Н⁺-форме помещают в химический стакан, заливают 5-кратным (по объёму) количеством дистиллированной воды и оставляют для набухания на 24 ч. После этого воду декантируют, катионит обрабатывают 2 и. водным раствором гидроксида натрия при перемешивании в течение 2 ч. Затем раствор декантируют и