Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

102 страницы

Купить МУ 3024-84 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Методические указания распространяются на определение содержания в воздухе рабочей зоны полиэдров и гранул бакуловирусов, являющихся действующим началом вирусных инсектицидных препаратов, что необходимо при разработке санитарно-гигиенических регламентов, санитарно-гигиеническом контроле, а также в научных исследованиях.

 Скачать PDF

Оглавление

Краткая характеристика бакуловирусных инсектицидов

Принцип метода

Метрологическая характеристика метода

Избирательность метода

Реактивы и материалы

Приборы и посуда

Подготовка к определению

Отбор проб воздуха

Ход анализа

Обработка результатов анализа

Требования безопасности

Приложение 1. Нормативно-техническая документация на реактивы и материалы

Приложение 2. Нормативно-техническая документация на посуду лабораторную

Приложение 3. Нормативно-техническая документация на приборы и аппаратуру

Приложение 4. Санитарно-гигиенические нормы содержания пестицидов в продуктах питания, воздухе, воде и почве

Приложение 5. Перечень пестицидов, применение которых запрещено или строго ограничено Министерством здравоохранения СССР

Приложение 6. Расчет погрешности измерения концентраций

Предметный указатель

Список сокращенных названий научных учреждений, встречающихся в справочнике

 
Дата введения01.01.2021
Добавлен в базу01.01.2018
Актуализация01.01.2021

Этот документ находится в:

Организации:

РазработанКНИИЭИБ
ИзданВО Агропромиздат1992 г.
Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24
Стр. 25
стр. 25
Стр. 26
стр. 26
Стр. 27
стр. 27
Стр. 28
стр. 28
Стр. 29
стр. 29
Стр. 30
стр. 30

СПРАВОЧНИК

МЕТОДЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

МИКРОКОЛИЧЕСТВ

ПЕСТИЦИДОВ

В ПРОДУКТАХ

ПИТАНИЯ,

КОРМАХ

ИВНЕШНЕЙ

СРЕДЕ

Том 2

МЕТОДЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

X

IT

2

МИКРОКОЛИЧЕСТВ

ПЕСТИЦИДОВ

В ПРОДУКТАХ

ПИТАНИЯ,

[Z

О

КОРМАХ

И ВНЕШНЕЙ

СРЕДЕ

В ДВУХ ТОМАХ

Том 2

МОСКВА ВО «АГРОПРОМИЗДАТ» 1992

Число включений в I м3 воздуха (М) определяют по формуле

М

oSn

VS,

где а — среднее число включении d квадрате окулярной сетки (поле зрения); S — площадь мембранного фильтра, мм3; V — объем пропущенного воздуха, приведенный к нормальным условиям, л; S, — площадь квадрата окулярной сетки (поле зрения); п — переводной коэффициент на 1 м3, равный 10.

Пример. Для анализа получены предметные стекла с отпечатками аэрозоля. Препараты покрасили по непрямому методу Кунса, как описано выше. При просмотре препаратов под люминесцентным микроскопом установлено, что в одном квадрате окулярной сетки обнаруживается в среднем 0.5 включений со специфическим свечением (полиэдров); с = 0,5. Сторона квадрата окулярной сетки при объективе 90х, окуляре 8х равна 0,12 мм (определили с помощью объект-микрометра). Площадь квадрата окулярной сетки Si = 0,0144 мм3; площадь мембранного фильтра S= 10 см3, Т. е. 10* мм -; объем пропущенного воздуха V*=100 л; л«*10.

Определяем число включений в 1 м3 воздуха:

34722,2.

0.5-10MQ Л,“ 100 0,0144 “

Таким образом, в 1 мэ воздуха рабочей зоны содержится окаю 3,5-10* определяемых полиэдров.

Требования безопасности. Соблюдаются меры безопасности, обычно рекомендуемые при работе с микроорганизмами IV группы (условно-патогенные).

137

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1 НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ НА РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Амиловый эфир уксусной кислоты, ТУ 6-09-1239—76.

4-Аминоантипирин, ТУ 6-09-3948—75.

Аммиак особой чистоты, ГОСТ 24147-82; водный, ГОСТ 3760-79.

Аммония молибдат, ГОСТ 3765-78.

Аммония персульфат, ГОСТ 20478-75.

Аммоний роданистый, ГОСТ 27067-86.

Аммоний сульфаминовой кислоты, ТУ 6-09-15-364—78.

Аммоний углекислый кислый, ГОСТ 3762-78.

Аммония хлорид. ГОСТ 3773-72.

Ангидрид уксусный, ГОСТ 5815-77.

Анилин солянокислый, ГОСТ 5822-78.

Аннокообмеииая смола АВ-17-8, ГОСТ 20301-74.

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил. ТУ 6-09-3534—74.

Бария хлорид, ГОСТ 4108-72.

Бензиднн. ТУ 6-09 10-1310—78.

Бензол, ГОСТ 5955-75.

Бор трехфтористый, эфират, ТУ 6-09-804—77.

Бром, ГОСТ 4109-79.

Бромкрезоловый зеленый, ТУ 6-09-450-77.

Бромтнмоловый синий, ТУ 6-09-2045—77.

Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530—77.

Бумага индикаторная универсальная, ТУ 6-09-1181—76.

Вазелиновое масло, ГОСТ 3164-78.

Висмута нитрат основной, ГОСТ 4110-75.

Водород газообразный, из баллона, ГОСТ 3022-80.

Воздух газообразный, из баллона, ГОСТ 9-010-80. и-Гексан, ТУ 6-09-3375—78. я-Геатан, ГОСТ 25828-83.

Гибберелин кристаллический, ТУ 64-3-103 —75.

Гидразин сульфат, ГОСТ 5841-74.

Гндрокснламин солянокислый, ГОСТ 5456-79.

Гипс медицинский, ГОСТ 3210-77.

Глицерин, ГОСТ 6824-76.

2,6-Двбром-М-хлорхныонимин, ТУ 6-09-05-63—73. л-Днметиламннобекзальдегид, ту 6-09-3272—77.

Д и метиле ульфоксид, ТУ 6-09-3818—74.

Диметилформамид, ГОСТ 20258-74 Е.

Дитизон, ГОСТ 10165-79.

Дифениламин, ГОСТ 5825-70.

Днэтнламин. ГОСТ 13279-67.

Диэткленглнколь, ГОСТ 10136-77.

Днэтиловый эфир фталевой кислоты. ТУ 6 09-3663—74.

Железо (III) хлорное, ГОСТ 4147-74.

Изооктан, ГОСТ 12433-83.

Индиго (динатриевая соль дисульфокислоты), ТУ 6 09-07-44—73. Индоксилацетат, ТУ 6-09-07-1156—78.

Индофенилацетат, ТУ 6-09-469—77.

Иод, ГОСТ 4159-79.

Йодистый метил, ГОСТ 6518-69.

Кадмия йодид, ГОСТ 8421-79.

Кадмий уксуснокислый, ГОСТ 5824-79.

Калия бромат, ГОСТ 4457-74.

Калия бромид, ГОСТ 4160-74.

Калия гидроксид, ГОСТ 24363-80.

Калий железистосинеродистый. ГОСТ 4207-75.

Калии железосииеродистый, ГОСТ 4206-75.

Калия иодид, ГОСТ 4232-74.

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.

Калия роданид, ГОСТ 4139-75.

Калий фосфорнокислый, двузаметенный, трехводный. ГОСТ 2493-75 Калия фосфат однозаметенный. ГОСТ 4198-75.

Калий хлорноватокнслый, ГОСТ 2713-74.

Калий щавелевокислый, ГОСТ 5868-78.

Кальции сульфат. ГОСТ 3210-77.

Кальция хлорид, ГОСТ 4161-77.

Катиониты, ГОСТ 20298-74.

Кислота азотная особой чистоты, ГОСТ 11125—8ч.

Кислота аскорбиновая, ГОСТ 4815-76.

Кислота борная, ГОСТ 9656-75.

Кислота винная, ГОСТ 5817-77.

Кислота кремниевая, ГОСТ 1214-78.

Кислота лимонная, ГОСТ 908-79 Е.

Кислота муравьиная, ГОСТ 5848-73.

Кислота серная особой чистоты, ГОСТ 14262-78; х. ч.. ГОСТ 4204-77. Кислота сульфа и иловая, ГОСТ 5821-78.

Кислота тногликолевая, ТУ 6-09-3115—73.

Кислота трихлоруксусная, ТУ 6-09-1926—77.

Кислота уксусная особой чистоты. ГОСТ 18270-72; ледяная ч д а ГОСТ 61-75.

Кислота ^-фосфорная. ГОСТ 6552-80.

Кислота фосфорно-вольфрамовая, ГОСТ 18290“-72.

Кислота фосфорно-молибденовая. ТУ 6-09-3540—78.

Кислота хлороводородная х. ч., ГОСТ 3118-77; особой чистоты, ГОСТ 14261-77.

Кислота щавелевая, ГОСТ 22180 -76.

Крахмал водорастворимый, ГОСТ 10163-76.

Кремния диоксид для люминофоров, ТУ 6-09-3644—74 Ксилол, ТУ 6 09-3825-78.

Лантана нитрат, ТУ 6-09-4676—78.

Магния сульфат, ГОСТ 4523-77.

Магния хлорат, ГОСТ 10483-83 Е.

Меди нитрат, ТУ 6-09-3757—74.

Меди сульфат, ГОСТ 19347-84 Е.

Медь уксуснокислая, ГОСТ 5852-79.

Метиламин солянокислый, ТУ 6*09-2088—77.

Метиловый красный, ТУ 6-09-5169—84.

Метиловый оранжевый, ТУ 6-09-4530—77.

Мочевина, ГОСТ 6691-77.

Натрия нитрит, ГОСТ 4197-74.

Натрия нитрат, ГОСТ 4168-79.

327

Натрий вольфрамовокислый. ГОСТ 18289-78.

Натрия гидроксид х. ч.. ГОСТ 4328-77; очищенный. ГОСТ 11078-78. Натрия гндросульфат, ГОСТ 246-76.

Натрий двууглекислый. ГОСТ 83-79.

Натрия дитионат, ТУ 6-09 01-283—75.

Натриевая соль додецилсульфокислоты, ТУ 6-09 64—75.

Натрий лимоннокислый, ГОСТ 22280-76.

Натрия мета-бисульфит. ГОСТ 10575-76.

Натрия нитропруссид, ГОСТ 4218-78.

Натрия сульфат безводный, ГОСТ 4166-76.

Натрий серноватнстокислый, ГОСТ 27068-86.

Натрий тетраборокнслый, ГОСТ 4199-76.

Натрий углекислый кислый, ГОСТ 4201-79.

Натрий уксуснокислый, ГОСТ 18290-72.

Натрия хлорид, ГОСТ 4233-77. а-Нафтила мин, ГОСТ 8827-74.

N-(1 -Нафтил)этилендиамик дигидрохлорид, ТУ 6-09-15-420—80. а-Нафтол, ГОСТ 5838-79. л-Нитроаннлин, ТУ 6-09-258—77.

4 (л-Нитробензил)пиридин, ТУ 6 09-15-93—74.

Нитрометан, ТУ 6-09-11-876—77.

Нингидрнн, ТУ 6-09-10-1384—79. л-Нитрофенол, МРТУ 6-09-3973—75.

Оксид алюминия для хроматографии, ГОСТ 8136-85.

Олово гранулированное. ТУ 6 09*2704—78.

Олово двуххлористос, ГОСТ 36-78.

Палладий двуххлористый, ТУ 6-09-2025—72.

Парафин. ТУ 6-09-3637—74.

Пенополиуретан эластичный. ТУ 6-05-1688—79.

Перекись водорода, ГОСТ 10929-76.

Пирокатехин фиолетовый, ТУ 6-09-07-1087—78.

Полидиэтиленгликоль сукцинат (ПДЭГС). ТУ 6-09-2827 —77.

Прочный голубой Б, ГОСТ 11263-80.

Прочный красный Б, ГОСТ 11827-77.

Резорцин, ГОСТ 9970-74.

Ртуть металлическая, ГОСТ 4658-73 Е.

Сахароза, ГОСТ 5833-75.

Свинец уксуснокислый, ГОСТ 1027-67.

Серебра нитрат, ГОСТ 1277-75.

Силикагель КСК для хроматографии, ГОСТ 3956-76 R.

Спирт амиловый, ТУ 6-09-3467—79.

Спирт м-бутнловый, ГОСТ 6006-78.

Спирт изопропиловый. ГОСТ 9805-84.

Спирт метиловый, ГОСТ 6995-77.

Спирт октиловый, ТУ 6-09-11-1055—78.

Спирт этиловый ректификат, ГОСТ 5962-67.

Судан, ТУ 6-09-4124-75.

Тальк очищенный, ГОСТ 19729-74.

Тетраэтилеипентамии. ТУ 6-09-05-804—78.

Титана сульфат, ТУ 6 09-01-477—77.

Титан трех хлористый, ГОСТ 311-78. о-Тол и дин, ТУ 6 09-2232—75.

0-Толундин, ТУ 6-09*2992—73.

Толуол. ГОСТ 5789-78 Трилон-Б, ГОСТ 10652-73.

Трнфторуксусный ангидрид. ТУ 6-09-4135—75.

2,2,2-Трихлорэтанол. ТУ 6-09-11-719—76.

328

Углерод четырехх лорнеты ft, ГОСТ 20288-74.

Уголь активированный АГ-3, АГ-5, ГОСТ 20464-75. Уголь активированный БАУ, ТУ 6 09-3247—73.

Уголь активированный КАД, МРТУ 6-09-1049—64. Уголь активированный ОУ-А, МРТУ 6-09-1049—64. 2-Феноксиэтаиол, ТУ 6-09-13-493—76.

Фенолфталеин, ГОСТ 5850-72.

Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1678—77.

Хлористый метилен. ГОСТ 12794-80.

Хлороформ, ГОСТ 20015-74.

Циклогексан, ТУ 6-09-06-452—76.

Пинк гранулированный. ГОСТ 989-75. Цнпк-дитиол, ТУ 6-09-05-142—79.

Цинковая пыль, ГОСТ 12601-76.

Цинка сульфат, ГОСТ 4529-78.

Цинка хлорид, ГОСТ 4529-78.

Этнлаиетат, ГОСТ 22300 - 76.

Этиленгликоль, ГОСТ 10164-75.

Этпленднамин дигидрохлорнд, ТУ 6 09-10-645—77. Эфир диэтнловый, ГОСТ 6265-74.

Эфир петролейный. ТУ МХП-1867—48.

Приложение 2 НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ НА ПОСУДУ ЛАБОРАТОРНУЮ

Посуда мерная лабораторная стеклянная (цилиндры, мензурки, мерные колбы, градуированные пробирки), ГОСТ 1770-74 Е.

Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые, ГОСТ 9147-80 Е.

Посуда и аппаратура лабораторная стеклянная. Шлифы сферические н взаимозаменяемые (вся химическая посуда на нормальных шлифах: круглодонные, плоскодонные, грушевидные колбы, колбы Эрленмейера, холодильники. двугорлые колбы, аллонжи, дефлегматоры и т. д.), ГОСЛГ 9737—70.

Приборы мерные лабораторные стеклянные (бюретки, пипетки), ГОСТ 20292-74 Е.

Пикнометры стеклянные, ГОСТ 22524-74 Е.

Посуда н оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры (воронки делительные, эксикаторы, камеры хроматографические, водоструйные насосы, стаканы стеклянные, пульверизаторы, бюк-сы, колбы, воронки Шотта и т. д.), ГОСТ 25336-82 Е.

Приложение 3

НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ НА ПРИБОРЫ И АППАРАТУРУ

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081—73 или аналогичный.

Аспирационное устройство, ТУ 64-1862—77.

Баня водяная, ТУ 64-1*2850—76.

Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19491-74.

Весы аналитические лабораторные, ТУ 64-1-1065—73.

Генератор водорода.

329

Гомогенизатор, МРТУ 42-1505—63.

Денситометр БИАН-170, ТУ 64-1-56—73.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-IM, ТУ 25-11-917—76 или аналогичный.

Лампа ртутно-кварцевая, ТУ 16-535-280—74 или аналогичная

Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236—79 или аналогичная.

Микрошприц МШ-10, МШ-1, ГОСТ 20292-74 Е.

Центрифуга, МРТУ 42-219—69.

Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411—76 Е.

Шприц медицинский, ГОСТ 22090-83 Е.

Электрокофемолка, ГОСТ 19423-81 Е.

Электроплитка, ГОСТ 14919-83 Е.

Колбонагреватель электрический, ТУ 92-275—76.

Приложение 4 САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКИЕ НОРМЫ СОДЕРЖАНИЯ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, ВОЗДУХЕ,

ВОДЕ И ПОЧВЕ

Приведенные в данном сборнике методики определения остаточных количеств пестицидов предназначены для контроля за содержанием пестицидов в различных средах с целью выявления нарушений санитарно-гигиенических норм (МДУ, ПДК), их устранения и разработки мер профилактики.

Определения терминов заимствованы из «Словаря термином и их определения в области гигиенического нормирования факторов окружающей среды» под ред. академика Г. И. Сидоренко (М., 1988) и «Методических указаний по гигиенической оценке новых пестицидов» (Киев: ВНИИГИНТОКС, 1988).

Предельно допустимая концентрация (ПДК)—наибольшая концентрация Вредного вещества в объектах окружающей среды, которая в условиях постоянного воздействия иа организм или в отдаленные сроки после него не вызывает у человека каких-либо заболеваний или отклонений в состоянии здоровья, а также не влияет на условия его жизни.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ)—устанавливаемый расчетным методом временный ориентировочный гигиенический норматив содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест, воде водоемов, продуктах питания, используемый в основном для целей предупредительного санитарного надзора. Утверждается Министерством здравоохранения СССР на ограниченный срок (2—3 года), после чего может быть заменен ПДК, переутвержден на новый срок или отменен в зависимости от перспективы применения вещества и имеющейся информации о его токсических свойствах.

ПДК химических веществ в воздухе рабочей зоны — концентрация вредного вещества в воздухе рабочей зоны, воздействие которой независимо от наличия других вредных факторов в пределах нормативов при ежедневной работе в течение 8 ч (при другой продолжительности в пределах 41 ч и неделю) за весь рабочий стаж и в отдаленный после него период не вызовет у работающего и его потомства каких-либо заболеваний или других отклонений в состоянии здоровья, обнаруживаемых современными методами.

ПДК пестицидов в воздухе рабочей зоны при их применении в сельском хозяйстве — это предельно допустимые концентрации, установленные с учетом особенностей сельскохозяйственного производства (кратковременность и периодичность работы с пестицидами, влияние метеорологических факторов, непостоянство концентраций и т. п.) (табл. 196, 197, 198).

ББК 41.4 М54

УДК 631.58(035)


Составители:    М.    А. Клисенко, А. А. Калинина, К. Ф. Новикова,

Г. А. Хохолькова

Редакторы:    А.    А.    Белоусова, Е. М. Козига


Методы определения микроколичеств пестицидов в про-М54 дуктах питания, кормах и внешней среде: Справочник.— Т. 2/Сост. Клисенко М. А., Калинина А. А., Новикова К Ф. и др. — М.: Агропромиздат, 1992. — 416 с.: ил.

ISBN 5—10—002699—5.


Во второй том справочника включены официально утвержденные методики определения шестичленных гетероциклических соединений, веществ, применяемых при биологической защите растений; приведены методические указания по контролю уровней и изучению динамики содержания пестицидов в почве и растениях, систематический ход определения смесей пестицидов в одной пробе; методика определения различных пестицидов в воздухе рабочей зоны.


М


4105020000—059

035(01)-92


19—92


ББК 41.4


ISBN 5—10—002772—X ISBN 5— Ш—002699-5 CiJП


© М. А. Клисенко, А. А. Калинина, К. Ф. Новикова. Г. А. Хохолькова, составление, 1992


Г л а в a 13. БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ*

Б соответствии с уставом Международного общества биологической борьбы, принятым в 1971 г., биологическая борьба в сельском и лесном хозяйствах определяется как использование живых существ и продуктов их жизнедеятельности для предотвращения или снижения ущерба, причиняемого вредными организмами. Сформировалось 3 направления биологической борьбы:

использование полезных видов насекомых для борьбы с вредными насекомыми (насекомые-энтомофаги) и сорняками (насекомые-фитофаги); применение в борьбе с вредителями и возбудителями болезней растений препаратов на основе микроорганизмов и продуктов нх жизнедеятельности (биопрепараты);

использование биологически активных веществ, синтезируемых насекомыми, или их химических аналогов (феромоны и гормоны насекомых).

Все 3 направления, используя те или иные средства, предусматривают снижение численности вредного вида до экономически безопасного уровня. Они нс рассчитаны на его полное истребление. Это позволяет сохранять существующие в природе связи между видами, т. е. предполагает экологическую безопасность.

Вместе с тем с применением в качестве действующих начал микроорганизмов, способных к размножению, а также использованием биологически активных веществ микробного синтеза либо веществ, синтезируемых насекомыми, необходимо предусматривать гигиеническую оценку рекомендуемых средств — изучение возможных отрицательных эффектов, возникающих при производстве и применении биологических средств защиты растений, в том числе возможное негативное влияние на здоровье населения. Такое исследование не может быть выполнено без определения действующих начал биологических средств в окружающей среде, позволяющего оценить реальные уровни загрязнения и наметить меры по его предупреждению. Наибольшую потенциальную опасность с позиций биологического загрязнения среды представляют собой биопрепараты, а также гормоны и феромоны насекомых, что нашло отражение в разработке методов определения биологических средств защиты растений.

Применение в защите растений полезных видов насекомых предусматривает использование хищных насекомых и насскомых-паразптов. Паразитических и хищных насекомых обычно называют энтомофагами. Насекомых, питающихся сорной растительностью, называют фитофагами. Все приемы борьбы с вредными организмами с помощью энтомофагов и фитофагов безопасны для окружающей среды и нецелевых видов, включая человека.

Использование биопрепаратов сопровождается внесением в окружающую среду различного рода микроорганизмов, способных к размножению. По-

Раздел подготовлен Е. А. Мельниковой (ВНИИГИНТОКС).

107

скольку условия применения биопрепаратов такие же, как химических лести-цидов, они могут загрязнять объекты окружающей среды остаточными количествами, что представляет опасность для нецелевых видов. Чтобы определить потенциальную опасность использования биопрепаратов, необходимо знать их характерные особенности.

Микробиологический метод защиты растений предусматривает использование микроорганизмов, вызывающих заболевания среди вредных членистоногих (вирусы, бактерии, грибы и др.), антибиотиков и токсинов фунгицидного действия, микробов — антагонистов возбудителей фитоинфекций.

По назначению биопрепараты используются в качестве инсектицидов, фунгицидов и родентицидов. Товарные формы биопрепаратов имеют вид смачивающихся и сухих порошков, паст, суспензий. В зависимости от качества действующих начал различают вирусные, бактериальные, грибные, токсин- и антибиотиксодержащие препараты.

Вирусные инсектициды создают на основе энтомопатогенных вирусов, вызывающих у восприимчивых насекомых инфекционную болезнь и последующую гибель. Вирусы насекомых принадлежат в основном к семейству б&куловирусов, особенность которых — способность к образованию внутри пораженной клетки кристаллических белковых включений в виде полиэдров или гранул. Внутри полиэдров и гранул содержатся собственно вирусные частицы — вырионы.

При попадании с кормом в кишечник чувствительного насекомого белковая оболочка полиэдров и гранул растворяется, и вирусные частицы проникают в ткани насекомого, вызывая заболевание и гибель.

Вирусные инсектициды высоко специфичны. Они патогенны обычно для одного вида вредителей. В настоящее время созданы вирусные биопрепараты против американской белой бабочки, капустной, хлопковой и озимой совок, рыжего соснового пилильщика, непарного шелкопряда и ряда других вредителей сельскохозяйственных культур и лесных насаждений.

Учитывая особую роль вирусов в патологии биологических видов, исследования по оценке безопасности вирусных инсектицидов проводят особенно тщательно. В опытах на различных моделях выясняют, в какой мере энтомопатогенные вирусы способны развиваться в клетках теплокровных животных, могут ли они проявлять инфекционно-токсическое или аллергическое действие, а также способны ли они оказывать отдаленный эффект (эмбриотоксическое, канцерогенное, тератогенное действие). К настоящему времени исследования по безопасности проведены более чем на 50 энтомо-патогенных вирусах и 20 видах позвоночных, в том числе на млекопитающих, включая человека.

Ни в одном из проведенных опытов не было получено данных, подтверждающих опасность энтомопатогенных вирусов для нецелевых видов.

Большинство бактериальных препаратов для защиты растений во всех странах производят на основе энтомопатогенных бацилл турингиензис. Они отличаются друг от друга содержанием в качестве действующего начала различных штаммов бацилл турингиензис, выделенных от больных насекомых в разных географических зонах. В СССР это препараты гомелин. дендроба-циллин, битоксибациллин, бактокулицид, лепидоцид, инсектнн, ВИП, энто-бактерии.

Заражение здорового насекомого происходит через загрязненный спорами бацилл растительный корм. Попадая в кишечник, споры прорастают в вегетативные клетки, в которых, в свою очередь, в процессе созревания образуется спора и формируются кристаллы эндотоксинов. Далее споры проникают в гемолимфу (кровь) насекомого, прорастают и вызывают септицемию и гибель насекомого. Важное место в патогенезе инфекции имеет эндотоксин. который вызывает распад клеток эндотелия кишечника и его паралич. Некоторые разновидности бацилл турингиензис образует также экзотоксин, который оказывает на насекомых овоцидное и тератогенное действие.

168

В последние годы ведется работа по испытанию других бактерий для •борьбы с вредными насекомыми. Так, испытываются псевдомонады и бацнл-•лы субтилис. На основе бактерий рода сальмонелла разработан и выпускается промышленностью бактороденцид, зерновой и аминокостный препараты для борьбы с мышами-полевками.

Исследования возможного патогенного действия бацилл турингиензнс л отношении теплокровных животных проводились с первых лет производства и испытания биопрепаратов как за рубежом, так и в нашей стране. В настоящее время действие бацилл турингиензнс испытано на 10 видах млекопитающих, 7 видах птиц н на 5 видах рыб. Во всех опытах бациллы турингиензнс не вызывали развития инфекционного заболевания и не размножались в нецелевых видах. После введения культур кристаллоспорообразующих бацилл турингиензнс млекопитающим и птицам исследователи обнаруживали споры микроорганизма в органах животных в течение 5—14 сут после воздействия. При этом каких-либо признаков заболевания и морфологических изменений в органах не обнаружено.

Товарные формы биопрепаратов этой группы практически нетоксичны для млекопитающих, но при длительном поступлении в организм через органы дыхания могут вызвать развитие явлений аллергии. Многие серотипы бацилл турингиензнс продуцируют термостабильный экзотоксин, который у чувствительных насекомых вызывает тератогенный эффект. В опытах с биопрепаратами, содержащими небольшое количество экзотоксина (до 2%), тератогенного действия на теплокровных животных не выявлено.

Среди возбудителей болезней насекомых важную роль играют микроскопические грибы. Заражение насекомых грибами происходит как через желудочно-кишечный тракт, так и через кожные покровы. Патогенное действие грибных инсектицидов обусловлено механическим повреждением тела вредителя прорастающими спорами и мицелием гриба, а также воздействием образуемых грибом токсинов. Токсические продукты жизнедеятельности микроскопических грибов способны также оказывать последействие, снижая плодовитость самок или вызывая развитие уродливых особей в поколении вредителя. Для борьбы с вредными насекомыми используют грибы боверия Зассиана (бовернн), энтомофтора (микоафидин и энтомофторин), вертнцил* лнум, ашсрсония, пецмломицее фаринозус (пецнломин).

Изучение безопасности энтомопатогенных грибов проведено на 4 видах лабораторных животных и куриных эмбрионах. Изучалось действие спор грибов и токсинов, содержащихся в культуральной жидкости при выращивании грибов на жидких питательных средах. Действующие начала н товарные формы грибных препаратов вводили в желудок н иетрапернтонеаль-«о. Ни в одном опыте не было получено результатов, свидетельствующих о патогенном действии грибов на теплокровных. Товарные формы биопрепаратов на основе грибов оказались практически нетоксичными для животных. В опытах на животных и в условиях производства установлено их аллергенное действие.

В биологической борьбе с болезнями культурных растений используют явление антагонизма между разными видами микрофлоры. В основе его лежит способность отдельных видов микрофлоры образовывать и выделять в окружающую среду токсичные для других видов микроорганизмов вещества (антибиотики). Их используют для предупреждения и лечения ряда вирусных, бактериальных и грибных болезней растений. Биопрепаратом, содержащим микробы-антагонисты или химически очищенные антибиотики, обрабатывают семенной материал перед посадкой или вносят его в почву.

Для борьбы с болезнями растений предложены препараты на основе разных штаммов псевдомонад (миколитин, изип, гаукенн и др.) н на основе грибов (триходермнн), а также антибиотики фитобактериомицин и трнхоте-цин. Все биопрепараты на основе бактерий или грибов, предложенные для защиты растений от возбудителей болезней, практически безопасны для теп-

109

.покровных организмов: культуры микроорганизмов не размножаются в организме млекопитающих и не образуют выраженных токсинов. Товарные формы биопрепаратов практически нетоксичны для теплокровных. Антибиотики трихотецин и фитобактериомицин производят промышленным способом. За рубежом, кроме антибиотиков, специально предназначенных для защиты растении (казумин, бластцидин, полиоксин и др.), используют и медицинские антибиотики (хлортетрациклин, стрептомицин и др.).

Токсикологические свойства антибиотиков, применяемых для борьбы с болезнями растений, зависят от их химических свойств и очень разнообразны. Так, трихотецин, изокротиловый эфир кетоспирта трихотеколона, принадлежит к среднетоксичным веществам. Он не кумулятивен и не аллергенен, но в больших концентрациях раздражает кожу и слизистые оболочки. Фитобактериомицин, стрептотриции сложного состава, более токсичен, особенно при поступлении через органы дыхания. Фитобактернмицин — выраженный аллерген, высококумулятивен, способен раздражать кожу и слизистые оболочки. В связи с относительно высокой токсичностью антибиотики применяют в основном путем обработки семян или посадочного материала.

В последние годы получают применение новые методы биологической борьбы с вредителями, основанные на использовании феромонов и гормонов насекомых. В природных условиях каждая особь насекомых вырабатывает и выделяет во внешнюю среду вещества, способствующие коммуникации между видами. Это феромоны. Лучше других изучены половые феромоны, которые используются насекомыми для встречи насекомых разного пола. Вырабатываются феромоны, обеспечивающие колонизацию вида (агрегацнонные феромоны), выполняющие роль аттрактантов или репеллентов, и др.

Ныне идентифицированы феромоны более чем для 700 видов насекомых. Многие из них синтезированы химиками и испытываются в защите растений. В СССР к 1983 г. были синтезированы феромоны более чем для 40 видов, в том числе для таких вредителей, как плодожорки, совки, листовертки, короеды, щелкуны и др.

Феромоны применяют в испарителях, которые либо помешают ь ловушки, либо рассеивают над полем с помощью авиации. Нормы расхода феромонов чрезвычайно малы (от 5—6 до 250 мг/га).

В последнее время для борьбы с вредными насекомыми стали применять гормоны насекомых, объединяемые общим понятием ювенильные гормоны (ЮГ), или синтетические аналоги гормонов (АЮГ),— вещества, химически не сходные с природными гормонами, но проявляющие гормоноподобное действие и нарушающие, как и гормоны, процессы развития и метаморфоза насекомых. Ныне синтезировано более 2000 АЮГ. Гормональные препараты используют для обработки вегетирующих культур, нормы их расхода приближаются к нормам расхода пестицидов.

Считается, что феромоны и гормоны обладают высокой избирательностью действия. Эти вещества проявляют активность в очень небольших количествах и привлекают насекомых с очень больших расстояний.

Все изученные феромоны и гормоны насекомых оказались малотокснчны-ми соединениями. Сейчас выясняют, могут ли они проявлять другие отрицательные свойства, в частности влиять на эндокринную систему теплокровных Опыты проводят на животных.

Таким образом, биологические средства защиты растений в большинстве своем — часть природных биоценозов. Однако антропогенный способ их получения и использование Не всегда может гарантировать полную их безвредность. Это обусловливает необходимость изучения поведения вновь рекомендуемых средств во внешней среде, для чего требуется разработка методов их определения.

Утверждено 27.04.84 Л® 3024—84

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО УНИФИЦИРОВАННОМУ МЕТОДУ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО ВЫЯВЛЕНИЯ БАКУЛОВИРУСОВ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ1

Настоящие Методические указания распространяются на определение содержания в воздухе рабочей зоны полиэдров и гранул бакуловирусов, являющихся действующим началом вирусных инсектицидных препаратов, что необходимо при разработке санитарно-гигиенических регламентов, санитарно-гигиеническом контроле, а также в научных исследованиях.

Краткая характеристика бакуловирусных инсектицидов. Известные в настоящее время отечественные вирусные препараты, разрабатываемые или

Принцип метода. Метод основан на специфическом взаимодействии антигенов (бакуловирусов) с антителами против полиэдров конкретного вируса. Образовывающийся комплекс, соединенный с флюоресцирующим красителем, выявляется в виде локализованного специфического свечения в лучах сине- и УФ-света на люминесцентных микроскопах.

применяемые в качестве инсектицидов против гусениц вредных насекомых, содержат в качестве действующего начала вирусы насекомых семейства бакуловирусов. Вирусы в препаратах представлены в виде телец-включений типа полиэдров или гранул, размеры от 0,3—1,5 мк (полиэдры) и до 0,25—0,8 мк (гранулы), в которых содержатся различные количества вн-рионов. Бакуловирусы обладают выраженной специфичностью в отношении насекомого-вредителя.

Вирусные тельца-включения получают из тканей и больных или погибших от вирусной инфекции гусениц соответствующего вида насекомых.

Вирусные препараты представляют собой концентрат-суспензию полиэдров или гранул в 50%-ном глицерине (жидкие формы) или порошок светло-серого цвета, состоящий из соответствующих компонентов действующего начала и наполнителя (каолин, силикон, тальк и т. д.). Препараты содержат полиэдры в концентрации в среднем ЫО9 пдр/мл, или 1 -1010 грн/мл. Применяются путем опрыскивания (авиа-, тракторного, ранцевого) при норме расхода 100—200 мл препарата на 1 га с добавлением поверхностно-активного вещества ОГ1-7 из расчета 0,6—4,0 г на 10 л воды.

По данным КНИИЭИБ, изученные отечественные вирусные энтомопа-тогенные препараты вкрин-ЭНШ, вирин-ЭКС, вирин-АББ, вирин-КШ, вк-рин-диприон не токсичны и не патогенны для человека и теплокровных животных. Изученные энтомопатогенные вирусы не репродуцируются в теплокровном организме, не вызывают явной или скрытой инфекции, безопасны в эпидемиологическом отношении. В условиях производства оказывают сенсибилизирующее действие на организм, что может приводить к развитию иммунопатологических состояний у работающих.

Методика определения бакуловирусов в воздухе основана на использовании иммунофлюоресценции, широко применяемой в медицинской вирусологии для индикации различных вирусов (метод Кунса, 1941). Применяют непрямой вариант метода.

Метрологическая характеристика метода. Данным методом можно определить концентрацию телец-включений в 1 м3 воздуха от 0,5-10* и более.

Избирательность метода. При использовании качественной гипериммун-ной антисыворотки против полиэдров или гранул определяемого вируса и устранении неспецифического свечения в исследуемых препаратах-отпечатках метод расценивается как высокоспецифический и чувствительный.

Реактивы и материалы. Ацетон. Хлористый натрий х. ч., 0,85%-ный раствор, pH 7,4—7,6. Нефлюоресцнрующее иммерсионное масло или днметнл-фталат. Синька Эванса (СмН24М6Ка<Ож). Меченная ФИТЦ сыворотка против глобулинов кролика. Специфическая антибакуловирусная сыворотка против определяемого вируса.

Приборы и посуда. Люминесцентный микроскоп МЛ-2 или МЛ-3. Окуляр с сеткой. Объект-микрометр. Электроаспиратор ПАБ-1 или ПОВ-1. Аналитические аэрозольные фильтры марки АФА-ВП-10. Чашки Петри. Предметные стекла. Пипетки Пастера.

Подготовка к определению. До проведения исследования необходимо подготовить люминесцентный микроскоп. При работе на микроскопах МЛ-2, МЛ-3 используют фильтры ФС-1-2, СС-15-2, БСК-8-2. Запирающий фильтр Т-2Н. объектив 90х, окуляры 8* или 10*. сила тока при микроскопии 4— 4,5 А.

Для микроскопии следует применять нефлюоресцирующее иммерсионное масло или диметилфталат х. ч. Чтобы подсчитать количество телец-включений в исследуемой пробе, необходимо определить с помощью объект-

135

микрометра сторону квадрата окулярной сетки, а затем ее площадь. При отсутствии окулярной сетки с помощью объект-микрометра определяют диаметр поля зрения и затем площадь поля зрения по формуле S = nr*. Найденную величину (площадь окулярной сетки или площадь поля зрения) подставляют в формулу для определения количества телец-включений в исследуемой пробе (см. ниже).

Отбор проб воздуха. Для отбора проб воздуха применяют приборы ПАБ-1 иля ПОВ-1, производительность которых до 150—250 л/мин и 20— 25 л/мин соответственно. Эти приборы работают но принципу электростатического или инерционного осаждения частиц аэрозоля из потока исследуемого воздуха на поверхность анализируемых фильтров. Применяют фильтры АФА-ВП-10. Для отсоса воздуха фильтры монтируют на фильтровальной воронке или на патроне для отбора проб пыли и подключают к аспиратору. Рабочая площадь фильтра АФА-ВП-10 равна 10 см2. Фильтры изготовлены из перхлорвиниловой ткани ФПП, обладают малым аэродинамическим сопротивлением, что позволяет протягивать воздух с большой скоростью (до 100 л/мин).

В исследуемых помещениях пробы отбирают в разных местах (5 точек конвертообразно) на уровне 150—200 см от пола в зоне дыхания людей. На каждую пробу пропускают не менее 100 л воздуха (5 мин при скорости 20 л/мин).

После аспирации воздуха аналитические фильтры снимают, кладут лицевой стороной (с отпечатком аэрозоля) вверх на предметные стекла, которые помещают в чашки Петри на две стеклянные палочки. На дно чашек наливают ацетон и закрывают их. В парах ацетона фильтры обесцвечиваются. Когда фильтр станет прозрачным, предметные стекла с зафиксированными на них отпечатками аэрозоля можно хранить при 4°С до проведения исследования (не более 30 сут).

Ход анализа. Исследованию подвергают зафиксированные на предметных стеклах отпечатки аэрозоля, полученные на обесцвеченных аналитических фильтрах. На стекла с отпечатками наносят водный раствор (1:10 000) енньки Эванса на 15 мин, затем стекла промывают в проточной воде н подсушивают на воздухе (для ускорения подсушивания можно применять комнатный вентилятор). На высушенный препарат накосят специфическую антиполиэдренную антивирусную иммунную сыворотку в рабочем разведении, выдерживают 20 мин во влажной камере при 37 °С. Сыворотку смывают в проточной воде, препарат подсушивают и наносят антивидовую меченную ФИТЦ сыворотку на 20 мин при 37 °С, затем промывают в проточной воде. Подсушенный препарат готов к просмотру в люминесцентном микроскопе. При наличии в отпечатках телец-включений бакуловирусов они будут выявляться в микроскопе но яркому специфическому желто-зеленому свечению. Более интенсивно светятся тельца-включения по их периферии в виде яркого ободка полиэдров или гранул на общем красноватом фоне препарата.

В случае получения отпечатков на нескольких фильтрах можно проводить окраску каждого или группы отпечатков разными специфическими иммунными сыворотками и таким образом осуществлять экспресс-идентифи-кацию выявляемого бакуловируса. Этим способом также выявляется степень серологического родства видов бакуловирусов.

Обработка результатов анализа. Кроме визуального определения телец-включений бакуловирусов (качественный анализ), можно провести количественный анализ на единицу объема.

Подсчитывают число телец-включений в 100—500 полях зрения, при этом общее количество подсчитанных частиц должно быть не менее 400. Затем определяют среднее количество включений в одном поле зрения или в одном квадрате окулярной сетки.

136

1

Разработаны В. Л. Васильевой, В. И. Трусовым, А. Л. Гуралем (КНИИЭИБ).