государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями РАСТЕНИЯ И СОРНЯКАМИ ПРИ мех СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОДЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОЗ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВКЕшНЕЙ СРЕДЕ

Часть XI

Москва - 1961

Государственная комиссия по химичеоким средствам борьбы вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Чаоть Х1-я

Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы о вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР

Москва - 1981

Н_ - высота пика анализируемой пробы в мд н ст - высота пика стандарта в мм Сет - содержание нзофоса-3 в стандарте в нг У - объем конечного раствора, из которого отбирают аликвоту на хроматографирование в мл У₀ - объем аиквоты , вводимой в хроматограф в мкл,

А - навеска анализируемого образца почвы в г иля объем воды вмл Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкалявааяе", готовят менее концентрированные растворы, добавляя в конечный объем дополнительное замеренное количество растворителя.

Тонкослойная хроматография

Содержание изофоса-З в анализируемой пробе вычисляют по формуле:

V    .

С - кг/    кг    или мг/л,    где

А

- количество изофоса-41, найденное в хроматографируемой пробе, в мкг

А - навеска анализируемого образца рйса или почвы в г или объвм воды в мл

3.    Требование безопасности

При работе соблюдать требования безопасности, принятые для фосФороргая ячеек их соединений, легковоспламеняющихся жидкостей и при заботе с водородом.

4.    Литература

1,    Ф.Р.»5елвцвр, К.«.Новикова, Т.В.Алдошина "Определение остатсгч-ПШ1 количеств аовых отечественных гербицидов азо*оса-2, нзо-^гя-З

з риса л водо методом газожидкостной хроматографии с тер/огхгчч

дв те втором* в б. "Газовая л^матографяя пестицидов" .Таллин, (072г,

J.7(r-125.

2.    Ф.Р.л'»епьцер,К.«.Новикова,Т.В.Алдошина "Определение изо'оса-2, изо1оса-3, ралида и я*аяэ в рисе и зедо ГЖХ" з книге "Лтоцч определо-:ин искроколичастп пестицидов" й., "Колос", 1977,219-222.

5.    Авторы

Методические указания разработаны авторским коллективом ВНИИ химических средств защиты растений г,Москва,К,5.Новиковой ,Ф.Р.Мель-цер , Т.В. Алдошиной,И Л.Меерзон.

6. В настоящие методические указания включена методика определения остаточных количеств изофоса-3 в почве методом ГХХ и ТСХ разработанная тем ге коллективом авторов и утверхденная 18 ноября 1977 г # 1798. Методика опубликована в"Методичесшо: указаниях по определению микроколичеотв пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде",чЛХ,1979 г,стрХ20-124.

83

Стр.

6* Методические указания по определению остаточных количеств рицида "П" в рисе и водо газожидкостной

хроматографией -................. 93

7. Методические указания по определению матилнитрофооа,

фенитрооксона и п-нитрокреаола в зерне и продуктах переработки зерна методом хроматографии в тонком

слое....................... ЮЗ

8. Энзимно-хроматограбический метод определения фоо-фороргэничоских пестицидов в раотителышх продуктах и биосуОстратах .................. 109

тонком слое.................... 118

2.    Методические указания но определению остеточных ко

личеств гербицида малорано в почвах о различным содержанием гумуса методом TGX........... 124

3.    Методические указания по определению остаточных количеств HE-I66 в огурцах хроматографией в тонком

сдое и фотометрическим методом .......... 129

4.    Методические указания по определению остаточных количеств теидекса в воде и почве.......... 136

5.    методические указания по опр делению ФДН    -ди-

ывтмл-Ж-(З-хлорфонил)-гуанидиаа) в огурцах и воде методом тонкослойной    хроматографии ........ 139

6.    Методические укззаиия по определении дитана М-45 в

продуктах питания растительного происхождения и воде ........................ 149

П. Гетероциклические соединения

7.    Методические указании но определению базаграна в

воде, почве, зерне и    растительном    историале ....    152

УЪ

Cip,

6. Uti то диче окне указания по определению фунгицида бай-летона методом ТСХ в почве, корнях,зеленых листьях,

плодах томатов и огурцов..........’.    .    .    159

9. Методические указания по газохидкостно-хроматографическому определению бентазона в почве ч растениях 166

10.    Методические указания по определению диквата в се

менах подсолнечника и масле из семян подсолнечника опектрофотометричеоким методом .......... 174

11.    Методические указания по определению метазина в во

де, почве, овощах и биологическом материале методом хроматографии в тонком одое сорбента....... 181

12. Методические указания по определению остаточных количеств симм-триазиновых гербицидов (симазинэ, ат-разина, проказина, промо трина, семерона, меэорэни-ла, метазина, метопротрина) в почве гээожидкоотной

хроматографией .................. 188

13.    Мотодичеокие указания по определению котофора в семенах хлопчатника методом хроматографии в тонком

слоо....................... 198

14.    Мотодичеокие указания по определению ронстэрт (ок

сидна зона) в рисе методами газовой и тонкослойной хроматографии ................... 205

15.    Методические указания по определению тачигьренэ в

вода методом тонкослойной хроматографии ...... 209

1C Методические указания по определению тербацилэ в эфирных маолэх и эфиромасличном сырье методом газожидкостной хроматографии ............. 214

17.    Мотодичеокие указании по определению трифорииэ в

воде....................... 220

18.    Методические указании по определению остаточных ко

личеств текто(тиабанда зола) в картофеле и свекле тонкослойной хроматографлей............ 227

19.    Методические указания но определению остаточных ко

личеств фона зоне в почве, воде, свекле и растительных обьоктах газожидкостной    хроматографией ....    234

Прочие пеотигиды

I. Методические указания по определению остаточных.

количеств хлората магния полярографическим ue-wov ••• 2чЗ

2.    Методические указания по определению нортроаа в

ьодо, черноземной почве и сахарной свекле ............ 2**8

3.    Методичеокие указания по определению содержания

общой ртути в **чсе, яйцах, рыбе, молочных продуктах, ПОЧВ", .....*..................................Zj'J

Бактериальные пестициды

1.    ?Летодические указания по определению микробиологи

ческих инсектицидов не прямым иммунофлюореогентним методом ..............................................268

2. U*годические указания по определению виталичина А

j воздухо м'етодом тонкослойной хроматографии.........276

3* Методические указания по определению полиэдров» вируса ядерного полиэдроза капустной совки на растительных объектах иыыунофлюоресцентным методом ....... 260

тов в воде, почве и растительном материале ......... 289

2. Методические указания по ^пределе*чю актеллика

растительной продукции, почве и воде ................. 296

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-иоследователь-ских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токоикологичеоких лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других Министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пео-тицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде*

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомио-сии по химическим средствам борьбы о вредителями, болезнями растений и оорнпками при МСХ СССР. (Председатель группы экспертов М.А.Клисенко).

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования оанэпидслужбы ИМПиТМ им.Е.И.Ыарциновокого и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минэдрава СССР.

ЪдВДОЩШ'

Заместитель Главного Государственного санитарного врача СССР

А.Л,Зайченко

^w 28 " января_I960    г.

^ТОДИЧЕСШ УКАЗАНИЯ НО 011РЩЛЗШЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КЮЗОСА-З

в таз. почвз и во^б газсщжостной к тонкослойной шштографМ

I. Краткая характеристика препарата

Изофос-3 новый отечественный гербицид, рекомендуемый для борьбы с просовидными сорняками в посевах риса. Действующее начало препарата О- (2-хлор, 4-метялфенил )-й- (втор-бутила\-.адо) хлорые тнлтиос^осфонат. Структурная формула:

С ^^Oi'iPsC Х«2 и'ол. масса 326,0

Синонимы отсутствуют.

В чдсто»м виде-бесцветная вязкая жидкость с Т.кип. Х47-Х48°С при 0,1 мм рт.ст.. Хорошо растворим в ацетоне, гексане, бензоле, этилапетате. Раст зоркость в воде при 20°С 1,87 мг/л.

P-значения в системе вода:органическиЛ растворитель, для гексана 0,84, эткладетатз 0,71, бензола 0,90.

ДДбО для крыс 510 мг/кг

ДОК в рисе 0,1 мг/кг, ПДК в воде 0,4 мг/л. ЦДК в почве не установлена.

2. Методика определения изофоса-3 в рисе, почве и воде газожидкостной и тонкослойной хроматографией

2.1. Основные положения

2.1 Л. Принцип метода

Метод определения изофоса-3 в рясе основан на извлечении гербицида зтилацетатом, из воды -гексаном, а из почвы - смесью гексана с ацето юм 14:1) или изопропилового спирта с бензолам ^ Г:3; и о::ределении газожидкостной хроматографией с термоионным детектором (ТКИ) без

75

очистки экстракта иди тонкослойной хроматографией после очистки экстракта на колонке с окисью кремния для люминофоров.

2.1.2. Метрологическая характеристика методы

Диапазон определяемых концентрации

Г£Х ТСХ рис 0,03-0,48 мг/кг 0,05-0,Змг/к1 почва 0,01-0,16 мг/кг 0,05-0,Змг/кг вода 0,005-0,08мг/л 0,001-0,006м£ Предел обнаружения 0,25 нг ГЖХ и 0,5 мкг ТСХ. 'А Предел обнаружения ПГ,- ТСХ рис 0,03 мг/кг 0,05мг/кг почва 0,01 мг/кг 0,05-0,08мг/кг вода 0,005 мг/л 0,001 мг/л Среднее значение определения стандартных количеств изоФюса-З в С при п=15 m ТСХ рис 90,8 83,2 почва 85,9 81,0 вода 95,0 90,0 Стандартное отклонение з в % Ш ТСХ ГУХ ТСХ рис + 3,5 ± 9,4 почва + 7,9 ± 8,8 вода ± 3,9 ± 7,8 Относительное стандартное отклонение sv Ш ТСХ рис + 3,9 ± 11,3 почва X 9,1 i *10,9 вода i 4,1 ± 8,7 Доверительный интервал среднего в % при"р=0,95 и п= 5 Глл ТСХ рис 90. *4,5 63,2+i2,I почва 65,9+10,2 31,0+11,3 вода 95,015,0 90,0+10,0 Размах варьирования в £ R Па ТСХ рис 73-96 70,0-90,5 почва 72-99 70-90 эода £2-100 £0-100

2.1.3. Избирательность метода

л’|втод селективен. Прочие пестициды, применяемые на рисовых плантациях, в том числе рицид, рицид-П, ялаа, пропанвд, метафос определении не метают.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетон ГООГ 2603-71,хч, свежеперегяанныл

Гексан '17-6-09-3375-78, хч, сзелеперегаапныД

Бензол ГОСТ 5955-75

Изопропиловый спирт СТ-ГОХП 15-235 хч

Хлористый метилен «ИЛУ 6-09-53-62-68,хч, oexeneperHaHHblt

Петролейный эфир (rp.40-70°С) ТУнЛЛ 1067-48 ч, перегнанный

Кремний окись 07) для люмино^ров \2?ТУ-6-69-4 85-67.

Окись кремния просеивают через сито с р з/ером отверстий 0,2 мм (70-90 меш). ЮОг сорбента помещают в фарфоровую чаггку и активируют в предварительно нагретое шкафудо Х30°С езкгдг в течение 7 часов. Сорбент охлаждают в эксикаторе над Р2О5, затем перестают в крутлодонмую колбу на 5о0 мл с притертой пробкой (колба X). Колбу 1 хранят в эксикаторе без осушающего агента *> колбу 2 быстро отвешивают из колбы I

47,5 г активированного охлажденного сорбента, затем пипеткой, очень аккуратно, по стенкам колбы вносят - 2,5 мл дистиллированнол воды. Колбу закр^ают притерто?» пробкой и ее содержимое тщательно встряхивают в течение 15-20 мин до исчезновения комков. Колба 2 хранится в эксикаторе без осушающего агента. Сорбент из колбы 2 ^оден к употреблению в течение 6-7 дней.

2,6-Дибромхинонхлоримид МРТУ 6-09-5759-69 , 0,5^-ный раствор в циклогексане

циклогексан :,1РТУ 6-09-3112-66, хч Азотнокислое серебро ГОСТ 1277-75 БромХеполовый синий

Проявляющий бром*ечоловнй реагент. 0,05г бром:Уенолозого синего растворяют в 10 мл ацетона и дозодят до 100 мл 1^-ным раствором азотнокислого серебра э смеси ацетона с водой (3:1).

Уксусная кислота ,Г0СГ 61-75, 5#-аыЯ водный раствор Хроаатон-ir-cynep (0,Х6-0,20 ми) с 32 sa—30

Хро^атон-а-AW-Н.Л 3 (0,Х25-0,Х60 мм)

Иодддяэтхлзяглиходьоукцхчат (ЯДЗГС) ГУ 6-П-Х5-68

Пластинки "силуфол", ЧССР

Хлористый натр ГОСТ 4233-66, чда

Пяткокясь фосфора ?.fi^ .»1РТУ 6-09-5753-65

Сульфат натрия ГОСТ 41-66-76, безводный и i£-ный раствор Стандартные растворы изофоса-3 з ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор А), 10 мкг/мл (раствор Б) и серия стандартных растворов с содержанием 0,1; 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 мкг/мл.

Раствор А готовят растворением 10 мг изофоса-3 в мерной колбе на 100 мл в аиетоне. Из раствора А пипеткой отбирают 10 мл в освещают в мерную колбу на 100 мл, и доводяi* к<. чбу до метки аце'Рон^:°⁵гастворы А и Б стабильны при хранении э холодильнике в течение I года.

Для пригс овления серии стандартных растворов из раствора Б в серию пробирок емкостью 10 мл с пришлифованными пробками пипеткой отбирают ОД; 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 мл и соответственно добавляют пипеткой 9,9; 9,о; 9,5;9,0;о,0;7,0 мд ацетона. Пробирки закрывают пробками, ^эрию стандартных растзоров готовят ежедневно.

Азот особой чистоты ГОСТ 9293-74 , газообразный из баллона Водород из баллона с редуктором пли получаемый из генератора водорода

Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Хромат-граф Цвет 106 или аналогичный прибор с ТЭД

Хроматографическая камера с притертей крышкой

Аппарат для встряхивания

Копейная мельница

Ротационный вакуумный испаритель

Иочзенное сито

Сито с размером отверстий 0,2 мм (70-90 мет)

Делительные воронки Г0СГ 10054-75 на I л

Хроматографическая колонка стеклянная, длиной 20 см, внутренним диаметром I см, с пористым.фильтром в нихней части и с капельницей на шлифе.

Хроматографические колонки для ГЖХ стеклянные, длиной 2 м я внутренним диаметром 3,5 мм, а также длиной 1,5 м и внутренним диаметром 3 мм

Колбы плоскодонные со шли;Ьом Гост 1039-1-72 на 100, 500 и 1000 мл

.лзнзуркг ГОСТ 1770-74 на 50,100 и 500 мл

Эксикатор

Пипетки ГОСТ 1770-74, на I, 2, Ю и ко мл Колба мерные ГОСТ 1770-74 на 100 мл Пробирка с притертыми пробками па 1^л мл Ьйшрошпркц на 10 мкл 78 Пористый фильтр ы I

2.4. Подготовка к определению

Подготовку хроматографа к работе проводят согласно инструкции. Хроматографические камеры насыщают "подвжжнчм растворителем" гексангхлористый метилен (3:2) или пвтролейный эфир:ацетон (7:1) в течение I часа

Перед анализом рис измельчают на кофейной мельнице до консистенции муки грубого помола. Для анализа берут 50 г.

Почву перед анализом просеизают через почвенное сито. Для анализ* берут навеску почвы в естественно-влажнам состоянии в количестве 20г

2.5 Проведение определения

Газохроматографическое определение

Рис. 50 г размолотого риса помещают в плоскодонную колбу иа I л, добавляют 100 мл этилацетата в экстрагируют изофоо-3 с помощью механического встряхивания в течение 30 мин. Экстракт фильтрует через бумах ный фильтр в кругложонную колбу прибора для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют еще два раза тем же количеством расточителя. Отгоняют этилацетат с помощью ротационного вакуумного испарителя полностью. К сухому остатку пипеткой добавляют 10 мл ацетона. К^лбу закрывают притертой пробкой и тщательно обмывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2 мял полученного раствора.

Вода. 500 мл воды помещают в делительную воронку емкостью I л, добавляют около 10 г хлористого натрия и экстрагируют изофос-3 тремя порциями по 100 мл этилацетата. Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и фильтруют через пористый фильтр al в круглодонную колбу прибора для отгонки растворителя. Фильтр смывают небольшим количеством этилацетата. С помощью ротационного вакуумного растворителя полностью удаляют растворитель. К сухому остатку пипеткой добав ляют 2 мл ацетона, колбу закрывают пробкой и тщательно смывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора.

Почва. Среднюю    пробу    почвы (20 г) помещают в плоскодонную

колбу на 100 мл, заливают 50 мл смеси гексан:ацетон (4:1) или изопропиловый спирт:бензол (1:1) и экстрагируют изофос-3 в течении 30 мин с помощью механического встряхивания. Переносят экстракт через бумажный фильтр в делительную воронку. Операцию повторяют еще два раза тем .же количеством растворителя. К объединенному экстракту добавляют 30 мл 1^,-ного раствора сульфата натрия, 50 мл ацетона и несильно рвз осторожно, не взбалтывая, переворачивают воронку, предварительно задрл ев пробкой. После разделения слоев водный, нижний слой отбрасывают.

79

Верхний слой сливают в коническую колбу на 500 мл я сушат над безводным сульфатом натрия в течение 15-20 мим при периодическом помешивании раствора. Высушенный экстракт фильтруют небольшими порциями в грушевидную колб;.* на 25 вал к отгоняют рястворктель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1-2 мл. Последнюю порцию растворителя удгляют полностью. К сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл гексана. Колбу закрывают притертой пробкой, тщательно смывают стенкя колбы растворителем. В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора. Условия хроматографирования Хроматограф Цвет 106 с ТЦД Наполнитель колонки

Янина колонки Диаметр

Скорость протяжки ленты самописца Рабочая икала электрометра Температура колонки

испарителя Скорость азота

воцорода воздуха Время удерживания Изофоса-З ялана рицида ркпида-П ме*афоса пропаяада

3 хроматограф вводят 3иверность детектирования

Количественное определение проводят методом соотношения со ота*-дертэм по высоте пиков

Определение тонкослойной хромгтографпей

При определении методом ТСХ дополнительно проводят очистку жг"ракта на колонке с окисью кремния для люминофоров.

1ля очистки берут аликвоты вз полученных по п. 2.6.1. конечных раство-

>ов.

Рис. Уз 10 мл яа очистку берут 2 мл, что эквивалентно 10 г риса. Ноч?з. К 2 мл добавляют еще 2 мл гексана и на очистку з завкси-

80

мости от содержания гумуса ($ 43») берут I ил 2 ил полученного раствора» что эквивалентно 5 идя 10 г почвы.

Вода. На листку берут весь объем ( 2 мд) раствора.

Отобранную ацетоновую аликвоту помечают в пробирку, полностью удаляют растворитель. К сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл гексана. Раствор почвенной пробы, поскольку она растворена в гексане, непосредственно переносят на колонку.Полученныв растворы также переносят на колонку.Для подготовки колонки отвешивают в химический стакан 5 г сорбента из колбы 2, добавляют к нему гексан, содержимое стаканчика быстро перемешивают я переносят на колонку. Предварительно на пористый фильтр колония помещают небольшой ватный томпон. Колонку заполняют при открытом кране. Кран закрывают, когда растворитель находится над слоем сорбента на расстоянии 3 мм. Меняют приемник я при открытом кране колонки переносят рабочий раствор ( 2 мл). Дают ему полностью впитаться в сорбент. Колбу из-под рабочего раствора несколько раз ополаскивают 1-2 мл гексана, полученный раствор гакже переносят ка колонку. К колой-ке присоединяют капельницу, содержащую 20 мл смеси хлористого метилена с гексаном (4:1), и по каплям наминают добавлять элюэит. По окончании элюирования отсоединяют приемник, добавляют к элюату чайную ложгсу безводного сульфата натрия и сушат раствор в течение нескольких мин. Элюат фильтруют в центрифужную пробирку, ь проенрку помещают janлавленный в верхней части капилляр и отгоняют иа водяной бане растворитель, добавляя свежив порции фильтрата по мере удаления растворителя. Остаток ( 0,1-0,2 мл) при помощи того же капилляра, но с отломанным за-плавленным концом количественно переносят на хроматографическую пластинку. Одновременно с рабочей пробой на пластинку наносят серию стандартних растворов изофоса-3 с содержанием 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; £,мкг Хроматограмму развивают в системе гексая.-хлористый дютилеа (3:2) или в с;-:стемфетролеЙный зфир-.ацетон (7:1). После развития хроматограммы ее высушчдают и обрабатывают 0,5*~аым раствором 2,6-дабромхянонхлорими-М в циклогексане с последующим нагреванием в сушильном шкафу при температуре 40°С в течение 5 мин . Изофос-3 проявляется на пластинах в виде оранжевых пятен на белом фоне с 0,44+0,01 в первой системе и 0,56+0,09 - во второй. Пятна стабальаы в течение длительного времени. Хроматограммы можно также проявлять бромфеноловым реагентом с последую-I» снятием фона SfS-ным раствором уксусной кислоты.

2.6 Расчет результатов анализа

Газожидкостная хроматография

Содержание изоФюса-З в анализируемой пробе вычисляют по rtopv-yie:

ЙХ