государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями РАСТЕНИЯ И СОРНЯКАМИ ПРИ мех СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОДЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОЗ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВКЕшНЕЙ СРЕДЕ

Часть XI

Москва - 1961

Государственная комиссия по химичеоким средствам борьбы вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Чаоть Х1-я

Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы о вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР

Москва - 1981

Стр.

6* Методические указания по определению остаточных количеств рицида "П" в рисе и водо газожидкостной

хроматографией -................. 93

7. Методические указания по определению матилнитрофооа,

фенитрооксона и п-нитрокреаола в зерне и продуктах переработки зерна методом хроматографии в тонком

слое....................... ЮЗ

8. Энзимно-хроматограбический метод определения фоо-фороргэничоских пестицидов в раотителышх продуктах и биосуОстратах .................. 109

тонком слое.................... 118

2.    Методические указания но определению остеточных ко

личеств гербицида малорано в почвах о различным содержанием гумуса методом TGX........... 124

3.    Методические указания по определению остаточных количеств HE-I66 в огурцах хроматографией в тонком

сдое и фотометрическим методом .......... 129

4.    Методические указания по определению остаточных количеств теидекса в воде и почве.......... 136

5.    методические указания по опр делению ФДН    -ди-

ывтмл-Ж-(З-хлорфонил)-гуанидиаа) в огурцах и воде методом тонкослойной    хроматографии ........ 139

6.    Методические укззаиия по определении дитана М-45 в

продуктах питания растительного происхождения и воде ........................ 149

П. Гетероциклические соединения

7.    Методические указании но определению базаграна в

воде, почве, зерне и    растительном    историале ....    152

УЪ

Cip,

6. Uti то диче окне указания по определению фунгицида бай-летона методом ТСХ в почве, корнях,зеленых листьях,

плодах томатов и огурцов..........’.    .    .    159

9. Методические указания по газохидкостно-хроматографическому определению бентазона в почве ч растениях 166

10.    Методические указания по определению диквата в се

менах подсолнечника и масле из семян подсолнечника опектрофотометричеоким методом .......... 174

11.    Методические указания по определению метазина в во

де, почве, овощах и биологическом материале методом хроматографии в тонком одое сорбента....... 181

12. Методические указания по определению остаточных количеств симм-триазиновых гербицидов (симазинэ, ат-разина, проказина, промо трина, семерона, меэорэни-ла, метазина, метопротрина) в почве гээожидкоотной

хроматографией .................. 188

13.    Мотодичеокие указания по определению котофора в семенах хлопчатника методом хроматографии в тонком

слоо....................... 198

14.    Мотодичеокие указания по определению ронстэрт (ок

сидна зона) в рисе методами газовой и тонкослойной хроматографии ................... 205

15.    Методические указания по определению тачигьренэ в

вода методом тонкослойной хроматографии ...... 209

1C Методические указания по определению тербацилэ в эфирных маолэх и эфиромасличном сырье методом газожидкостной хроматографии ............. 214

17.    Мотодичеокие указании по определению трифорииэ в

воде....................... 220

18.    Методические указании по определению остаточных ко

личеств текто(тиабанда зола) в картофеле и свекле тонкослойной хроматографлей............ 227

19.    Методические указания но определению остаточных ко

личеств фона зоне в почве, воде, свекле и растительных обьоктах газожидкостной    хроматографией ....    234

Прочие пеотигиды

I. Методические указания по определению остаточных.

количеств хлората магния полярографическим ue-wov ••• 2чЗ

2.    Методические указания по определению нортроаа в

ьодо, черноземной почве и сахарной свекле ............ 2**8

3.    Методичеокие указания по определению содержания

общой ртути в **чсе, яйцах, рыбе, молочных продуктах, ПОЧВ", .....*..................................Zj'J

Бактериальные пестициды

1.    ?Летодические указания по определению микробиологи

ческих инсектицидов не прямым иммунофлюореогентним методом ..............................................268

2. U*годические указания по определению виталичина А

j воздухо м'етодом тонкослойной хроматографии.........276

3* Методические указания по определению полиэдров» вируса ядерного полиэдроза капустной совки на растительных объектах иыыунофлюоресцентным методом ....... 260

тов в воде, почве и растительном материале ......... 289

2. Методические указания по ^пределе*чю актеллика

растительной продукции, почве и воде ................. 296

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-иоследователь-ских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токоикологичеоких лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других Министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пео-тицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде*

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомио-сии по химическим средствам борьбы о вредителями, болезнями растений и оорнпками при МСХ СССР. (Председатель группы экспертов М.А.Клисенко).

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования оанэпидслужбы ИМПиТМ им.Е.И.Ыарциновокого и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минэдрава СССР.

" утвввда»"

ЗАМ . ГЛАЗНОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО САНИТАРНОГО ВРАЧА СССР

_А. И.ЗАЙЧЕНКО 19 октября 1Э?9г » 2095-79

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАЗАГРАНА В ВОДЕ. ПОЧВЕ .ЗЕРНЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ

I.Характеристика анализируемого пеотицида.

Активное вещество базаграна(синонимы:бентазон.5А0£ 351) 3«*иэопропилбснэ-2,1,3-'гиадиазино-4-диоксид-2,2).

Структурная формула:

Суммарная формула:    ^10^12^    2^3^*

Молекулярная масса базаграна:240,3.

Томка плавления:137-139°С.

Растворимость (в г в 100 г рястЬорителя): вода 0,05,этанол 86,1_#ацетон 150,7, циклогексан 0,02, бензол 3,3, диэтиловый эфир 61этилацетат 65,хлороформ 16. Используемся в виде водного растьора.Малотоксичен для теплокровных животных,1Дзд _для

крыс 1100 кг/кг.

Применяется для уничтожения ряда уотойчиьнх к 2,4-Д сорня-iod на посевах сои,риса.фасоли,зерновых.

IS2

2•Методика определения базаграна э воде,почве,зерне и растительном материале методом тонкослойной хроматографии.

2.1* Основные положения.

2.1.I. Принцип метода.

Метод основан на экст[акции пестицида из анализируемых проб органическим растворителем,очистки экстракта и хроматографировании в тонком слое адсорбента.

Подвижной фазой служит смесь органических растворителей (см табл.).В качестве адсорбента используют силикагель либо пластинки "Силуфол”.Проявление хроматограмм можно осуществить двумя способами: I - термическое разложение базаграна,деазотирование нитритом натрия в солянокислой среде,аэосочетанис седей фенилдказоькя с а-нафтолои(дибо с У -/I-нафтил/-отиленди-амгном,), II -активация базаграна У^-свето.ч,хлорирование и взаимодействие с О •'ГОЛ ИДИНОМ.

Количественное определение производится путем сэагкения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандаотных растворов.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

Диапазон определяемых концентраций - 1-10 мкг.

Нижн/.Я предел обнаружения 0,5 ккг, дл« воды 0,05 кг/л, для почвы 0,1 мг/кг, для серна 0,2 иг/кг.

?азмах варьирогания R ^я 95 *70 “25 Среднее значение определения стандартных растэороз пестицида - 90£(ддя воды), 73 % (для почвы), 68 •$ (для верка).

Стандартное отклонение - 6,3£(для воды). 10^ (для почвы), Н,ч52 ( для зерна).

Относительное стандартное отклонение - 7/(для ьоды), 13£(для почвы), 13,1£(для зерна).

Доверительный интервал среднего г.ои р»0,95 и П»5, сС *9Q- б,1Д( для ьоды),    5,2£    (для    почвы),

СО °80- Ь,¹\$ (для зерна).

Определению базаграна не хезапт арезин,диурон,лкнурон₍ монурон,пропанид,солен,фалоран,применяемые на зерновых культурах.

2.2. Реактивы и растворы.

Ацетон,х.ч.,Г0СГ 2603-71.

Бензол,х.ч.,Г0СТ5955-75. н-Гексан.х.ч.,ТУ Ь.49 „3375-78.

Гипс.(кальций сернокислый CaSO^-2 Н^О)* В. течение двух суток прокаливают при 180°С и просеивают через сито 100 меш.

Калий марганцевокислый,ГОСТ 5.I07I-7I.

Кислота соляная,х.ч.,Г0СГ 3118-67.

Кислота соляная,0,1 н раствор.

Кислота фосфорномолибденовая,40^ раствор, ТУ 6-09-3540-74,

Натр едкий,ГОСТ 4328-66, 0,2# раствор.

Натрий сернокислый безводный,ГОСТ 4166-76.

Пластинки '’Сил у фол^м, 150 х 150 мм, Т-4-56068-76 (ЧССР). Силикагель Л (5-40 мк), (ЧССР), о-Толидин,ч.,МРТУ 6-09-6337-69.

Хлороформ,х.ч., ГОСТ 200-15-74.

Этилацетат,х.ч.,ГОСТ 5,1070-71.

Эфир диэтиловый(для наркоза),Фармокопея СССР.

Проявляющий раствор JfrI.K смеси,состоящей из 46 мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной соляной кислоты,прибавляют I г азотистокислого натрия.

Проявляющий раствор &2, 3 г едкого кали растворяют в 50 мл воды, прибавляют 0,5 г <1 -нафтола.

Проявляющий раствор *3. Ijt-ный водный раствор v VI-нафтил-отилендиамина дигидрохлорида.

Стандартный раствор базаграна(концентрация 500 мкг/мл).

2,5 мг базаграна(х.ч.) растворяют в ацетоне в мерной колбе на 50 мл.

2*3. Посуда и приборы.

Баня водяная ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумно-ротационный испаритель ИП-ТУ-25-П-3^-69 или прибор для отгонки растворителя 1-РТУ 25-11-67-67.

Воронка Бюхнера,емк.50-100 мл.

Воронки химические»диаметр 6 см,ГОСТ 86-13-64.

Воронки делительные,емк.100,250,500 мл,ГОСТ 10054-75.

Камера для опрыскивания ТУ-11-*»30-70.

Камера для хроматографирования,размером 150x200, *05x165 мм, ГОСТ 10565-63.

Колбы мерные емкостью 50.100 мл,ГОС? 1770-7*».

Колбы н/ш,емкостью 100,250,500 мл, Г ОСТ 10Э9*»-63.

Колбы круглодожше на,емкостью 150,250 мл,ГОСТ 1039 **-63.

Лампа ртутно-кварцевая, 0КН«*11,ТУ6**-1-16х&-72.

МикропипеткиДЛТГ 1770-7**(для нанесения стандартного раствора).

Насос масляный, ГОСТ 861Э-6**,

Пластинки стеклянные размером 9x12 см.

Пипетки емкостью 1,5,10 мл,ГОСТ 1770-7*».

Прибор для встряхивания М?ТУ 2*»5*-6*».

Цилиндры мерные емкостью 25,50,100,250,500 мл,ГОСТ 1770.7*»,

2»А.Подготовка к определению.

2.*».1. Приготовление пластинок.

Стеклянные пластинки тщательно моют раствором хромовой смеси промывают проточной водой,затем дистиллированной и суват. Взвеаивают 1*1 г силикагеля и I г гипса,растирают в фарфоровой ступке с *Ю мл дистиллированной воды до получения однородной массы.Сорбционную массу равномерно наносят на 5 пластинок,сузат при комнатной температуре 17-20 часов,затем в суаильном акафу 20 мин.при 130-1ч0°С* Плаотинкч "Силуфол" также активируют при той же температуре.

2.5.Проведение определения.

2.5.1. Экстракция.

Зода. 200 мл анализируемой воды помещают в делительную воронку,подкисляют серной кислотой до рН“2;пос/.е чего экстрагируют базагрон тремя порциями этилацетата или диэтилового эфира по 50 мл кгждый раз в течение 3-5 мин.Объединяют экстракты.фильтруют через слой безводного сернокислого натрия.Растворитель упаривают досуха на ротационной испарителе.К охлажденному остатку прилипают 0,05-0,1 ил ацетона и наносят на пластннху.Хроматографируют.

Почва(бедная органическими веществами). 50 г измельченной и просеянной почвы заливают в колбе на 500 мл смесью ацетона и. зо-дн(1:3) в количестве 200 мд и встряхивает в течение часа.После отстаивания жидкость фильтруют через бумажный фильтр.а остаток

155

дважды промывают той не смесью,встряхивая каждый раз со 100 мл в течение 30 мин.Объединенные экстракты подкисляют конц.соляной кислотой до pH^sI-2 и базагран экстрагирует 40 мл хлороформа трижды каждый раз в течение 3-4 кин.Хлороформные экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и уг.еривают досуха.Приливают 0,05-0,1 мл ацетона и наносят на пластинку.Хроматографируют.

Растительный материал.зерно. 20 г измельченного образна экстрагируют ацетоном либо диэтиловым офиром дважды по 40 мл растэорителя в течение 60 мин.Фкльтувт экстракты через плотный бумажный фильтр ка воронке Бюхнера,затем через слой безводного сернокислого натрия.Упаривают досуха.Остаток переносят в колбу, используя 50 мл 25-ного раствора едкого натра.Затем прибавляют конц.солннуо кислоту до р9^а2 и 2,5 кл 405-ной фосфорно-молибденовой кислоты,тщательно перемешивают раствор и через 25-30 мин. фильтруют через плотный бумажный фкльгр на эоренке Бюхнера.

Остаток на фильтре трижды промывают 0,1 н соляной кислотой по 10 мл.Общий фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют трижды хлороформом(либо диэтиловым эфиром) порциями по 50 мл э течение 5 мин.гаждый раз.Экстракт сусат над безводным сернокислым натрием и упаривают досуха.Остаток растворяют в 0.05-0,1 мл ацетона и наносят на пластинку.Хроматографируют.

2.5.2. Хроматографирование.

Экстракты с помощью пипетки наносят на пластинку с тонким слоем силикагеля либо на пластинку "Силуфол".Рядом с пробами наносят 10 и 20 мкл стандартного раствора базагрона( 0500 мкг/мл), что соответствует 5 и 10 мкг пестицида.Хроматографируют в смеси растворителей (см.таблицу).З_иНикают пластинку,сушат на воздухе и помещают в сушильный шкаф,нагретый до Ю0°С,выдерживают 30-40 мин. Извлеченные из шкафа пластинки после охлаждения опрыскивают проявляющим раствором М,затем раствором №2 либо раствором №3. Расход реактивов небольшой.

При наличии баэагрена появляется пятно красного цБета(при использовании р-ра Н*2) лчбо фиолетового цаета( при использовании р-ра №3).

Возможно проявление хроматограмм также следуюцим образок* После хроматографирована и зысусипания пластинку облучают

156

У$-св$тон 20-25 мин.,затем помещают в камеру,насыщенную iiapa-ми хлора.ддя его получения на дно эксикатора наливают 50 мл насыщенного водного раствора марганцевокислого калия и такой же объем концентрированной серной кислоты.Через 10-15 мин. пластинку вынимают,оставляют на воздухе(15 мин.для удаления избытка хлора) и затем опрыскивают насыщенным pacTjOpOM о-толи-дина в этилацетат .Базагрщн проявляется в виде ^иренево-фколето-вых пятен на светлом фонз(^иСилуфол") либо серо-зеленых пятен (слой силикагеля).    *

Таблица.    \

' Значения величин R^, базаграна в тонком слое адсообекта при ' использовании различных растворителей в качестве подвижней > V. фазы.

Адсорбент Подвижная фаза ^ Гексан * ацетон*1:1 Гексан + ецетонс2,:1 ХлорофЪрм + ' ацетон5* 1^:1 Бензол т лцсх.она9:.т ! Силикагель "Л" 0,62 - 0,46 0,34 ъСилуфол" - 0,5* _ 0,6 _ 0,52

2.6. Обработка результатов анализа.

Количественное определение производится путем_s сравнения -площади пятен проб и стандартных растворов.Измерение площади осуществляется с помощь» миллиметровой бумаги.Пропорциональная зависимость между площадь» пятна и концентрацией препарата наблюдается до 10 хкг.Г.ри большем содержания на пластинку ьа-* носят часть раствора.

Содержание базаграна в анализируемой пробе в мг/л либо мг/кг(Х) рассчитывают по формуле:

где к - количество мкр стандартного раствора базаграна, площадь пятна стандартного раствора,

5 2** площадь .пятна пробы, к.ч^    -

Р - вес либо ..объем'.пробы, взятый на анализ в г. либо чд.

I № Щ Ш ■ ^: Ш ■ Ш

2.7,    Требования техники безопасности.

Соблюдать требования техники безопасности,обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями. При работе с кварцевой лампой необходимо пользоваться светозащитными очками.

2.8.    Методические указания подготовлены ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов,полимерных и пластических масс Уииздра-ва СССР Сд.б.н.,проф. М.А.Клисенко, к.х.н.Н.И.Киселевой),

ВНИИЗР (к.с.-х.н. В.С.Шустрое, к.с.-х.н. М.Ф.Зелениной,Э.В.Кулин-цовой,Л.МЛ(острикиной), Белорусским НИИ зацигы растений

(к.б.н. П.М.Кислушко).

158