Федеральная сдужба по напору к сфере защиты нрав ноi ребшедеп и б.laiono.|учпя человека
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Фенотипическая идентификация бактерий рода Corynebacterium
Методические рекомендации МР 4.2.0020—11
ББК51.9
Ф42
Ф42 Фенотипическая идентификация бактерий рода Согупе-bacterium: Методические рекомендации.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011.—55 с.
1. Разработаны НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, г. Санкг-11стербург (Г. Я. I {снопа заслуженный деятель науки РФ. доктор медицинских наук, профессор. Л. А. Красна - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник): Харьковской медицинской академией последипломного обучения (Ж. Н. Манина кандидат медицинских наук, доцент); Институтом экспериментальной и клинической ветеринарной медицины. г. Харьков (О. В. Шаповалова кандидат биологических наук.
С. В. Бирюкова доктор медицинских наук, профессор): Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина кандидат медицинских наук, заместитель начальника управления эпидемиологического надзора).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 11 мая 2011 г.
3. Введены впервые.
ББК51.9
© Роспотребнадзор, 2011 © Федеральный цен тр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011
то-ссрыс. 2 мм и более в диаметре, немного блестят. При окраске по Граму через 24 ч инкубации выглядят как корннебактерин. через 72 ч -как коккобациллы. Артробактерии можно легко спутать с брсвибактсри-ями, т. к. они имеют сходную морфологию колоний и окислительный метаболизм. Однако штаммы Artrobacter могут быть подвижными, в то время как штаммы Brevibacterium всегда неподвижны. Многие штаммы Brevibacterium дают запах сыра, чего нс наблюдается в случае штаммов Artrobacter.
Brevibacterium
Этот род был описан в 1980 г. (Collins ct al.) с В. linens в качестве типового штамма. Некоторые виды Brevibacterium являются представителями нормальной флоры кожи человека и животных. Из 17 видов клинически значимы 7 видов, выделяющиеся при бактериемии, инспекционных процессах различной локализации. Более 90 % клинических изоля-тов Brevibacterium принадлежат к виду В. casei. Содержание G + С пар в ДНК составляет 59—70 mol%.
Эти микроорганизмы имеют кокко-бациллярную морфологию с преобладанием в молодых культурах палочковидных форм. Все они Неположительные, некислотоустойчивые и неподвижные. Строгие аэробы. Не требуют наличия липидов для роста. Некоторые Brevibacterium. в частности В. Linens, после 24 ч культивирования при 30 °С на питательном агаре образу ет колонии, имеющие слабый желтооранжевый пигмент, диаметром около 1 мм. Если на эти колонии воздействовать концентрированной щелочью, появляется красное окрашивание. тогда как при добавлении концентрированной кислоты появляется зелено-голу бой пигмент. Этот признак нс характерен для окрашенных колоний микроорганизмов родов Micrococcus, Mycobacterium или Staphylococcus. В 24-часовых культурах при 37 °С В. casei и В. epidermidis образу ют колонии диаметром около 1 мм, бело-серые, выпу клые и блестящие, но нс проявляют реакций, как В. linens. Оптимальная температура для роста 30—37 °С, но рост возможен и при 40 °С. Представители рода толсрантны к 15% NaCl. каталозоположительные. отрицательные по оксидазс и у реале. нс образу ют кислоту из глюкозы. Виды можно отличить по строению мснахинона и содержанию G + С пар в ДНК.
Dermabacter
В основном это представитель нормальной микрофлоры кожи человека. Однако единственный вид этого рода I), hominis выделялся также при раневой инфекции и бактериемии. Содержание G + С пар в ДНК составляет 60—62 mol%. По многим свойствам вид аналогичен Brevibacterium. но в отличие от последнего является факультативным
анаэробом. Колонии мелкие: от 1 до 1.5 мм через 48 ч инкубации, при микроскопии выглядят как кокковидные палочки.
Roth iа
Из пяти известных видов только два имеют клиническое значение. До сих пор представители этих видов выделялись при бактериемии, эндокардитах. из материала верхних дыхательных путей при респираторных инфекциях. Содержание G + С пар в ДНК составляет 47—56 mol%.
Грамположительные палочки, некислотоустойчивые. Неподвижные. Образуют V-формы, в молодых культурах фнламентированы. Ка-талозоположительные. Факультативные анаэробы. Колонии от шероховатых до гладких, часто их описывают как мягкие, сухие, крошащиеся, слизистые. Морфологически напоминает Actinomyces, но являются аэробами и отличаются по строению клеточной стенки, которая богата лизином и галактозой. Rothia относится к аэробным микроорганизмам, подобным группе Nocardia-Actinomyces, вегетирующим в ротовой полости человека.
Exiguobacterium
Род Exiguobacterium впервые был описан (Collins at al.) в 1983 г. Его представители являются частью нндигенной микробной флоры человека. Из семи видов рода лишь один пока проявил клиническое значение - Е. acetylicum. Эти микроорганизмы были выделены из различных клинических источников (кожа. раны, ликвор). Содержание G + С пар в ДНК составляет около 47 mol%. Exiguobacterium подвижны за счет жгу тиков. Факультативные анаэробы с ферментацией в углеводном метаболизме. Колонии имеют желто-золотистый пигмент, большинство штаммов имеют положительную оксидазную реакцию.
Oerskovia
Среди инфекций, вызываемых Oerskovia, известны менингит, эн-дофгальмит. инфекция искусственного сустава, бактериемия, гангренозный холецистит, перитонит, пионефроз, инфекции мягких тканей. Содержание G + С пар в ДНК составляет 70—75 ию1%.
Микроорганизмы рода Oerskovia принадлежат к нокардиоформным бактериям. Термин определяется нс близкими филогенетическими взаимоотношениями между определенными родами, а определенными общими чертами, такими как грамположительность и образование временной мицеллы, которая затем разрывается с образованием палочковидных или кокковидных бактерий. Мицелла Oerskovia представляет собой субстрат со значительным ветвлением, который разрывается с образованием палочковидных подвижных или неподвижных элементов.
Штаммы являются некислотоустойчивыми, каталазопозитивными, ферментирующими, большинство из них пигментированы в желтый цвет. Колонии имеют диаметр 1—2 мм через 24 ч инкубации.
Cellulomonas
Эти микроорганизмы встречаются в окружающей среде и лишь 2 вида из 13 были выделены от людей при раневой инфекции и бактериемии: С. hominis и С. denverensis. Содержание G + С пар в ДНК составляет 71—76 ию1%.
Колонии кремовой окраски диаметром 0.5—1.5 мм после 24 ч инкубации. Указанные медицински значимые виды различаются между собой по ферментации сорбитола.
Cellulosimicrobium
Из трех видов рода два вида имеют в настоящее время клиническое значение: C.funkei и С. cellulans (в прошлом Cellulomonas cellulans и Oerskovia xanthineolytica). Оба выделялись от больных с инфекционными процессами различной локализации и при бактериемии. Содержание G + С пар в ДНК составляет 74 mol%.
Колонии микроорганизмов похожи на колонии Oerskovia. так же как сходны они и по биохимическим характеристикам. Отличительным признаком может слу жить отношение ко ксантину.
Microbacterium
Этот род известен с 1990-х годов и в настоящее время насчитывает 35 видов, широко распространенных в природе, в т. ч. в почве. Но только некоторые из них в настоящее время имеют клиническое значение: Л/, oxydans, А/, paraoxydans, Л/, аигит. Л/, lacticum. Чаще всего они выделялись от больных с раневыми инфекциями, бактериемией, инфекционными процессами различной локализации. Содержание G + С пар в ДНК составляет около 75 mol%.
Для колоний Microbacterium харктерно наличие пигмента от светло-желтого до оранжевого. Под микроскопом выглядят как короткие палочки без ветвлений. Характерной особенностью микроорганизмов является вариабельная чувствительность их к антибактериальным препаратам. Поэтому при выделении микроорганизма из клинического материала необходима постановка теста на чувствительность к антибиотикам каждого выделенного штамма.
С'urtobacterium
Эти микроорганизмы выделялись из клинического материала при инфекционных процессах различной локализации. Содержание G + С пар в ДНК составляет 68—75 пю1%.
Колонии микроорганизмов имеют ярко выраженный желтый или желто-оранжевый пигмент. Под микроскопом выглядят как маленькие короткие палочки без ветвлений. Продукция кислот из сахаров очень замедленная (до 7 дней). Дифференциация этих микроорганизмов затруднена, поэтом) возможна в полной мере лишь в условиях рсфсрснс-лабораторий.
Leifson in
Единственный клинически значимый в настоящее время вид рода L. aquatica в прошлом относился к род) Corynebacterium. Выделяется из клинического материала при различных инфекционных процессах. Содержание G + С пар в ДНК составляет около 70 пю1%.
Колонии микроорганизмов через 3—4 дня инкубации приобретают желтый пигмент. Под микроскопом имеют вид тонких палочек. Для некоторых штаммов характерно повышение МИК антибиотиков пенициллинового ряда, однако механизм развития такой устойчивости пока не выяснен.
A rcanobacterium
Из шести известных до настоящего времени видов три являются клинически значимыми: A. haemolyticum, A. bernardiae, A. pyogenes. Их выделяли при хронических кожных поражениях, септицемиях, абсцессах головного мозга, остеомиелитах, раневых инфекциях, хронических тонзиллитах. Резервуар возбудителя - больной человек. Основной путь передачи - воздушно-капельный. У части пациентов с тонзиллитом наблюдают беловатые бляшки на миндалинах, у большинства - двустороннее увеличение шейных и подчелюстных лимфоузлов. Респираторные заболевания, вызванные Arcanobacterium haemolyticum. обычно сопровождаются сыпью. Содержание G + C пар в ДНК составляет 48— 52 шо1%.
Колонии микроорганизмов 0.5—1.5 мм в диаметре. Факультативные анаэробы. Рост обычно скудный, но усиливается на кровяных средах и в присутствии СО:. На агаре с кровью лошади в 48 ч культурах наблюдается узкая зона Р-гемолиза. На агаре с кровью барана через 24— 48 ч образуют мелкие 0,1—0,5 мм в диаметре колонии, окруженные зоной р-гемолиза. На агаре с кровью кролика колонии дают несколько большие колонии и зоны гемолиза. Каталозоотрицательные. При микроскопии выглядят как неравномерно тонкие палочки, иногда V-формы. в старых культурах приобретают кокковидную форм)’. Грамположитель-ныс. нс кислотоустойчивые, неподвижные.
GardnereUa
Единственный вид этого рода G. vaginalis встречается в половых путях человека. Вызывает нсспсцнфичсскис уретриты, вагиниты, ваги-
нозы. эндометриты, послеродовый сепсис. Основной диагностический признак заболевания - обнаружение в мазках отделяемого мочеполовых органов «ключевых» клеток, обильной кокко-бациллярной флоры при уменьшении или полном отсутствии лактобактерий. Описаны также случаи менингитов, вызванных G. vaginalis, у новорожденных. Содержание G + С пар в ДНК составляет 42—44 mol%.
G. vaginalis образуют мелкие колонии 0.5—1.0 мм в диаметре. При микроскопии выглядят как грамвариабельные полиморфные палочки или коккобациллы, встречаются полисады и клетки, лежащие под острым углом (подобно Corynebacterium). Неподвижны, аспорогснныс. При окраске по Нсйсссру нередко обнаруживаются внутриклеточные мс-тахроматичсскис гранулы. Факультативные анаэробы. Хсмоорганотро-фы. Исключительно требовательны к составу питательных сред, но при этом не нуждаются в факторах роста (X и Y). Каталазо- и оксидазоотри-цательные. Оптимальная температура для роста 35—37 °С. Способны гемолизировать эритроциты человека (от а- до (5-гемолиза). но не обладают гемолитической активностью в отношении эритроцитов лошади и барана. Нуждаются в адснинс и витаминах группы В (тиамине, рибофлавине. фолиевой и никотиновой кислоте, биотине). Рост на шоколадном агаре улучшается в присутствии СО:. Жизнеспособность культур G. vaginalis низкая. На твердых средах они погибают через 24 ч. в полу жидких средах живут 7 и более дней. Ферментируют глюкозу, мальтозу, крахмал, гликоген, декстрин. Не сбраживают лактозу, манит, раффинозу. Нитраты не восстанавливают. Протеолитическая активность слабо выражена.
3.2. Биологические особенности и роль отдельных видов коринебактерии в патологии человека и животных
Правильная постановка диагноза и начало эффективной терапии любого инфекционного заболевания в значительной степени зависят от тесного взаимодействия клинициста и лабораторной службы. Но на пути этого взаимодействия немало трудностей и наиболее частой является неправильная интерпретация результатов, полученных из микробиологической лаборатории. Главный вопрос, который встает перед врачами-клиницнетами при получении ответа из лаборатории. - является ли данный микроорганизм инфекционным агентом или имеет место банальная микробная колонизация.
Большинство коринебактерий колонизируют различные отделы организма человека и животных без выраженных клинических реакций и иммунного ответа, т. е. являются комменсалами (табл. 2). Они находятся в благоприятном для них взаимодействии с организмом хозяина и не
наносят ему никакого вреда. Кроме того, известно, что некоторые кори-небактерии способны оказывать благоприятное влияние на организм в результате своей жизнедеятельности. Так. колонизируя умерший пласт клеток поверхностного эпителия кожи, коринебактсрин перерабатывают вредные вещества, питаясь продуктами биохимического распада.
Таблица 2
Вы.к‘.mine нсдифтсрийных KopiiiicoaK'icpiiii с различных анатомических участков тела человека (В. П. Строганов, 1999) |
Участок тела |
Встречаемость коринебактерий, % |
Кожа |
55 |
11ос и носоглотка |
5—80 |
1 органь |
50—90 |
Толстый кишечник |
|
Тонкий кишечник |
0,5—1,0 |
Влагалище и шейка матки |
45—75 |
|
В настоящее время наблюдается большой приток информации в виде научных публикаций в микробиологических журналах об этиологической значимости ранее считавшихся непатогеннымн видов коринс-бактсрий или коринсформных родов и их некоторых видов. Для повышения достоверности выдаваемых микробиологом результатов необходимо следовать в работе следующим рекомендациям: соблюдать все правила отбора, доставки и посева исследуемого клинического материала. идентифицировать до вида выделенный микроорганизм, считать этиологически значимым для нестерильных полостей организма количество микроорганизмов 1 х 10 , если они выделяются в монокультуре, и 1 х Ю5, если микроорганизмов несколько видов и другие микроорганизмы обладают более низкой патогенностью, чем выделенные коринсфор-мы или коринсбактсрии. если отмечается лейкоцитарная реакция организма. Клинические проявления заболеваний, этиологическим агентом которых являются нсдифтсрийныс коринсбактсрии. отличаются большим разнообразием (табл. 3). Ниже приводятся сведения о роли отдельных видов рода Corynebacterium в патологии человека и животных.
С. diphtheritic
Типовой вид рода. С. diphtheriae чаще всего вызывают классическую дифтерию верхних дыхательных путей, заболевание, сопровождающееся тяжелой интоксикацией. В 1884 г. Леффлер нс только установил этиологическую роль этого возбудителя, но и доказал возможность бактерионосительства без клинических симптомов. Микроорганизм может вызывать также дифтерию редкой локализации: раны. кожи, глаза, уха.
MP 4.2.0020—11
Содержание
Введение......................................................................................................................4
1.11ока jaiuiM и противопоказания к применению метода.......................................6
2. Материально-техническое обеспечение метода...................................................6
3. Описание метода.....................................................................................................8
3.1. Микробиологическая характеристика коринеформных бактерий..............8
3.2. Биологические особенности и роль отдельных видов коринебакте-
рий в патологии человека и животных........................................................15
3.3. Ход лабораторного исследования биологического материала при
идентификации недифтерийных коринебакторий.....................................30
3.4. Дифференциальная диагностика коринебактерий от других палочковидных грамположительных бак-торий...................................................31
4. Приложения...........................................................................................................38
4.1. Питательные среда для культивирования и идентификации кори-
небактерий.....................................................................................................38
4.2. Контроль качества питательных сред, референс-штаммы
Corynebacterium, хранение музейных культур...........................................55
Список литературы...................................................................................................56
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|)срс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
11 мая 2011 г.
Дата введения: с момента утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Фенотипическая идентификация бактерий рода Corynebacterium
Методические рекомендации МР 4.2.0020—И
Введение
В методических рекомендациях представлены современные сведения о таксономии, биологических особенностях и роли корннебактерий в патологии человека и животных. Основное внимание уделяется методам фенотипической идентификации и дифференциальной диагностики представителей рода Corynebacterium от других неположительных палочковидных бактерий, в т. ч. С. diphtheriae. имеющих клиническое значение. Приведенные адаптированные диагностические таблицы и методики приготовления необходимых питательных сред и реагентов рекомендуются для практического применения в лабораториях клинической и ветеринарной микробиологии.
Коринсбактсрии часто встречаются во внешней среде и обычно колонизируют кожу и слизистые оболочки человека и животных, являясь представителями микроценозов данных биотопов. Роль этих микроорганизмов в развитии заболеваний человека и животных установлена недавно. В зависимости от биологических особенностей разные виды ко-ринсбактсрий способны поражать кожу и внутренние органы, особенно у пожилых людей, пациентов с иммуносупрессией или мультиорганной патологией. В случаях инфицирования венозных или брюшных катетеров. нейрохирургических шунтов наблюдается бактериемия. Многие представители корннебактерий становятся причиной эндокардитов.
пневмоний, септического артрита и остеомиелита, инфекций при протежировании. заболеваний мочеполовой системы. В связи с этим в клинической практике необходима точная идентификация бактерий данной группы, что позволит правильно и своевременно выбрать этиотропную терапию. Однако в настоящее время фенотипическая идентификация большинства видов коринсбактсрий затруднена из-за отсутствия информативных диагностических схем и таблиц, а также из-за дефицита оперативных сведений о роли их в патологии человека и животных.
Определяющий вклад в успешну ю идентификацию коринсбактсрий внесли автоматизированные и полуавтоматизированные системы, методы родовой и видовой идентификации на основе анализа 16S рРНК. К сожалению. использование сложных и дорогостоящих хсмотаксономичсских исследований, проведение молекулярно-генетического анализа доступно малому числу лабораторий. В практической работе в основном применяются традиционные, общепринятые, «пробирочные» тесты. Кроме того, эти тесты незаменимы, когда идет проверка диагностической эффективности новых тест-систем. В этих слу чаях рутинные тесты, как «золотой стандарт», помогают решать многие спорные вопросы нетрадиционных методов идентификации возбудителей инфекционных заболеваний.
В настоящее время род Corvnebacterium насчитывает 40 медицински значимых видов (и две таксонные группы). Традиционно основой их идентификации и дифференциации является метаболический профиль. Выявление фенотипических особенностей коринсбактсрий проводится на основе определения наличия или отсутствия са.харолитнчсскн.х энзимов и других ферментных систем. Однако вследствие морфологических и биохимических особенностей коринсбактсрий их идентификация нередко затруднена. Для получения достоверных сведений о характеристике вида становится необходимым использование наиболее информативных биохимических тестов и качественных питательных сред.
В рекомендациях представлены сведения о наиболее значимых видах коринсформных грамположитсльных палочек и их роли в патологии человека и животных. Помимо прописей питательных сред и необходимых комментариев по их использованию, приводятся оптимальные схемы их биохимической идентификации с минимальным и наиболее ин-(|юрмативным набором тестов. Многие из этих методов характеризуются достаточно высокой воспроизводимостью, точностью, быстротой выполнения и приемлемой стоимостью.
В методических рекомендациях обобщены данные литературы, собственный опыт работы и опыт практических бактериологических лабораторий по морфологической и биохимической идентификации микроорганизмов рода Corvnebacterium.
1. Показания и противопоказания к применению метода
Дифференцирование коринебактерий следует проводить в соответствии с приведенным ниже перечнем биохимических признаков во избежание гипо- и гипердиагностики заболеваний, которые они вызывают. Противопоказаний нет.
2. Материально-техническое обеспечение метода Оборудование
Весы лабораторные общего назначения 2-го
класса точности |
ГОСТ 24104—80Е |
Весы лабораторные 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 1 ООО г |
ГОСТ 24104 |
Ионометр универсальный ЭВ-74 или потенциометр pH-340 |
ГОСТ 9245-79 |
ОБМ-150 или других марок |
ТУ 16-535—84 |
Термостат, позволяющий поддерживать температуру 15—65 °С с отклонением от заданной 1 °С |
ТУ 64-1-1382—72 |
Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80П или других марок, позволяющий поддерживать температу ру (160 ± 5) °С |
ТУ 64-1-9009—74 |
Холодильник электрический бытовой |
ГОСТ 16317 |
Микроскоп световой биологический с увеличением 900—1 ООО |
ГОСТ 8284 |
Автоклав вертикальный |
ГОСТ 9586 |
Лупа с увеличением 5—10 х |
ГОСТ 8309 |
Термометр (рту тный) с диапазоном измерения от Одо 100 °С |
ГОСТ 28498-90 |
Материалы
Стекла предметные |
ГОСТ 9284 |
Стекла предметные для микроскопов |
ГОСТ 6672-75 |
Стекла покровные. 2 уп. |
ГОСТ 6672 |
Пинцет медицинский |
ГОСТ 212241 |
Скальпель медицинский |
ГОСТ 21240 |
Ножницы медицинские |
ГОСТ 21239 |
Часы песочные на 1. 2 и 5 мин |
ГОСТ 10576 |
Чашки Петри |
ГОСТ 25336 |
Спиртовки СЛ-1 |
ГОСТ 25336 |
Ступки фарфоровые с пестиком |
ГОСТ 9147 |
Пробирки стеклянные бактериологические П2-10-90 ХС: ПЗ-5ХС |
ГОСТ 25336 |
Пробирки для микропроб однократного применения (пробирки Эппсндорфа) Пипетки 7-1-1: 7-1-2: 7-1-5: 7-1-10: 8-2-0.1 |
ТУ 64-2-300—80 ГОСТ 20292 |
|
Пипетки исполнения 5. 1-го. 2-го классов точности ГОСТ 29227-91 Стаканы В-1-250 ТС: Н-2-100 ТХС ГОСТ 25336 |
|
Натрий фосфорно-кислый одно замещенный. чда ГОСТ 245 Натрий фосфорно-кислый дву замещенный |
3. Описание метода
3.1. Микробиологическая характеристика коринеформных бактерий
Коринсформныс бактерии - плеоморфные палочковидные грампо-ложительные микроорганизмы, относящиеся к классу Actinobacteria, объединенные по 16S рРНК. Проведенные хемотаксономичсскис исследования позволили найти общие черты среди коринеформных бактерий в целом, а также дифференцировать между собой отдельных их представителей. Многие из них представляют интерес для медицины и ветеринарии. Термин «коринсформныс» связан с плеоморфной палочковидной формой этих грамположитсльных бактерий. Термин «дифтсроиды» в последнее время не употребляется, т. к. большинство видов нс имеют сходства с Corynebacterium diphtheriae - основным патогенным микроорганизмом группы.
По типу дыхания одни из них - облигатные аэробы, другие - факультативные анаэробы либо строгие анаэробы со своими морфологиче-скими особенностями и различной каталазной активностью, в отдельных случаях обладающие подвижностью. Всех их отличает отсутствие эндоспор.
Обычно наличие плеоморфных нсспорообразующнх грамположн-тсльных палочек с характерным расположением в виде V-форм и палисада обусловливает отнесение к группе. Следует также отметить, что некоторые виды в жизненном цикле имеют фазы палочки-кокки с преобладанием палочек в молодых культурах. Некоторые виды очень плохо растут на средах без липидов, а на средах с 0.5—1.0% Твин-80 растут хорошо, в 1—2 дневных культурах формируют колонии диаметром 1 мм. Такие штаммы называют «липофильными».
Представители группы - преимущественно облигатные представители слизистых оболочек и кожных покровов млекопитающих, но иногда обнаруживаются и в других источниках. В настоящее время коринс-(1юрмныс бактерии включают 19 родов на основе хемотаксономических признаков. По мере накопления знаний таксономическое положение многих видов пересматривается.
Среди представителей коринеформных бактерий имеются клинически значимые роды или виды отдельных родов (Corynebacterium. Turicel/a, Arthrohacter. Bre\>ibacterium, Dermahacter. Roth ia.
Exiguobacterium. Oerskovia, Cellulomonas, Cellulosim icrob i um,
Microbacterium, Curtobacterium. Leifsonia, Arcanobacterium. Gardnerella) (табл. 1).
Таблица 1
Идентификации медицински значимых коринсформнмх бактерии |
Таксон |
Ка
та
лаза |
Фер-
мен-
ПЩИЯ
окис
ление |
Пит
рат-
ре-
дук-
iaia |
У ре-
аза |
Гид-релиз >с кули на |
Образование кислоты из |
Другие
свойства |
глю
ко
зы |
\tair
то
зы |
сача-
харо
ро
зы |
ма-
ни-
юла |
кси
ло
зы |
Turicella
otitidis |
|
С) |
|
|
|
|
|
|
|
|
СЛМР-тест
длинные
палочки |
Arthrobacter
spp. |
|
о |
V |
V |
V |
V |
V |
V |
- |
- |
|
Brevibacterium
spp. |
+ |
С) |
V |
— |
— |
V |
V |
V |
- |
- |
Запах сыра |
Dermabacter
hominis |
|
Ф |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
|
- |
V |
Маленькие
палочки |
Rothia
dentocariosa |
V |
Ф |
|
|
+ |
|
+ |
|
|
|
Могут дава!ь серочерный пигмент |
l:\igiiohacteriii
m acetylicum |
|
Ф |
V |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
Золотисто желтый пигмент |
Oerskovia
turhata |
|
Ф |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
11е гидролизуют ксантин |
C ellulomonas spp. |
+ |
Ф |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
V |
+ |
|
( elliiiosiniicro hi inn spp. |
+ |
Ф |
V |
V |
+ |
|
+ |
|
— |
|
I идролизуют ксашин |
\ (icmhacteriu in spp. |
V |
Ф/О |
V |
V |
V |
+ |
+ |
V |
V |
V |
|
( 'urtohacteiru m spp. |
+ |
О |
— |
— |
+ |
+ |
V |
V |
V |
+ |
|
Lei/sonia
aquatic |
|
о |
V |
- |
V |
|
V |
V |
+ |
|
|
. Ircanobacleri uni
haeiiiolyticuni |
|
ф |
|
|
|
|
+ |
V |
|
|
Ингибирование СЛМР-теста |
[rcanohacteri uin pyogenes |
- |
ф |
- |
— |
V |
+ |
V |
V |
V |
+ |
|
Ircanobacleri-iihi hemardiae |
- |
ф |
- |
— |
- |
|
|
— |
- |
— |
Крахмал-
позитивные |
Gardnerella
vaginalis |
|
ф |
|
|
|
+ |
+ |
V- |
|
|
Потеря цвета при окраске по Г раму |
|
- позитивная реакция. — негативная реакция; V - вариабельная реакция; О - окисление. Ф - ферментация. |
Роль представителей других родов и видов нс всегда ассоциируется с заболеваниями человека и животных. Они являются представителями нормофлоры кожи и слизистых оболочек, а также обнаруживаются в пищевых продуктах и окружающей среде.
В настоящее время коринсформныс бактерии делят на роды на основе особенностей строения клеточной стенки и содержания G + С пар в ДНК. Ниже приведена краткая характеристика клинически значимых родов коринсформных бактерий.
С orynebacterium
Род был описан в 1896 г. Lehmann и Neumann, к нему относятся возбудитель дифтерии и другие морфологически подобные родственные микроорганизмы в количестве 67 видов (и двух таксонных групп), из которых 40 видов (и две таксонныс группы) имеют медицинское значение. Это в основном палочки от прямых до слегка изогнутых с неравномерно окрашивающимися частями цитоплазмы, часто имеющие метахроматиче-скис гранулы. В мазках, как правило, одиночные или в парах, часто V-образной конфигурации, либо в стопках из нескольких параллельно лежащих клеток. К такому угловому и палисадному расположению клеток приводит «щелкающее» (snapping) деление. Обычно неподвижные, гра.мположнтсльныс. нскислоустойчнвыс. каталазоположитсльныс.
Клеточная стенка содержит мсзо-диамино-пимслиновую кислоту и короткоцепочечные миколовыс кислоты с 22 и 36 атомами углерода, ара-бинозу и галактозу. Пальмитиновая, олеиновая и стеариновая кислоты являются основными клеточными жирными кислотами у всех коринсбак-тсрий. Содержание G + С пар в ДНК колеблется от 46 до 74 ию1%.
Углеводный метаболизм смешанный - бродильный и дыхательный. Не образуют растворимых гемолизинов, но на твердых питательных средах. содержащих кровь морской свинки или барана, возможен краевой гемолиз. Некоторые виды образуют экзотоксин.
Turicella
Эти коринс(|юрмныс бактерии чаще всего выделяются от больных со средним отитом. Фенотипически они напоминают коринсбактсрнн. но более длинные. Содержание G + С пар в ДНК составляет 65—72 пю1%. Все штаммы проявляют резко полож»ггельную реакцию в САМР-тесте. Колонии выпуклые, кремового цвета, с ровным краем, диаметром 1— 1.5 мм через 48 ч инку бации.
Arthrobacter
Штаммы Artrobacter широко распространены в окружающей среде и выделяются из клинического материала от людей при бактериемии, различных инфекционных процессах, особенно мочевого тракта человека. Содержание G + С пар в ДНК составляет 59—70 niol%. Колонии бслова-