Федеральная служба но напору в сфере защиты нрав потребителей и благополучия человека

4.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологический анализ парфюмерно-косметической продукции экспресс-методом биолюминесценции

Методические рекомендации МР 4.2.0015—10

ББК 51.204.1 М59

М59 Микробиологический анализ парфюмерно-косметической продукции экспресс-методом биолюминесценции: Методические рекомендации.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2010.—23 с.

1.    Разработаны: ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Санкт-Петербурге» (Т. А. Гречанинова. И. С. Григорьева. Г. М. Иванова.

В. Л. Свирщевекая. В. В. Иванова): Научно-исследовательским институтом медицины труда РАМН(Н. И. Измерова, Н. К. Просветова).

2.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 1.12.2010.

3.    Введены в действие с момента утверждения.

4.    Введены впервые.

ББК 51.204.1

< Роспотребнадзор, 2010 <’ Федеральный центр гигиены н эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010

MP 4.2.0015—10

5.2.    Реагенты

5.2.1.    Набор реагентов UNI-1 + kit на 1 ООО тестов.

Хранение при температуре 0—1 °С.

Каждый набор включает: 6 фл. х 18.8 бнолюминссцентного реагента (Luminc EX)

6 фл. х АТФ высвобождающего реагента (Lumine АТЕ)

6 фл. х 12 мл восстанавливающего буфера (Lumen ATE buffer)

1 фл. х АТФ стандарт (ATP standards)

1 фл. х 15 мл АТФ буфер (ATP buffers)

5.2.2.    Набор реагентов Daily Wash & Rinse kit для ежедневной промывки и ополаскивания люмннометра.

Каждый набор включает: 14 фл. х Раствор для промывки инжекторов 14 фл. х Раствор для ополаскивания инжекторов

5.2.3.    Набор реагентов Monthly Maintenance & Cleaning kit для ежемесячного ухода и очистки люмннометра.

Каждый набор включает:

6 фл. х 12 мл реагент 1 (Reagent 1) - водный раствор для очистки инжекторов

6 фл. х 22 мл реагент 2 (Reagent 2) - водный раствор для дезинфекции инжекторов

6 фл. х 22 мл реагент 3 (Reagent 3) - водный раствор хтя промывки инжекторов.

5.3.    Приборы

5.3.1.    Люминомстр.

5.3.2.    Комьпютср с операционной системой Windows ХР.

5.3.2.    Весы электронные по 1 классу точности, дискретность отсчета

0.001 г.

5.3.3.    Шейкер инкубатор 28 °С. 150—200 об./мин.

5.3.4.    Автоклав.

5.3.5.    Вихревой миксер.

5.3.6.    Автоматический дозатор 100 мкл (0.1 мл).

5.3.7.    Криоблок PL 155. металлический штатив для хранения криовиал. нагруженных культу рой микроорганизмов в замороженном состоянии.

5.-/. Расходные материалы

5.4.1.    Контейнеры пластиковые стерильные одноразовые с завинчивающейся крышкой 30 или 150 мл.

5.4.2.    Пипетки пластиковые стерильные одноразовые в индивидуальной упаковке 1 и 10 мл.

11

MP 4.2.0015—10

5.4.3.    Петли пластиковые стерильные одноразовые 1 мкл.

5.4.4.    Наконечники для дозатора Fintip стерильные, упаковка: 10 штативов по 96 штук.

5.4.5.    Кюветы для люминомстра пластиковые Advance Cuvettes.

5.4.6.    Microbank PL 160

- набор криовиал с цветными бусинами для хранения культуры Staphyloccocus cpidcrmidis и Saccharomyccs ccrcvisiac.

5.4.7.    Петли CULTI-LOOPS. нагруженные лиофили тированной культурой St.cpidcnnidis и Saccharomyces ccrcvisiac.

5.5. Приготовление стерильного нейтрали чующего бульона и стерильной дистиллированной воды

5.5.1. Приготовление стерильного нейтрализующего бульона

5.5.1.1.    Отвесить дегидратированную сухую среду как указано в инструкции производителя.

5.5.1.2.    Тщательно перемешать с требуемым количеством дистиллированной воды.

5.5.1.3.    Нагревать до полного растворения порошка в воде.

5.5.1.4.    Как только порошок полностью растворится, снять с плитки и осту дить. Ра злить в стерильные колбы с завинчивающейся крышкой.

5.5.1.5.    Маркировать колбы, указав название бульона, дату приготовления и срок годности.

5.5.1.6.    Автоклавировать в течение 15 минут при температу ре 121 °С. При каждом цикле стерилизации проводить контроль температуры и времени с помощью индикаторов стерилизации (полосок или химических).

5.5.1.7.    Стерильный бульон может храниться при комнатной температуре в сухом месте в течение 3-х месяцев. По истечении этого срока остатки бульона следует утилизировать.

5.5.2. Подготовка стерильной дистиллированной воды

5.5.2.1.    Стерильные колбы с дистиллированной водой (250 мл) маркировать. ука зав дату стерили зации и поместить в автоклав для стерилизации в течение 15 минут при температу ре 121 °С. При каждом цикле стерилизации проводить контроль температуры и времени с помощью индикаторов стерилизации (полосок или химических).

5.5.2.2.    Стерильная дистиллированная вода может храниться при комнатной температуре в сухом месте в течение 3-х месяцев. По истечении этого срока остатки воды следует утилизировать.

MP 4.2.0015—10

5.6. Подготовка крчобусины для положительного контроля

5.6.1.    Для подготовки свежей культуры (18—24 ч) Staphylococcus cpidcnnidis иди Saccharomyccs ccrcvisiac используются петли CULTI-LOOPS (п. 5.4.7). нагруженные стабилизированными жизнеспособными микроорганизмами.

К работе с использованием петель должен допускаться обученный в соответствии с инструкцией поставщика персонал.

Удалив упаковку и наконечник с петли, поместить ее в пробирку с жидкой средой, используя для этой цели:

а) Триптонсоя бульон (TryptoncSoya Broth) (п. 5.1.3) для петель, нагруженных культурой Staphylococcus cpidcnnidis:

б)    Стерильный солевой раствор для петель, нагруженных культурой Saccharomyccs ccrcvisiac.

Культуры Staphylococcus cpidcnnidis и Saccharomyccs cerevisiae выращивают в жидкой среде в условиях инкубирования при температуре 37 °С до полного растворения пленки, покрывающей петлю и образования взвеси микроорганизмов.

Используя стерильную пастеровскую петлю, пересевают культуру по поверхности хорошо подсушенной среды штрихами хтя получения изолированных колоний.

Инкубируют чашки с посевами при 30 °С в течение 24—18 часов.

5.6.2.    Дтя хранения чистой культуры Staphylococcus cpidcnnidis или Saccharomyccs cerevisiae используются криовиалы. содержащие 25 цветных бусин и криоконсервант (п. 5.4.6). Бусины имеют пористую структуру. что позволяет микроорганизмам задерживаться на их поверхности.

5.6.3.    В стерильных условиях изолированные колонии микроорганизмов с чашки Петри (п. 5.6.1) пересевают в криовиалу с криоконсервантом до достижения 3—4 McFarland стандарта.

Тщательно завинчивают крышку криовиалы и вращают се 4—5 раз хтя распределения культуры микроорганизмов. Избыточное количество криоконсерванта удаляют из криовиалы.

Плотно закрытую криовиалу с культурой устанавливают в крио-блок (п. 5.3.7) и хранят при температуре на выше -32 °С в морозильной камере.

5.6.4.    Перед подготовкой положительного контроля (п. 3.2.2.2). криовиалу с культурой микроорганизмов выдерживают несколько минут при комнатной температуре, оставляя криоблок в морозильной камере. После перемещения одной бусины из криовиалы в контейнер с летино-вым бульоном, криовиалу устанавливают в криоблок и хранят хтя последующих тестов.

13

Приложение 1

Метол определения пригодности пробы ютовою продукта для микробиологического ана.ппа с использованием биолюминисценцнн АТФ (Sample Effect Method)

Эта методика может использоваться для подтверждения пригодности готовых продуктов для микробиологического анализа с использованием систем биолюминнсценции АТФ и для определения степени разведения. при которой следует проводить анализ проб. Методика также может применяться для определения пригодности сырья для проведения микробиологического анализа с использованием систем биолюминис-ценции АТФ.

Нс все виды сырья и готовых продуктов пригодны для тестирования с использованием биолюминнсценции АТФ: в некоторых может содержаться повышенное количество природного АТФ (т. е. в продуктах. содержащих натуральные экстракты, например, алоэ вера), что может привести к получению «ложно-положительных» результатов. Другие материалы, такие как сложные полимеры, могу т ингибировать реакцию биолюминнсценции в системе АТФ. что может привести к полу чению «ложно-отрицательных» резу льтатов. Поэтому важно знать, является ли сырье или продукт пригодным для тестирования с помощью микробиологического анализа с использованием систем биолюминнсценции АТФ. а также знать необходимую степень разведения.

1.    ПРИНЦИП

Выбранная проба приготавливается в соответствующей нейтрализующей среде при разведении 1 : 10; затем приготавливаются два следующих разведения (1 : 100 и 1 : 1 ООО). Двойные аликвоты (100 мкл) всех разведений помещают в кюветы люминомстра + 10 мкл стандарта АТФ. Затем проводят измерения всех проб и соответствующих контро-лей на люминометре с использованием стандартного набора Unil+; полученные результаты сравнивают с контролямн. используя таблицу Microsoft excel, которая автоматически определяет возможность проведения тестирования АТФ для каждого разведения индивидуальных проб.

2.    РЕАКЦИИ

АТФ + 0,+ЛЮЦИФКРИИ<=>ЛМФ + С0₂+ OKC1L1КЩНФКРИН+ ПИРОФОСФАТ + СВЕТ

Высвобождающий АТФ агент (LuininEX) вводится в каждую пробу и облетает экстракцию АТФ из клеток. Количество имеющегося АТФ затем измеряется с использованием каталитической реакции, запускас-

14

MP 4.2.0015—10

мой комплексом люциферин/люцифераза (LuminATE). Сила света, излучаемого в каждой пробе, выражается в относительных единицах силы света (RLU) и используется для определения наличия/отсутствия бактериального загрязнения пробы.

3. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРОБ

3.1.    Перед взятием проб тщательно перемешайте тестируемый материал (готовый продукт или сырье), а перед взятием проб зубной пасты первую порцию продукта, выдавленную из тюбика, выбросьте.

3.1.1.    Соблюдая стерильность, взвесьте 1.0 г (±0.05 г) пробы и поместите в стерильный контейнер.

3.1.2.    Соблюдая стерильность, добавьте к пробе 9 мл нейтрализующего бульона и тщательно перемешайте: это будет разведение 1:10 или -1. Приготовьте последовательные разведения следующим образом: соблюдая стерильность, перенесите 1 мл разведения -1 в 9 мл нейтрализующего бульона, это будет разведение 1 : 100 или -2. тщательно перемешайте и. соблюдая стерильность, перенесите 1 мл разведения -2 в 9 мл нейтрализующего бульона, это будет разведение 1 : 1000 или -3.

3.1.3.    Укажите на каждом контейнере необходимые сведения о пробе.

3.2. Подготовка люминометра к работе

3.2.1.    Люминометр следует подготовить к работе в соответствии со специальными инструкциями производителя. Каждый инжектор люми-нометра, который предполагается использовать при тестировании, следует вымыть и ополоснуть с помощью набора хля ежедневного мытья и ополаскивания компании-производителя люминомстра перед заправкой реактивами из набора Uni 1+.

3.2.2.    После начальной заправки реактивами следует провести измерения для получения серии «ежедневных контролей» (т. е. значений хля пу стых кювет, чистого реактива и АТФ-контроля). чтобы у бедиться в нормальной работе люминомстра и реактивов. После того как эти проверки будут проведены, и оператор убедится, что все системы работают нормально, можно проводить анализ проб.

3.2.3.    Для каждой тестируемой пробы необходимо в сумме 12 кювет. как указано ниже

10 (-1) разведение пробы в бульоне

10 (-1) разведение пробы в бульоне + 10 мкл АТФ

100 (-2) разведение пробы в бульоне

100 (-2) разведение пробы в бульоне + 10 мкл АТФ

1000 (-3) разведение пробы в бульоне

1000 (-3) разведение пробы в бульоне + 10 мкл АТФ

15

Кроме того, для каждого измерения необходимо: 2 х 100 мкл контроля для бульона 2 х 100 мкл контроля для бульона + 10 мкл АТФ 1 х 50 мкл стандарта АТФ 1 положительный контроль

NB: Для каждой пробы СЛЕДУЕТ использовать чистые и стерильные наконечники пипеток. Рекомендуется располагать кюветы в соот-ветствующем держателе в логическом порядке (рис. 1)._

Содержание

I. Область применения............................................................................................4

Н. Общие положения................................................................................................4

III. Метод отбора и подготовки проб для микробиологического анализа.............5

IV.    Метод анализа.......................................................................................................8

V.    Аппаратура, реагенты, питательные среды, расходные материалы...............10

Приложение. Метод определения пригодности пробы готового продукта для микробиологического анализа с использованием

биолюмшшсценции АТФ (Sample Effect Method)..................... 14

Библиографические данные....................................................................................23

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|юре защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

1 декабря 2010 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологический анализ парфюмерно-косметической продукции экспресс-методом биолюминесценции

Методические рекомендации _МР    4.2.0015—10_

I. Область применения

1.1.    Методические рекомендации могут использоваться при проведении исследований микробиологической загрязненности парфюмерно-косметической продукции с помощью альтернативного автоматизированного экспресс-метода биолюминисцснции.

1.2.    Методические рекомендации предназначены для специалистов аккредитованных бактериологических лабораторий и могут быть использованы в органах и организациях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, промышленных. испытательных лабораториях, а также иных организациях, занимающихся вопросами оценки безопасности парфюмерно-косметической продукции.

1.3.    Методические рекомендации адаптированы к условиям работы лабораторий, осуществляющих контроль качества и безопасности парфюмерно-косметической продукции.

11. Общие положения

2.1. Классические методы микробиологических исследований парфюмерно-косметической продукции, используемые в практике бактериологических .лабораторий, требуют больших затрат труда и времени.

4

MP 4.2.0015—10

достаточно длительны и позволяют получать результаты в течение нескольких дней.

Предлагаемый ускоренный метод с использованием люминомстра заключается в определении АТФ. синтезируемой микроорганизмами и определяемой по интенсивности возникающего свечения в ходе ферментативной реакции, позволяет получать быстрые (в течение нескольких часов) и надежные результаты для большого числа одновременно исследуемых образцов.

2.2.    Биолюминесцентный метод определения АТФ является качественным методом определения микробиологической загрязненности парфюмерно-косметической продукции и может быть также использован для исследования некоторых видов сырья.

В настоящих методических рекомендациях представлено описание процедуры микробиологического анализа парфюмерно-косметической продукции экспресс-методом биолюминесценции с использованием люминомстра Advance Coupe (Celsis International. Нидерланды).

2.3.    Работы по подготовке реагентов, образцов продукции, проведению исследования на приборе, а также интерпретации результатов должны выполняться квалифицированными сотрудниками.

2.4.    Технология использования метода.

Подготовленные образцы продукции в стерильном нейтрализующем лстиновом бульоне (Lethccn broth) инкубируются в течение 18 или 24 часов (в зависимости от типа продукта) и исследуются на приборе Люминометр Advance Coupe с использованием стандартной АТФ и набора реагентов UNI-1 + kit. По окончании анализа компьютерная программа выдаст краткое описание полученных результатов, выраженных в относительных единицах света (RLU- RELATIVE LIGHT UNITS).

III. Метод отбора и подготовки проб для микробиологического анализа

3.1. Отбор проб

3.1.1.    При отборе проб следует руководствоваться требованиями ГОСТ 29188.0-91 «Парфюмерно-косметические изделия. Правила приемки. отбор проб, методы органолептических испытаний» и ГОСТ 26668—85 «Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических анализов».

3.1.2.    Пробы парфюмерно-косметических изделий для микробиологического анализа отбирают до отбора проб для физико-химических, органолептических и других видов испытаний с соблюдением правил асептики, для того чтобы исключить вторичное микробное загрязнение продукта.

5

3.2. Подготовка проб к шииту

3.2.1. Подготовка проб для определения микробиологической чистоты

3.2.1.1.    Перед вскрытием упаковки образец тщательно перемешивают. вращая или переворачивая его несколько раз. Место соединения крышки с тарой обрабатывают 70 %-ым раствором этилового спирта. Первую порцию (примерно 10%) содержимого упаковки отбрасывают, затем перемешивают стерильной петлей и отбирают пробу.

3.2.1.2.    Используя стерильные приемы, отвешивают требуемое количество продукта в стерильный пластиковый контейнер и добавляют стерильный нейтрализующий летиновый бульон (п. 5.1.1). чтобы инактивировать действие консерванта в продукте.

Легшкшый бульон рекомендуется как стандартная, обеспечивающая соотвсгствующпй начальный уровень АТФ, нейтрализующая среда для широкою спектра консервантов и определения различных видов заражения.

Количество продукта, необходимое хтя приготовления пробы, определяется заранее по методике «Метод определения пригодности пробы» (Sample Effect Method) согласно прилож. 1 к настоящим методическим рекомендациям.

Соотношение продукта и питательного лстннового бульона должно сохраняться равным 1 : 99.

В качестве наилучшей практики рекомендуется 1 г продукта поместить в 99 мл бульона. Однако нс все лаборатории располагают необходимыми возможностями и площадью для таких размеров испыту емого образца. В таких случаях допускается уменьшать количество проду кта до 0.1 г и помещать его в 9.9 мл бульона, сохраняя неизменным соотношение 1 :99.

3.2.1.3.    В асептических условиях (желательно в ламинарном боксе) добавить в пластиковый контейнер с отвешенным продуктом летиновый бульон и тщательно закрыть крышку контейнера. Перемешать на вихревом миксере, у бедившись, что продукт полностью диспергирован в бульоне. Таким образом, полу чается разведение 10 “ или 1 : 100.

3.2.1.4.    Слегка ослабить крышку контейнера (на пол-оборота) и поместить его в шейкер-инкубатор на 24 часа при температуре (30 ± 3) °С. Рекомендуемая скорость вращения образцов в шейкер-инкубаторе 150— 200 об./мин для полной уверенности, что проду кт в течение всего времени остается полностью диспергированным в бульоне, нс оседает на дно контейнера и нс переливается через его край.

MP 4.2.0015—10

3.2.1.5. Определение собственной антимикробной активности парфюмерно-косметической продукции проводят в соответствии с МУК 4.2.801—99 «Методы микробиологического контроля парфюмерно-косметической продукции».

3.2.2. Подготовка отрицательного и положительного контроля

3.2.2.1.    Отрицательный контроль используется в каждом тесте для определения уровня RLU, по сравнению с которым будут оцениваться пробы продукта. Лстиновый бульон содержит небольшое количество АТФ и обеспечивает соответствующий начальный уровень АТФ.

В асептических условиях поместить в пластиковый стерильный контейнер 99 мл (либо 9.9 мл) лстинового бульона. Для контроля следует использовать лстиновый бульон той же партии, что и в подготовке тестируемых проб. В случае если при подготовке проб продукта использован бульон нескольких партий, следует подготовить контрольные образцы бульона из каждой партии. Инкубировать вместе с подготовленными пробами продукта в шейкер-инкубаторе.

3.2.2.2.    Положительный контроль.

В асептических условиях поместить в пластиковый стерильный контейнер 99 мл (либо 9.9 мл) лстинового бульона. С помощью стерильной пластиковой петли переместить криобусину, нагруженную свежей культурой (18—24 часов) Staphylococcus cpidcnnidis. в лстиновый бульон (п. 5.6). Для продуктов с pH < 5 используется криобусина, нагруженная свежей культурой Saccharomyces cerevisiac (п. 5.6).

Перемешать на вихревом миксере, убедившись, что культура полностью диспергирована в бульоне. Инкубировать вместе с подготовленными пробами продукта в шейкер-инкубаторе.

3.2.3. Дополнительное разведение образцов

3.2.3.1. После 24-часового инкубирования проб продукции вынуть образцы из шейкер-инкубатора и перемешать на вихревом миксере в течение 10—15 секунд каждый.

Подготовить следующее десятикратное разведение каждого образца в стерильной дистиллированной воде. Для этого 1 мл образца поместить в заранее подготовленный стерильный пластиковый контейнер, содержащий 9 мл стерильной дистиллированной воды, и тщательно перемешать на вихревом миксере. Полученное разведение - 10 ³ или (1:1 000).

Если на стадии определения количества продукта «Методом определения пригодности пробы» выявлено, что для данного продукта

7

наиболее эффективно использовать разведение К)² (1 : 100), то дополнительное разведение нс требуется.

3.2.3.2.    Если установлено, что пробы продукта тестируются в разведении 1 : 1 000. то и используемые для отрицательного контроля образцы стерильного лстинового бульона, а также образец положительного контроля культуры Staphylococcus cpidcnnidis после инкубирования должны быть разведены 1 : К) в стерильной дистиллированной воде по п. З.2.З.1.

3.2.3.3.    Полученные разведения используют для тестирования на приборе. Время с момента окончания подготовки пробы до начала тестирования не должно превышать 30 мин.

IV. Метод анализа АТФ + (>₂+ЛЮЦНФЕРИНс=> АМФ + С0₂ + ОКСИЛЮЦНФЕРИН + ПИРОФОСФАТ+СВЕТ

При работе люминомстра в процессе инжекции реагентов. АТФ -высвобождающий реагент (Lumex EX), поступающий в каждый образец продукта, способствует экстракции АТФ из клеток микроорганизмов, находящихся в пробе продукта. Количество присутствующей в пробе АТФ измеряется по количеству света в ходе каталитической реакции с комплексом люциферин/люцифераза (LUMEN АТЕ), оценивается в относительных единицах света (RLU) и используется для заключения о присутствии или отсутствии микробиологического заражения продукта.

4.1.    Подготовка кювет для люминомстра

4.1.1.    По 100 рл (0.001 мл) исследуемого материала из разведений, приготовленных по п. 3.2.3.1 поместить на дно индивидуальной кюветы для люминомстра. Убедиться в отсутствии материала на стенках кюветы.

4.1.2.    Подготовить все пробы продуктов, а также контрольные образцы (два отрицательных и один положительный) по п. 4.1.1.

4.1.3.    Поместить в индивидуальную кювету 100 рл (0.001 мл) стандартного АТФ (ATP standard), поставляемого в наборе реагентов UNI 1 + kit (п. 5.2.1).

4.2.    Проведение aiuuuta на люминометре

После начальной заправки реактивами следует провести измерения для получения серин «ежедневных контролей» (т. с. значений для пустых кювет, чистого реактива и АТФ-контроля). чтобы убедиться в нормальной работе люминомстра и реактивов. После того как эти проверки будут проведены, и оператор убедится, что все системы работают нормально. можно проводить анализ проб.

MP 4.2.0015—10

4.2.1.    Загрузить кюветы в люминомстр в порядке, указанном в Руководстве по работе с прибором.

4.2.2.    Работа люминометра и инжекция реагентов Lumex EX и LUMEN АТЕ (п. 5.2.1) в присутствии которых протекает каталитическая реакция биолюминесценции, происходит в автоматическом режиме, управляемом компьютерной программой.

4.2.3.    Количество света на выходе каждого образца измеряется и оценивается по отношению к контрольным стерильным бульонам.

Образцы, показания которых RLU нс превышают среднее показание контрольных стерильных нейтрализующих бульонов более чем в 1.4 раза, считаются соответствующими стандарт) микробиологического качества (PASS). Все неудачные образцы отмечаются в списке с положительным результатом (Positive) и должны быть исследованы повторно.

4.3. Обработка результатов

4.3.1.    Отрицательные результаты.

Образец, который по результатам проведенного теста на люмино-мстрс оценивается как PASS, указывает, что продукт отвечает микробиологической чистоте (< 300 КОЕ/г) и может быть выпущен на реализацию.

4.3.2.    Положительные результаты.

Образец, который по результатам проведенного теста на люмино-метре оценивается как (Positive), указывает, что продукт может быть заражен микроорганизмами и. необходимо провести дополнительное повторное испытание этого продукта на люминомстрс и классическим методом в соответствии МУК 4.2.801—99 «Методы микробиологического контроля парфюмерно-косметической продукции».

4.3.3.0ценка положительных результатов.

Положительные результаты теста указывают, что продукт может быть заражен, так как результат RLU образца превышает в 1.4 раза результат стерильного лстинового бульона. В этом случае следует немедленно перепроверить этот продукт двойным количеством образцов.

Если по результатам «Метода определения пригодности пробы» продукт тестируется в разведении 10 \ то должны быть приготовлены свежие разведения в стерильной дистиллированной воде из образца продукта, инкубированного в течение 24-х часов.

В случае если результаты RLU двух свежеприготовленных образцов отрицательные, нс превышают в 1.4 раза результат стерильного ле-тинового бульона и выражаются как PASS, то продукт может выпущен на реализацию.

9

MP 4.2.0015—10

В случае если один или оба свежеприготовленных образца показывают положительный результат, т. с. превышают в 1.4 раза результат стерильного лстинового бульона и выражаются как (Positive), должны быть срочно приняты меры в соотвстсвнн с установленными в организации требованиями в области качества.

4.4. Диаграмма испытании обращав при по./учении положительных раультатов

V. Аппаратура, реагенты, питательные среды, расходные материалы

5.1. Пишите, /ьные среды

5.1.1.    Летиновый бульон (Lcthccn Broth), используется для продуктов с любым pH. Состав лстинового бульона: белковый пептон - 10,0 г; мясо-пептонный агар - 5.0 г: лецитин - 0.7 г: полисорбат 80 (Твин-80) - 5.0 г; натрия хлорид - 5.0 г. pH - 7.0 ± 0.2.

5.1.2.    Жидкая среда Сабуро (Sabouraud Liquid Medium) для продуктов с низким pH (< 5).

5.1.3.    Трнптонсоя бульон (TiyptoncSoya Broth).

1

4. РАСЧЕТЫ И ПРЕДСТАВЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1. Вычисление результатов

При каждом анализе, проводимом с помощью люминомстра. следует записывать следующие значения (в относительных единицах силы света - RLU):

•    Среднее значение для контрольного бульона;

•    Два результата для контрольного бульона + АТФ:

•    Два значения для каждой пробы в бульоне;

2

   Два значения для каждой пробы в бульоне +АТФ.

Например, при условии, что пробы 1 и 2 тестировались в люмино-мстрс одновременно, средние значения хля контрольного бульона и значения хзя контрольного бульона + АТФ одинаковы, получаем результаты. приведенные в табл. 1.

16