ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО И МОЛОЧНОЕ СЫРЬЕ

Определение наличия ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств методом иммуноферментного анализа с хемилюминесцентной детекцией с применением технологии биочипов

Издание официальное

СШЩЩ11М|фирМ

2021

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным автономным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности» (ФГАНУ «ВНИМИ»)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 470 «Молоко и продукты переработки молока»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 11 февраля 2021 г. No 73-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегод>юм (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в ин-формационной системе общего пользования — на официалыюм сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (wwyv.gost.ru)

© Стандартинформ. оформление. 2021

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии II

9.1.1.8    С биочипов сливают рабочий буферный раствор, а затем полностью его удаляют, постукивая держателем кассет по безворсовой ткани.

9.1.1.9    В каждую лунку вносят по 0,250 см³ рабочего раствора субстрата, приготовленного по 7.1.3. избегая воздействия солнечных лучей, и оставляют на (120 ± 10) с.

9.1.1.10    По истечении (120 ± 10) с держатель кассет с биочипами помещают в иммунохимичесхий анализатор (5.1.1) и проводят измерение интенсивности люминесценции биочипов согласно инструкции. прилагаемой к анализатору.

9.1.2 Проведение измерений с применением тест-системы N9 2

9.1.2.1    В держатель кассет вставляют необходимое количество кассет с биочипами.

Схема заполнения кассеты с биочипами приведена в приложении Б (пункты Б. 1.1, Б. 1.2).

9.1.2.2    На каждый биочип (лунку) кассеты (5.3.1) наносят по 0.100 см³ аналитического буферного раствора для разведения (5.3.2). обеспечивая равномерное покрытие всей поверхности биочипа.

В лунку 1 добавляют 0,100 см³ контрольного раствора «Аналитический стандарт», приготовленного по 7.1.1.2.

В лунки 2—9 добавляют по 0,100 см³ анализируемой пробы продукта, подготовленной по 7.3.

Растворы в лунках перемешивают аккуратным постукиванием (не менее 10 раз) по ребру держателя кассет с биочипами.

9.1.2.3    Держатель кассет с биочипами помещают в термошейкер и перемешивают/инкубируют при температуре (25 ± 2) °С в течение 30 мин.

9.1.2.4    В каждую лунку вносят по 0,100 см³ раствора ферментного конъюгата (5.3.7) и продолжают перемешивание/инкубирование в термошейкере при температуре (25 ± 2) °С еще в течение 60 мин.

9.1.2.5    Далее проводят процедуры согласно 9.1.1.5—9.1.1.10.

9.2 Проведение измерений с применением автоматического иммунохимического анализатора

9.2.1    В лунку кассеты (5.4.1) вносят 0,500 см³ анализируемой пробы продукта, подготовленной по 7.3.

Схема заполнения кассеты и картриджа с биочипом приведена в приложении Б (пункт Б. 1.3).

9.2.2    Кассету с биочипом и реагентами с внесенной по 9.2.1 анализируемой пробой продукта и картридж с наконечниками для дозаторов (5.4.4) помещают в автоматический анализатор (5.1.2) и проводят измерение интенсивности люминесценции биочипов согласно инструкции, прилагаемой к анализатору.

9.2.3    Периодически один раз в 30 дней автоматический анализатор запрашивает проведение контроля качества с использованием контрольного раствора «Положительный стандарт». В этом случае в лунку кассеты (5.4.1) вместо пробы анализируемого продукта вносят 0,500 см³ контрольного раствора «Положительный стандарт», приготовленного по 7.1.2, и далее проводят процедуры согласно 9.2.2.

10 Обработка результатов измерений

Обработку результатов измерений проводят с применением программного обеспечения, прилагаемого к анализатору.

Результаты анализа отображаются на дисплее иммунохимического анализатора биочипов и сохраняются в памяти прибора.

Если анализируемая проба продукта определена как отрицательная, программное обеспечение отображает значение «n.d.»/«H.O.» (не обнаружено). Это означает, что определяемые вещества в анализируемом продукте отсутствуют или их массовая концентрация менее предела обнаружения.

Если анализируемая проба продукта определена как положительная, программное обеспечение отображает «Positive»/«Обнаружено». Массовая концентрация определяемых веществ в анализируемом продукте более или равна пределу обнаружения.

Примеры вариантов отображения результатов анализа приведены в приложении В.

Дополнительная информация по применению иммунохимического анализатора биочипов для определения ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств в пастеризованном молоке, обезжиренном молоке, концентрированном молоке и молочной сыворотке приведена в приложении Г.

11 Метрологические характеристики

Пределы обнаружения наличия ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств в молоке сыром и молочном сырье с применением технологии биочилов приведены в таблицах 1—3.

Таблица 1 — Пределы обнаружения наличия ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств в сыром молоке и молочном сырье с применением тест-системы № 1

Наименование группы определяемы* веществ Определяемое вещество Предел обнаружения, мг/кг Амфениколы Тиамфеникол 0.0016 Флорфеникол 0.0004 Хлорамфеникол 0.00022 Апрамицин Апрамицин 0,006 Баквилоприм Баквилоприм 0.003 Бацитрацин Бацитрацин 0,002 Бвта-лактамы Амоксициллин 0.0024 Ампициллин 0.002 Бензатин Бензилпенициллин 0.00125 Дезацетилцефапирин 0.00375 Десфуроилцефтиофур 0.025 Диклоксациллин 0.002 Клоксациллин 0.0013 Нафциллин 0.003 Оксзциллин 0.0014 Пенегамат 0.002 Пенициллин G (Бензилпенициллин) 0.00088 Пенициллин V (Феноксиметилпенициллин) 0.00015 Прокаин Бензилпенициллин 0.0005 Цефазолин 0.018 Цефалониум 0.00035 Цефалотин 0.0031 Цефапирин 0.005 Цефацетрил 0.01 Цефквином 0.0063 Цефоперазон 0.0038 Цефтиофур 0.025 Вирджиниямицин М1 Вирджиниямицин М1 0.00075 Гентамицин Гентамицин 0.022

Продолжение таблицы 1

Наименование группы Определяемое вещество Предел обнаружения, ut/a Гигромицин В Гигромицин В 0.0075 5-гид рокси-флукиксины 5-ОН Флуниксин 0.00025 Флуниксин 0.00036 Дапсон Дапсон 0.0009 Сульфадиазин 0.030 Сульфадиметоксин 0.007 Сульфадоксин 0.025 Сульфамеразин 0.0125 Сульфаметазин 0.015 Сульфамегер 0.010 Сульфамвтизол 0.025 Сульфаметоксаэол 0.050 Сульфаметохсилиридазин 0.085 Сульфамономегоксин 0.012 Сульфанитран 0.070 Сульфапиридин 0.050 Сульфатиаэол 0.035 Сульфахиноксалин 0.005 Сульфаэгоксипиридазин 0.030 Сульфизомидин 0.016 Двксаметазон Бетаметазон 0.0025 Двксаметазон 0.0002 Канамицин А Канамицин А 0.004 Линкомицин Клиндамицин 0.009 Линкомицин 0.0065 Мвлоксикам Мвлоксикам 0.006 Мвтамизолы Метамизол (Дипирон) 0.024 4-мет иламиноантипирин 0.042 Метилпреднизолоны Мегилпрвднизолон 0.0004 Преднизолон 0.0014 Неомицины Нвомицин 0.009 Паромомицин 0.003 Фрамицетин 0.0075 Нитроксинил Нитроксинил 0.0015 Новобиоцин Новобиоцин 0.0125

Наименование группы определяемых веществ	Определяемое вещество	Предел обнаружения, мг/кг
Пирлимицин	Пирлимицин	0.011
Полимиксины	Колистин	0.0013
	Полимиксин В	0.0005
Рактопамин	Рактоламин	0.00032
Рифаксимин	Рифаксимин	0,001
Спвктиномицин	Спвктиномицин	0,003
Спирамицины	Слирамицин	0.052
	Нвослирамицин	0,056
	Джозамицин	0.0016
Стрелтомицины	Стрептомицин	0,032
	Дигидрострвптомицин	0.020
Сульфа гуанидин	Сульфа гуанидин	0,020
Сульфамвтазины	Сульфамвтазин	0.0012
	Сульфамеразин	0.025
	Сульфа моксол	0.174
Сульфалиридины	Сульфал иридии	0.0009
	Сульфаэтоксилиридазин	0,030
	Сульфамвтоксипиридазин	0.030
	Сульфа моксол	0.0285
	Сульфасапазин	0.0012
	Супьфанитран	0.060
	Сульфатиазол	0,050
	Сульфамономвтоксин	0,080
Сульфонамиды	Сульфатиазол	0,024
	Сульфа квиноксалин	0.0045
	Сульфадимвтоксин	0,0016
	Сульф ацетамид	0.0024
	Сульфадоксин	0.0025
Сульфонамиды	Сульфабензамид	0.00056
	Сульфамвтоксазол	0.0016
	Сульфамономвтоксин	0.00076
	Сульфа хлорпирида зин	0.0018
	Сульфадиазин	0,014

Продолжение таблицы 1

Наименование группы Определяемое вещество Предел обнаружения, мгla Супьфонамиды Сульфаметоксипиридазин 0.040 Сульфизоксаэол 0.00075 Сульфэмеразин 0.022 Супьфэметизол 0.006 Сульфаметер 0.006 Сульфамсжсол 0.088 Сульфанитран 0.046 Сульфафеназол 0.0046 Сульфатроксаэол 0.00075 Сульфизомидин 0.013 Сульфаэгоксипиридазин 0.030 Сульфапиридин 0.110 Сульфаклозин 0.004 Тетрациклину Дохсициклин 0.00125 Окситетрациклин 0.00125 4-эпиокситетрациклин 0.0025 Тетрациклин 0.00125 4-эпитетрациклин 0.0025 Хлортетрацихлин 0.0025 4 -эпихлортетрациклин 0,005 Тилозины Тилозин А 0.0075 Типмикозин 0.0125 Тобрамицин Канамицин 0.100 Тобрамицин 0.007 Толфенамовая кислота Толфенамовая кислота 0.0016 Флуниксин 0.0025 5-гид роксифлуниксин 0.100 Триметоприм Триметоприм 0.013 Фенилбутазоны Фенил бутазон 0.00125 Оксифенбутазон 0.0015 Хинолоны Данофлоксацин 0.0113 Дифлоксацин 0.020 Марбофлоксацин 0.0225 Норфлоксацин 0.020

Наименование труппы определяемых веществ	Определяемое вещество	Предел обнаружения, мг/кт
Хинолоны	Оксолиновая кислота	0,015
	Офлоксацин	0.0125
	Пефлоксацин	0.00625
	Флумеквин	0.0225
	Ципрофлоксацин	0,0138
	Энрофлоксацин	0,0125
Хлормадинон	Хлормадинон	0,0012
Цефалексин	Цефалексин	0.023
Цефуроксим	Цефуроксим	0,0085
Эритромицины	Эритромицин	0,0025
	Гамитромицин	0.032
	Олеандомицин	0,060
	Рокситромицин	0,00063
	Тулатромицин	0.050

Таблица 2 — Пределы обнаружения наличия ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств в сыром молоке и молочном сырье с применением тест-системы № 2

Наименование группы определяемы* веществ Определяемое вещество Предел обнаружения, мг/кг Авермектины Абамектин 0.0006 Дорамектин 0.0023 Ивермектин 0.0015 Эмамектин бензоат 0.001 Эприномектин 0.0003 2-а минобен зимидазол ы Альбендаэол 2-аминосульфон 0.0003 Аминомебендазол 0.00005 Аминофлубендазол 0.00005 Бензимидазолы Альбендаэол 0.010 Альбендаэол сульфоксид 0.0001 Альбендаэол сульфон 0.0003 Гидроксимебендазол 0.0001 Гидроксифлубендазол 0.0001 Карбендазим 0.040 Мебендазол 0.0001 Оксибендаэол 0.0008

Продолжение таблицы 2

Наименование группы Определяемое вещество Предел обнаружения. ut/a Бензимидазолы Оксфендазол {Фенбендазол сульфоксид) 0.0001 Оксфендазол сульфон (Фенбендазол сульфон) 0.015 Парбендазол 0.0004 Фенбендазол 0.001 Флубендазол 0.0001 Галофугинон Галофугинон 0.0003 Дерквантел Дерквантел 0.0001 Имидокарб Имидокарб 0.0002 Клозантел Клозантел 0.0143 Рафоксанид 0.135 Клорзулон Клорзулон 0.0001 Ласалоцид Ласолацид 0.0007 Левамиэол Левамизол 0.003 Моксидектин Моксидектин 0.035 Монензин Монензин 0.002 Монепантел Монепантел 0.0025 Морантел Морантел 0.0001 Оксантел 0.0001 Пирантел 0.0001 Нитроксинил Нитроксинил 0.0012 Оксихлозанид Оксиклозанид 0.0008 Оксфендазол супьфон Оксфендазол (Фенбендазол сульфоксид) 0.0031 Оксфендазол сульфон (Фенбендазолсульфон) 0.0003 Фенбендазол 0.125 Тиабендазол Тиабендазол 0.0002 Камбендаэол 0.00065 Никпоаамид 2.0 5-тидрокситиабендазол 0.0003 Толтразурил Толтразурил 0.0002

Наименование группы определяемых веществ	Определяемое вещество	Предел обнаружения, мг/кг
Триклабендаэол	Триклабендаэол	0.0015
	Триклабендаэол сульфоксид	0.0008
	Триклабендаэол сульфон	0.0006
	Кето-триклабендазол	0.0007

Таблица 3 — Пределы обнаружения наличия содержания ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств в сыром молоке и молочном сырье с применением тест-системы № 3

Наименование группы определяемых веществ Определяемое вещество Предел обнаружения, мг/кт Амфениколы Тиамфеникол 0.00125 Фпорфеникол 0.00015 Хлорамфеникол 0.0001 Апрамицин Апрамицин 0,005 Баквилоприм Баквилоприм 0.006 Бацитрацин Бацитрацин 0.0025 Бета-лактамы Амоксициллин 0.0032 Ампициллин 0.0038 Бензатин Бензилпенициллин 0.00125 Дезацетилцефапирин 0,028 Десфуроилцефтиофур 0,060 Бета-лактамы Диклоксациллин 0.00135 Клоксациллин 0.0045 Нзфциллин 0.005 Оксзциллин 0,005 Пенетамат 0.005 Пенициллин G (Бензилпенициллин) 0,001 Пенициллин V (Феноксиметилленициллин) 0,001 Прокаин Бензилпенициллин 0.00175

Продолжение таблицы 3

Наименование группы Определяемое вещество Предел обнаружения. ытГ«г Бета-лактамы Цефазолин 0.090 Цефалониум 0.00125 Цефалотин 0.014 Цефапирин 0.015 Цефацетрил 0.032 Цефквином 0.006 Цефоперазон 0.00175 Цефтиофур 0.080 Вирджиниямицин М1 Вирджиниямицин М1 0.003 Гентамицин Гентамицин 0.060 5-гид рокси-флуниксины 5-ОН Флуниксин 0.0005 Флуниксин 0.0008 Дапсон Дапсон 0.0009 Сульфадиазин 0.025 Сульфадиметоксин 0.006 Сульфадоксин 0.025 Сульфамеразин 0.015 Сульфаметазин 0.020 Сульфаметер 0.0075 Супьфаметизол 0.0275 Сульфаметоксазол 0.095 Сульфаметоксилиридазин 0.043 Сульфзмонометоксин 0.057 Дапсон Сульфанитран 0.070 Сульфапиридин 0.050 Сульфатиаэол 0.017 Сульфахиноксалин 0.005 Сульфазтоксипиридазин 0.025 Сульфизомидин 0.015 Дексаметазон Бетаметазон 0.001 Дексаметазон 0.00025 Канамицин А Канамицин А 0.030 Линкомицин Клиндамицин 0.009 Линкомицин 0.010 Мелоксикам Мелоксикам 0.004

Наименование группы определяемых веществ	Определяемое вещество	Предел обнаружения, мг/кг
Метамиэолы	Мвтамизол (Дипирон)	0,017
	4-метилами ноантипирин	0,020
Метилпредниээлоны	Метиллреднизолон	0.00019
	Преднизолон	0,002
Нвомицины	Неомицин	0,045
	Паромомицин	0,029
	Фрамицетин	0.055
Нитроксинил	Нитроксинил	0.0075
Новобиоцин	Новобиоцин	0.007
Пирлимицин	Пирлимицин	0,025
Полимиксины	Колистин	0.002
	Полимиксин В	0.0015
Рактоламин	Рактопамин	0,0006
Рифаксимин	Рифаксимин	0.003
Слектиномицин	Спектиномицин	0.004
Слирамицины	Спирамицин	0.030
	Неослирамицин	0.125
Стрелтомицины	Стрептомицин	0.025
	Дигидрострептомицин	0,025
Сульфагуанидин	Сульфагуанидин	0.022
Сульфаметазины	Сульфаметазин	0,002
	Сульфамеразин	0.0375
	Сульфамоксол	0.45
Сульфапяриди.ны	Сульфапиридин	0,005
	Сульфаметоксипиридазин	0,043
	Сульфамоксол	0,065
	Сульфамонометоксин	0.4
	Сульфанитран	0.15
	Сульфасалазин	0.0047
	Сульфатиазол	0.15
	Сульфаэтоксипиридазин	0.047
	Супьфабензамид	0.00075
	Сульфадиазин	0.0075
	Сульфадиметохсин	0.0018

Содержание

1    Область применения.................................................................1

2    Нормативные ссылки.................................................................2

3    Термины и определения...................................... 3

4    Сущность метода....................................................................3

5    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы...........4

6    Отбор проб.........................................................................5

7    Подготовка к проведению измерений....................................................5

8    Условия проведения измерений........................................................7

9    Проведение измерений...............................................................7

10    Обработка результатов измерений.....................................................8

11    Метрологические характеристики......................................................9

12    Требования, обеспечивающие безопасность............................................19

Приложение А (справочное) Примерный перечень применяемого оборудования и тест-систем____20

Приложение Б (справочное) Схома заполнения кассеты с биочипами.........................21

Приложение В (справочное) Варианты отображения результатов анализа на иммунохимическом

анализаторе биочипов....................................................22

Приложение Г (справочное) Дополнительная информация по применению иммунохимического анализатора биочипов для определения наличия ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств в пастеризованном молоке.

обезжиренном молоке, концентрированном молоке и молочной сыворотке........23

Библиография.......................................................................24

Продолжение таблицы 3

Наименование группы Определяемое вещество Предел обнаружения. ut/a Супьфапиридины Сульфадоксин 0.0015 Сульфаквиноксалин 0.0023 Сульфамеразин 0.070 Сульфаметер 0.0045 Супьфаметизоп 0.0075 Сульфаметоксазол 0.0025 Сульфаметоксилиридазин 0.043 Сульфамоксол 0.060 Сульфамонометоксин 0.001 Сульфанитран 0.028 Сульфапиридин 0.060 Сульфатиаэол 0.016 Сульфафеназол 0.0025 Сульфахлорпиридазин 0.00225 Сульфацетамид 0.001 Сульфаэтоксипиридазин 0.025 Сульфизоксаэол 0.0007 Сульфизомидин 0.015 Тетрацикли ны Доксициклин 0.010 Окситетрациклин 0.004 4-эпиокситетрациклин 0.019 Тетрациклин 0.006 4-элитетрациклин 0.0235 Хлортетрациклин 0.0085 4-элихлортетрациклин 0.0075 Тилди пи розин Тилдипирозин 0.0013 Тилмикозин 0.005 Тилозины ТилозинА 0.006 Тилмикозин 0.008 Тобрамицин Канамицин 0.030 Толфенамовая кислота Толфенамовая кислота 0.0025 Флуниксин 0.0019 5-гидроксифлуниксин 0.055 Триметоприм Триметоприм 0.002 Трипиленамин Трипиленамин 0.005

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО И МОЛОЧНОЕ СЫРЬЕ

Опроделонио наличия ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств методом иммуноферментного анализа с хемилюминесцентной детекцией с применением технологии биочипов

Milk and milk raw material.

Determination of veterinary drugs and chemotherapeutic drugs by enzyme immunoassay with chemiluminescent detection using biochip technology

Дата введения — 2021—03—15

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сырое молоко, молочное сырье* (далее — продукт) и устанавливает иммуноферментный метод одновременного определения наличия следующих ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств с применением технологии биочипов:

-    авермектины;

-    2-аминобемзимидазолы,

-    амфениколы;

-    апрамицин;

-    баквилоприм;

-    бацитрацин:

-    бензимидазолы:

-    бета-лактамы;

-    вирджиниямицин М1;

-    галофугинон;

-    гентамицин;

-    гмгромицин В;

-    5-гидрокси-флуниксины:

-    дапсон;

-    дексаметазон;

-    дерквантел;

-    имидокарб:

-    канамицин А:

-    кпозантел:

-    клорсулон;

-    ласалоцид;

-    левамизол;

-    линкомицин;

-    мелоксикам;

-    метамизолы;

-    метиллреднизолоны;

-    моксидектин:

* В настоящем стандарте к молочному сырью относят: пастеризованное молоко, обезжиренное молоко, концентрированное молоко и молочную сыворотку.

Издание официальное

-    монензин;

-    монепантел;

-    морантел;

-    меомицины:

-    нитроксинил;

*    новобиоцин;

-    оксиклозанид;

-    оксфендазолсульфон;

-    пирлимицин;

-    лолимиксины;

-    рактоламин;

*    рифаксимин;

-    слектииомицим:

-    слирамицины;

-    стрептомицины;

-    сульфагуанидин,

-    сульфаметазины;

-    сульфапиридины;

-    сульфонамиды:

-    тетрациклины;

-    тиабендазол:

-    тилдипирозин;

-    тилозины;

-    тобрамицин;

-    толтразурил;

-    толфемамовая кислота;

*    триклабендазол;

-    триметоприм:

-    трипиленамим;

*    фенилбутазоны;

-    хинолоны:

-    хлормадинон;

*    цофалвксин;

-    цефуроксим;

*    эритромицины.

Метод, предусмотренный настоящим стандартом, не является контрольным методом. В качестве контрольного метода применяют метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 1770 (ИСО 1042—83. ИСО 7788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия 2

ГОСТ 4233 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 13928 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809.1 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ Р 52501 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания ГОСТ Р ИСО 707 Молоко и молочные продукты. Руководство по отбору проб

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, го рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссыпку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по [1]. а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    иммуноформентный метод: Метод определения низкомолекулярных соединений, макромолекул. вирусов и пр„ в основе которого лежит специфическая реакция «антиген—антитело». Для выявления образовавшегося комплекса в качестве метки для регистрации сигнала применяют специфический для каждой реакции фермент или ферментозависимое вещество.

3.2    тест-систома (тест-набор): Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов). оборудования и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных химиотерапевтических лекарственных средств или групп химиотерапевтических лекарственных средств и ветеринарных препаратов.

4    Сущность метода

Иммунофермеитный метод с хемилюминесцентной детекцией (ИФА-Х) с применением технологии биочипов основан на одновременном измерении анализатором массовой концентрации химиотерапевтических лекарственных средств и ветеринарных препаратов в растворах экстрактов анализируемых проб продукта с помощью прямого твердофазного ИФА-Х.

Метод основан на конкуренции химиотерапевтических лекарственных средств и ветеринарных препаратов к антителам, адсорбированным на дискретных участках биочипа.

В ходе иммуноспецифической реакции образуются комплексы «антитела—лекарственные вещества». Вещества, не связанные с поверхностью биочипа комплексом «антиген—антитело», удаляют на стадии промывания.

После добавления раствора субстрата регистрируют значение интенсивности люминесценции, характеризующее степень взаимодействия антител с антигенами. Измеренное анализатором значение обратно пропорционально массовой концентрации определяемых лекарственных средств и ветеринарных препаратов в растворе.

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы

Примерный перечень оборудования и тест-систем изложен в приложении А.

5.1    Анализатор биочипов иммунохимичоский

5.1.1    Анализатор биснипов иммунохимичосхий полуавтоматический, включающий:

-    компьютер с установленным программным обеспечением для управления и обработки результатов измерений;

-    блок измерительный, включающий камеру с зарядовой связью для регистрации хемилюминесценции;

-    держатель кассет с биочипами;

-    термошейкер для перемешивания/инкубации проб;

-    сканер штрих-кодов, позволяющий распознавать тест-систему.

5.1.2    Анализатор биочипов иммунохимический автоматический, включающий:

* блок измерительный, включающий камеру с зарядовой связью для регистрации хемилюминесценции, роботизированную систему дозирования и специализированное программное обеспечение:

-    сканер штрих-кодов, позволяющий распознавать тест-систему.

5.2    Тест-система No 1 для определения антибиотиков с применением иммунохимичесхого анализатора биочипов полуавтоматического, приведенное в 5.2.1—5.2.7. включающая:

5.2.1    Кассеты с биочипами.

5.2.2    Раствор аналитический буферный для разведения.

5.2.3    Раствор контрольный «Аналитический стандарт» лиофилизированный.

5.2.4    Раствор люминола.

5.2.5    Раствор перекиси водорода.

5.2.6    Концентрат буферного раствора для промывания биочипов.

5.2.7    Раствор ферментного конъюгата.

5.3 Тест-система № 2 для определения кокцидиостатиков и антигельминтных препаратов в молоке с применением иммунохимичесхого анализатора биочипов полуавтоматического, приведенное в 5.3.1—5.3.7, включающая:

5.3.1    Кассеты с биочипами.

5.3.2    Раствор аналитический буферный для разведения.

5.3.3    Раствор контрольный «Аналитический стандарт» лиофилизированный.

5.3.4    Раствор люминола.

5.3.5    Раствор перекиси водорода.

5.3.6    Концентрат буферного раствора для промывания биочипов.

5.3.7    Раствор ферментного конъюгата.

5.4 Тест-система No 3 для определения антибиотиков в молоке с применением иммунохимическо-го анализатора биочипов автоматического, приведенное в 5.4.1— 5.4.4, включающая:

5.4.1    Кассета с биочипом (картридж), содержащая комплекс реагентов, необходимых для проведения иммуноферментного анализа.

5.4.2    Раствор контрольный «Положительный стандарт» лиофилизированный.

5.4.3    Раствор буферный для восстановления.

5.4.4    Картридж с наконечниками для дозаторов.

5.5    Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0.01 г.

5.6    Часы 2-го класса точности по ГОСТ 27752.

5.7    Секундомер механический или электронный.

5.8    Вортекс лабораторный.

5.9    Испаритель роторный любого типа или устройство для испарения экстрактов с термостатиру-емым нагревательным модулем, поддерживающим температуру от 25 °С до 100 °С, с системой отдувки растворителей инертным газом.

5.10    Система получения деионизированной воды высокой чистоты.

5.11    Центрифуга лабораторная, обеспечивающая скорость вращения 4000 об/мин.

5.12    Дозаторы пипеточные (пилвт-дозаторы) переменного объема дозирования в диапазоне 0.005—0.05 см³,0.1—1.0 см³. 1.0—5.0 см³ с наконечниками.

5.13    Дозатор пипеточный (пипет-дозатор) переменного объема дозирования в диапазоне 1,0—5.0 см³ со стерильными наконечниками.

5.14    Колбы мерные 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

5.15    Цилиндры 1-10 (25. 50)-2 по ГОСТ 1770.

5.16    Виалы из темного стекла с крышкой вместимостью 2 см³.

5.17    Пробирка П-1-15(25)-0,2 или П-2-15(25)-14/23 по ГОСТ 1770 или ПЗ-25(50) по ГОСТ 25336 или пробирки полипропиленовые вместимостью 20-50 см³ с завинчивающимися крышками.

5.18    Пробирки типа Эппендорф вместимостью 0.5—1.5 см³.

5.19    Стаканы В-1-50(150) по ГОСТ 25336.

5.20    Флаконы из темного стекла с крышками вместимостью 10—50 см³ для приготовления рабочего раствора субстрата.

5.21    Промывалка лабораторная.

5.22    Ткань безворсовая.

5.23    Ацетонитрил, содержание основного вещества не менее 98 %.

5.24    н-Гексан. содержание основного вещества не менее 98 %.

5.25    Магний сернокислый безводный, содержание основного вещества не менее 98 %.

5.26    Натрий хлористый по ГОСТ 4233. ч.д.а.

5.27    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

5.28    Вода деионизированная 2-й степени чистоты по ГОСТ Р 52501.

Допускается применение других средств измерений, испытательного и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерений, а также реактивов по качеству но ниже вышеуказанных.

6    Отбор проб

Отбор и подготовка проб — по ГОСТ Р ИСО 707. ГОСТ 13928. ГОСТ 26809.1.

Если измерение не может быть проведено сразу после отбора проб продукта, то неконсервированные пробы продукта хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С не более 36 ч.

Если измерение не может быть проведено в течение 36 ч. то после отбора проб допускается замораживание проб продукта при температуре (минус 20 ± 2) ^еС.

Титруемая кислотность анализируемого сырого молока не должна превышать 21.0 °Т.

7    Подготовка к проведению измерений

7.1    Приготовление реактивов и реагентов

7.1.1    Приготовление контрольного раствора «Аналитический стандарт»

7.1.1.1    Приготовление контрольного раствора «Аналитический стандарт» при применении тест-системы No 1 (5.2)

Во флакон с контрольным раствором «Аналитический стандарт» (5.2.3) добавляют 1 см³ деионизированной воды, флакон закрывают пробкой. Содержимое флакона аккуратно перемешивают в течение 20 мин. не допуская образования пены.

Восстановленный контрольный раствор «Аналитический стандарт» стабилен в течение 8 ч при хранении его при температуре от 2 °С до 8 ^СС.

Восстановленный контрольный раствор «Аналитический стандарт» делят на аликвоты объемом 0,1 см³ в пробирках типа Эппендорф или виалах из темного стекла в течение 1 ч после приготовления и хранят при температуре (минус 20 ± 2) ^еС но более 1 мес.

После размораживания контрольный раствор «Аналитический стандарт» стабилен в течение 8 ч при хранении его при температуре от 2 °С до 8 °С. Отбирают только необходимое количество материала. Не допускается повторное замораживание восстановленного раствора.

7.1.1.2    Приготовление контрольного раствора «Аналитический стандарт» при применении тест-системы No 2 (5.3)

Во флакон с контрольным раствором «Аналитический стандарт» (5.3.3) добавляют 6 см³ деионизированной воды, флакон закрывают пробкой. Содержимое флакона аккуратно перемешивают в течение 20 мин. не допуская образования пены.

Далее восстановленный контрольный раствор «Аналитический стандарт» готовят по 7.3.2. помещая в центрифужную пробирку вместимостью 30 см³ вместо 5 см³ анализируемого продукта 5 см³ восстановленного контрольного раствора «Аналитический стандарт».

7.1.2    Приготовление контрольного раствора «Положительный стандарт»

Контрольный раствор «Положительный стандарт» используют при применении тест-системы N9 3

(5.4).

Во флакон с контрольным раствором «Положительный стандарт» (5.4.2) добавляют 1 см³ буферного раствора для восстановления (5.4.3) и закрывают крышкой. Содержимое флакона аккуратно перемешивают, не допуская образования пены, и оставляют на 20 мин.

Восстановленный контрольный раствор «Положительный стандарт» делят на аликвоты объемом по 0,3 см³ в виалах из темного стекла в течение 1 ч после приготовления и хранят при температуре (минус 20 ± 2) ^аС не более 1 мес.

После размораживания контрольный раствор «Положительный стандарт» стабилен в течение 8 ч при хранении его при температуре от 2 ⁵С до 8 ’С. Отбирают только необходимое количество материала. Не допускается повторное замораживание восстановленного раствора.

7.1.3    Приготовление рабочего раствора субстрата при применении тест-системы № 1 (5.2) и тест-системы № 2 (5.3)

Рабочий раствор субстрата готовят, смешивая раствор люминола (5.2.4, 5.3.4) и раствор перекиси водорода (5.2.5. 5.3.5). прилагаемые к тест-системе, в пропорции 1:1 (V/V). На одну кассету с биочипами (девять лунок) необходимо приблизительно 3 см³ рабочего раствора субстрата или 0.250 см³ рабочего раствора субстрата на одну лунку.

Во флакон из темного стекла соответствующей вместимости, используя пипет-доэатор с одноразовыми стерильными наконечниками, помещают необходимые количества растворов люминола (5.2.4. 5.3.4) и перекиси водорода (5.2.5. 5.3.5), при этом раствор люминола добавляют к раствору перекиси водорода, избегая воздействия солнечных лучей.

Полученную смесь аккуратно перемешивают в течение 15 мин.

Рабочий раствор субстрата остается стабильным в течение 4 ч при температуре от 15 °С до 25 °С.

7.1.4    Приготовление рабочего буферного раствора для промывания биочипов при применении тест-системы № 1 (5.2) и тест-системы № 2 (5.3)

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 32 см³ концентрата буферного раствора для промывания биочипов (5.2.6. 5.3.6). добавляют небольшое количество деионизированной воды по ГОСТ Р 52501 и аккуратно перемешивают, объем раствора доводят деионизированной водой до метки.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 1 мес.

7.2    Подготовка анализатора

Подготовку анализатора проводят в соответствии с прилагаемой к прибору инструкцией.

7.3    Подготовка анализируемой пробы продукта

7.3.1    Подготовка проб продукта при применении тест-системы № 1 и тест-системы № 3

Перед проведением измерения пробы продукта перемешивают, переворачивая не менее трех раз.

Замороженные продукты предварительно размораживают и выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин.

Не допускается проведение измерений проб продукта, если после их размораживания наблюдается выпадение осадка или образование сгустков.

7.3.2    Подготовка проб продукта при применении тест-системы № 2

В центрифужную пробирку вместимостью 30 см³ помещают 5 см³ анализируемого продукта, добавляют 10 см³ ацетонитрила (5.23) и перемешивают на вортексе в течение 60 с. К полученной смеси добавляют (0.05 ± 0.01) г натрия хлористого (5.26). (2.00 ± 0.01) г магния сернокислого безводного (5.25) и тщательно перемешивают во избежание образования комочков. Затем, после получения однородной смеси, добавляют 4 см³ н-Гексана (5.24) и перемешивают на вортексе в течение 60 с.

Полученную смесь центрифугируют при 4000 об/мин в течение 8 мин. Дозатором отбирают 4 см³ нижней фракции, переносят в чистую стеклянную пробирку и сушат в токе азота при температуре (50 ± 2) °С. Полученный сухой остаток растворяют в 0.5 см³ рабочего буферного раствора для промывания. приготовленного по 7.1.4. После этого анализируемая проба продукта подготовлена для проведения измерений.

7.4 Подготовка тест-системы к проведению измерений

7.4.1    Перед применением тест-систему достают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин. после чего каждый флакон с реагентами, входящий в тест-систему, перемешивают. аккуратно встряхивая его.

После использования флаконы с реагентами сразу убирают в холодильник.

На всех этапах проведения измерений воздействия прямого солнечного света но допускается.

7.4.2    При применении полуавтоматического иммунохимического анализатора биочипов добавление реактивов проводят при помощи пилотирования по направлению к переднему краю биочипа. Для каждого реагента используют отдельный наконечник липет-дозатора. Внесение растворов на биочипы проводят осторожно, не касаясь наконечником пипет-дозатора поверхности биочипа.

8    Условия проведения измерений

При выполнении измерений в лаборатории необходимо соблюдать следующие условия:

температура окружающего воздуха....................от    18    °С до 27 ®С;

относительная влажность воздуха.....................(50    ±    30) %;

атмосферное давление..............................(96    ±    10) кПа.

9    Проведение измерений

9.1    Проведение измерений с применением полуавтоматического иммунохимического анализатора

9.1.1    Проведение измерений с примененном тест-системы № 1

9.1.1.1    В держатель кассет вставляют необходимое количество кассет с биочипами.

Схема заполнения кассеты с биочипами приведена в приложении Б (пункты Б.1.1. Б.1.2).

9.1.1.2    На каждый биочип (лунку) кассеты (5.2.1) наносят по 0.175 см³ аналитического буферного раствора для разведения (5.2.2). обеспечивая равномерное покрытие всей поверхности биочипа.

В лунку 1 добавляют 0.025 см³ контрольного раствора «Аналитический стандарт», приготовленного по 7.1.1.1.

В лунки 2—9 добавляют по 0.025 см³ анализируемой пробы продукта, подготовленной по 7.3.

Растворы в лунках перемешивают аккуратным постукиванием (не менее 10 раз) по ребру держателя кассет с биочипами.

9.1.1.3    Держатель кассет с биочипами помещают в термошейкер и перемешивают/инкубируют при температуре (25 ± 2) °С в течение 30 мин.

9.1.1.4    В каждую лунку вносят по 0.100 см³ раствора ферментного конъюгата (5.2.7) и продолжают перемешивание/инкубирование в термошейкере при температуре (25 ± 2) ^еС еще в течение 60 мин.

9.1.1.5    Держатель кассет с биочипами достают из термошейкера и сливают реактивы. Биочипы быстро промывают, добавляя в каждую лунку приблизительно по 0.350 см³ рабочего буферного раствора для промывания биочипов, приготовленного по 7.1.4. и выливая его. Процедуру повторяют дважды, при этом необходимо избегать переполнения лунок, чтобы не допустить попадания посторонних примесей из лунки в лунку.

9.1.1.6    После этого в каждую лунку опять вносят по 0.350 см³ рабочего буферного раствора для промывания биочипов, приготовленного по 7.1.4, аккуратно перемешивают, постукивая по всем краям держателя кассет с биочипами в течение 10—15 с, и оставляют в покое на 2 мин. Затем раствор удаляют. Процедуру повторяют четыре раза.

9.1.1.7    После последнего промывания в каждую лунку вносят по 0,350 см³ рабочего буферного раствора для промывания биочипов, приготовленного по 7.1.4. и оставляют до добавления рабочего раствора субстрата в темном месте, но не более чем на 30 мин.