ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПРОДУКЦИЯ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ

Метод выявления сальмонелл ускоренным способом

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2017

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности — филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения Федерального научного центра «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства» Российской академии наук (ВНИИПП)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 мая 2017 г. № 467-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случав пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ. 2017

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ P 57480—2017

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПРОДУКЦИЯ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ

Метод выявления сальмонелл ускоренным способом

Poultry slaughtering products, poultry meat products and environment production objects. Salmonella identification by quick method

Дата введения — 2018—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется:

-    на продукты убоя птицы (тушки, части тушек, жир-сырец, кожу, субпродукты, мясо птицы механической обвалки, кость птицы пищевую, сырье коллагенсодержащее), полуфабрикаты из мяса птицы, в том числе высокой степени готовности, и яичные продукты, предназначенные для пищевых целей (далее — продукты);

-    продукцию из мяса птицы и яиц сельскохозяйственной птицы, готовую к употреблению — колбасные. кулинарные изделия, консервы и др. (далее — готовые продукты);

-объекты окружающей производственной среды (технологическое оборудование, тара, инвентарь, стены и пол производственных цехов, воздух в производственных цехах, одежда и поверхность рук работников).

Настоящий стандарт устанавливает ускоренный метод качественного обнаружения сальмонелл (далее — бактерии рода Salmonella) с использованием тест-пластины, содержащей дегидратированный питательный гелеобразующий хромогенный субстрат на подложке.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.4 .009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 5962 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ 7702.2.0 Продукты убоя птицы, полуфабрикаты из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям ГОСТ 8756.0 Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию ГОСТ 9792 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 10444.1 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ ISO 11133 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление. производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Издание официальное

ГОСТ ISO 16140 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ 28489 Микроскопы световые. Термины и определения

ГОСТ 31468 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл

ГОСТ 31659 (ISO 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella

ГОСТ Р 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 52313 Птицеперерабатывающая промышленность. Продукты пищевые. Термины и определения

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен беззамены.тоположе-ние. в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52313, ГОСТ 7702.2.0, ГОСТ 31468, а также следующий термин с соответствующим определением:

3.1    тест-пластина для определения бактерии рода Salmonella Дегидратированная дифференциально-диагностическая среда на подложке, содержащая хромогенные субстраты и растворимое в холодной воде гелеобразующее вещество.

4    Сущность метода

Метод выявления бактерии рода Salmonella ускоренным способом основан на высеве определенного количества пробы в жидкие неселективные и селективные среды с последующим высевом на плотную дифференциально-диагностическую среду, выделении культур, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella морфологические, культуральные признаки, с последующей их идентификацией по биохимическим свойствам и серологическим реакциям.

5    Требования безопасности

5.1    Общие требования проведения микробиологических исследований, в том числе требования безопасности к работе с микроорганизмами III и IV групп патогенности — по ГОСТ ISO 7218. (1).

5.2    При подготовке и проведении анализа необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

5.3    Помещение, в котором проводят анализ, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.4    При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТР 12.1.019.

5.5    Требования к персоналу — по ГОСТ ISO 7218. ¹

ГОСТ P 57480—2017

6    Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды — по ГОСТ 7702.2.0 со следующими дополнениями:

-    микроскоп биологический, обеспечивающий просмотр в проходящем свете, с увеличением 900х—10ООх по ГОСТ 28489;

-    тест-пластина для определения бактерии рода Salmonella по документации изготовителя;

-    диск для биохимической идентификации бактерии рода Salmonella, содержащий биохимический субстрат, облегчающий биохимическое подтверждение присутствия бактерии рода Salmonella по документации изготовителя;

-    среда для неселективного предварительного обогащения — забуференная пептонная вода по ГОСТ 7702.2.0;

-    бульон Рапаппорта-Вассилиадиса (R-V R10) по 8.4;

-    распределитель для тест-пластин по документации изготовителя;

-    губка (спонж) для отбора образцов с нейтрализующим раствором по ГОСТ 7702.2.0;

-    пептонно-солевой раствор для приготовления разведений по ГОСТ 7702.2.0;

-    мясо-пептонный агар по ГОСТ 7702.2.0;

-    сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные О-сыворотки; Vi-, Н-агглютинирую-щие сыворотки для серологической идентификации бактерии рода Salmonella по ГОСТ 7702.2.0;

-    физиологический раствор по ГОСТ 7702.2.0;

-    дистиллированная вода по ГОСТ 6709. ГОСТ ISO 11133;

-    спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

7    Подготовка к проведению анализа

7.1    Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 7702.2.0. ГОСТ 9792. ГОСТ 8756.0.

Для отбора проб окружающей среды используют губку (спонж) с нейтрализующим раствором, не содержащую антимикробных веществ.

Размер участка пробы для проверки присутствия или отсутствия патогенов на поверхности составляет 100 см^? (10 х 10 см). Забирая пробу с помощью губки, покрывают весь участок в двух направлениях (слева направо, затем сверху вниз).

7.2    Подготовка посуды — по ГОСТ 31468.

7.3    Подготовка тест-пластин к анализу — по (2).

7.4    Температура проб перед анализом должна быть в пределах комнатной температуры от 18 °С до 22 °С.

8    Приготовление питательных сред, сыворотки и селективной добавки

8.1    Пептонно-солевой раствор для приготовления разведений — по ГОСТ 7702.2.0.

8.2    Среда для неселективного предварительного обогащения — забуференная пептонная вода — по ГОСТ 7702.2.0.

8.3    Селективная добавка к среде неселективного предварительного обогащения

Состав:

-    малахитовый зеленый оксалат;

-    цефсулодин натрия;

-    стрептомицина сульфат;

-новобиоцин натрия;

-    налидиксин натрия.

Весовые характеристики и приготовление — в соответствии с инструкцией изготовителя.

8.4    Бульон Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10)

Состав:

-    хлорид магния (безводный) 13.4 г;

-    хлорид натрия 7,2 г;

-    казеиновый пептон 4.54 г;

-    дигидроортофосфат калия 1.45 г;

-    малахитовый зеленый 0,036 г;

-    дистиллированная вода 1000.0 см².

ГОСТ Р 57480-2017

Приготовление:

26.6 г сухой среды растворяют в 10ОО см³ дистиллированной воды. Тщательно перемешивают, при необходимости нагревают до полного растворения порошка. Стерилизуют при температуре 116 °С в течение 15 мин. Показатель pH должен соответствовать (5.1 = 0.2) ед. pH при 25 °С.

8.5    Мясо-пептонный агар — по ГОСТ 7702.2.0.

8.6    Сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные О-сыворотки. Vi-. Н-агглютиниру-ющие сыворотки — 8 соответствии с инструкцией изготовителя.

8.7    Питательные среды перед использованием контролируют по ГОСТ IS011133.

8.8    Контроль сред на стерильность

Среды проверяют на стерильность путем выдержки в термостате при (37 г 1) °С в течение 48 ч. Если после этого на плотных питательных средах не обнаруживаются колонии микроорганизмов, а в жидких средах нет помутнения или осадка, свидетельствующих о росте микроорганизмов, они считаются стерильными.

9 Проведение анализа

9.1    Предварительное обогащение в неселективной среде

Для приготовления исходной суспензии используют неселективную среду с селективной добавкой.

Перед использованием неселективную среду по 8.2 вместе с селективной добавкой по 8.3 нагревают на водяной бане до температуры (41,5: 1,0) ®С. Подготовленную среду для неселективного обогащения с селективной добавкой в асептических условиях инокулируют пробой продукта массой (25 г 0.1) г в пакеты с фильтром. Соотношение между количеством высеваемой пробы и количеством неселективной среды — 1:9,т.е.(25 г 0,1)гпробына(225 = 0,1)см³среды. Тщательно гомогенизируют в течение 2 мин.

Для проб окружающей среды соотношение между количеством высеваемой пробы и количеством неселективной среды — 1:9. т е. губка на (225 ± 0.1) см³ среды.

Посевы инкубируют при (41,5 : 1,0)°С в течение (18—24)ч.

9.2    Обогащение в селективной среде

Культуры из среды для предварительного неселективного обогащения пересевают в среду селективного обогащения — бульон Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10) (см. 8.4).

Для этого 0.1 см³ культуры, полученной по 9.1. пересевают в (Юг 1.0) см³ бульона Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10) по 8.4

Посевы на бульоне Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10) инкубируют при температуре (41.5 = 1.0) “С в течение (8—24)ч.

Допускается высевать культуры из среды неселективного обогащения проб продуктов, готовых к употреблению, непосредственно на дифференциально-диагностическую среду (тест-пластину), исключая этап обогащения в селективной среде на бульоне Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10).

9.3    Пересев на дифференциально-диагностические среды

После инкубирования на селективной среде — бульоне Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10). проводят высев посевного материала на дифференциально-диагностическую среду.

Для по лучения отдельных хорошо изолиро ванных колоний бактериологической петлей диаметром 3 мм³ берут посевной материал и проводят высев непрерывным штрихом на поверхность геля тест-пластины. Рукой в перчатке проводят разглаживающим движением по поверхности пленки тест-пластины, оказывая на нее равномерное давление, для удаления пузырьков воздуха из области высева.

Тест-пластины инкубируют пленкой вверх при температуре (41,5 г 1,0) *С в течение (24 ±2) ч. укладывают в стопки в количестве не более 20 пластин.

После инкубирования проводят просмотр тест-пластин на присутствие типичных колоний для бактерий рода Salmonella.

Бактерии рода Salmonella образуют на тест-пластине колонии цвета от красного до коричневого с желтой зоной и/или пузырьком газа.

При отсутствии типичных колоний в посевах на дифференциально-диагностической среде работу с посевами прекращают, и конечный результат определяют как отсутствие бактерий рода Salmonella в анализируемой пробе (массе, объеме) продукта.

4

ГОСТ Р 57480-2017

9.4 Идентификация

9.4.1    Биохимическая идентификация

Если типичные колонии бактерий рода Salmonella присутствуют на тест-пластине, на верхней пленке тест-пластины обводят не менее пяти изолированных типичных колоний несмываемым сверхтонким маркером и переходят к проведению идентификации бактерий рода Salmonella по биохимическим свойствам.

Для определения биохимических свойств используют тест-пластину с типичными колониями.

Поднимают верхнюю пленку тест-пластины и вставляют диск для биохимической идентификации, разместив его на геле катящим движением во избежание попадания пузырьков воздуха. Закрывают тест-пластину. Рукой в перчатке аккуратно проводят разглаживающим движением по поверхности пленки, оказывая на нее равномерное давление.

Тест-пластину и диск инкубируют при температуре (41.5 ± 1.0) °С в течение 4—5 ч в горизонтальном положении диском вверх, укладывая по высоте не более 20 пластин.

Типичные культуры бактерий рода Salmonella показывают изменение цвета колоний на зеленый, синий, темно-синий с ореолом темно-фиолетового цвета вокруг колоний.

Принцип биохимической идентификации с применением диска основан на комбинированном действии двух хромогенных субстратов на бета-галактозидазу и бета-глюкоронидазу. Распад хромогенных ферментов сопровождается изменением цвета и образованием ореола темно-фиолетового цвета вокруг колоний.

Колонии, которые сохранили тот же красный, темно-красный или коричневый цвет без темно-фиолетового ореола, не являются подтвержденными по биохимическим свойствам.

9.4.2    Серологическая идентификация

Серологическую идентификацию для подтверждения принадлежности к бактериям рода Salmonella проводят с культурами, предварительно пересеянными на поверхность мясо-лептонного агара.

Для этого поднимают верхнюю пленку тест-пластины и петлей снимают колонию с геля или диска, затем штриховым движением колония переносится на мясо-пептонный агар.

Посевы инкубируют при температуре (37 г 1) °С в течение 18—24 ч, затем проводят серологическую идентификацию по ГОСТ 31659.

10    Обработка результатов

10.1    Результаты оценивают по каждой пробе в отдельности.

10.2    Результаты записывают следующим образом: бактерии рода Salmonella обнаружены или не обнаружены в определенном количестве г (см³) продукта.

11    Валидация метода

Валидация метода проведена с помощью межлабораторных испытаний по ГОСТ IS016140. ³

Библиография

Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 28 января 2008 г.

Методические указания «Методы микробиологического контроля объектов окружающей среды и пищевых продуктов с использованием петрифильмов», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29 июня 2011 г.

УДК 637.54:579.67:006.35    ОКС    67.120.20

Ключевые слова: мясо птицы, субпродукты, полуфабрикаты, бактерии рода Salmonella, питательные среды, отбор проб, биохимические свойства, контроль микробиологических исследований

БЗ 7—2017/93

Редактор АЭ Попова Технический редактор В Н Прусакова Корректор ИА. Коропева Компьютерная верстка И А Напойкиной

Сдано в набор 14.06.2017 Подписано в печать 19.06 2017. Формат 60 х 84^. Гарнитура Ариал. Уел печ л 0,93. Уч.-изд л 0.74. Тираж 32 экз Зак 983 Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

1

2

3

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва. Гранатный пер . 4. wwwgosbnfo.ru    inlo@gosbnfo    ги