ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ
НАЦИОНАЛЬНЫЙ
СТАНДАРТ
РОССИЙСКОЙ
ФЕДЕРАЦИИ
ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПРОДУКЦИЯ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫМетод выявления сальмонелл ускоренным способом
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2017
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности — филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения Федерального научного центра «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства» Российской академии наук (ВНИИПП)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 мая 2017 г. № 467-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случав пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
© Стандартинформ. 2017
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
ГОСТ P 57480—2017
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПРОДУКЦИЯ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ
Метод выявления сальмонелл ускоренным способом
Poultry slaughtering products, poultry meat products and environment production objects. Salmonella identification by quick method
Дата введения — 2018—07—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется:
- на продукты убоя птицы (тушки, части тушек, жир-сырец, кожу, субпродукты, мясо птицы механической обвалки, кость птицы пищевую, сырье коллагенсодержащее), полуфабрикаты из мяса птицы, в том числе высокой степени готовности, и яичные продукты, предназначенные для пищевых целей (далее — продукты);
- продукцию из мяса птицы и яиц сельскохозяйственной птицы, готовую к употреблению — колбасные. кулинарные изделия, консервы и др. (далее — готовые продукты);
-объекты окружающей производственной среды (технологическое оборудование, тара, инвентарь, стены и пол производственных цехов, воздух в производственных цехах, одежда и поверхность рук работников).
Настоящий стандарт устанавливает ускоренный метод качественного обнаружения сальмонелл (далее — бактерии рода Salmonella) с использованием тест-пластины, содержащей дегидратированный питательный гелеобразующий хромогенный субстрат на подложке.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.4 .009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 5962 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ 7702.2.0 Продукты убоя птицы, полуфабрикаты из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям ГОСТ 8756.0 Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию ГОСТ 9792 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 10444.1 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ ISO 11133 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление. производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред
Издание официальное
ГОСТ ISO 16140 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов
ГОСТ 28489 Микроскопы световые. Термины и определения
ГОСТ 31468 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл
ГОСТ 31659 (ISO 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella
ГОСТ Р 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ Р 52313 Птицеперерабатывающая промышленность. Продукты пищевые. Термины и определения
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен беззамены.тоположе-ние. в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52313, ГОСТ 7702.2.0, ГОСТ 31468, а также следующий термин с соответствующим определением:
3.1 тест-пластина для определения бактерии рода Salmonella Дегидратированная дифференциально-диагностическая среда на подложке, содержащая хромогенные субстраты и растворимое в холодной воде гелеобразующее вещество.
4 Сущность метода
Метод выявления бактерии рода Salmonella ускоренным способом основан на высеве определенного количества пробы в жидкие неселективные и селективные среды с последующим высевом на плотную дифференциально-диагностическую среду, выделении культур, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella морфологические, культуральные признаки, с последующей их идентификацией по биохимическим свойствам и серологическим реакциям.
5 Требования безопасности
5.1 Общие требования проведения микробиологических исследований, в том числе требования безопасности к работе с микроорганизмами III и IV групп патогенности — по ГОСТ ISO 7218. (1).
5.2 При подготовке и проведении анализа необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
5.3 Помещение, в котором проводят анализ, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
5.4 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТР 12.1.019.
5.5 Требования к персоналу — по ГОСТ ISO 7218. 1
ГОСТ P 57480—2017
6 Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды
Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды — по ГОСТ 7702.2.0 со следующими дополнениями:
- микроскоп биологический, обеспечивающий просмотр в проходящем свете, с увеличением 900х—10ООх по ГОСТ 28489;
- тест-пластина для определения бактерии рода Salmonella по документации изготовителя;
- диск для биохимической идентификации бактерии рода Salmonella, содержащий биохимический субстрат, облегчающий биохимическое подтверждение присутствия бактерии рода Salmonella по документации изготовителя;
- среда для неселективного предварительного обогащения — забуференная пептонная вода по ГОСТ 7702.2.0;
- бульон Рапаппорта-Вассилиадиса (R-V R10) по 8.4;
- распределитель для тест-пластин по документации изготовителя;
- губка (спонж) для отбора образцов с нейтрализующим раствором по ГОСТ 7702.2.0;
- пептонно-солевой раствор для приготовления разведений по ГОСТ 7702.2.0;
- мясо-пептонный агар по ГОСТ 7702.2.0;
- сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные О-сыворотки; Vi-, Н-агглютинирую-щие сыворотки для серологической идентификации бактерии рода Salmonella по ГОСТ 7702.2.0;
- физиологический раствор по ГОСТ 7702.2.0;
- дистиллированная вода по ГОСТ 6709. ГОСТ ISO 11133;
- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
7 Подготовка к проведению анализа
7.1 Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 7702.2.0. ГОСТ 9792. ГОСТ 8756.0.
Для отбора проб окружающей среды используют губку (спонж) с нейтрализующим раствором, не содержащую антимикробных веществ.
Размер участка пробы для проверки присутствия или отсутствия патогенов на поверхности составляет 100 см? (10 х 10 см). Забирая пробу с помощью губки, покрывают весь участок в двух направлениях (слева направо, затем сверху вниз).
7.2 Подготовка посуды — по ГОСТ 31468.
7.3 Подготовка тест-пластин к анализу — по (2).
7.4 Температура проб перед анализом должна быть в пределах комнатной температуры от 18 °С до 22 °С.
8 Приготовление питательных сред, сыворотки и селективной добавки
8.1 Пептонно-солевой раствор для приготовления разведений — по ГОСТ 7702.2.0.
8.2 Среда для неселективного предварительного обогащения — забуференная пептонная вода — по ГОСТ 7702.2.0.
8.3 Селективная добавка к среде неселективного предварительного обогащения
Состав:
- малахитовый зеленый оксалат;
- цефсулодин натрия;
- стрептомицина сульфат;
-новобиоцин натрия;
- налидиксин натрия.
Весовые характеристики и приготовление — в соответствии с инструкцией изготовителя.
8.4 Бульон Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10)
Состав:
- хлорид магния (безводный) 13.4 г;
- хлорид натрия 7,2 г;
- казеиновый пептон 4.54 г;
- дигидроортофосфат калия 1.45 г;
- малахитовый зеленый 0,036 г;
- дистиллированная вода 1000.0 см2.
ГОСТ Р 57480-2017
Приготовление:
26.6 г сухой среды растворяют в 10ОО см3 дистиллированной воды. Тщательно перемешивают, при необходимости нагревают до полного растворения порошка. Стерилизуют при температуре 116 °С в течение 15 мин. Показатель pH должен соответствовать (5.1 = 0.2) ед. pH при 25 °С.
8.5 Мясо-пептонный агар — по ГОСТ 7702.2.0.
8.6 Сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные О-сыворотки. Vi-. Н-агглютиниру-ющие сыворотки — 8 соответствии с инструкцией изготовителя.
8.7 Питательные среды перед использованием контролируют по ГОСТ IS011133.
8.8 Контроль сред на стерильность
Среды проверяют на стерильность путем выдержки в термостате при (37 г 1) °С в течение 48 ч. Если после этого на плотных питательных средах не обнаруживаются колонии микроорганизмов, а в жидких средах нет помутнения или осадка, свидетельствующих о росте микроорганизмов, они считаются стерильными.
9 Проведение анализа
9.1 Предварительное обогащение в неселективной среде
Для приготовления исходной суспензии используют неселективную среду с селективной добавкой.
Перед использованием неселективную среду по 8.2 вместе с селективной добавкой по 8.3 нагревают на водяной бане до температуры (41,5: 1,0) ®С. Подготовленную среду для неселективного обогащения с селективной добавкой в асептических условиях инокулируют пробой продукта массой (25 г 0.1) г в пакеты с фильтром. Соотношение между количеством высеваемой пробы и количеством неселективной среды — 1:9,т.е.(25 г 0,1)гпробына(225 = 0,1)см3среды. Тщательно гомогенизируют в течение 2 мин.
Для проб окружающей среды соотношение между количеством высеваемой пробы и количеством неселективной среды — 1:9. т е. губка на (225 ± 0.1) см3 среды.
Посевы инкубируют при (41,5 : 1,0)°С в течение (18—24)ч.
9.2 Обогащение в селективной среде
Культуры из среды для предварительного неселективного обогащения пересевают в среду селективного обогащения — бульон Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10) (см. 8.4).
Для этого 0.1 см3 культуры, полученной по 9.1. пересевают в (Юг 1.0) см3 бульона Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10) по 8.4
Посевы на бульоне Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10) инкубируют при температуре (41.5 = 1.0) “С в течение (8—24)ч.
Допускается высевать культуры из среды неселективного обогащения проб продуктов, готовых к употреблению, непосредственно на дифференциально-диагностическую среду (тест-пластину), исключая этап обогащения в селективной среде на бульоне Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10).
9.3 Пересев на дифференциально-диагностические среды
После инкубирования на селективной среде — бульоне Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10). проводят высев посевного материала на дифференциально-диагностическую среду.
Для по лучения отдельных хорошо изолиро ванных колоний бактериологической петлей диаметром 3 мм3 берут посевной материал и проводят высев непрерывным штрихом на поверхность геля тест-пластины. Рукой в перчатке проводят разглаживающим движением по поверхности пленки тест-пластины, оказывая на нее равномерное давление, для удаления пузырьков воздуха из области высева.
Тест-пластины инкубируют пленкой вверх при температуре (41,5 г 1,0) *С в течение (24 ±2) ч. укладывают в стопки в количестве не более 20 пластин.
После инкубирования проводят просмотр тест-пластин на присутствие типичных колоний для бактерий рода Salmonella.
Бактерии рода Salmonella образуют на тест-пластине колонии цвета от красного до коричневого с желтой зоной и/или пузырьком газа.
При отсутствии типичных колоний в посевах на дифференциально-диагностической среде работу с посевами прекращают, и конечный результат определяют как отсутствие бактерий рода Salmonella в анализируемой пробе (массе, объеме) продукта.
4
ГОСТ Р 57480-2017
9.4 Идентификация
9.4.1 Биохимическая идентификация
Если типичные колонии бактерий рода Salmonella присутствуют на тест-пластине, на верхней пленке тест-пластины обводят не менее пяти изолированных типичных колоний несмываемым сверхтонким маркером и переходят к проведению идентификации бактерий рода Salmonella по биохимическим свойствам.
Для определения биохимических свойств используют тест-пластину с типичными колониями.
Поднимают верхнюю пленку тест-пластины и вставляют диск для биохимической идентификации, разместив его на геле катящим движением во избежание попадания пузырьков воздуха. Закрывают тест-пластину. Рукой в перчатке аккуратно проводят разглаживающим движением по поверхности пленки, оказывая на нее равномерное давление.
Тест-пластину и диск инкубируют при температуре (41.5 ± 1.0) °С в течение 4—5 ч в горизонтальном положении диском вверх, укладывая по высоте не более 20 пластин.
Типичные культуры бактерий рода Salmonella показывают изменение цвета колоний на зеленый, синий, темно-синий с ореолом темно-фиолетового цвета вокруг колоний.
Принцип биохимической идентификации с применением диска основан на комбинированном действии двух хромогенных субстратов на бета-галактозидазу и бета-глюкоронидазу. Распад хромогенных ферментов сопровождается изменением цвета и образованием ореола темно-фиолетового цвета вокруг колоний.
Колонии, которые сохранили тот же красный, темно-красный или коричневый цвет без темно-фиолетового ореола, не являются подтвержденными по биохимическим свойствам.
9.4.2 Серологическая идентификация
Серологическую идентификацию для подтверждения принадлежности к бактериям рода Salmonella проводят с культурами, предварительно пересеянными на поверхность мясо-лептонного агара.
Для этого поднимают верхнюю пленку тест-пластины и петлей снимают колонию с геля или диска, затем штриховым движением колония переносится на мясо-пептонный агар.
Посевы инкубируют при температуре (37 г 1) °С в течение 18—24 ч, затем проводят серологическую идентификацию по ГОСТ 31659.
10 Обработка результатов
10.1 Результаты оценивают по каждой пробе в отдельности.
10.2 Результаты записывают следующим образом: бактерии рода Salmonella обнаружены или не обнаружены в определенном количестве г (см3) продукта.
11 Валидация метода
Валидация метода проведена с помощью межлабораторных испытаний по ГОСТ IS016140. 3
Библиография
(1) СП 1.3.2322-08
[2] МУК 4.2.2884-11
Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 28 января 2008 г.
Методические указания «Методы микробиологического контроля объектов окружающей среды и пищевых продуктов с использованием петрифильмов», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29 июня 2011 г.
УДК 637.54:579.67:006.35 ОКС 67.120.20
Ключевые слова: мясо птицы, субпродукты, полуфабрикаты, бактерии рода Salmonella, питательные среды, отбор проб, биохимические свойства, контроль микробиологических исследований
БЗ 7—2017/93
Редактор АЭ Попова Технический редактор В Н Прусакова Корректор ИА. Коропева Компьютерная верстка И А Напойкиной
Сдано в набор 14.06.2017 Подписано в печать 19.06 2017. Формат 60 х 84^. Гарнитура Ариал. Уел печ л 0,93. Уч.-изд л 0.74. Тираж 32 экз Зак 983 Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта
1
2
3
Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва. Гранатный пер . 4. wwwgosbnfo.ru inlo@gosbnfo ги