ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

Продукты пищевые

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ И ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ НИХ ПРОДУКТОВ

Общие требования и определения

ISO 24276:2006

Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — General requirements and definitions (MOD)

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2009

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Институтом физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской академии наук при участии Ассоциации « Биологическая, экологическая и продовольственная безопасность» на основе аутентичного перевода международного стандарта, указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 447 «Биологическая безопасность пищевых продуктов, кормов и товаров народного потребления и методы ее контроля»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 25 декабря 2008 г. № 708-ст

4    Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 24276:2006 «Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Общие требования и определения» (ISO 24276:2006 «Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — General requirements and definitions»).

При этом дополнительные положения и требования, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены курсивом

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

©Стандартинформ. 2009

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 53214-2008

Содержание

1    Область применения...................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................1

3    Термины и определения................................................1

4    Применение к подходящим международным стандартам............................6

4.1    Общие положения..................................................6

4.2    Руководство для пользователей по выбору методов............................7

4.3    Рабочие характеристики..............................................7

5    Общие требования к лаборатории и процедурам.................................8

6    Интерпретация и представление результатов..................................11

7    Протокол испытаний..................................................12

Библиография........................................................13

III

Введение

Цель такого анализа состоит в идентификации и количественной оценке содержания генетических элементов или белков обычных для генетически модифицированных организмов (ГМО) и полученных из них продуктов в анализируемой пробе.

Главным предметом настоящего стандарта являются методологии, основанные на полимеразной цепной реакции (ПЦР). Однако поскольку технологические изменения в этой области происходят очень быстро, в будущем могут быть рассмотрены также и другие технологии.

Поиск ингредиентов генетически модифицированного происхождения осуществляется посредством следующих последовательных (или одновременных) стадий. После отбора проб из анализируемой пробы экстрагируются нуклеиновые кислоты или белки. Экстрагированный материал может далее очищаться в процессе экстракции или после нее. Затем проводится его количественное определение (при необходимости), разбавляется (при необходимости) и подвергается аналитическим процедурам, таким как ПЦР, или определению с помощью твердофазного иммуносорбентного анализа (ELISA). Эти стадии подробно изложены в настоящем стандарте и в следующих стандартах:

ИСО 21569 Продукты пищевые. Методы анализа, предназначенные для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Методы, основанные на качественном определении нуклеиновых кислот [1);

ИСО 21570 Продукты пищевые. Методы анализа, предназначенные для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Методы, основанные на количественном определении нуклеиновых кислот (2):

ИСО 21571 Продукты пищевые. Методы анализа, предназначенные для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Экстракция нуклеиновых кислот (3): ИСО 21572 Продукты пищевые. Методы анализа, предназначенные для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Методы, основанные на определении белков (4).

IV

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Продукты пищевые

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ

И ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ НИХ ПРОДУКТОВ

Общие требования и определения

Foodstuffs. Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products. General

requirements and definitions

Дата введения — 2010—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт содержит общие термины и определения, требования и руководящие указания для организации лабораторий, требования к методу подтверждения достоверности, описание методов и протоколов испытаний.

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, а также семена, корма и растительные образцы, отобранные из окружающей среды.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТРИСО/МЭК17025—2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ Р 50779.10-2000 (ИСО 3534-1—93) Статистические методы. Вероятность и основы статистики. Термины и определения

ГОСТ Р 52173-2003 Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения

ГОСТ Р 52174-2003 Биологическая безопасность. Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа

Примечание — При пользовании насгоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты», который опубликован посостояниюна 1 января текущею года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (иэмененным)стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТРИСО 5725-1, ГОСТР50779.70 и [5], а также следующие термины с соответствующими определениями:

Издание официальное

3.1    Общие определения

3.1.1    таксон-мишень (целевой таксон): Таксон, к которому принадлежит генетически модифицированный организм.

Примечание — В настоящем стандарте таксон обычно означает биолотический вид. однако он может иметь как более низкий, так и более высокий таксономический ранг.

3.1.2    лабораторная проба: Проба, подготовленная для отправки в лабораторию и предназначенная для анализа или тестирования.

3.1.3    проба для анализа (анализируемая проба): Проба, подготовленная для анализа, все количество которой будет использовано для экстракции анализируемого компонента за один раз.

3.1.4    специфичность: Свойство метода исключительным образом отвечать на анализируемый параметр или вещество.

3.1.5    чувствительность: Изменение ответной реакции, деленное на соответствующее изменение концентрации стандартной (калибровочной) кривой.

Примечание — Это наклон аналитической калибровочной кривой.

3.1.6    предел детектирования (LOO): Минимальное количество или концентрация анализируемого вещества в анализируемой пробе, которое может быть достоверно обнаружено, но необязательно оценено количественно, что может быть продемонстрировано с помощью совместных испытаний лабораторий или другого подходящего метода валидации.

Примечание — Совместные испытания лабораторий — в соответствии с (б], метод валидации — в соответствии с [7].

3.1.7    предел количественного определения (LOQ) (в аналитических определениях): Наименьшая концентрация или количество анализируемого вещества в анализируемой пробе, которая может быть количественно определена с приемлемым уровнем точности и достоверности, что может быть продемонстрировано с помощью совместных испытаний лабораторий или другого подходящего метода валидации.

Примечание — См. ссылку [б], описывающую совместные испытания лабораторий, и ссылку [7], описывающую метод валидации.

3.1.8    точность: Степень близости между результатом испытания и принятым стандартным значением.

3.1.9    истинность: Степень близости между средней величиной, полученной в результате большого числа испытаний, и принятым стандартным значением.

Примечание — Мера истинности обычно выражается в терминах отклонений (ошибок). Истинность может быть определена как «точность среднего».

3.1.10    прецизионность: Степень близости между независимыми результатами испытаний, полученными при заданных условиях.

Примечания

1    Прецизионность зависит только от распределения случайных ошибок и не связана с истинным значением или установленной величиной.

2    Мера прецизионности обычно выражается в терминах погрешности и рассчитывается как стандартное отклонение результатов испытаний. Меньшей прецизионности соответствует большее стандартное отклонение.

3    «Независимые результаты испытаний» означают результаты, полученные таким способом, который не подвергается влиянию полученных ранее результатов на тех же или аналогичных объектах испытаний. Количественные изменения прецизионности критически зависят от установленных условий. Условия повторяемости и воспроизводимости являются частными случаями экстремальных условий.

3.1.11    повторяемость: Прецизионность в условиях повторяемости.

3.1.12    воспроизводимость: Прецизионность в условиях воспроизводимости.

3.1.13    условия повторяемости: Условия, при которых независимые результаты испытаний получаются в течение короткого интервала времени одним и тем же методом на идентичных анализируемых пробах в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором, использующим одно и то же оборудование.

3.1.14    условия воспроизводимости: Условия, при которых результаты испытаний получаются одним и тем же методом на идентичных анализируемых пробах в разных лабораториях разными операторами. использующими разное оборудование.

2

ГОСТ Р 53214-2008

Примечание — Когда разные методы дают результаты испытаний, различающиеся незначительно, или ко1 да разные методы разрешены планом эксперимента, термин «воспроизводимость» может быть применен к итоговым параметрам. Условия должны быть ясно определены.

3.1.15    стандартное отклонение повторяемости: Стандартное отклонение результатов испытаний. полученных в условиях повторяемости.

Примечание — Стандартное отклонение повторяемости представляет собой меру дисперсии распределения результатов испытаний в условиях повторяемости. Аналогично «отклонение повторяемости» и «коэффициент вариации повторяемости» могут быть определены и использованы в качестве меры дисперсии результатов испытаний в условиях повторяемости.

3.1.16    стандартное отклонение воспроизводимости: Стандартное отклонение результатов испытаний, полученных в условиях воспроизводимости.

Примечание — Стандартное отклонение повторяемости представляет собой меру дисперсии распределения результатов испытаний в условиях воспроизводимости. Аналогично «отклонение воспроизводимости» и «коэффициент вариации воспроизводимости» могут быть определены и использованы в качестве меры дисперсии результатов испытаний в условиях воспроизводимости.

3.1.17    предел повторяемости: Величина, меньшая или равная абсолютной разнице между двумя результатами испытаний, полученными в условиях повторяемости, ожидаемая с вероятностью 95 %.

Примечания

1    Используется обозначение г.

2    При рассмотрении двух единичных результатов испытаний, полученных в условиях повторяемости, сравнение следует производить с пределом повторяемости 2.8 $г.

3.1.18    предел воспроизводимости: Величина, меньшая или равная абсолютной разнице между двумя результатами испытаний, полученных в условиях воспроизводимости, ожидаемая с вероятностью 95%.

Примечания

1    Используется обозначение R.

2    При рассмотрении двух единичных результатов испытаний, полученных в условиях воспроизводимости, сравнение должно производиться с пределом воспроизводимости /?= 2.8 sR.

3.1.19    совместные межлабораторные испытания: Испытания, в которых несколько лабораторий обнаруживают и/или определяют какой-либо компонент в одной или нескольких «идентичных» порциях гомогенных стабильных материалов при условиях документирования.

Примечание — Руководящие указания по проведению совместных испытаний детально разработаны в гармонизированном протоколе ГОСТР ИСО 5725-2.

3.1.20    соответствие цели (применимость): Область применения метода, которая определяет матрикс, компонент или биологический вид. которые будут исследоваться, диапазон концентраций и тип исследования/контрольного испытания, которому процедура, как можно судить из ее рабочих характеристик. соответствует.

Примечание — Она также описывает известные ограничения метода [7].

3.1.21    осуществимость: Легкость эксплуатации, в терминах пропускной способности и стоимости проб для достижения необходимых критериев рабочих параметров и достижения таким образом поставленной цели.

3.1.22    диапазон применимости (диапазон количественной оценки/линейность/динамичес-кий диапазон): Количественный интервал, внутри которого, как показано совместными испытаниями или другой подходящей процедурой валидации, аналитическая процедура имеет достаточный уровень точности и прецизионности.

Примечание — См. ссылку. Совместные испытания — в соответствии с (б], метод валидации — в соответствии с (7).

3.1.23    погрешность измерения: Параметр, связанный с результатом измерения, который характеризует дисперсию величин, которые обоснованно могут быть приписаны компоненту.

3.1.24    метод скрининга: Метод, который позволит быстро и достоверно исключить (отсеять) большое число отрицательных (или положительных) анализируемых проб и ограничить число анализируемых проб, требующихся для применения точного метода.

3

Примечания

1    См. ссыпку (8).

2    В настоящем стандарте метод скрининга представляет собой метод обнаружения генных продуктов (таких как белки) и/или генетических элементов, общих для нескольких ГМО (таких как промоторы, терминаторы или дру-1ие интересующие генетические элементы).

3.1.25    метод, специфичный для определения генетической конструкции:

Метод, однозначно позволяющий определить конкретную генетическую конструкцию, которая может быть обнаружена только в материале, полученном из ГМО.

3.1.26    метод, специфичный для трансформационного события:

Метод, позволяющий обнаружить уникальную специфическую последовательность, которая присутствует только в том или ином конкретном трансформационном событии.

Примечание — Он обычно направлен на фаничную область интеграции.

3.2 Термины, относящиеся к экстракции и очистке ДНК

3.2.1    Экстракция ДНК: Отделение ДНК от других компонентов анализируемой пробы.

3.2.2    Очистка ДНК: Метод, приводящий к получению более чистой ДНК.

Примечание — Вэтомконтекстечистотаотноситсякуменьшениюнаблюдаемыхиизмеряемых эффектов ингибиторов ПЦР.

3.2.3    ДНК ПЦР-качества: ДНК в анализируемой пробе достаточной длины, химической чистоты и структурной целостности, пригодная для амплификации методом ПЦР.

3.3    Термины, относящиеся к амплификации ДНК и ПЦР

3.3.1    идентификация последовательностей нуклеиновых кислот (идентичность последовательностей нуклеиновых кислот): Установление идентичности путем сравнения с фрагмен-том/последовательностью стандартной нуклеиновой кислоты.

Примечание — Например, специфическая гибридизация со стандартным образцом, сопоставление профилей рестрикционных гидролизатов или сопоставление последовательностей нуклеиновых кислот.

3.3.2    область соединения: Последовательность ДНК. окружающая два следующих элемента последовательности, таких как промотор и кодирующий участок гена.

3.3.3    граничная область интеграции: Область соединения, в которой один элемент происходит из ДНК организма-реципиента, а другой элемент происходит из ДНК, вставленной в ходе трансформации.

3.3.4    зависящая от таксона (эндогенная) целевая последовательность:

Последовательность, о которой известно, что она специфична для целевого таксона.

Примечания

1    Она постоянно присутствует в целевом таксоне и отсутствует в других таксонах.

2    Имеется, по крайней мере, два типа последовательностей, специфических для целевого таксона:

переменное число или мультиколийиость последовательностей, которые также могут быть использованы.

например, для того, чтобы достичь присутствия нуклеиновой кислоты из целевого таксона.

Небольшое число копий или единственная копия последовательности, которые также могут быть использованы. например, в качестве стандартной последовательности для установления базового (фонового) уровня эквивалентов генома целевого таксона при количественном анализе.

3.3.5    прямоток: Принцип обработки проб, применяемый для обеспечения того, чтобы лабораторная проба, сырая или приготовленная анализируемая проба (включая амплифицированную ДНК) оставалась физически изолированной на протяжении всего анализа.

3.4 Определения, относящиеся к контролям ДНК и ПЦР

Примечание — Контроля, применимые к методам, основанным на определении белка, описаны в ИСО 21572 [4]. Следующие определения применяют для методов, основанных на определении ДНК.

3.4.1 положительный контроль целевой ДНК: Стандартная ДНК или ДНК. экстрагированная из сертифицированного стандартного образца, или известного типичного положительного образца исследуемой последовательности или организма.

Примечание — Этот контроль применяют, чтобы продемонстрировать, что реактивы для ПЦР работают как положено.

4

ГОСТ Р 53214-2008

3.4.2    отрицательный контроль целевой ДНК: Стандартная ДНК или ДНК. экстрагированная из сертифицированного стандартного образца или известного отрицательного образца, не содержащая исследуемой последовательности.

Примечание — Этот контроль демонстрирует, что результаты испытаний анализируемых проб, не содержащих целевой последовательности, будут отрицательными.

3.4.3    контроль ингибирования ПЦР: Реакционная смесь, которая обеспечивает средство контроля ингибирования ПЦР при испытании специфического образца целевого компонента.

Примечания

1    Этот контроль позволяет определение присутствия растворимых ингибиторов ПЦР, и он особенно необходим в случае отрицательной амплификации и при количественной ПЦР.

2    Обычно известное количество целевой ДНК добавляется к реакции, которая должна быть проконтролирована. Это может быть оригинальная целевая последовательность или некий ее аналог, например слегка модифицированная целевая последовательность, такая как плазмида.

3.4.4    контроль реагентов ПЦР: Контроль, содержащий все реактивы для амплификации, за исключением экстрагированной стандартной ДНК анализируемой пробы.

Примечание — Этот контроль применяют, чтобы продемонстрировать отсутствие загрязняющих нуклеиновых кислотв реактивах. ВместостандартнойДНКкреакциоиной смеси добавляют, например, эквивалентный объем дистиллированной воды, свободной от ДНК.

3.4.5    пустой контроль экстракции: Контроль, генерируемый путем проведения всех стадий процедуры экстракции, за исключением добавления анализируемой пробы.

Примечания

1    Например, путем замены анализируемой пробы водой.

2    Применяется, чтобы продемонстрировать отсутствие загрязняющих нуклеиновых кислот в ходе экстракции.

3.4.6    положительный контроль экстракции: Контроль применяют, чтобы продемонстрировать, что процедура экстракции ДНК проводилась путем, который позволяет экстрагировать целевую ДНК.

Примечание — Например, путем использования пробы, которая заведомо содержит целевую ДНК.

3.4.7    контроль окружающей среды: Контроль применяют, чтобы определить, что отсутствует загрязнение нуклеиновыми кислотами, например, из воздуха в лаборатории.

Примечание — Контрольпредсгавлиет собой пробирку, содержащую соответствующий об ьем свободной от нуклеиновых кислот воды, которую оставляют открытой для доступа воздуха в течение всего испытания.

3.5    Термины, относящиеся к стандартным образцам

3.5.1    стандартный образец: Материал или вещество, один или несколько, чьи свойства достаточно однородны, и достоверно установлено, что он может использоваться для калибровки прибора, оценки точности метода измерения или для установления показателей для материалов (9].

3.5.2    сертифицированный стандартный образец: Стандартный образец, снабженный сертификатом, одно или несколько свойств которого сертифицированы с помощью надлежаще технически проведенной процедуры, имеющей сертификат или прослеживаемый сертификат, или другую документацию, выданную сертифицирующим (ованным) органом (9].

3.6    Термины, относящиеся к количественному определению

Примечание — Контроли. применимые к методам, основанным на определении белка, описаны в ИСО 21572 (4). Следующие определения применяют к методам, основанным на ДНК.

3.6.1    эндогенная последовательность ДНК: Определенная стандартная последовательность ДНК. являющаяся природной для соответствующего таксона.

Примечание — Эндогенная последовательность ДНК может использоваться для определения количеств геномных эквивалентов целевого таксона, если последовательность присутствует в постоянном числе копий и не проявляет аллельных вариаций между сортами целевого таксона.

3.7    Термины, относящиеся к ГМО

3.7.1    содержание ГМО: Идентичность и количество ГМО или материалов, полученных из ГМО в продукте.

Примечание — Обычно содержание ГМО оценивается путем детектирования анализируемого компонента (идентификации и количественного определения).

5