МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ. МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION. METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Определение содержания фуразолидона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

(ISO 14797:1999,

Animal feeding stuffs — Determination of furazolidone content — Method using high-performance liquid chromatography,

IDT)

Издание официальное

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП») на основе официального перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5. который выполнен Федеральным государственным унитарным предприятием «Российский научно-технический центр информации по стандартизации, метрологии и оценке соответствия» (ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ»)

2    ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 31 августа 2016 г. № 90-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны no МК (ИСО 3166) 001—97 Коя страны по МК (ИСО 3166) 004—97 Сокращенное наименование национальною органа по стандартизации Армении AM Минэкономики Республики Армения Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь Киргизия KG Кыргызстандарт Россия RU Россгандарт Таджикистан TJ Таджикстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 20 октября 2016 г. № 1462-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 14797-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2018 г.

5    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 14797:1999 «Корма для животных. Определение содержания фуразолидона. Метод с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии» («Animal feeding stuffs — Determination of furazolidone content — Method using high-performance liquid chromatography». IDT).

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 10 «Корма для животных» Технического комитета по стандартизации ТС 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001 (подраздел 3.6) для увязки с наименованиями. принятыми в существующем комплексе межгосударственных стандартов.

В настоящем стандарте заменены единицы измерения объема: «литр» на «дециметр кубический», «миллилитр» на «сантиметр кубический»—для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001, пункт 4.14.1.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

ГОСТ ISO 14797-2016

-    20 % от среднеарифметического значения результатов двух определений массовой доли фура-золидона от 4 % до 6 %.

12 Протокол испытания

Протокол испытания должен включать следующую информацию:

-    все детали, необходимые для полной идентификации пробы:

-    использованный метод отбора проб, если известен;

-    использованный метод испытаний со ссылкой на настоящий стандарт;

-    все детали операций, не установленных в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные. наряду с описанием всех случаев, которые могли повлиять на результат(ы) испытаний;

-    в случае определения повторяемости — конечный результат. ¹

Приложение А (справочное)

Пример хроматограммы

А — стандартный образец фураэолидона. 12,1 мкг/см³, В — холостая проба,

С — холостая проба корма с введенным контрольным веществом. 242 мгЛсг, D — проба (реальная)

Рисунок А. 1

Приложение В (справочное)

Результаты межлабораторных испытаний

Прецизионность данною метода была установлена в межлабораторных испытаниях, выполненных в соответствии с ISO 5725 [5)4 В этих испытаниях приняли участие 30 лабораторий из семи европейских стран, было испытано 14 проб (включая три холостые пробы). Пробы выбирали на основе информации об использовании материалов в ряде стран. Результаты приведены в таблицах В.1 и В.2.

Таблица В.1 — Статистические результаты межлабораторных испытаний кормов для животных

Проба1» 11араметр Р«6 Pi7 Ra9 Chll Oil 2 Cal3 Fi14 Число лабораторий, оставшихся после исключения выбросов 27 29 28 29 28 29 28 Среднее содержание фуразолидона. мг/кг 199 274 89 92 189 190 2853 Стандартное отклонение повторяемости s„ мг/кг 2.8 3.9 2.4 2.8 3.6 5.9 57.6 Коэффициент вариации повторяемости. % 1.4 1.4 2.7 3.0 1.9 3.1 2.0 Предел повторяемости г, (г = 2.8 s,). % 7.9 8.5 6.8 7.9 10.2 16.7 163.0 Стандартное отклонение воспроизводимости sH. мг/кг 9.9 12.1 6.9 7.4 10.6 13.6 173.4 Коэффициент вариации воспроизводимости. % 5.0 4.4 7.7 8.0 5.6 7.1 6.1 Предел воспроизводимости R (R = 2.8 sH). мг/кг 28.0 34.2 19.5 22.4 28.9 47.3 490.0

¹ Pi6 — корм для свиней с содержанием сульфадимидина натрия 400 мг/кг;

Pi7 — корм для свиней;

Ra9 — корм для кроликов с содержанием робенидина 66 мг/кг и флавофосфолипола 4 мг/кг;

Chi 1 — корм для бройлеров со средним содержанием жира, содержанием авогтарцина 15 мт/кг и салиноми-цина натрия 60 мг/кг;

СМ2 — корм для бройлеров с высоким содержанием жира, содержанием авогтарцина 15 мг/кг и салиноми-цина натрия 60 мт/кг;

Са13 — заменитель молока для телят с содержанием хлор тетрациклина 200 мг/кг;

Fi14 — корм для рыб.

Таблица В.2 — Статистические результаты межлабораторных испытаний премиксов для животных

Параметр Проба11 Р1 Р2 РЗ Р4 Число лабораторий, оставшихся после исключения выбросов 29 29 29 29 Среднее содержание фуразолидона. мг/кг 3.89 6.21 3.72 19.9 Стандартное отклонение повторяемости s„ мг/кг 0.14 0.20 0.22 0.38 Коэффициент вариации повторяемости. % 3.6 3.2 5.9 1.9 Предел повторяемости г(г= 2.8 s,). % 0.40 0,57 0.62 1.08 Стандартное отклонение воспроизводимости s*. мг/кг 0.26 0.45 0.30 0.82 Коэффициент вариации воспроизводимости. % 6.58 7.23 8.05 4.13 Предел воспроизводимости R(R = 2.8 s«). мг/кг 0.74 1.27 1.75 2.32

Р1 и Р2 — премиксы на основе кукурузной муки в качестве наполнителя; РЗ — премиксы на основе кукурузной муки в качестве наполнителя, с массовой долей сульфадимидина натрия 8 %; Р4 — премиксы на основе карбоната кальция в качестве наполнителя.

ISO 5725; 1986 (в настоящее время отменен) был использован для получения показателей прецизионности.

ГОСТ ISO 14797-2016

Приложение ДА (справочное)

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам

Таблица ДА.1

Обозначение ссылочного международного стандарта Степень соответствия Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта ISO 6498:1998 MOD ГОСТ 31218-2003 «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб» ISO 6498:2012 IDT ГОСТ ISO 6498-2014 «Корма, комбикорма. Подготовка проб для испытаний» Примечание — В настоящей таблице использованы следующие условные обозначения степени соответствия стандартов: -    IDT — идентичный стандарт; -    MOD — модифицированный стандарт.

Библиография

(1)    Keukens. H.J., Aerts, M.M.l. and Straling, К. (1994) (in press)

(2)    SOP A0520, State Institute for Quality Control of Agricultural Products (RIKILT-DLO). Agricultural Research Department, The Netherlands

(3)    Lowie, Jr.. D.M., Teague. Jr.. R.T.. Quick. F.E. and Foster, C.L. J. AOAC. 66. 1983. pp. 602—605

(4)    ISO 6497:2002, Animal feeding stuffs — Sampling

(5)    ISO 5725:1986. Precision of test methods — Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests

(6)    ISO 5725-1:1994. Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results —Part 1: General principles and definitions

(7)    ISO 5725-2:1994. Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 2. Basicmethod for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method

11

УДК 636.085.3:006.35    МКС    65.120    ЮТ

Ключевые слова: корма, комбикорма, комбикормовое сырье, премиксы, испытание, холостая проба, навеска, содержание, массовая доля, фуразолидон. высокоэффективная жидкостная хроматография, подтверждение, оценка

Редактор Н И Мигунова Технический редактор В Ю Фотоооа Корректор ИА Королева Компьютерная верстка И.А Налеикиной

Сдано в набор 24 10 2016 Подписано в печать 14.11.2016 Формат 60*84,%. Гарнитура А риал Уел печ л. 1.86 Уч.-иэд л. 1.68. Тираж 39 экз Зак. 2795 Подготовлено на основе электронной версии, предоставленном разработчиком стандарта

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995 Москва. Гранатный пер . 4 waw gostinfo.ru    mfo@gostinfo    ru

ГОСТ ISO 14797-2016

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе « Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — неофициальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ. 2016

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КОРМА. КОМБИКОРМА. КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Определение содержания фуразолидона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Feeds, mixed feeds, feed raw material.

Determination of furazolidone content by method of high-performance liquid chromatography

Дата введения — 2018—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и премиксы для животных и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для определения содержания фуразолидона.

Метод применим к кормам с содержанием фуразолидона от 25 до 5000 мг/кг и премиксам с массовой долей фуразолидона до 20 %.

Примечания

1    Содержание фуразолидона в кормах, комбикормах для животных и комбикормовом сырье выражают в миллиграммах на килограмм, а в премиксах — в процентах массовой доли.

2    Фуразолидон является химиотерапевтическим препаратом, принадлежащим к группе нитрофуранов. Нитрофураны являются бактериостатическими или бактерицидными препаратами, действующими против грампо-ложительных и трамог рицательных микроорганизмов и против некоторых плесеней и простейших.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на межгосударственные стандарты, которые являются обязательными. Для датированных ссылок применяют только указанное издание. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).

ISO 6498:1998. Animal feeding stuffs — Preparation of test sample. (Корма для животных. Подготовка проб)*

3 Сущность метода

Фуразолидон экстрагируют из пробы смесью ацетонитрила и метанола. Пробу корма предварительно смачивают водой. Экстракт пробы очищают, пропуская через колонку, наполненную окисью алюминия, и затем разбавляют водой. Экстракт премикса разбавляют смесью воды, ацетонитрила и метанола. Конечный экстракт анализируют методом ВЭЖХ с обратной фазой с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 365 нм (1)—[3].

* Стандарт заменен на ISO 6498:2012. однако, для однозначного соблюдения требования настоящего стандарта. выраженного в датированной ссылке, рекомендуется использовать только указанное в этой ссылке издание.

Изданио официальное

4    Реактивы

При анализе используют реактивы только признанной аналитической чистоты.

4.1    Вода, деминерализованная или деионизированная, с удельным электрическим сопротивлением 10 мОм см. или вода эквивалентной чистоты.

4.2    Растворитель для экстракции, смесь ацетонитрила с метанолом (в соотношении 1:1 по объему).

Соединяют равные объемы ацетонитрила и метанола. Тщательно перемешивают и перед использованием доводят до комнатной температуры.

4.3    Растворитель для разбавления, смесь растворителя для экстракции (см. 4.2) и воды (см. 4.1) (в соотношении 35:65 по объему).

Смешивают 350 см³ растворителя для экстракции (см. 4.2) и 650 см³ воды (см. 4.1).

4.4    Уксусная кислота (СН₃С0₂Н) с объемной долей 10%.

Доводят 10 см³ ледяной уксусной кислоты водой (см. 4.1) до 100 см³.

4.5    Буферный раствор ацетата натрия. c(CH₃C0₂Na) = 0,01 моль/дм³, pH = 6.0 ед. pH.

Взвешивают 0.82 г ацетата натрия и помещают в мерную колбу с одной отметкой вместимостью

1000 см³. Растворяют в 700 см³ воды. Регулируют значение pH до 6.0 ед. pH с помощью уксусной кислоты (см. 4.4). Доводят до метки водой и перемешивают.

4.6    Подвижная фаза для ВЭЖХ

Соединяют 800 см³ буферного раствора ацетата натрия (см. 4.5) и 200 см³ ацетонитрила и перемешивают. Фильтруют элюент через фильтр 0.22 мкм с помощью фильтровальной системы растворителя (см. 5.2) и перед применением дегазируют в течение 10 мин в ультразвуковой ванне (см. 5.3).

4.7    Стандартный образец фуразолидона*: М-(5-нитро-2-Фурфурилиден)-3-амино-2-оксазолидон.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Ввиду чувствительности фуразолидона к свету, все операции рекомендуется проводить в темноте. Необходимо избегать вдыхания и воздействия токсичного фуразолидона и растворов на его основе. Работу с ними следует проводить в вытяжном шкафу, а также надевать защитные очки и защитную одежду.

4.8    Исходный раствор фуразолидона (массовой концентрации приблизительно 250 мкг/см³)

Взвешивают25 ± 1 мгфуразолидона(см.4.7)сзаписьюрезультатадо0,1 мг и помещают в мерную

колбу с одной отметкой вместимостью 100 см³. Растворяют в растворителе для экстракции (см. 4 2). доводят до метки и перемешивают. Рассчитывают концентрацию с учетом чистоты стандартного образца. Готовят каждый месяц свежий раствор. Хранят в темном месте при температуре от 0 ^ФС до 8 °С.

4.9    Рабочие растворы фуразолидона (массовой концентрации приблизительно 5 мкг/см³ и

12.5 мкг/см³)

4.10    Нейтральная окись алюминия, активность 1.

Примечание — Для полной дезактивации потребуется от 0 % до 1 % воды.

5    Оборудование

Используют следующее лабораторное оборудование:

5.1    рН-метр.

5.2    Система фильтрования растворителя, аппарат целиком из стекла, подходящий для фильтров 0,22 мкм.

5.3    Ультразвуковая ванна.

5.4    Роторный встряхиватель с горизонтальным вращением и частотой вращения от 250 до 300 об/мин.

5.5    Фильтр из микростекловолокна диаметром 15 см.

5.6    Стекловата.

5.7    Колонка для хроматографии стеклянная, длина 30 см, внутренний диаметр 10 мм, закрытая на конце стекловатой (см. 5.6).

5.8    Система фильтрования, оснащенная фильтрами из поли(винилиденфторида) (PVDF) или политетрафторэтилена (PTFE) с размером пор 0,45 мкм.

* Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта, номер CAS 67-45-8 согласно Реестру химических соединений Американского химического общества. ²

ГОСТ ISO 14797-2016

5.9    Система ВЭЖХ. включающая следующее:

5.9.1    Насос, без пульсаций, обеспечивающий объемную скорость подачи от 0.1 до 2.0 см³/мин.

5.9.2    Система ввода пробы, с петлей, подходящая для инъекций от 20 до 50 мк/дм³.

5.9.3    УФ-детектор. пригодный для измерений при длине волны 365 нм.

Для подтверждения можно использовать, если имеется, диодно-матричный детектор.

5.9.4    Устройство записывающее.

5.9.5    Предколонка: заполнена силикгелем С₁₈, размер частиц от 37 до 100 мкм, длина предколонки 20 мм. внутренний диаметр 3.9 мм или предколонка с аналогичными характеристиками.

5.9.6    Колонка аналитическая: заполнена силикгелем С₁₈. размер частиц 5 мкм. длина колонки 200 мм. внутренний диаметр 3,0 мм или аналитическая колонка с аналогичными характеристиками.

Для фуразолидона коэффициент емкости К' должен составлять не менее 1.0.

Примечание — Коэффициент емкости определяют по формуле

#С= — — 1.    <’>

*0

где К" — коэффициент емкости;

—    время удерживания фуразолидона. мин;

—    время удерживания неадсорбируемого фуразолидона. мин.

5.10    Шприц однократного применения вместимостью 5 см³.

6    Отбор проб

Отбор проб не является частью метода, устанавливаемого настоящим стандартом.

Рекомендуемый метод отбора проб описан в ISO 6497 [4).

Важно, чтобы лаборатория получила пробу, которая действительно является представительной и не имеет повреждений или изменений, полученных в ходе транспортирования или хранения.

7    Подготовка пробы

Пробу готовят в соответствии с ISO 6498.

Лабораторную пробу (600 г) измельчают так. чтобы она полностью проходила через сито с размером стороны ячейки 1 мм. Тщательно перемешивают.

8    Проведение анализа

8.1    Общие положения

Вместе с анализом пробы (или серии проб) анализируют холостую пробу, холостую пробу с дополнительно введенным контрольным веществом и. если имеется, стандартный образец.

Примечание — Холостыми пробами являются гомогенаты сопоставимых кормов с содержанием фуразолидона менее 10 мг/кг. Холостые пробы с дополнительно введенным контрольным веществом представляют собой холостые пробы кормов, к которым добавляют фураэолидон. Холостые пробы и стандартные образцы можно хранить в течение одного года при температуре от 0 "С до 8 *С.

Если восстановление меньше 94 % или выше 106 %. анализ следует повторить.

8.2    Приготовление холостой пробы с дополнительно введенным контрольным

веществом — фуразолидоном

Содержание фуразолидона в пробе с дополнительно введенным контрольным веществом должно быть приблизительно равно ожидаемому содержанию фуразолидона в анализируемой пробе. Для пробы с дополнительно введенным контрольным веществом с содержанием фуразолидона 250 мг/кг используют следующую процедуру.

Пипеткой переносят 5.0 см³ исходного раствора фуразолидона (см. 4.8) в коническую колбу вместимостью 250 см³. В токе азота выпаривают раствор примерно до объема 0,5 см³ и добавляют 5 г холостой пробы корма. Тщательно перемешивают и перед началом экстракции дают отстояться в течение не менее 10 мин (см. 8.3).

8.3 Экстракция

8.3.1    Корма с содержанием фуразолидона от 25 до 2500 мг/кг включительно

Навеску (5,00 г 0,05) г подготовленной анализируемой пробы помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³. Добавляют 15,0 см³ воды и дают отстояться в течение 5 мин. Добавляют 35.0 см³ растворителя для экстракции (см. 4.2), закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 30 мин на роторном встряхивателе (см. 5.4). Раствор фильтруют через фильтр из микростекловолокна (см. 5.5) и используют фильтрат для хроматографии на колонке согласно 8.4.

8.3.2    Корма с содержанием фуразолидона свыше 2500 до 5000 мг/кг включительно

Навеску (5,0 г 0,1) г подготовленной анализируемой пробы помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³. Добавляют 30.0 см³ воды и дают отстояться в течение 5 мин. Добавляют 70.0 см³ растворителя для экстракции (см. 4.2), закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 30 мин на роторном встряхивателе (см. 5.4). Раствор фильтруют через фильтр из микростекловолокна (см. 5.5) и используют фильтрат для хроматографии на колонке согласно 8.4.

8.3.3    Премиксы с массовой долей фуразолидона от 0,5 % до 7 % включительно

Навеску (1,00 г 0,01) г подготовленной анализируемой пробы премикса помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³. Добавляют 100,0 см³ растворителя для экстракции (см. 4.2). закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 30 мин на роторном встряхивателе (см. 5.4). Раствор фильтруют через фильтр из микростекловолокна (см. 5.5).

Разбавляют фильтрат растворителем для разбавления (см. 4.3), чтобы получить конечный раствор с массовой концентрацией фуразолидона от 5 до 10 мкг/см³. Коэффициент разбавления f.

Тщательно перемешивают и фильтруют с помощью системы фильтрования (см. 5.8). Фильтрат используют для анализа ВЭЖХ согласно 8.5.

Примечание — Требуемый коэффициент разбавления f вычисляют по формуле

f

• \Лр,

где /_в — рассчитанный коэффициент разбавления, который требуется для экстракта пробы;

т — масса навески, г; w_Mp — ожидаемое содержание фуразолидона в пробе, мг/кг;

Р_г — требуемая концентрация фуразолидона в конечном растворе, мкг/см³;

V — общий обьем растворителя для экстракции, добавленного к навеске (см. примечание к 8.5.2), см³.

8.3.4 Премиксы с массовой долей фуразолидона свыше 7 % до 10 % включительно

Навеску (1.00 г 0.01) г подготовленной анализируемой пробы премикса помещают в коническую колбу вместимостью 500 см³. Добавляют 200,0 см³ растворителя для экстракции (см. 4.2), закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 30 мин на роторном встряхивателе (см. 5.4). Раствор фильтруют через фильтр из микростекловолокна (см. 5.5).

Разбавляют фильтрат растворителем для разбавления (см. 4.3), чтобы получить конечный раствор с массовой концентрацией фуразолидона от 5 до 10 мкг/см³. Вычисляют коэффициент разбавления f.

Тщательно перемешивают и фильтруют с помощью системы фильтрования (см. 5.8). Фильтрат используют для анализа ВЭЖХ согласно 8.5.

Примечание — Вычисление коэффициента разбавления — по примечанию к 8.3.3.

8.3.5 Премиксы с массовой долей фуразолидона от 10 % до 20 % включительно

Навеску (0,500 г 0,005) г подготовленной анализируемой пробы премикса помещают в коническую колбу вместимостью 500 см³. Добавляют 200.0 см³ растворителя для экстракции (см. 4,2), закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 30 мин на роторном встряхивателе (см. 5.4). Раствор фильтруют через фильтр из микростекловолокна (см. 5.5).

Разбавляют фильтрат растворителем для разбавления (см. 4.3), чтобы получить конечный раствор с массовой концентрацией фуразолидона от 5 до 10 мкг/см³. Вычисляют коэффициент разбавления /.

Тщательно перемешивают и фильтруют с помощью системы фильтрования (см. 5.8). Фильтрат используют для анализа ВЭЖХ согласно 8.5.

Примечание — Вычисление коэффициента разбавления по примечанию к 8.3.3.

4

ГОСТ ISO 14797-2016

8.4    Хроматография на колонке

Для каждого экстракта пробы сушат наполнитель стеклянной колонки (см. 5.7), нижняя часть которой закрыта пробкой из стекловаты (см. 5.6) с помощью 4 г окиси алюминия (см. 4.10). В колонку вводят 20 см³ экстракта, подготовленного в соответствии с 8.3.1 или 8.3.2, и первые 4 см³ элюата отбрасывают. Собирают следующие 8 см³ элюата в небольшой мерный цилиндр.

Пипеткой переносят 5.0 см³ элюата в мерную колбу содной отметкой вместимостью 5 см³ и доводят до метки водой. Тщательно перемешивают.

При необходимости раствор разбавляют растворителем для разбавления (см. 4.3), чтобы получить конечный раствор с массовой концентрацией фуразолидона от 5 до 10 мкг/см³. Вычисляют коэффициент разбавления(

Разбавленные растворы фильтруют с помощью системы фильтрования (см. 5.8). Фильтрат используют для анализа методом ВЭЖХ согласно 8.5.

8.5    Анализ методом ВЭЖХ

8.5.1    Условия проведения ВЭЖХ

Используют следующие условия проведения ВЭЖХ:

-    объемная скорость подачи подвижной фазы (см. 4.6): 0.6 см³/мин;

-    объем вводимой пробы: 20 мк/дм³:

-    длина волны: 365 нм:

-    регистрирующее устройство: 10 мВ;

-    скорость диаграммной ленты: 0,5 см/мин.

8.5.2    Проведение анализа

8.5.2.1    Вводят рабочие растворы фуразолидона (см. 4.9), пока не получат стабильную базовую линию и воспроизводимые высоты пиков или площади пиков. Для высоты или площади пика разность между наибольшим и наименьшим результатом должна быть меньше 5 % от среднего результата трех последовательных вводов проб.

Пик фуразолидона должен быть симметричным (f_at менее 2).

Примечание — f_at — полуширина пика за перпендикулярной линией (высотой) пика, деленная на полуширину пика перед перпендикулярной линией (высотой) пика. измерение на 10 % высоты этого пика.

Должна иметься пропорциональная связь (в пределах 5 %) между концентрацией и высотами пиков двух рабочих растворов фуразолидона. Если обнаружено расхождение, превышающее 5 %. необходимо приготовить новые рабочие растворы фуразолидона.

Вводят экстракты холостой пробы и холостой пробы с введенным контрольным веществом. Если пик фуразолидона несимметричен или не полностью отделяется от пиков матрицы — корма, необходимо использовать другую колонку ВЭЖХ или отрегулировать хроматографические условия, увеличив или уменьшив содержание воды в подвижной фазе (см. 4.6).

Последовательно вводят рабочие растворы фуразолидона (см. 4 9). пять экстрактов пробы и рабочие растворы фуразолидона (см. 4.9). Повторяют эту последовательность, если необходимо, для других экстрактов проб в серии.

Наблюдаемые высоты пиков или площади пиков для рабочих растворов фуразолидона должны попасть в интервал 5 % от результатов рабочих растворов фуразолидона, введенных раньше.

Пример хроматограммы представлен в приложении А. По хроматограмме фуразолидона можно рассчитать значение коэффициента емкости /С, равное 2,1 (см. примечание к 5.9.6).

8.5.2.2    Если содержание фуразолидона в премиксе очевидно ниже, чем ожидаемое (с учетом допуска), то рекомендуется повторить анализ с дополнительным объемом 50 см³ растворителя для экстракции (см. 4.2) к примененному в 8.3.3,8.3.4 или 8.3.5.

Если новый результат более чем на 15 % выше первоначального значения, анализ следует повторить со следующим дополнительным объемом 50 см³ растворителя для экстракции (см. 4.2). Такое добавление следует повторять, пока расхождение результатов последовательных определений не будет менее 15%.

9 Подтверждение

9.1 Общие положения

Если идентичность вещества, давшего пик на хроматограмме, вызывает сомнения, основанные на форме пика или полученном результате, то идентичность определенного аналита подтверждают либо ⁴

применением совместной хроматографии, либо с помощью диодно-матричного детектора. В первом случае поступают по 9.2, во втором случае — по 9.3.

9.2    Совместная хроматография

Готовят экстракт пробы с введенным контрольным веществом, добавляя соответствующий объем рабочего раствора фуразолидона (см. 4.9) в экстракт пробы. Количество добавленного фуразолидона должно приблизительно равняться предполагаемому количеству фуразолидона в экстракте пробы.

Анализируют экстракт пробы, рабочий раствор фуразолидона (см. 4.9) и экстракт пробы с введенным контрольным веществом. На хроматограмме пик экстракта пробы с введенным контрольным веществом должен увеличиваться, при этом его высота должна увеличиться пропорционально уровню добавленного вещества, а ширина пика на середине высоты должна увеличиться не более чем на :10 % от первоначальной ширины.

Далее определяют содержание фуразолидона в соответствии с разделом 10.

9.3    Диодно-матричный детектор

9.3.1    Условия

Условия установлены в 8.5.1. но вместо УФ-детектора используют диодно-матричный детектор со следующими параметрами:

Наименование параметра    Значение    параметра

Длина волны пробы............... 365 нм;

Ширина полосы пробы.............4 мм (т. е. длина волны (365 ± 2) нм);

Опорная длина волны............. 450 нм;

Опорная ширина полосы...........100 нм;

Спектральный диапазон............от 225 до 400 нм;

Спектр.......................базовая    линия, верхняя точка, точки перегиба

наклона вверх и наклона вниз.

9.3.2    Проведение анализа

Дают системе стабилизироваться. Вводят рабочий раствор фуразолидона массовой концентрации 5 мкг/см³ (см. 4.9). вызывающие сомнение экстракты проб и снова рабочий раствор фуразолидона массовой концентрации 5 мкг/см³ (см. 4.9). Записывают спектр у базовой линии, точки перегиба вверх по наклону и вниз по наклону и вершину пика. Хранят все данные.

9.3.3    Оценка

Строят на одном рисунке нормализованные разностные спектры (проба — базовая линия) пика пробы, записанного у вершины и в точках перегиба вверх по наклону и вниз по наклону. Строят на одном рисунке нормализованные спектры пика пробы и пика рабочего раствора фуразолидона. записанные в вершине пика.

9.3.4    Критерии подтверждения

Идентичность фуразолидона подтверждается, если удовлетворены следующие критерии:

a)    Время удерживания пробы должно быть равно времени удерживания стандарта (г5 %). Если возникают сомнения, необходимо выполнить добавление стандарта (добавление к пробе стандартного образца).

b)    Оценивают чистоту пика пробы на основе соответствия разностных спектров, записанных в верхней точке и в точках перегиба вверх по наклону и вниз по наклону пика. При каждой длине волны относительное поглощение должно быть равно для всех спектров (в пределах до 15 %).

c)    При длине волны выше 220 нм разностные спектры пиков пробы и стандарта, записанные в верхней точке пика, не должны визуально отличаться для тех частей спектров, где относительное поглощение составляет не менее 10 %. Этот критерий удовлетворяется, когда одни и те же максимумы присутствуют в пределах интервала, определенного разрешением системы детектирования (обычно от 2 до 4 нм). Ни в одной из наблюдаемых точек не допускается превышение отклонения 15 % от поглощения анализируемого стандарта приданной конкретной длине волны более чем на 15%.

10 Обработка результатов

10.1 Общие положения

Определяют содержание фуразолидона в экстракте пробы сопоставлением высоты пика (или площади пика) хроматограммы экстракта пробы со средними значениями высот или площадей рабочего раствора фуразолидона, введенного до и после экстракта пробы. Используют результаты, полученные с рабочим раствором фуразолидона. более близкие по содержанию фуразолидона. ⁵

1

2

3

4

5