ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

ПИЩЕВАЯ ПРОДУКЦИЯ С БОЛЬШИМ СОДЕРЖАНИЕМ ЖИРА

Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ) Часть 3

Методы очистки

ХАРЧОВАЯ ПРАДУКЦЫЯ 3 ВЯЛ1К1М ЗМЯШЧЭННЕМ ТЛУШЧУ

Вызначэнне пестыцыдау i пол1хпараваных б1феншау (ПХБ) Частка 3 Метады ачыстм

(EN 1528-3:1996, IDT)

Настоящий государственный стандарт ГОСТ EN 1528-3-2014 идентичен EN 1528-3:1996 и воспроизведен с разрешения CEN/CENELEC, Avenue Mamix 17, В-1000 Brussels. Все права по использованию европейских стандартов в любой форме и любым способом сохраняются во всем мире за CEN/CENELEC и его национальными членами, и их воспроизведение возможно только при наличии письменного разрешения CEN/CENELEC в лице Государственного комитета по стандартизации Республики Беларусь.

Издание официальное

<ЯБ

Предисловие

Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (ЕАСС) представляет собой региональное объединение национальных органов по стандартизации государств, входящих в Содружество Независимых Государств. В дальнейшем возможно вступление в ЕАСС национальных органов по стандартизации других государств.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Порядок разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт метрологии» (БелГИМ)

2    ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол 73-П от 22 декабря 2014 г.)

За принятие стандарта проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Армения AM Минэкономики Республики Армения Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь Кыргызстан KG Кыргызстандарт Молдова MD Молдова-Стандарт Таджикистан TJ Таджикстандарт Узбекистан UZ Узстандарт

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 1528-3:1996 Bestimmung von Pesti-ziden und polychlorierten Biphenylen (PCB) - Fettreiche Lebensmittel - Bestimmung von Pestiziden und po-lychlorierten Biphenylen (PCB) - Teil 3: Reinigungsverfahren (Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ). Часть 3. Метод очистки).

Европейский стандарт EN 1528-3:1996 разработан техническим комитетом по стандартизации CEN/TC 275 «Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы» Европейского комитета по стандартизации (CEN).

Перевод с немецкого языка (de).

Официальные экземпляры европейского стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международного и европейских стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Национальном фонде ТИПА.

В стандарт внесены следующие редакционные изменения: единица измерения литр (л) заменена на кубический дециметр (дм³); единица измерения миллилитр (мл) заменена на кубический сантиметр (см³).

В разделе «Нормативные ссылки» и тексте стандарта ссылки на международный и европейские стандарты актуализированы.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным европейским стандартам приведены в дополнительном приложении Д.А.

Степень соответствия — идентичная (ЮТ)

© Госстандарт, 2015

Настоящий стандарт не может быть воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта Республики Беларусь

ГОСТ EN 1528-3-2014

7.5    Проведение испытания

7.5.1    Экстракция жира, пестицидов и ПХБ

20 г тщательно измельченной и перемешанной пробы взвешивают в лабораторном стакане измельчителя, 40 г сульфата натрия (7.3.5) смачивают петролейным эфиром (7.3.1) и добавляют к пробе. Перемешивают смесь в течение 20 мин с помощью стеклянной палочки. Дают отстояться и вновь перемешивают. После добавления 100 см³ петролейного эфира смесь гомогенизируют в течение 1-2 мин. Пробу центрифугируют в течение 1-2 мин со скоростью 2000 об/мин для получения прозрачного экстракта петролейного эфира. Экстракт фильтруют через ворону, содержащую тампон из стекловаты и 20 г сульфата натрия, в мерную колбу вместимостью 250 см. Затем при перемешивании стеклянной палочкой к пробе добавляют еще 100 см³ петролейного эфира и экстрагируют аналогичным образом. Экстракт добавляют в ту же колбу вместимостью 250 см³, содержимое доливают петролейным эфиром до метки и тщательно перемешивают. Переносят 25 см³ этого раствора во взвешенную плоскодонную колбу вместимостью 100 см³. Помещают плоскодонную колбу в кипящую водяную баню для удаления растворителя, а затем охлаждают. После взвешивания определяют содержание жира в пробе.

В пробе с рыбой, содержащей менее 10 % жира, из мерной колбы вместимостью 250 см³ переносят 25 см³ содержимого в испаритель Kurderna-Danish вместимостью 125 см³. В пробе с рыбой, содержащей более 10 % жира, из мерной колбы отбирают количество раствора, содержащее не более 200 мг жира. Добавляют центры кипения (7.3.7), концентрируют раствор на кипящей водяной бане до объема 3 см³; затем охлаждают и удаляют колонку Snyder (7.4.5). Дважды прополаскивают испаритель 1 см³ петролейного эфира и концентрируют раствор в потоке воздуха до 3 см³, а затем переносят на колонку с Florisil®.

7.5.2    Хроматография на колонке с Florisil®

В хроматографическую колонку (7.4.1) помещают 4 г Florisil® (7.3.6) и закрывают слоем сульфата натрия толщиной 2 см (7.3.5). Хроматографическую колонку промывают 20 - 25 см³ петролейного эфира (7.3.1), оставляя его на высоте 1 см над слоем сульфата натрия.

Как только раствор достигнет метки, испарительную колбу объемом 125 см³ (7.4.2) ставят под колонку. Раствор, полученный по 7.5.1, наносят на колонку, промывают колбу 1 см³ петролейного эфира и добавляют его в колонку. Растворитель не должен опускаться ниже метки, для этого кран периодически закрывают. Добавляют 35 см³ смеси элюентов А (7.3.3) для элюирования ПХБ, а также ДДТ и его аналогов.

Как только уровень растворителя достигнет метки, заменяют испарительную колбу и добавляют в колонку 35 см³ смеси элюентов В (7.3.4), чтобы элюировать такие соединения, как диэлдрин и эндрин. После добавления пористого материала для поддержания равномерного кипения обе колбы присоединяют к колонке Snyder (7.4.5) и осторожно концентрируют каждый элюат в водяной бане. Испарительную колбу охлаждают, удаляют колонку Snyder и осторожно концентрируют раствор с помощью слабого потока азота до объема, необходимого для газохроматографического определения. Фракции, которые содержат смесь ПХБ с хлорсодержащим соединением, такие как ДДЕ, требуют дополнительной очистки.

7.6    Определение

Определение проводят в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 7) и EN 1528-4:1996 (раздел 4).

7.7    Сведения о результатах

Результаты должны оцениваться в соответствии с EN 1528-1:1996 (разделы 9-11).

7.8    Отчет об испытаниях

Результаты испытаний должны быть представлены в отчете в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 12). ¹

8 Метод D. Колоночная хроматография с частично дезактивированным Florisil® (Stijve) [4]

8.1    Область применения

Данный метод применяется для определения 20 хлорорганических пестицидов и метаболитов, основных индикаторных конгенеров ПХБ и 6 фосфорорганических пестицидов (см. EN 1528-1:1996, приложение А). Метод представляет собой ускоренный скрининг для серии проб, поскольку требуется лишь один этап очистки. Для некоторой пищевой продукции содержащийся в ней жир не должен экстрагироваться отдельно, так как операция экстрагирования жира совпадает с операцией очистки в колоночной хроматографии. Однако при определении незначительного содержания остатка может потребоваться дополнительный этап очистки.

8.2    Сущность метода

Экстракцию жира, включая остатки, проводят по методу, изложенному в EN 1528-2:1996. Концентрируют экстракт до сухого остатка, который растворяют в петролейном эфире. Очищают раствор на Florisil®-KonoHKe с помощью петролейного эфира/дихлорметана в качестве элюента. При анализе молока, молочных изделий, яиц, яичного порошка, шоколада или аналогичных продуктов навеску образца, содержащую до 1 г жира с Florisil®, и подают смесь в Florisil®-KonoHKy так, чтобы одновременно экстрагировался жир и очищался экстракт. В обоих случаях элюат для газохроматографического анализа концентрируют до сухого остатка, который растворяют в петролейном эфире.

8.3    Реактивы и вспомогательные вещества

Все реактивы и вспомогательные вещества должны быть пригодными для анализа остатков пестицидов и ПХБ и соответствовать EN 1528-1:1996 (раздел 4). При необходимости очистки применяют процедуры, приведенные в приложении А.

8.3.1    Петролейный эфир с температурой кипения от 40 °С до 60 °С.

8.3.2    Дихпорметан.

8.3.3    Смесь элюентов: петролейный эфир (8.3.1) и дихлорметан (8.3.2), объемное отношение 4: 1 (об/об).

8.3.4    Изооктан.

8.3.5    Florisil®, от 150 до 250 мкм (от 60 до 100 меш).

В течение ночи нагревают при температуре 500 °С и после охлаждения хранят в плотно закрытой емкости. Перед использованием нагревают в течение 5 ч при температуре 130 °С, охлаждают, затем добавляют 3 части дистиллированной воды к 97 частям Florisil® (м/м). Встряхивают смесь в течение 20 мин и в течение 10 - 12 ч хранят в плотно закрытой емкости. Используют в течение 3 дн.

8.3.6    Стекловата, тщательно экстрагированная с дихлорэтаном и высушенная при температуре 130 °С.

8.4 Оборудование

Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.

8.4.1    Хроматографическая колонка длиной 25 см, с внутренним диаметром 22 мм, со стеклянной фриттой или тампоном из стекловаты, краном из политетрафторэтилена или стекла и резервуаром для раствора вместимостью 300 см³.

8.4.2    Хроматографическая колонка длиной 20 см, с внутренним диаметром 8 мм, со стеклянной фриттой или краном из политетрафторэтилена или стекла и резервуаром вместимостью 30 см³.

8.4.3    Ротационный испаритель с круглодонной колбой вместимостью 500 см³ и водяной баней с регулируемой температурой от 20 °С до 50 °С.

8.4.4    Мерные колбы необходимой номинальной вместимостью 5, 10 или 20 см³.

8.5 Проведение испытания

8.5.1    Экстракция жира, пестицидов и ПХБ

8.5.1.1    Общие сведения

Общие методы должны быть выполнены по EN 1528-2:1996. Специальные методы должны быть выполнены по 8.5.1.2 - 8.5.1.6.

ГОСТ EN 1528-3-2014

8.5.1.2    Молоко и сгущенное молоко без сахара

Взвешивают 10 г пробы в стеклянном стакане вместимостью 250 см³ и добавляют малыми порциями 25 г Florisil® (8.3.5). Во время добавления Florisil® непрерывно перемешивают с помощью стеклянной палочки до однородного состояния и без комков.

8.5.1.3    Сгущенное молоко с сахаром

Тщательно размешивают 10 г пробы с 5 см³ дистиллированной воды. В дальнейшем опыт проводят по 8.5.1.2 с добавлением 25 г Florisil® (8.3.5).

8.5.1.4    Сухое молоко и детское питание на молочной основе

Полностью растворяют 3 г пробы в 10 см³ дистиллированной воды при температуре 40 °С. В дальнейшем опыт проводят по 8.5.1.2 с добавлением 25 г Florisil® (8.3.5).

8.5.1.5    Яйца

Разбивают яйца в стеклянный стакан. Скорлупу выбрасывают, а содержимое гомогенизируют. Тщательно перемешивают 2 - 5 г содержимого с 5 - 8 см³ дистиллированной воды. В дальнейшем опыт проводят по 8.5.1.2 с добавлением 25 г Florisil® (8.3.5).

8.5.1.6    Яичный порошок, порошок какао, шоколад

В зависимости от содержания жира тщательно перемешивают 1 - 3 г пробы с 10 см³ теплой дистиллированной воды. В дальнейшем опыт проводят по 8.5.1.2 с добавлением 25 г Florisil® (8.3.5).

8.5.2    Хроматография на колонке с Florisil®

В хроматографическую колонку со стекловатой (8.4.1) вносят 100 см³ петролейного эфира (8.3.1) и медленно добавляют 25 г Florisil® (8.3.5). После осаждения Florisil® петролейный эфир спивают до уровня на 5 мм выше уровня заполнения колонки. Растворяют 0,5 - 1 г жира или масла или экстрагированного жира в 10 см³ петролейного эфира, количественно переносят раствор в колонку и сливают растворитель до верхнего уровня заполнения колонки.

При исследовании молока, молочных продуктов, яиц, яичного порошка, порошка какао, шоколада или подобных продуктов, берут смесь образца и Florisil®, подготовленного как описано в 8.5.1.2 -

8.5.1.6 и вносят в колонку приблизительно в 50 см³ петролейного эфира. Затем элюируют 300 см³ смеси растворителей (8.3.3) с максимальной скоростью 5 см³/мин и собирают элюат в круглодонную колбу вместимостью 1000 см³. Элюат упаривают на ротационном испарителе до 50 см , концентрат переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ и концентрируют приблизительно до 5 см³. Оставшийся растворитель удаляется с помощью слабого потока азота. Содержимое, оставшееся после упаривания переносят небольшими порциями петролейного эфира в мерную колбу или градуированную пробирку и доводят петролейным эфиром до определенного объема, например 5 см³.

Примечание 1 — Элюат не должен испаряться до сухого остатка в потоке азота. Оставшиеся пары петролейного эфира не влияют на результат, так как дихлорметан при этом процессе практически полностью удаляется.

Примечание 2 — При исследовании различных хлорорганических пестицидов пробы целесообразно обрабатывать по методу, изложенному в [9], с применением силикагеля вместо Florisil®.

8.5.3    Хроматография на колонке с Florisil®. Миниатюризированный способ

С целью экономии колоночная хроматография по 8.5.2 может проводиться в случаях, когда требуется минимальное количество - только десятая часть Florisil® (8.3.5) и растворителей [10].

Взвешивают около 1,0 г жира или экстрагированной жировой части с точностью до 10 мг в мерной колбе вместимостью 20 см³. Растворяют пробу в петролейном эфире (8.3.1), доводят раствор петролейным эфиром до метки и, встряхивая, хорошо перемешивают. В хроматографическую колонку

(8.4.2), которая содержит 15 см³ петролейного эфира, медленно добавляют 3,0 г Florisil®. Чтобы достичь равномерной плотности, следует постучать стеклянной палочкой по стенкам хроматографической колонки. После выпадения Florisil® в осадок спивают петролейный эфир до уровня 5 мм над уровнем заполнения колонки. С помощью пипетки вместимостью 2 см³ добавляют аликвоту жирового раствора (соответствует 100 мг пробе) в Florisil®-KonoHKy.

Примечание — Полное элюирование должно проводиться в течение менее 15 мин.

Собирают элюат в колбе вместимостью 100 см³ и концентрируют на ротационном испарителе до 2 см³, остаток растворителя удаляют мягким потоком азота; к остатку с помощью пипетки вместимостью 2 см³ добавляют 2,00 см³ изооктана; перемешивают содержимое колбы, переворачивая ее. ²

8.6    Определение

Определение проводят в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 7) и EN 1528-4:1996 (раздел 4).

8.7    Сведения о результатах

Результаты должны оцениваться в соответствии с EN 1528-1:1996 (разделы 9-11).

8.8    Отчет об испытаниях

Результаты испытаний должны быть представлены в отчете в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 12).

9 Метод Е. Колоночная хроматография с частично дезактивированным оксидом алюминия (Greve и Grevemstik) [5]

9.1    Область применения

Данный метод применяется для определения содержания 20 хлорорганических пестицидов и метаболитов, индикаторных конгенеров ПХБ (см. EN 1528-1:1996, приложение А). Метод не применяют в случаях, если содержание ПХБ выше 0,5 см³/кг. Определение р-эндосульфата не удовлетворительное.

9.2    Сущность метода

Экстракцию из пробы жира, включая остатки, производят по методу, изложенному в EN 1528-2:1996. Концентрируют экстракт до сухого остатка, который растворяют в петролейном эфире. Хроматографируют раствор на колонке на основе оксида алюминия с помощью петролейного эфира в качестве элюента. Концентрируют элюат для газохроматографического анализа.

9.3    Реактивы и вспомогательные вещества

Реактивы и вспомогательные вещества должны быть пригодными для анализа пестицидов и ПХБ и соответствовать EN 1528-1:1996 (раздел 4). При необходимости очистки применяются процедуры, приведенные в приложении А.

9.3.1    Ацетон.

9.3.2    Петролейный эфир с температурой кипения от 40 °С до 60 °С.

9.3.3    Сульфат натрия гранулированный, безводный; нагревают в течение 2 ч при температуре 550 °С.

9.3.4    Оксид алюминия основной, активность по Брокману (= 1 % воды).

Для хроматографии к 100 весовым частям оксида алюминия добавляют 8,8 весовых частей воды, встряхивают смесь до исчезновения комков и оставляют на 24 ч. Содержание воды в конечном продукте должно составлять 9,0 %. Активность продукта следует проверять стандартным раствором р-гексахлорциклогексана (Р-НСН). Обнаружение должно быть 99 % или более.

9.4    Оборудование

Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.

9.4.1    Испаритель растворителя (Kuderna-Danish или аналогичный).

9.4.2    Высокопроизводительный измельчитель, устойчивый к растворителям и со взрывозащищенным двигателем.

9.4.3    Центрифуга со взрывозащитой, стакан для центрифугирования вместимостью 200 см³, с частотой вращения 1000 - 3000 об/мин.

9.4.4    Хроматографическая колонка длиной 17,5 см, с внутренним диаметром 6 мм, с краном из политетрафторэтилена и резервуаром для раствора вместимостью 25 см³.

9.5 Проведения испытания

9.5.1    Экстракция жира, пестицидов и ПХБ

9.5.1.1    Общие положения

Общий метод проводят по EN 1528-2:1996. Специальные методы проводят по 9.5.1.2 - 9.5.1.4.

ГОСТ EN 1528-3-2014

9.5.1.2    Масло

Нагревают масло в течение 4 - 8 ч при температуре 65 °С до полного выделения жира. Фильтруют жир через сухой теплый бумажный фильтр и растворяют в таком количестве петролейного эфира

(9.3.2), чтобы раствор содержал от 40 до 50 мг/см³ жира.

9.5.1.3    Молоко

В стакане измельчителя смешивают 40 см³ молока с 80 см³ ацетона (9.3.1) и 80 см³ петролейного эфира (9.3.2). Смесь центрифугируют. Фильтруют аликвотную часть, например 10 см³, через тонкий спой сульфата натрия (9.3.3) и промывают сульфат натрия небольшим количеством петролейного эфира. Концентрируют раствор в испарителе таким образом, чтобы раствор содержал от 35 - 50 мг жира на 1 см³.

9.5.1.4    Сыр

В стакане измельчителя смешивают 20 - 25 г сыра с 50 см³ петролейного эфира (9.3.2). Фильтруют раствор через сульфат натрия (9.3.3) и промывают сульфат натрия небольшим количеством петролейного эфира. Концентрируют раствор в испарителе таким образом, чтобы раствор содержал 35 - 50 мг жира на 1 см³.

9.5.2 Хроматография на колонке с оксидом алюминия

В хроматографическую колонку (9.4.4) с небольшим тампоном из кварцевого войлока вводят 4,0 г дезактивированного оксида алюминия (9.3.4). Для достижения равномерного наполнения колонки производят постукивание по стенкам колонки.

Добавляют в колонку 2 см³ раствора, полученного по 9.5.1. Три раза промывают колбу 1 см³ петролейного эфира (9.3.2). Элюируют колонку 25 см³ петролейного эфира. Сливают элюат в градуированную пробирку и концентрируют до требуемого объема.

Для достижения хорошего коэффициента извлечения, особенно р-НСН, необходимо не менее 70 мгжира нанести на колонку с 0,4 г оксида алюминия. Эта колонка может надежно удержать 100 мг жира. Если необходимо очистить большее количество жира (например, если не достигается чувствительность детектора), ниже приведенное количество оксида алюминия и петролейного эфира необходимо соответственно увеличить. Процесс очистки с оксидом алюминия может легко обеспечивать очистку 250 мг жира.

9.6    Определение

Определение проводят в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 7) и EN 1528-4:1996 (раздел 4).

9.7    Сведения о результатах

Результаты должны оцениваться в соответствии с EN 1528-1:1996 (разделы 9-11).

9.8    Отчет об испытаниях

Результаты испытаний должны быть представлены в отчете в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 12).

10 Метод F. Гельпроникающая хроматография (ГПХ) (АОАС) [6]

10.1    Область применения

Данный метод применяется для определения 18 хпорорганических пестицидов и метаболитов в животном жире (крупного рогатого скота, птичьем и свином жире) (см. EN 1528-1:1996, приложение А). С определенной долей вероятности могут определяться и другие хлорорганические пестициды и индикаторные конгенеры ПХБ.

10.2    Сущность метода

Растворяют жир в смеси циклогексан/дихлорэтан и хроматографируют раствор на ГПХ-колонке с циклогексаном/дихпорметаном в качестве элюента. Концентрируют элюат до сухого остатка и растворяют остаток для газохроматографического анализа.

11

10.3 Реактивы и вспомогательные вещества

Все реактивы и вспомогательные вещества должны быть пригодными для анализа остатка пестицидов и ПХБ и должны соответствовать EN 1528-1:1996 (раздел 4). При необходимости очистки применяют процедуры, приведенные в приложении А.

10.3.1    Циклогексан.

10.3.2    Дихлорметан.

10.3.3    Изооктан.

10.3.4    Смесь элюентов: циклогексан (10.3.1) и дихлорметан (10.3.2), объемное отношение 1 : 1 (об/об).

10.4    Оборудование

Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.

10.4.1    Автоматизированный прибор для ГПХ, например GPC Autoprep® 1001 или 1002 ³, с хроматографической колонкой длиной 60 см, с внутренним диаметром 25 мм и петлей для ввода образцов 23 х 5 см³; наполняют колонку 60 г смолой BioBeads® S-X3 ⁴, предварительно подготовленной (разбухшей) в течение ночи элюирующей смесью; затем наполняют колонку на высоту 48 см.

10.4.2    Ротационный испаритель, снабженный круглодонной колбой вместимостью 500 см³ и водяной баней с регулируемой температурой от 20 °С до 50 °С.

10.5    Проведение испытания

10.5.1    Экстракция жира и пестицидов

10.5.1.1    Общие методы

Общие методы приведены в EN 1528-2:1996.

10.5.1.2    Специальные методы

В стеклянную воронку диаметром 8 см с помещенным в нее тампоном из стекловаты помещают около 40 г жира. Устанавливают стеклянную воронку в химический стакан вместимостью 250 см³, который ставят на плиту, нагретую до температуры 110 °С, до тех пор, пока жир не перестанет капать через тампон. Затем тщательно перемешивают жир.

10.5.2    Очистка с помощью ГПХ

При использовании новой ГПХ-колонки расход смеси элюентов регулируют до 5 см³/мин. Проводят калибровку путем определения количества возврата 2,0 г кукурузного масла, обогащенного соответствующими соединениями. Определяют время выхода и сбора определяемых компонентов. Взвешивают около 2 г с точностью до 10 мг пробу жидкого жира в мерной колбе вместимостью 10 см³ в элюирующей смеси и перемешивают. Если в пробе видны частицы материала, ее центрифугируют или фильтруют. Загружают 5 см³ пробы в дозирующую петлю, используя 7 см³ раствора. Промывают ГПХ-колонку элюирующей смесью, используя время выхода и сбора компонента, определенное ранее, при расходе 5 см³ /мин.

Собирают элюат в круглодонную колбу вместимостью 250 см³ и упаривают на ротационном испарителе до сухого остатка при максимальной температуре водяной бани 30 °С. Остаток, оставшийся после упаривания, переносят небольшими порциями изооктана в мерную колбу или градуированную пробирку и добавляют необходимое количество изоокгана, например 5 см³.

10.6    Определение

Определение проводят в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 7) и EN 1528-4:1996 (раздел 4).

10.7    Сведения о результатах

Результаты должны оцениваться в соответствии с EN 1528-1:1996 (разделы 9-11).

ГОСТ EN 1528-3-2014

10.8 Отчет об испытаниях

Результаты испытаний должны быть представлены в отчете в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 12).

11 Метод G. Гельпроникающая колоночная хроматография с частично дезактивированным силикагелем (Specht) [7]

11.1    Область применения

Данный метод применяется для определения 24 хпорорганических пестицидов и их метаболитов, индикаторных конгенеров ПХБ и 13 фосфорорганических пестицидов (см. EN 1528-1:1996, приложение А). ГПХ позволяет осуществить быстрое отделение анализируемых остатков от липидов. Это перекрывает широкий диапазон компонентов, поэтому ГПХ-элюат содержит, кроме вышеуказанных остатков, другие пестициды и контаминанты, например пиретроиды и хлорированный бензол или фенол. Более того, ГПХ легко автоматизируется. Мини-колонка с силикагелем может использоваться для дополнительной очистки и фракционирования исследуемых остатков в соответствии с их полярностью, что позволяет получить дополнительную информацию для идентификации.

11.2    Сущность метода

Экстракцию из пробы жира, включая остатки, можно проводить, применяя метод, изложенный в EN 1528-2:1996. Концентрируют экстракт практически до сухого остатка, который растворяют в цикпо-гексане/этилацетате; хроматографируют раствор на колонке ГПХ с помощью циклогексана/ этилацетата и концентрируют элюат практически до сухого остатка. Остаток растворяют в н-гексане и хроматографируют раствор на колонке с дезактивированным силикагелем, при этом повышают полярность растворителя и смесей. Концентрируют отдельные элюаты для проведения газохроматографического анализа.

11.3    Реактивы и вспомогательные вещества

Все реактивы и вспомогательные вещества должны быть пригодными для анализа пестицидов и ПХБ и соответствовать EN 1528-1:1996 (раздел 4). При необходимости очистки применяют процедуры, приведенные в приложении А.

11.3.1    Циклогексан.

11.3.2    Этилацетат.

11.3.3    Смесь элюентов для гельпроникающей хроматографии (ГПХ): циклогексан (11.3.1) и этилацетат (11.3.2), объемное отношение 1 :1 (об/об).

11.3.4    Ацетон.

11.3.5    Изооктан.

11.3.6    н-Гексан.

11.3.7    Толуол.

11.3.8    Смесь элюентов 1: н-гексан (11.3.6) и толуол (11.3.7), объемное отношение 65:35 (об/об).

11.3.9    Смесь элюентов 2: толуол (11.3.7).

11.3.10    Смесь элюентов 3: толуол (11.3.7) и ацетон (11.3.4), объемное отношение 95 : 5 (об/об).

11.3.11    Сернокислый натрий гранулированный, безводный, нагретый при температуре 550 °С в течение как минимум 2 ч.

11.3.12    Силикагель дезактивированный, содержащий 1,5 % воды.

Нагревают силикагель 60 (от 63 до 200 мкм; от 70 до 230 меш) в течение 5 ч при температуре 130 °С, охлаждают в эксикаторе и хранят в плотно закрытом эксикаторе. К 98,5 г сухого силикагеля, помещенного в колбу Эрленмейера вместимостью 300 см³ со шлифом, добавляют 1,5 см³ воды из бюретки, постоянно встряхивая. Сразу закрывают колбу пришлифованной пробкой, интенсивно встряхивают в течение 5 мин, пока не исчезнут комки, затем встряхивают на механическом шейкере в течение 2 ч и хранят в плотно закрытой колбе.

13

11.4    Оборудование

Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.

11.4.1    Автоматизированный прибор для ГПХ, например GPC Autoprep® 1001 или 1002, с хроматографической колонкой длиной 40 см, с внутренним диаметром 25 мм и петлей для ввода образцов 23 х 5 см³; наполняют колонку 50 г смолой BioBeads® S-X3 (38 - 75 мкм; 200 - 400 меш), предварительно подготовленной (разбухшей) в течение ночи элюирующей смесью; затем наполняют колонку на высоту 32 см.

11.4.2    Ротационный испаритель с круглодонной колбой вместимостью 500 см³ и водяной баней с регулируемой температурой от 20 °С до 50 °С.

11.4.3    Хроматографическая колонка длиной 23 см, с внутренним диаметром 7 мм, с вытянутым носиком.

11.5    Проведение испытания

11.5.1    Экстракция жира, пестицидов и ПХБ

11.5.2    Очистка с помощью ГПХ

При использовании ГПХ-колонки устанавливают расход смеси элюентов до 5 см³/мин и проводят калибровку с помощью соответствующих соединений. Определяют время удержания и выхода элюата для различных хпорорганических соединений.

Растворяют 5 г жира или экстрагированной части в мерной колбе вместимостью 25 см³ в ГПХ-смеси элюентов (11.3.3). Доводят раствор до метки и хорошо встряхивают. Вводят 7 см³ этого раствора в пробирку вместимостью 5 см³. Промывают ГПХ-колонку элюирующей смесью, используя время выхода и сбора компонента, определенное ранее, при расходе 5 см³ /мин.

Помещают элюат в круглодонную колбу вместимостью 250 см³ и концентрируют в ротационном испарителе до 1 см³ (медленно вращая и неглубоко погружая колбу). Помещают концентрированный раствор с этилацетатом в закрываемую градуированную пробирку и доводят этилацетатом до определенного объема, например 5,0 см³.

Примечание — При анализе фосфорорганических пестицидов элюат непосредственно используют для газохроматографических исследований при применении фосфорно-селективного детектора.

11.5.3    Хроматография на мини-силикагелевой колонке

Вносят 2,5 см³ раствора, полученного по 11.5.2, в круглодонную колбу с притертым соединением и добавляют 5 см³ изооктана (11.3.5). Осторожно упаривают до 1 см³ на ротационном испарителе (медленно вращая и неглубоко погружая колбу), не допуская испарения досуха. Если раствор пахнет этилацетатом, снова добавляют изоокган и повторяют упаривание.

Хроматографическую колонку (11.4.3) наполняют в следующей последовательности: тампон из стекловаты, 1,0 г деактивированного силикагеля (11.3.12), от 5 до 10 мм сернокислого натрия (11.3.11), тампон из стекловаты. Перед использованием промывают колонку 5 см³ н-гексана (11.3.6) и отбрасывают элюат. Как только н-гексан стечет до верхнего уровня заполнения колонки, добавляют раствор изоокгана (11.5.2), полученный при концентрировании ГПХ-элюата, далее в колонку добавляют 1 см³ н-гексана. Как только гексан стечет до верхнего уровня колонки, круглодонную колбу промывают 2 см³ смеси элюентов 1(11.3.8) и также вводят раствор в колонку. С этого момента собирают элюат в градуированную пробирку. Затем промывают колонку следующими 6 см³ смеси элюентов 1 и доводят содержимое градуированной пробирки смесью элюентов 1 до 10 см³ (элюат 1).

Ополаскивают колбу, используемую для упаривания еще раз 2 см³ толуола. Затем вносят этот раствор на колонку. Собирают элюат во вторую градуированную пробирку и промывают колонку следующими 6 см³ толуола. Доводят объем в градуированной пробирке толуолом до 10 см³ (= элюат 2). Таким же образом проводят хроматографию со смесью элюентов 3: круглодонную колбу ополаскивают 2 см³ толуола, колонку промывают следующими 6 см³ и объем в пробирке доводят до 10 см³ (элюат 3).

Время от времени следует проверять способность к отделению с помощью стандартного раствора хпорорганических пестицидов. При правильно установленной активности силикагеля будут найдены до 100 % ГХБ и линдана в элюате 1 и эндосульфан-сульфата и диэлдрина в элюате 2. Геп-тахлорэпоксид и альфа-эндосульфан элюируются в обеих фракциях. Полярные соединения, такие как хлорфенвинфос и диазинон, находятся в элюате 3.

Для отделения индикаторных конгенеров ПХБ от основных хпорорганических пестицидов можно дополнительно промыть колонку с силикагелем 10 см³ н-гексана [11] перед элюированием смесью элюентов 1. Конгенеры ПХБ в этом случае элюируются с н-гексаном (элюат 0).

ГОСТ EN 1528-3-2014

11.6    Определение

Определение проводят в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 7) и EN 1528-4:1996 (раздел 4).

11.7    Сведения о результатах

Результаты должны оцениваться в соответствии с EN 1528-1:1996 (разделы 9 — 11).

11.8    Отчет об испытаниях

Результаты испытаний должны быть представлены в отчете в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 12).

12 Метод Н. Высокопроизводительная гельпроникающая хроматография (HPGPC) (MAFF) [8]

12.1    Область применения

Данный метод применяют для определения 20 хлорорганических пестицидов, их метаболитов и индикаторных конгенеров ПХБ и 18 фосфорорганических пестицидов (см. EN 1528-1:1996, приложение A). HPGPC позволяет осуществлять отделение подлежащих анализу веществ от липидов. Одновременно можно определять многие компоненты. Поэтому HPGPC позволяет определять другие пестициды, например пиретроиды. Кроме того, HPGPC можно автоматизировать, если хроматограф имеет автоматическую систему ввода.

12.2    Сущность метода

Экстракцию из пробы жира, включая остатки, осуществляют по методу, изложенному в EN 1528-1:1996. Концентрируют экстракт в HPGPC-колонке с н-гексаном/изопропанолом в качестве элюента. Концентрируют элюат до сухого остатка и растворяют остаток для газохроматографического анализа.

12.3    Реактивы и вспомогательные вещества

Все реактивы и вспомогательные вещества должны быть пригодными для анализа остатка пестицидов и ПХБ и соответствовать EN 1528-1:1996 (раздел 4). При необходимости очистки применяют процедуры, приведенные в приложении А.

12.3.1    Ацетон.

12.3.2    н-Гексан.

12.3.3    Изопропанол.

12.3.4    Пропиленгликоль.

12.3.5    Смесь элюентов: н-гексан (12.3.2) и изопропанол (12.3.3), объемное отношение 80 :20 (об/об).

12.3.6    Удерживающий раствор: ацетон (12.3.1) и пропиленгликоль (12.3.4), объемное отношение 95: 5 (об/об).

12.4    Оборудование

Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.

12.4.1    Высокопроизводительная гельпроникающая хроматографическая система (HPGPC),

снабженная насосом (производительностью 2,3 см³/мин) с автоматической или ручной системой ввода (виалы для проб вместимостью 1 см³), нагревом колонки (регулировка (35 ± 1) °С) и двумя ГПХ-колонками PLRP-S ⁵ длиной 30 см, с внутренним диаметром 7,5 мм, размерами частиц 8 мкм, величиной пор 100 А, или аналогичное оборудование, которое соединяется последовательно.

12.5    Проведение испытания

12.5.1    Экстракция жира, пестицидов и ПХБ

Общие методы приведены по EN 1528-2:1996.

12.5.2 Очистка

При использовании новой ГПХ-колонки регулируют расход смеси элюентов до 2 см³/мин и проводят калибровку с помощью соответствующих соединений. Определяют время удержания и выхода элюата для различных хпорорганических соединений.

Растворяют 1,25 г жира или экстрагированной жировой части в мерной колбе вместимостью 5 см³ в смеси элюентов (12.3.5), доводят раствор смесью элюентов до метки и тщательно перемешивают.

С помощью автоматического пробоотборника вводят 1 см³ данного раствора в HPGPC-колонку. Элюируют HPGPC-колонку смесью элюентов при расходе 2 см³/мин; при этом соблюдают ранее установленное время удержания и выхода элюата. Помещают элюат в круглодонную колбу, добавляют в нее 0,1 см³ удерживающего раствора (12.3.6) и тщательно перемешивают. Осторожно концентрируют элюат слабым потоком азота, свободного от кислорода, до 2 см³. Переливают этот раствор в мерную колбу вместимостью 2 см³ и выпаривают в потоке азота примерно до 1 см³. Промывают круглодонную колбу примерно 1 см³ н-гексана и вносят раствор в мерную колбу вместимостью 2 см³, снова выдувают растворитель в потоке азота, доводят до метки н-гексаном и тщательно перемешивают.

12.6    Определение

Определение проводят в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 7) и EN 1528-4:1996 (раздел 4).

12.7    Сведения о результатах

Результаты должны оцениваться в соответствии с EN 1528-1:1996 (разделы 9-11).

12.8    Отчет об испытаниях

Результаты испытаний должны быть представлены в отчете в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 12).

16

ГОСТ EN 1528-3-2014

5    ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 25 мая 2015 г. № 29 непосредственно в качестве государственного стандарта Республики Беларусь с 1 марта 2016 г.

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных (государственных) стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных (государственных) органов по стандартизации.

Введение

Европейский стандарт EN 1528 состоит из следующих частей под общим заголовком «Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ)»:

-    часть 1. Общие положения (определяет область применения стандарта, а также содержит общие указания, касающиеся реактивов, оборудования, газовой хроматографии и т. д., применяющихся для каждого из выбранных аналитических методов);

-    часть 2. Экстракция жира, пестицидов и ПХБ и определение содержания жира (устанавливает ряд аналитических методов, с помощью которых проводят экстракцию жира, включая остатки пестицидов и ПХБ из различных групп пищевой продукции, содержащих жиры);

-    часть 3. Методы очистки (содержит подробные описания методов А - Н для очистки от жиров и растительных масел или изолированной жировой фракции с применением методов жидкость - жидкостной переэкстракции, адсорбционной или гельпроникающей колоночной хроматографии);

-    часть 4. Определение, методы подтверждения, прочие положения (содержит руководство по некоторым рекомендуемым методам определения пестицидов и ПХБ в пищевой продукции с большим содержанием жира, а также описание процедуры очистки для удаления основной части липидов при анализе большого количества жира).

Настоящий стандарт содержит ряд методов определения множественных остатков одинакового значения. Ни один из этих методов нельзя рассматривать как преимущественный, так как методы исследования в данной области постоянно совершенствуются. Методы, выбранные для включения в настоящий стандарт, были проверены и имеют широкое применение. Необходимо доказать, что любые изменения в методах дадут сопоставимые результаты.

Остатки, подвергаемые анализу в соответствии с настоящим стандартом, содержатся в жировой части образцов. Экстракты проб, полученные в соответствии с EN 1528-2:1996, содержат кроме остатков жира и различные липиды, которые могут привести к ошибочным результатам, и для очистки данного экстракта или жира и масла можно применять несколько различных методов.

Настоящий стандарт содержит следующие методы очистки, которые были проверены в кольцевых испытаниях и широко распространены:

-    метод А. Жидкость-жидкостное разделение с ацетонитрилом и очистка на Florisil®-KonoHKe (АОАС) [1]

-    метод В. Жидкость-жидкостное разделение с диметилформамидом и очистка на Florisil®-колонке (Specht) [2];

-    метод С. Колоночная хроматография на активированном Florisil® (АОАС) [3];

-    метод D. Колоночная хроматография на частично дезактивированном Florisil® (Stijve) [4];

-    метод Е. Колоночная хроматография на частично дезактивированном оксиде алюминия (Greve и Grevemstik) [5];

-    метод F. Гельпроникающая хроматография (ГПХ) (АОАС) [6];

-    метод G. Гельпроникающая колоночная хроматография на частично дезактивированном силикагеле (Specht) [7];

-    метод Н. Высокопроизводительная гельпроникающая хроматография (HPGPC) (MAFF) [8].

IV

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

ПИЩЕВАЯ ПРОДУКЦИЯ С БОЛЬШИМ СОДЕРЖАНИЕМ ЖИРА Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ)

Часть 3 Методы очистки

ХАРЧОВАЯ ПРАДУКЦЫЯ 3 ВЯЛ1К1М ЗМЯШЧЭННЕМ ТЛУШЧУ Вызначэнне пестыцыдау i пол1хпараваных б1феншау (ПХБ)

Частка 3 Метады ачыстм

Fatty food

Determination of pesticides and polychlorinated biphenyls (PCBs)

Part 3 Clean-up methods

Дата введения — 2016-03-01

1    Область применения

В настоящем стандарте установлены требования к методам А — Н очистки от жира и масел или изолированных жировых компонентов, содержащихся в пищевой продукции. При этом используется жид-кость-жидкостное разделение методом абсорбционной колоночной хроматографии или гель-проникающей хроматографии. Применимость методов А — Н подробно описана отдельно для каждого метода.

Примечание — См. также EN 1528-4, который содержит дополнительные методы предварительной очистки от жира при переработке пищевой продукции, содержащих большое количество жира.

2    Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).

EN 1528-1:1996 Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ). Часть 1. Общие положения

EN 1528-2:1996 Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ). Часть 2. Экстракция жира, пестицидов и ПХБ и определение содержания жира

EN 1528-4:1996 Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ). Часть 4. Определение, контрольные испытания, прочие положения

3    Сущность метода

Сопутствующие вещества удаляются из экстракта пробы, чтобы экстрагированные фракции находились в растворе, используемом для количественного определения по одному из выбранных методов.

4    Общие положения

При любом жидкость-жидкостном разделении делительную воронку встряхивают в течение 2 мин в горизонтальном положении, периодически открывая пробку. Если при встряхивании образовывается стабильная эмульсия, предпочтительным может быть продолжительное встряхивание. В эмульсию можно добавить от 1 до 2 см³ насыщенного раствора хлорида натрия или сульфата натрия, нагреть теплой водой из-под крана или процентрифугировать.

При расслоении эмульсии на фазы верхнюю фазу вновь экстрагируют, а нижнюю выбрасывают.

Издание официальное

Активность Florisil ® ¹⁾, которая в настоящем стандарте используется для хроматографии на колонке, должна проверяться через определенные промежутки времени, а в случае необходимости, как указано для отдельных методов, - регулироваться.

Примечание — Из-за очень высокой связующей способности липидов Florisil® ^Г) часто используется в качестве абсорбента. Его активность зависит от качества изготовления, условий транспортирования и хранения.

Скорость элюирования хроматографической колонки зависит от применяемых методов. Она должна находиться в диапазоне от 1 до 5 см³/мин.

При анализе хпорорганических пестицидов рекомендуется перед очисткой добавить к экстракту заданное количество пентахлорбензола (или 1,7-дибромгептана) и менее летучего индикатора (например, 1,2,3,4-тетрахпорнафталина или изодрина)²⁾. Пентахлорбензол используют как индикатор возможных потерь пестицидов при упаривании путем сравнения площади пика (высоты) пестицидов с площадью пика (высоты) менее летучего индикаторного компонента. Добавление индикаторного компонента может также использоваться как внутренний стандарт для определения (относительно времени выхода) и количественных расчетов. Однако для детектора электронного захвата (ДЭЗ) параллельно экстрагируемые вещества могут давать пики, совпадающие с временем выхода пика внутреннего стандарта.

Примечание — Библиография, связанная с данными методами, приведена в приложении В.

5 Метод А. Жидкость-жидкостное разделение с ацетонитрилом и очистка на ПопаМ®-колонке (АОАС) [1]

5.1    Область применения

Данный метод применяется для определения 17 хпорорганических пестицидов и метаболитов, индикаторных конгенеров ПХБ и 6 фосфорорганических пестицидов (в особых случаях) (см. EN 1528-1:1996, приложение А).

5.2    Сущность метода

Экстракция жира, включая остатки из пробы, производится по методу, приведенному в EN 1528-2:1996. Экстракт концентрируется почти до сухого состояния, остаток растворяется в петро-лейном эфире. Остаток пестицидов и ПХБ растворяют в ацетонитриле и после разбавления ацетонитриловой фазы водой вновь переводят в петролейный эфир. Концентрированная органическая фаза очищается хроматографически с помощью Florisil®-KonoHKH с петролейным эфиром/диэтиловым эфиром в качестве элюента. Элюат используется для газохроматографического анализа.

5.3    Реактивы и вспомогательные средства

Все реактивы и вспомогательные вещества должны быть пригодными для анализа остатков пестицидов и ПХБ и должны соответствовать EN 1528-1:1996 (раздел 4). При необходимости очистки применяются процедуры, приведенные в приложении А.

5.3.1    Ацетонитрил.

5.3.2    Петролейный эфир с температурой кипения от 40 °С до 60 °С.

5.3.3    Ацетонитрил (5.3.1), насыщенный петролейным эфиром (5.3.2).

5.3.4    Диэтиловый эфир, свободный от перекиси; перегоняют и стабилизируют абсолютным этанолом в количестве 2 % (по объему).

5.3.5    Смесь элюентов А: петролейный эфир (5.3.2) и диэтиловый эфир (5.3.4), объемное отношение 94:6 (об/об).

5.3.6    Смесь элюентов В: петролейный эфир (5.3.2) и диэтиловый эфир (5.3.4), объемное отношение 85 : 15 (об/об).

5.3.7    Смесь элюентов С: петролейный эфир (5.3.2) и диэтиловый эфир (5.3.4), объемное отношение 50 : 50 (об/об).

5.3.8    Сульфат натрия гранулированный, безводный; нагревают в течение 4 ч при температуре 500 °С или 550 °С и после охлаждения хранят в герметичной стеклянной емкости.

^r> Florisil® является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не означает признания названного продукта со стороны CEN. ²⁾ 1, 2, 3, 4,10, 10'-гексахлор-1, 4, 4', 5, 8, 8'-гексагидро 1,4-эндо-5,8-эндодиметанонафталин.

ГОСТ EN 1528-3-2014

5.3.9    Florisil®, от 150 до 250 мкм (от 60 до 100 меш).

Активируют его при нагревании в течение 4 ч при температуре 650 °С, а затем сразу переносят в плотно закрытую емкость, которую хранят в темноте. Перед использованием нагревают при температуре в течение 5 ч, а затем охлаждают в эксикаторе.

Периодически проверяют качество Florisil®, как описано ниже.

Помещают 1 см⁶ стандартного раствора в гексане с концентрацией 0,1 мг/дм⁶ линдана, гептахлора, альдрина, гептахпор-эпоксида и диэлдрина и 0,3 мг/дм⁶ эндрина в абсорбционную колонку по 5.5.3.

Проводят повторный газохроматографический анализ.

Florisil® пригоден к использованию, если линдан, гентахпор, апьдрин и гептахлор-эпоксид количественно элюированы апюенгом А (5.3.5), а диэлдин и эндрин количественно элюированы элюентом В (5.3.6).

5.3.10    Раствор хлорида натрия насыщенный; перед растворением нагревают хлорид натрия при температуре 500 °С в течение 4 ч.

5.4 Оборудование

Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.

5.4.1    Делительные воронки номинальной вместимостью 125 и 1000 см⁶, со стеклянным притертым краном или краном из политетрафторэтилена.

5.4.2    Хроматографическая колонка длиной 50 мм, наружным диаметром 25 мм, с краном из политетрафторэтилена и пористым стеклянным фильтром или тампоном из стекловаты.

5.4.3    Хроматографическая колонка длиной 300 мм, внутренним диаметром 22 мм, с краном из политетрафторэтилена и пористым стеклянным фильтром или тампоном из стекловаты.

5.4.4    Испаритель Kuderna-Danish вместимостью 500 см⁶, с градуированной приемной пробиркой (или аналогичный прибор).

5.4.5    Микроколонка Snyder с двумя шариками (сферами) или микроколонка Vigreux.

5.5    Проведение испытаний

5.5.1    Экстракция жира, пестицидов и ПХБ

Методы проводятся в соответствии с EN 1528-2:1996.

5.5.2    Очистка с помощью петролейного эфира/ацетонитрила

Помещают до 3 г жира в делительную воронку вместимостью 125 см⁶ и растворяют в петролейном эфире (5.3.2), чтобы общий объем жира и петролейного эфира составлял 15 см⁶. Добавляют 30 см⁶ ацетонитрила (5.3.3), насыщенного петролейным эфиром, и сильно встряхивают смесь в течение 1 мин. После разделения фаз нижнюю фазу ацетонитрила сливают в делительную воронку вместимостью 1000 см⁶, добавляют 650 см⁶ воды, 40 см⁶ насыщенного раствора хлорида натрия (5.3.10) и 100 см⁶ петролейного эфира. Фазу петролейного эфира вместе с 30 см⁶ ацетонитрила (5.3.3), насыщенного петролейным эфиром, сильно встряхивают три раза по 1 мин в делительной воронке вместимостью 125 см⁶.

Объединенный ацетонитрильный экстракт осторожно встряхивают в течение 30 - 45 с в горизонтальном направлении в делительной воронке вместимостью 1000 см⁶. После разделения фаз водную фазу сливают во вторую делительную воронку вместимостью 1000 см⁶. 100 см⁶ петролейного эфира добавляют во вторую делительную воронку, которую сильно встряхивают в течение 15 с, и после разделения фаз выбрасывают нижнюю водную фазу. Фазу петролейного эфира объединяют с фазой в первой делительной воронке вместимостью 1000 см⁶ и дважды промывают 100 см⁶ воды. Водную фазу выбрасывают, а фазу петролейного эфира добавляют через хроматографическую колонку

(5.4.2) к безводному сульфату натрия (5.3.8), находящемуся в испарителе Kuderna-Danish вместимостью 500 см⁶ (5.4.4). Делительную воронку и колонку трижды промывают 10 см⁶ петролейного эфира. Объединенные фазы петролейного эфира, а также петролейный эфир, использовавшийся для промывания, концентрируют в испарителе Kuderna-Danish (5.4.4) до 10 см⁶ и помещают в Florisil®-KonoHKy.

5.5.3    Хроматография на колонке с Florisil®

В хроматографическую колонку (5.4.3) помещают слой активного Florisil® (5.3.9) высотой 10 см, а также слой сульфата натрия высотой 10 мм и 40 - 50 см⁶ петролейного эфира. Под колонкой закрепляют испаритель Kuderna-Danish (5.4.4) с градуированными приемными пробирками для сбора элюата. Добавляют в колонку раствор согласно 5.5.2 и элюируют колонку со скоростью не более 5 см⁶/мин. Дважды промывают испаритель Kuderna-Danish петролейным эфиром объемом 5 см⁶, который добавляют в колонку, а также дополнительно промывают стенки колонки незначительным количеством петролейного эфира. Элюируют 200 см⁶ смеси элюентов А (5.3.5) со скоростью 5 см⁶/мин. Заменяют сборную емкость и элюируют колонку с 200 см⁶ смеси элюентов В (5.3.6) со скоростью 5 см⁶/мин. После повторной замены сборной емкости элюируют 200 см⁶ смеси элюентов С (5.3.7).

Элюаты отдельно концентрируют в испарителе Kuderna-Danish (5.4.4) до определенного объема. Если требуется объем менее 5 см³, используют микроколонку Snyder с двумя шариками (сферами) или микроколонку Vigreux (5.4.5). При необходимости дополнительной очистки ее осуществляют на второй, вновь изготовленной Florisil®-KonoHKe.

Первый элюат содержит хпорорганические соединения, перечень которых приведен в EN 1528-1:1996 (приложение А), во втором элюате, кроме того, содержатся дилдрин и эндрин. Фос-форорганические соединения могут содержаться во всех трех элюатах.

5.6    Определение

Определение проводят в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 7) и EN 1528-4:1996 (раздел 4).

5.7    Сведения о результатах

Результаты должны оцениваться в соответствии с EN 1528-1:1996 (разделы 9-11).

5.8    Отчет об испытаниях

Результаты испытаний должны быть представлены в отчете в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 12).

6 Метод В. Жидкость-жидкостное разделение с диметилформамидом и очистка на Florisil®-KonoHKe (Specht) [2]

6.1    Область применения

Данный метод применяется для определения 18 хпорорганических пестицидов и метаболитов, индикаторных конгенеров ПХБ и 7 фосфорорганических пестицидов (см. EN 1528-1:1996, приложение А). Метод применяется при определении очень незначительного содержания остатка, так как используются тщательно очищенные экстракты. Однако очистка требует больше времени.

6.2    Сущность метода

Производят экстракцию из пробы жира, включая остаток, по методу, приведенному в EN 1528-2:1996. Экстракт концентрируют почти до сухого состояния и растворяют остаток в петро-лейном эфире. Остаток пестицидов и ПХБ путем жидкость-жидкостного разделения переносят в ди-метилформамид и после разбавления в растворе сульфата натрия снова переносят в петролейный эфир. Концентрированную органическую фазу хроматографически очищают на Florisil®-KonoHKe, причем хлороргани-ческие соединения элюируют с помощью петролейного эфира/диэтилового эфира, а фосфороргани-ческие пестициды - с помощью петролейного эфира/этилацетата. Элюаты концентрируют для газохроматографического анализа.

6.3    Реактивы и вспомогательные вещества

Все реактивы и вспомогательные вещества должны быть пригодными для анализа остатка пестицидов и ПХБ и соответствовать EN 1528-1:1996 (раздел 4). При необходимости очистки применяют процедуры, приведенные в приложении А.

6.3.1    Петролейный эфир с температурой кипения от 40 °С до 60 °С.

6.3.2    Петролейный эфир (6.3.1), насыщенный диметилформамидом (6.3.3).

6.3.3    Диметилформамид.

6.3.4    Диметилформамид (6.3.3), насыщенный петролейным эфиром (6.3.1).

6.3.5    Диэтиловый эфир, свободный от перекиси.

6.3.6    Этилацетат.

6.3.7    н-гексан.

6.3.8    Смесь элюентов I: петролейный эфир (6.3.1) и диэтиловый эфир (6.3.5), объемное отношение 94:6 (об/об).

6.3.9    Смесь элюентов II: петролейный эфир (6.3.1) и этилацетат (6.3.6), объемное отношение 6 : 4 (об/об).

6.3.10    Florisil®, от 150 до 250 мкм (от 60 до 100 меш).

Нагревают 2 ч при температуре 550 °С и после охлаждения помещают для хранения в плотно закрытую емкость. Перед использованием его нагревают в течение не менее 5 ч при температуре 130 °С и оставляют для охлаждения в эксикаторе. Добавляют 5 частей дистиллированной воды к 95 частям Florisil® (м/м). Встряхивают смесь в течение не менее 20 мин и выдерживают в плотно закрытой емкости не менее 10 ч. ⁷

ГОСТ EN 1528-3-2014

6.3.11    Сульфат натрия безводный, нагретый в течение 2 ч при температуре 550 °С.

6.3.12    Раствор сульфата натрия, 2 г/100 см³.

6.4    Оборудование

Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.

6.4.1    Хроматографическая колонка длиной от 40 до 50 см, с внутренним диаметром 20 мм, с краном из политетрафторэтилена и стеклянной фриттой.

6.4.2    Ротационный испаритель вместимостью 500 см³ с круглодонной колбой и водяной баней с регулируемой температурой от 20 °С до 50 °С.

6.4.3    Делительная воронка номинальной вместимостью 250 и 500 см³ со стеклянным притертым краном или краном из политетрафторэтилена.

6.5    Проведение испытания

6.5.1    Экстракция жира, пестицидов и ПХБ

Испытания проводятся в соответствии с EN 1528-2:1996.

6.5.2    Очистка диметилформамид/петролейный эфир

Пробу, содержащую от 2 до 5 г жира, растворяют в 25 мл петролейного эфира, насыщенном ди-метил-формамидом (6.3.2), и помещают раствор в делительную воронку вместимостью 250 см³. Емкость для проб несколько раз промывают 75 см³ диметилформамида (6.3.4). Диметилформамид добавляют в делительную воронку и сильно встряхивают смесь в течение 1 мин. Фазу диметилформамида спивают, а фазу петролейного эфира еще раз встряхивают после добавления 10 мл диметилформамида (6.3.4).

Объединенные фазы диметилформамида переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³ и добавляют в 200 см³ раствора сульфата натрия (6.3.12). Последовательно встряхивают смесь в течение 1 мин с 40 см³ и трижды с 25 см³ петролейного эфира (6.3.2). Объединенные фазы петролейного эфира промывают с 10 см³ воды, высушивают, пропуская петролейный эфир черех воронку, заполненную хлопковой ватой и сульфатом натрия (6.3.11), добавляют 5 см³ н-гексана и концентрируют в ротационном испарителе приблизительно до 5 см³.

6.5.3    Хроматография на колонке с Florisil®

Хроматографическая колонка со стеклянной фриттой (6.4.1) или со стекловатой наполняется до половины петролейным эфиром. При частично открытом кране через воронку небольшими порциями пропускают 30 г Florisil® (6.3.10). Наполнение колонки должно происходить без образования воздушных пузырьков. На слой Florisil® помещают слой сульфата натрия толщиной 2 см, а петролейный эфир сливают до уровня 2 мм над уровнем заполнения колонки.

Раствор, полученный по 6.5.2, вносят в колонку. Сливают растворитель до уровня 1 - 2 мм над уровнем заполнения колонки. Круглодонную колбу промывают небольшими порциями предварительно отмеренного объема 200 см³ элюирующей смеси I (6.3.8). Этот раствор вносят в колонку и снова спивают до тех пор, пока уровень жидкости не будет на отметке 1 - 2 мм над уровнем заполнения колонки. Элюируют колонку путем добавления 200 см³ смеси элюентов I со скоростью 5 см³/мин. Разбавляют элюат 5 см³ н-гексана и концентрируют в ротационном испарителе до 5 см³. После промывания н-гексаном переливают раствор в мерную колбу или градуированную пробирку и заполняют до определенного объема (например, 10 см³) н-гексаном (элюат I).

Если кроме хпорорганических соединений должны быть определены фосфорорганические соединения, элюирование прерывают до того, как остаток смеси элюентов I попадет в колонку. Сборную емкость меняют, и элюирование продолжают со смесью элюентов II (6.3.9) объемом 300 см³. Концентрируют элюат II в ротационном испарителе до 5 см³, переливают в мерную колбу определенного объема или градуированную пробирку и доводят этилацетатом до определенного объема (например, 10 см³) (элюат II).

6.6    Определение

Определение проводят в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 7) и EN 1528-4:1996 (раздел 4).

6.7    Сведения о результатах

Результаты должны оцениваться в соответствии с EN 1528-1:1996 (разделы 9-11). ⁸

6.8 Отчет об испытаниях

Результаты испытаний должны быть представлены в отчете в соответствии с EN 1528-1:1996 (раздел 12).

7 Метод С. Колоночная хроматография на активированном Florisil® (АОАС) [3]

7.1    Область применения

Данный метод применяется для определения четырех хлорорганических пестицидов и метаболитов (п.п'-ДДД, п,п'-ДДЕ, п.п'-ДДТ и диэлдрина) и индикаторных конгенеров ПХБ в пробах из рыбы (см. EN 1528-1:1996, приложение А).

7.2    Сущность метода

Жир, включая остатки, экстрагируют из пробы петролейным эфиром. Экстракт концентрируют до незначительного объема и хроматографируют на Florisil®-KonoHKe с петролейным эфиром/ диэтиловым эфиром в качестве элюента. Концентрируют элюат для газохроматографического анализа.

7.3    Реактивы и вспомогательные вещества

Все реактивы и вспомогательные вещества должны быть пригодными для анализа остатка пестицидов и соответствовать EN 1528-1:1996 (раздел 4). При необходимости очистки применяют процедуры, приведенные в приложении А.

7.3.1    Петролейный эфир с температурой кипения от 40 °С до 60 °С.

7.3.2    Диэтиловый эфир, свободный от перекиси; перегоняют и стабилизируют абсолютным этанолом в количестве 2 % (по объему).

7.3.3    Смесь элюентов А: петролейный эфир (7.3.1) и диэтиловый эфир (7.3.2), объемное отношение 94:6 (об/об).

7.3.4    Смесь элюентов В: петролейный эфир (7.3.1) и диэтиловый эфир (7.3.2), объемное отношение 85: 15 (об/об).

7.3.5    Сульфат натрия гранулированный, безводный, нагретый в течение 2 ч при температуре 550 °С.

7.3.6    Florisil®, от 190 до 250 мкм (от 60 до 80 меш).

Нагревают в течение 4 ч при температуре 650 °С, сразу переносят в герметичную емкость и хранят в темном помещении. Перед использованием Florisil® нагревают в течение 5 ч при температуре 130 °С и охлаждают в эксикаторе.

Периодически проверяют качество Florisil®, как описано ниже.

Помещают 1 см³ стандартного раствора с концентрацией 0,1 мг/дм³ линдана, гептахпора, ал-дрина, гептахлор-эпоксида диэлдрина и 0,3 мг/дм³ эндрина в гексане в адсорбционную колонку

(7.5.2). Элюируют и выпаривают согласно 7.5.2.

Проводят повторный газохроматографический анализ.

Florisil® достаточно активирован, если линдан, гептахлор и гептахлор-эпоксид элюировался смесью элюентов А (7.3.3) и диэлдрин и эндрин смесью элюентов В (7.3.4).

7.3.7    Вспомогательный материал для поддержания равномерного кипения, например карбид кремния.

7.4 Оборудование

Применяется обычное лабораторное оборудование, а также указанное ниже.

7.4.1    Хроматографическая колонка длиной 30 см, с внутренним диаметром 10 мм, краном из политетрафторэтилена и пористой стеклянной фриттой.

7.4.2    Испаритель Kuderna-Danish номинальной вместимостью 125 см³, с градуированной приемной пробиркой вместимостью 10 см³ или аналогичное приспособление.

7.4.3    Высокопроизводительный измельчитель, устойчивый к растворителям, с взрывозащищенным двигателем.

7.4.4    Центрифуга со взрывозащитой, со стаканом для центрифугирования вместимостью 200 см³, 1000 - 3000 об/мин.

7.4.5    Колонка Snyder. ⁹

1

2

3

ОРС Autoprep® 1001 или 1002 - это обычное промышленное наименование прибора, продаваемого Analytical Bio Chemostry Laboratoies. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не означает признания названного продукта со стороны CEN. Могут использоваться аналогичные приборы, если будет подтверждено, что они обеспечивают получение аналогичных результатов.

4

^4> Смола BioBeads® S-X3 - обычный промышленный продукт, продаваемый Bio-Rad Laboratoies. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не означает признания названного продукта со стороны CEN. Могут использоваться аналогичные продукты, если будет подтверждено, что они обеспечивают получение аналогичных результатов.

5

^б> PLR-S - промышленное наименование продукта, выпускаемого Polymer Laboratories Limied. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не означает признания названного продукта со стороны CEN. Могут применяться аналогичные продукты, если будет подтверждено, что они обеспечивают получение аналогичных результатов.

15

6

7

8

9