МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ
Метод определения остаточного содержания седативных препаратов и адреноблокаторов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2017
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 августа 2017 г. №102-П)
За принятие проголосовали: |
Краткое наименование страны no МК (ИСО 3166) 004—97 |
Код страны no МК (ИСО 3166)004—97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартим1*и |
Армения |
AM |
Минэкономики Республики Армения |
Беларусь |
BY |
Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан |
KZ |
Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия |
KG |
Кыргызстандарт |
Россия |
RU |
Росстандарт |
Узбекистан |
UZ |
Узстандарт |
Украина |
UA |
Минэкономразвития Украины |
|
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 сентября 2017 г. № 1161 -ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34139-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2018 г.
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты» В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
© Стандартинформ. 2017
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
II
ГОСТ 34139-2017
8.2.1 Проводят измерения не менее четырех матричных градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.3. в порядке возрастания их концентраций. Каждый градуировочный раствор измеряют два раза. Определяют значения времени удерживания ион-продуктов аналитов и их внутренних стандартов.
8.2.2 Вычисление площади пика проводят для каждого ион-продукта анализируемых аналитов и их внутренних стандартов. Количественное определение седативных препаратов и адреноблокаторов проводят по одному, наиболее интенсивному, ион-продукту. Для подтверждения наличия седативных препаратов и адреноблокаторов рассчитывают отношения площади пика двух ионов-продуктов для каждого аналита в градуировочном растворе.
8.2.3 Градуировочную характеристику строят в координатах «отношение площади пика определяемого соединения к площади пика внутреннего стандарта этого соединения» — «отношение концентраций аналита и внутреннего стандарта». При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию вида у = а + Ьх, при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0.98. Построение градуировочной характеристики проводят при каждой серии измерений заново.
Соответствие аналитов и их внутренних стандартов указано в таблице 1.
8.2.4 Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации седативных препаратов и адреноблокаторов в анализируемых пробах выполняется системой обработки данных в автоматическом режиме.
8.3 ВЭЖХ-МС/МС анализ
8.3.1 Для измерения содержания седативных препаратов и адреноблокаторов проводят ВЭЖХ-МС/МС анализ в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования. Для каждого аналита проводят два параллельных измерения.
8.3.2 Анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:
- подвижную фазу А;
- «чистую» пробу;
- градуировочные растворы (см. 6.3.3);
- экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.
8.3.3 Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков двух ион-продук-тов каждого аналита. соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов по 8.1.3.
9 Обработка результатов измерений
9.1 В соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения массовой концентрации седативных препаратов и адреноблокаторов в двух параллельных измерениях анализируемой пробы.
9.2 Содержание но аналита Xt, нг/г. вычисляют по формуле'
где С, — массовая концентрация аналита в анализируемой пробе, найденная по градуировочному графику, нг/см3;
Ц—объем, до которого разбавлена проба, см3; т,— масса анализируемой пробы, г.
9.3 За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений анализируемой пробы, если выполняется условие приемлемости по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 5.2.2).
10 Метрологические характеристики
Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений содержания седативных препаратов и адреноблокаторов с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к - 2 и доверительной вероятности Р = 0.95. указанной в таблицах 5 и 6.
При оформлении результатов содержание /-го аналита в анализируемой пробе представляют в мкг/кг
9
Таблица 5 — Показатели точности и прецизионности метода при определении содержания седативных препаратов и адреноблокаторов в пробах субпродуктов |
Аналит |
Диапазон измерений содержания, мкг/кг |
Значение относительной расширенной неопределенности Ur %. при коэффициенте охвата fc-2 |
Показатель повторяемости (относительное стандартное отклонение повторяемости) сг% |
Показатель воспроизводи мости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости) aR.% |
Предел
повторя
емости
г.% |
Аэаперол |
От 1 до 500 в ключ |
40 |
13 |
19 |
36 |
Азаперон |
От 1 до 100 включ |
49 |
11 |
22 |
31 |
Св 100 до 500 включ |
30 |
8 |
14 |
22 |
Пропионилпромазин |
От 10 до 100 включ |
50 |
17 |
24 |
48 |
Св 100 до 500 включ |
35 |
11 |
16 |
31 |
Галоперидол |
От 1 до 100 включ |
35 |
12 |
17 |
34 |
Св 100 до 500 включ |
27 |
8 |
12 |
22 |
Флуфеназин |
От 1 до 500 включ |
53 |
18 |
26 |
50 |
Каразолол |
От 1 до 100 включ. |
45 |
15 |
22 |
42 |
Св 100 до 500 включ |
30 |
8 |
15 |
22 |
Ацепромаэин |
От 1 до 100 включ. |
65 |
11 |
32 |
31 |
Св 100 до 500 включ |
25 |
8 |
12 |
22 |
Ксилазин |
От 1 до 500 включ |
47 |
16 |
23 |
45 |
Трифлупромазин |
От 1 до 100 включ |
65 |
23 |
32 |
64 |
Св 100 до 500 включ |
32 |
11 |
16 |
31 |
Детомидин |
От 1 до 100 включ. |
45 |
11 |
22 |
31 |
Св 100 до 500 включ |
30 |
9 |
15 |
25 |
Медетомидин |
От 1 до 10 включ |
32 |
11 |
15 |
31 |
Св 10 до 500 включ. |
25 |
8 |
12 |
22 |
Хлорпромазин |
От 10 до 100 включ |
58 |
12 |
26 |
34 |
Св 100 до 500 включ |
32 |
10 |
16 |
28 |
Меперидин |
От 1 до 100 включ. |
34 |
11 |
17 |
31 |
Св 100 до 500 включ |
10 |
3 |
5 |
7 |
Диазепам |
От 1 до 100 включ, |
41 |
12 |
18 |
34 |
Св 100 до 500 включ |
10 |
3 |
5 |
8 |
Метопролол |
От 1 до 10 включ |
32 |
6 |
9 |
17 |
Св 10 до 500 включ. |
13 |
4 |
6 |
11 |
Ромифидин |
От 10 до 500 включ |
13 |
4 |
6 |
10 |
Промазин |
От 10 до 100 включ |
30 |
9 |
14 |
26 |
Св 100 до 500 включ |
13 |
4 |
6 |
10 |
|
ГОСТ 34139-2017
Таблица б — Показатели точности и прецизионности метода при определении содержания седативных препаратов и адреноблокаторов в пробах мяса и молока |
Аиалит |
Диапазон измерении содержания, мкг/кг |
Значение относительной расширенной неопределенности Ur %. при коэффициенте охвата *■ 2 |
Показатель повторяемости (относительное стандартное отклонение повторяемости) |
Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости) aR.% |
Предел
повторяе
мости
г.% |
Азаперол |
От 1 до 500 в ключ |
29 |
8 |
12 |
22 |
Азаперон |
От 1 до 100 в ключ |
61 |
20 |
30 |
56 |
Се 100до500включ |
32 |
8 |
15 |
22 |
Пропионилпромазин |
От 10 до 100 включ |
38 |
12 |
18 |
34 |
Св 100 до 500 в ключ |
22 |
7 |
11 |
20 |
Галоперидол |
От 10 до 100 вклюн |
48 |
12 |
15 |
34 |
Св 100 до 500 включ |
30 |
8 |
12 |
22 |
Флуфеназин |
От 1 до 100 в ключ |
45 |
10 |
20 |
28 |
Св 100 до 500 в ключ |
35 |
12 |
16 |
34 |
Каразолол |
От 1 до 100 включ |
30 |
9 |
14 |
25 |
Св 100 до 500 включ |
25 |
7 |
12 |
20 |
Ацепромазин |
От 1 до 100 включ |
26 |
8 |
12 |
22 |
Св 100 до 500 включ |
22 |
7 |
11 |
20 |
Ксилазин |
От 1 до 500 включ |
31 |
10 |
15 |
28 |
Трифлупромазин |
От 1 до 100 включ. |
40 |
9 |
17 |
25 |
Св 100 до 500 включ |
32 |
9 |
15 |
25 |
Детомидин |
От 1 до 500 включ |
35 |
10 |
16 |
28 |
Медетомидин |
От 1 до 500 включ |
36 |
10 |
16 |
28 |
Хлорпромазин |
От 1 до 10 включ |
49 |
16 |
24 |
45 |
Св 10 до 500 включ |
30 |
8 |
14 |
22 |
Меперидин |
От 1 до 100 включ |
40 |
13 |
20 |
36 |
Св 100 до 500 включ |
30 |
9 |
15 |
25 |
Диазепам |
От 1 до 100 включ. |
35 |
10 |
16 |
28 |
Св 100 до 500 включ |
28 |
9 |
14 |
25 |
Метоп ролол |
От 1 до 100 включ |
41 |
13 |
20 |
36 |
Св 100 до 500 включ |
25 |
8 |
12 |
22 |
Ромифидин |
От 1 до 100 включ |
35 |
12 |
16 |
34 |
Св 100 до 500 включ |
28 |
8 |
13 |
22 |
Промазин |
От 10 до 500 включ |
27 |
7 |
12 |
20 |
|
11 Оформление результатов измерений
Содержание /-го аналита. м к г/кг, представляют в виде
X, ± 0,01 Uf-% при Р = 0.95, (3)
где Я) — среднеарифметическое значение вычислений двух параллельных измерений содержания /-го аналита в анализируемой пробе, мкг/кг (см. 9.3);
ГОСТ 34139-2017
U, — значение относительной расширенной неопределенности содержания /-го аналита для соответствующего диапазона измерений. % (в соответствии с таблицами 5 и 6);
0.01 • Uf’Xf — значение расширенной неопределенности в абсолютных единицах, мкг/кг.
Числовое значение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение расширенной неопределенности, содержащее не более четырех значащих цифр и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).
12 Контроль стабильности результатов измерений
Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 6.2.3) с использованием контрольных карт Шухарта.
12
УДК 637.07:614.3:006.354 МКС 67.050
67.100
67.120.10
Ключевые слова: продукты пищевые, продовольственное сырье, седативные препараты и адренобло-каторы. метод определения содержания с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
13
БЗ 9-2017/93
Редактор Л В Коретникова Технический редактор И Е Черепкова Корректор МИ Першина Компьютерная верстка Е О Асташина
Сдано в набор 21 09 2017. Подписано в печать 09 10 2017. Формат 60«841/в. Гарнитура Ариал Уел. печ л. 1.86 Уч.-иэд. л. 1.68. Тираж 28 экз Зак 1750.
Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ
Метод определения остаточного содержания седативных препаратов и адреноблокаторов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим
детектированием
Food products, food raw materials Method for determination of the residual content of sedatives and blockers by high performance liquid chromatography — mass spectrometry
Дата введения — 2018—07—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и продовольственное сырье: мясо (все виды животных), субпродукты (печень, почки), молоко, молочные продукты и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ВЭЖХ-МС/МС) для определения остаточного содержания седативных препаратов и адреноблокаторов в диапазоне измерений от 1.0 до 500.0 мкг/кг.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты'
ГОСТ 12.2.085-2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности
ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИС0 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия
ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике"
ГОСТ 5848-73 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия
ГОСТ 7269-2015 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести
ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435—73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия
‘ В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12 1 019—2009 В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2012
Издание официальное
ГОСТ 22300-76 Реактивы Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 29245-91 Консервы молочные. Методы определения физических и органолептических показателей
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты*, который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты* за текущий год Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку
3 Сущность метода
Метод основан на извлечении седативных препаратов и адреноблокаторов из анализируемой пробы с последующим количественным определением их методом ВЭЖХ-МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций (ММР). Количественное определение проводят методом внутреннего стандарта.
4 Требования безопасности и условия выполнения измерений
4.1 Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го класса опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.
4.2 Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.
4.3 Приготовление градуировочных растворов проводят в вытяжном шкафу
4 4 При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила по электробезопасности по ГОСТ 12.1.019 и правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением по ГОСТ 12.2.085.
4.5 Применяемые при определении остаточных содержаний седативных препаратов и адреноблокаторов средства измерений должны иметь свидетельства о поверке, вспомогательное обордова-ние — свидетельства об аттестации, оформленные в соответствии с требованиями национального законодательства в области обеспечения единства измерений, действующего на территории государства, принявшего стандарт.
4.6 К выполнению измерений методом ВЭЖХ-МС/МС допускаются лица, владеющие техникой ВЭЖХ-МС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемого оборудования
4.7 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- температура окружающего воздуха........................................................................от 15 °С до 30 °С;
- относительная влажность воздуха............................................................................от 20 % до 80 %.
5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы,посуда и реактивы
5.1 Для определения остаточного содержания седативных препаратов и адреноблокаторов применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и посуду:
- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с максимальной нагрузкой не более 150 г и пределами допускаемой погрешности не более ± 0.001 г;
- весы высокого (II) класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0,02 мг;
- масс-спектрометр, оснащенный источником ионизации с электрораспылением, квадрулольными анализаторами с диапазоном измерений от 50 до 500 атомных единиц массы (а. е. м ), массовым разре- 2
ГОСТ 34139-2017
шением не менее 0.7 а. е. м.. с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0.1 а. е. м.. с режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС);
- систему высокоэффективной жидкостной хроматографии, оснащенную бинарным насосом со смесителем, системой фильтрования и дегазации подвижных фаз. термостатом хроматографической колонки, обеспечивающим температуру нагрева до (50 ± 1) X;
- колонку хроматографическую заполненную обращенно-фазным сорбентом С18 с размером частиц не более 5.0 мкм. длиной 150 мм и внутренним диаметром 2.1 мм;
- компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;
- модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 60 X;
- баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм3;
- встряхиватель (шейкер) вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2500 об/мин;
- генератор азота, с объемной долей азота не менее 90 % и производительностью 200 дм3/мин;
- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;
- камеру лабораторную морозильную с рабочим диапазоном температур от минус 15 °С до минус 25 X;
- систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 МОм см;
- холодильник бытовой с рабочим диапазоном температур от 2 X до 8 X;
- центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения не менее 4000 об/мин и диапазоном температур от 4 X до 20 X с адаптерами для пробирок вместимостью 15 см3;
- центрифугу лабораторную с центробежным ускорением не менее 15000 об/мин и с адаптерами для пробирок вместимостью 1.5 см3;
- шкаф сушильный с максимальной температурой нагрева не менее 200 X и погрешностью поддержания заданной температуры ± 5 X;
- пробы, не содержащие седативные препараты и адреноблокаторы. подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8, в зависимости от типа анализируемой матрицы («чистые» пробы');
- фильтры нейлоновые мембранные с диаметром пор 0.2 мкм;
- виалы (флаконы) для автоматического устройства ввода проб, вместимостью 2 см3, с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками;
- виалы (флаконы) или пробирки полипропиленовые вместимостью 15 см3 с завинчивающимися крышками;
- пробирки микроцентрифужные полипропиленовые вместимостью 1.5 см3;
- колбы 1-25(1000)-2 по ГОСТ 1770;
- пипетки 2-2-1-2(5,10) по ГОСТ 29227;
- пипетки одноканальные переменной вместимости 20—100,200—1000.500—5000 мм3с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ± 1 %;
- пробирки П-2-10-14/23 ХС по ГОСТ 1770;
-цилиндры 1-25(1000)-1 по ГОСТ 1770.
5.2 При определении остаточного содержания седативных препаратов и адреноблокаторов применяют следующие реактивы:
- азот газообразный марки 60 по ГОСТ 9293. ос. ч.;
- ацетон по ГОСТ 2603;
- ацетонитрил для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %;
- кислоту муравьиную по ГОСТ 5848. ч. д. а.;
- метанол, по ГОСТ 6995, х. ч.;
- воду деионизированную для ВЭЖХ, полученную с использованием системы производства уль-трачистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709;
- эфир этиловый уксусной кислоты (этилацетат) по ГОСТ 22300. ч. д. а.
5.3 При определении содержания седативных препаратов и адреноблокаторов в качестве образцов сравнения применяют следующие соединения с массовой долей основного вещества не менее 90 %;
Срок хранения «чистых» проб при температуре от минус 15 X до минус 25 °С — не более 3 мес
3
ГОСТ 34139-2017
5.3.1 Для приготовления исходных растворов:
-азаперол;
-азаперон;
- ацепромазин;
- галолеридол;
•диазепам;
- детомидин;
-каразолол;
-ксилазин;
- медетомидин;
- меперидин;
- метопролол;
- промазин;
- пропионилпромазин;
- ромифидин;
- трифлупромазин;
- флуфеназин;
- хлорпромазин.
5.3.2 Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов:
-азаперол-Д4;
-азаперон-Д4;
- каразолол-Д7.
5.4 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также вспомогательного оборудования, реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
6 Подготовка к проведению измерений
6.1 Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.1.1 Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.
6.1.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократно), ацетоном (дважды).
6.1.3 Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 °С до 110 °С.
6.1.4 Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.
6.2 Приготовление растворов
6.2.1 Приготовление подвижной фазы А
Для приготовления подвижной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 600 с»л3 деионизированной воды, 5.0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, доводят объем раствора деионизированной водой до метки на колбе и помещают в ультразвуковую баню в режиме дегазации на 5 мин. Срок хранения раствора при температуре от 15 "С до 25 °С — не более 2 мес.
6.2.2 Приготовление подвижной фазы Б
Для приготовления подвижной фазы Б в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 600 см3 метанола. 5,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, доводят объем раствора метанолом до метки на колбе и помещают в ультразвуковую баню в режиме дегазации на 5 мин.
Срок хранения раствора при температуре от 15 “С до 25 °С — не более 1 мес.
6.3 Приготовление градуировочных растворов
6.3.1 Приготовление исходных стандартных растворов седативных препаратов и адреноблокаторов (азаперон, азаперол, промазин, детомидин, метопролол, каразолол,
4
ГОСТ 34139-2017
ксилазин, галоперидол, ацепромазин, хлорпромазин, пропионилпромазин, трифлупромазин, диазепам, медетомидин, меперидин, ромифидин и флуфеназин) (растворы С0) и исходных растворов внутренних стандартов (каразолол-Д7, азаперон-Д4, азаперол-Д4) (растворы D0) с массовыми концентрациями 200 мкг/см3
Таблица 1 — Соответствие между аналитами и внутренними стандартами |
Наименование аналита |
Наименование внутреннего стандарта |
Азалерол |
Азаперол-Д4 |
Диазепам |
Азаперон |
Азаперон-Д4 |
Ромифидин |
Ацепромазин |
Караэолол-Д7 |
Галоперидол |
Детом идин |
Караэолол |
Ксилазин |
Медетомидин |
Метопролол |
Меперидин |
Промазин |
Пропионилпромазин |
Трифлупромазин |
Флуфеназин |
Хлорпромазин |
|
6.3.1.2 Для приготовления исходных стандартных растворов С0 и О0, рассчитывают необходимую массу йго вещества, эквивалентную 5,0 мг с учетом содержания основного вещества для каждого определяемого аналита и внутреннего стандарта по формуле |
6.3.1.1 Внутренние стандарты для седативных препаратов и адреноблокаторов выбирают в соответствии с таблицей 1.
где С — концентрация /-го аналита в стандартном растворе, мкг/см3;
V— объем мерной колбы, см3;
Р, — массовая доля основного вещества в мл стандартном образце. %.
/И, — молярная масса основного вещества в нм стандартном образце, г/моль;
^аналита / — молярная масса йго аналита. г/моль.
В мерные колбы вместимостью 25 см3 по отдельности вносят рассчитанные массы исходных веществ (взвешивание проводят с точностью до первого десятичного знака). Приливают по 15 см3 метанола. закрывают пробками, перемешивают и. после полного растворения сухого вещества, доводят объем растворов метанолом до метки на колбе Помещают в ультразвуковую баню на 5 мин в режиме перемешивания.
Срок хранения растворов при температуре от минус 15 °С до минус 25 °С — не более одного года.
Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.
6.3.2 Приготовление рабочих стандартных растворов седативных препаратов и адреноблокаторов (растворы С,—С^) и их внутренних стандартов (растворы D1t D2)
Рабочие растворы С,—С3. О,. D2 готовят в мерных пробирках вместимостью 10 см3 в соответствии с рисунком 1.
5
Растворы хранят при температуре от минус 15 °С до минус 25 °С. Срок хранения растворов С,, D, — не более 6 мес, С2, 02 — не более 3 мес, С3 — не более одной недели.
Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.
6.3.3 Приготовление матричных градуировочных растворов (растворы G1—G6)
Матричные градуировочные растворы G,— G6 готовят в виалах или полипропиленовых пробирках вместимостью 15 см3 из «чистых» проб массой 1.0 г. в которые вносят рабочий раствор внутренних стандартов D2 и рабочие растворы определяемых аналитов С,. С2. С3 в соответствии с таблицей 2.
Таблица 2 — Приготовление матричных градуировочных растворов G,—G6 |
Обозначение и массовая концен-трация матричного градуировочного раствора |
Вносимый объем рабочего раствора, см3 |
Ci |
с2 |
С3 |
°г |
G, (500 нг/см3) |
0.25 |
— |
— |
0.05 |
Gj (100 нг/см3) |
— |
0.1 |
— |
0.05 |
G3 (50 нг/см3) |
— |
0.05 |
— |
0,05 |
G4 (10 нг/см3) |
— |
— |
0.1 |
0.05 |
G5 (5 нг/см3) |
— |
— |
0.05 |
0.05 |
Ge (1 нг/см3) |
— |
— |
0.01 |
0,05 |
|
Пробирки встряхивают в шейкере в течение 1—2 мин. выдерживают в темноте при комнатной температуре в течение 10 мин и проводят дальнейшую обработку растворов согласно разделу 7.
Срок хранения растворов G,—G6 при температуре от 2 °С до 8 °С — не более суток.
7 Отбор и подготовка проб
7.1 Отбор проб
7.1.1 Отбор проб мяса, субпродуктов — по ГОСТ 7269.
7.1.2 Отбор проб молока и молочных продуктов — по ГОСТ 26809.1.
7.1.3 Пробы, отобранные по 7.1.1, при отсутствии возможности анализа в день отбора замораживают и хранят при температуре от минус 15 °С до минус 25 °С до проведения анализа
7.2 Подготовка проб мяса, субпродуктов, молока, молочных продуктов при определении
седативных препаратов и адреноблокаторов
Подготовку проб молока, молочных продуктов проводят по ГОСТ 26809.1 [восстановление сухих молочных продуктов — по ГОСТ 29245 (пункт 3 4)). Мышечную ткань предварительно очищают от грубой соединительной ткани. 100 г мяса, субпродуктов измельчают на гомогенизаторе. Далее обработку пробы проводят в соответствии с рисунком 2.
6
8 Порядок выполнения анализа
8.1 Условия хроматографического разделения
8.1.1 Масс-спектрометр и хроматограф включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и хроматографического разделения.
8.1.2 Например, для колонки диаметром 2.1 мм. длиной 150 мм. с обращенно-фазным сорбентом С18 с размером частиц не более 5.0 мкм. соблюдают следующие условия хроматографирования:
- температура колонки — 40 °С;
- скорость потока подвижной фазы — 0,25 см3/мин;
- объем вводимой пробы — 20 мм3.
Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление подвижных фаз А и Б по 6.2) в соответствии с таблицей 3.
Таблица 3 — Условия градиентного элюирования при регистрации положительных ионов |
Время, мин |
Подвижная фаза А. % |
Подвижная фаза 6, % |
0.0 |
95 |
5 |
1.0 |
95 |
5 |
20.0 |
5 |
95 |
|
7 |
Время, мин |
Подвижная фаза А. % |
Подвижная фаза Б. % |
20,1 |
95 |
5 |
30,0 |
95 |
5 |
8.1.3 Параметры режима ММР при измерении седативных препаратов и адреноблокаторов приведены в таблице 4.
Параметры настройки масс-слектрометрического детектора:
- напряжение на распыляющем капилляре (IS) 5500 В при регистрации положитепьных ионов; -температура источника 500 ®С;
- разрешение квадруполей Q1/Q3 — единичное;
- поток газа для фрагментации (CAD) — 6 кПа.
Таблица 4 — Параметры воздействия на ионы в режиме ММР с регистрацией положительных ионов |
Аналит |
Ион-предшественник. т/г |
Ион-продукт,
т/г |
Время удерживания, мин |
Энергия соударений. эВ |
Ускоряющее напряжение на выходе из ячейки столкновений.В |
Азалерол |
330,3 |
121,1 |
312,2 |
6,87 |
28 |
20 |
12 |
13 |
Пропионилпромазин |
341,3 |
236,2 |
268,2 |
15,75 |
47 |
32 |
11 |
20 |
Галоперидол |
376,2 |
165,1 |
123,2 |
13,90 |
31 |
55 |
11 |
11 |
Азалерон |
328,3 |
121,1 |
165,2 |
8,01 |
25 |
27 |
12 |
11 |
Флуфеназин |
438,2 |
143,2 |
171,2 |
16,85 |
38 |
34 |
9 |
12 |
Каразолол |
299,2 |
116.2 |
222,2 |
11.64 |
27 |
26 |
10 |
10 |
Ацепромазин |
327,2 |
86,0 |
254,3 |
14,6 |
23 |
31 |
14 |
16 |
Ксилазин |
221,1 |
90,0 |
164,1 |
9,93 |
30 |
35 |
11 |
11 |
Трифлулромазин |
353,2 |
58,2 |
280,1 |
16,61 |
68 |
32 |
7 |
13 |
Детомидин |
187,3 |
81,0 |
54.2 |
11.66 |
25 |
51 |
11 |
8 |
Медетомидин |
201,3 |
95,3 |
68,1 |
12,84 |
24 |
45 |
6 |
8 |
Хлорпромазин |
319,2 |
58,0 |
246,1 |
16,15 |
83 |
30 |
11 |
17 |
Меперидин |
248,2 |
103,2 |
220.3 |
11,11 |
50 |
30 |
8 |
14 |
Диазепам |
285,0 |
154,2 |
193,1 |
17,77 |
36 |
46 |
15 |
15 |
Метопролол |
268,2 |
116,2 |
191,2 |
10,49 |
25 |
23 |
18 |
13 |
Ромифидин |
259,4 |
160,0 |
178,0 |
6,00 |
40 |
45 |
9 |
10 |
Промазин |
284,6 |
180,1 |
212,1 |
11.16 |
52 |
30 |
10 |
15 |
Азалерол-Д4* |
334,3 |
153,2 |
6,80 |
37 |
10 |
Азалерон-Д4* |
332,3 |
127,2 |
7,94 |
50 |
17 |
Каразолол-Д7* |
306.1 |
123,0 |
11.61 |
24 |
10 |
’ Внутренний стандарт |
|
Примечание — Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-спектро-метрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования |
8.1 4 Контроль чувствительности масс-спектрометра осуществляют введением в инжектор хроматографа 20 мм3 градуировочного раствора G6 (см. 6.3.3). Полученное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 10.
8.2 Построение градуировочной характеристики
Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии анализов с помощью программного обеспечения хромато-масс-спектрометра
1
Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123001 Москва. Гранатный пер . 4 www.gostaf6.ru info@gostinfo ru
2