МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

СИСТЕМЫ ЖИЗНЕОБЕСПЕЧЕНИЯ НА ЖЕЛЕЗНОДОРОЖНОМ ПОДВИЖНОМ

СОСТАВЕ

Часть 6

Методы гигиенической оценки системы водоснабжения

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2016

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным унитарным предприятием «Всероссийский научно-исследовательский институт железнодорожной гигиены Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека» (ФГУП ВНИИЖГ Роспотребнадзора)

2    ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 524 «Железнодорожный транспорт»

3    ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 февраля 2016 г. № 85-П)

За принятие стандарта проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Армения AM Минэкономики Республики Армения Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан Киргизия KG Кыргызстандарт Россия RU Росстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 мая 2016 года № 324-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33463.6-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 года

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт может быть применен на добровольной основе для оценки соответствия требованиям технических регламентов Таможенного союза: «О безопасности железнодорожного подвижного состава», «О безопасности высокоскоростного железнодорожного транспорта»

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты» (по состоянию на 1 января текущего года), а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

©Стандартинформ, 2016

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ 33463.6-2016

6.7.2    Допустимый срокхранения проб воды (от момента отбора проб до начала проведения анализа) для определения значений всех санитарно-микробиологических (по 8.1) и санитарно-химических показателей (по 9.1), характеризующих качество воды в системе водоснабжения объекта испытаний на момент отбора, составляет 6 ч при температуре от 4 °С до 10 °С.

Примечание — При необходимости определения значений отдельных показателей допустимый срок хранения проб воды по ГОСТ 31861 (пункт 5.5). Максимальный допустимый срок хранения проб воды, в соответствии с ГОСТ 31942 (приложение А), при температуре (5 ± 3) °С составляет: для определения общего микробного числа, Е. coli, колиформных бактерий, энтерококков, патогенных микроорганизмов кишечной группы 12—18 ч, для иных потенциально-патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae — 48 ч, Pseudomonas aeruginosa 8—12 ч, Legionella spp. — 24 ч.

6.7.3    Для правильной оценки результатов анализов фиксируют температуру воздуха при отборе проб, а также дополнительные сведения или факторы и отклонения от установленной процедуры отбора, доставки, хранения, которые могут повлиять на результат анализов по ГОСТ31942 (пункт 8.4).

6.8 Отбор проб подтверждается актом отбора. Форма акта отбора приведена в приложении Б.

7 Требования к средствам измерений, испытательному и вспомогательному оборудованию, стандартным образцам

7.1    Применяемые средства измерений и испытательное оборудование должны соответствовать требованиям национального законодательства об обеспечении единства измерений*.

7.2    Измерение температуры воздуха производят средствами измерения температуры с пределами погрешности +1 °С, относительной влажности (для целей 8.2.3) — гигрометрами с погрешностью не более 5%.

7.3    Для регистрации времени используют часы с пределами погрешности точности хода ±1 мин в сутки, а также средства измерений температуры с функцией фиксации времени с погрешностью, не превышающей указанную.

7.4    Термостаты должны обеспечивать поддержание температуры в пределах (36±2)°С, (44,0 + 0,5) °С.

7.5    Для измерения массы применяют весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания не менее 200 г (с пределами допускаемой погрешности +0,02 г) и не менее 1000 г (с пределами допускаемой погрешности+0,1 г).

7.6    Для измерения водородного показателя pH используется PH-метр с диапазоном измерений от 0 до 14 ед. pH с пределами допускаемой погрешности+0,01 ед. pH.

7.7    Для оптической стандартизации бактериальных взвесей применяют оптический стандарт мутности на 10 единиц.

7.8    Вспомогательное оборудование, обеспечивающее допустимые условия доставки проб воды (термосумки, переносной термостат, термоконтейнер или иное оборудование) подвергают периодической проверке технического состояния в соответствии с указаниями, содержащимися в инструкциях по эксплуатации этого оборудования или паспортах на них.

7.9    Оборудование для отбора проб на санитарно-химические показатели должно соответствовать требованиям ГОСТ31861 (пункты 4.1,4.4,4.7—4.10), на санитарно-микробиологические показатели — ГОСТ31942 (пункты 5.3,5.5, 5.6).

7.10    Оборудование для санитарно-химического анализа воды должно соответствовать требованиям стандартов или методических документов по 9.1.2.

7.11    Санитарно-микробиологический анализ воды проводится в стационарной микробиологической лаборатории. Оборудование микробиологической лаборатории, расходные материалы, реактивы, питательные среды — см. приложение В.

Примечание — Для обеспечения сроков начала анализа по 6.7.2 допускается провести посев проб (начальный этап анализа) в условиях переносной или передвижной лаборатории (в случае, когда не предоставляется возможным в срокдоставить пробы в стационарную лабораторию) при наличии оборудования, удовлетворяющего требованиям ГОСТ 24849 (пункт 5.3).

* В Российской Федерации действуют Федеральный закон «Об обеспечении единства измерений» № 102-ФЗ от 26 июня 2008 года, правила по метрологии ПР 50.2.006—94 «Государственная система обеспечения единства измерений. Порядок проведения поверки средств измерений» и ГОСТ Р 8.568-97 «Государственная система обеспечения единства измерений. Аттестация испытательного оборудования. Основные положения».

7

8 Методы санитарно-микробиологического анализа

8.1    Определяемые показатели

8.1.1    При гигиенической оценке системы водоснабжения объекта испытаний по санитарно-микробиологическим показателям определяют:

-    общее микробное число;

-    показатель «Escherichia coli»;

-    показатель «Колиформные бактерии»;

-    показатель «Энтерококки»;

-    показатель «Колифаги»;

-    показатель «Pseudomonas aeruginosa» (далее — Р. aeruginosa).

8.1.2    При микробиологическом анализе ОМЧ определяют количество колонии образующих единиц в 1 см³ исследуемой пробы воды (КОЕ/см³).

8.1.3    При определении показателей Escherichia coli (E.coli), колиформных бактерий проводят трехкратное исследование по 100 см³ отобранной пробы воды. Энтерококки определяют в 100 см³ пробы воды.

8.1.4    При отсутствии роста E.coli и (или) колиформных бактерий, но наличии роста оксидазоотри-цательных бактерий, проводят определение их принадлежности к бактериям семейства Enterobacteriaceae по ферментации глюкозы, при обнаружении роста оксидазоположительных бактерий проводят определение показателя Р. aeruginosa и устанавливают «наличие—отсутствие» этих бактерий в исследованной пробе воды.

8.1.5    Обнаружение в пробе воды Escherichia coli и (или) колиформных бактерий более 5 КОЕ/100 см³, и (или) колифагов более 2 БОЕ/ЮО см³ является показанием к определению патогенных микроорганизмов (Salmonella, Shigella, Yersinia, Legionella pneumophila, P. aeruginosa, Klebsiella, Citrobacter и другие).

8.1.6    Для санитарно-микробиологического анализа используют наборы реагентов и сред питательных микробиологических, а также иные изделия медицинского назначения, разрешенные к применению на территории государства, принявшего стандарт¹.

8.2 Методы определения общего микробного числа

8.2.1    Определение общего числа микроорганизмов (ОМЧ), образующих колонии

на питательном агаре

8.2.1.1    Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных и аэробных микроорганизмов, способныхобразовывать колонии на питательном агаре при температуре (36 ± 2) °С в течение 24 ч, видимые с увеличением в 2 раза.

8.2.1.2    При выполнении анализа из каждой пробы воды делают посев не менее двух объемов по 1 см³ без разведения.

Посев воды проводят после тщательного перемешивания пробы. Посев производят, внося по 1 см³ воды из пробы в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышку. Сразу после внесения воды в каждую чашку Петри наливают небольшое количество (от 8 до 10 см³ на одну чашку Петри диаметром 90 или 100 мм) расплавленного и остуженного до температуры в пределах от 45 °С до 48 °С питательного агара (не касаясь посевной пробы), предварительно фламбируя край емкости, в которой он находился. После внесения агара содержимое чашки Петри плавно перемешивают, равномерно распределяя его по дну чашки, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки, и помещают на горизонтальную поверхность.

Посев и заливку посевов питательным агаром проводят между пламенем двух горелок с целью обеспечения условий асептики.

После застывания агара чашки Петри с посевами переворачивают (вверх дном), помещают в термостат и инкубируют при температуре (36 + 2) °С в течение (24 + 4) ч.

После инкубации чашки Петри с посевами извлекают из термостата, подсчитывают все выросшие на чашках колонии микроорганизмов (X), видимые при увеличении в 2 раза, и регистрируют в журнале испытаний. Подсчет проводят только на тех чашках, на которых выросло не более 300 колоний.

ГОСТ 33463.6-2016

Результат допускается представлять на основании подсчета колоний на одной чашке, если на другой чашке обнаружен ползучий рост колоний, или число колоний превышает 300.

Если на всехчашках имеет место рост расплывчатых колоний, который не распространился на всю поверхность чашки, подсчитывают колонии на секторе с изолированными колониями с последующим пересчетом на всю площадь чашки.

Если на чашке выросло более 300 изолированных колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают колонии на двух секторах, выбранных на участках чашки с максимальным и минимальным ростом и пересчитывают на всю площадь чашки.

В этих случаях в протоколе отмечают «Число КОЕ в 1 см³ ориентировочно».

Если подсчет колоний на чашках невозможен за счет сплошного роста изолированных колоний, в журнал испытаний вносят текст: «Сплошной рост». Если на всех засеянных чашках рост расплывчатых колоний бактерий распространился на всю поверхность чашки, то в журнал испытаний вносят текст: «Сливной рост».

Если ни на одной из засеянныхчашек не выросло ни одной колонии, в протоколе исследований указывают — «КОЕ ОМЧ не обнаружено в 1 см³».

Примечан ие — Если рост колоний на чашках с посевами не обнаружен, то допустимо продолжить инкубацию посевов до 48 ч, после чего окончательно учесть результат.

8.2.1.3 Содержание микроорганизмов (X) в 1 см³ анализируемой пробы воды рассчитывают по формуле

где N — число колоний, подсчитанных и зарегистрированных по 8.2.1.2;

V — объем воды, см³, использованный для посева на чашки Петри, на которых велся подсчет.

Результат округляют до целого числа и выражают числом колоний образующих единиц микроорганизмов в 1 см³ пробы воды.

8.2.2    Определение ОМЧ с использованием готовых к употреблению питательных подложек

Для определения ОМЧ анализируемую воду в объеме 1 см³ вносят на поверхность подложки (при

использовании петрифильма в центр и аккуратно опускают верхнюю пленку). Посевы инкубируют при температуре (36 + 2) °С в течение 18—24 ч.

Подсчет колоний по 8.2.1.2.

8.2.3    Проведение посева проб воды на месте отбора проб с последующей доставкой

в стационарную лабораторию

8.2.3.1    Посев проб воды на месте отбора для определения ОМЧ проводят в соответствии с 8.2.1.2.

Посевы помещают в переносной термостат или термоконтейнер с температурой внутри камеры не

ниже 30 °С и доставляют для дальнейшего анализа в стационарную лабораторию в срок не более 24 ч.

В стационарной лаборатории посевы переносят в термостат при температуре (36 ± 2) °С. Через 24 ч инкубации посевов проводят учет выросших колоний. При отсутствии роста колоний общее время инкубации посевов должно составлять 48 ч.

8.2.3.2    Подсчет и идентификацию обнаруженных микроорганизмов в посеве проб воды, учет, обработку проводят в стационарной лаборатории по 8.2.1.2, 8.2.1.3.

8.2.3.3    Доставка посевов проб воды в стационарную лабораторию должна сопровождаться передачей акта отбора проб воды и документа, включающего информацию о процедуре посева: условия посева (температура и влажность воздуха), дата и время посева, фамилию, имя и отчество лица, проводившего отбор и посев проб воды.

8.3    Определение Е.соМ и колиформных бактерий

8.3.1    Показатели Е.соМ и колиформных бактерий определяют методом мембранной фильтрации в соответствии с ГОСТ 31955.

8.3.2    Для определения содержания колиформных бактерий и Е. соМ может быть применен ускоренный метод с использованием хромогенных сред.

Метод позволяет определить содержание колиформных бактерий и бактерий Е. соМ в пробе воды в течение промежутка времени от 18 до 24 ч без дальнейшей идентификации выросших колоний.

Определение содержания колиформных бактерий и бактерий Е. соМ в пробе анализируемой воды проводят методом мембранной фильтрации по 8.3.1, используя в качестве дифференциальной питательной среды вместо среды Эндо или среды стергитолом-7 и ТТХодну из хромогенных сред, например, хромокульт колиформ агар (см. Д.5 Приложения Д).

9

Инкубацию посевов проводят при температуре (36 + 2) °С.

Хромогенные среды обеспечивают одновременное определение колиформных бактерий и Е. coli в одном посеве. Для дифференциации колиформных бактерий и Е. coli использованы различия указанных видов бактерий по ферментативной активности. Колиформные бактерии имеют фермент(3-галактозида-зу, а Е. coli — помимо этого фермента обладают ферментом р-глюкуронидазой.

В качестве колиформных бактерий учитывают красные и красно-коричневые с окрашенным ореолом вокруг колонии. В качестве Е. coli учитывают колонии бактерий сине-фиолетового цвета.

На среде хромокульт колиформ агаре иные бактерии, за исключением бактерий Е. coli, обладающих ферментом (3-глюкуронидазой, образуют колонии светло-голубого цвета, которые при подсчете не учитывают.

Обработку и оформление результатов проводят по ГОСТ 31955 (раздел 9,10).

Примечание — Метод с использованием хромокульт колиформ агара имеет такую же воспроизводимость результатов как при посеве на среды Эндо и тергитол-7 с ТТХ.

8.4 Определение энтерококков

8.4.1    Определение энтерококков методом мембранной фильтрации

8.4.1.1    Фильтруют 100 см³ пробы воды через мембранные фильтры с соблюдением требований, представленных в приложении Е. После фильтрования фильтры переносят, не переворачивая, на плотную агаризованную среду энтерококкагара (см. Д.9.1 приложения Д) или агаризованную плотную азидную среду Сланеца-Бертли (см. Д.9.2 приложения Д) и добиваются полного прилегания его к среде без образования пузырьков воздуха. Чашки Петри с посевами помещают в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (36 + 2) °С в течение 24—48 ч.

При отсутствии роста колоний инкубацию посевов продолжают до 48 ч.

После инкубации посевов учитывают колонии, характерные для энтерококков — выпуклые, с ровными краями, темно-малиновые, розовые, светло-розовые, равномерно окрашенные или с темно-красным не четко оформленным центром и подсчитывают их число.

Очень мелкие (на пределе видимости невооруженным глазом), плоские разных оттенков, ярко-малиновые с четко выраженным малиновым центром и бесцветным ободком колонии не учитывают.

Регистрируют число колоний энтерококков или их отсутствие в журнале испытаний.

8.4.1.2    При необходимости подтверждают наличие энтерококков с помощью тест-систем для идентификации энтерококков (в соответствии с инструкцией производителя) или одним из следующих способов.

Пересевают по 2—3 колонии каждого типа:

-    секторами на солевой агар с ТТХ (см. Д.9.3 приложения Д) и инкубируют при температуре (36 + 2) °С в течение 24 ч. Энтерококки на указанной среде дают равномерный нежный рост на протяжении всего штриха. Иные бактерии на этой подтверждающей среде не растут или растут на платформе штриха;

-    мембранный фильтр с выросшими колониями стерильным пинцетом, не переворачивая, переносят на поверхность желчь-эскулин-азидного агара, предварительно нагретого до 44 °С, и помещают в термостатна (44,0 + 0,5) °С (см. Д.9.4 приложения Д), инкубируют в течение 2 ч. В течение этого времени эскулин гидролизируется энтерококками с образованием характерных продуктов, что проявляется окрашиванием типичных для кишечных энтерококков колоний от коричневого до черного цвета.

8.4.1.3    Подсчитывают число колоний энтерококков на фильтрах, где выросло менее 50—70 колоний, суммируют и определяют по формуле

где X — число КОЕ энтерококков в 100 см³ исследуемой воды; а — число подсчитанных энтерококков в сумме;

V — объем воды, профильтрованный через фильтры, на которых велся учет.

В протоколе исследования выдают «Число КОЕ энтерококков в 100 см³ анализируемой пробы воды».

При отсутствии в пробе анализируемой воды энтерококков в протокол испытаний вносят текст: «Не обнаружено КОЕ энтерококков в 100 см³ пробы анализируемой воды».

ГОСТ 33463.6-2016

8.4.2    Ускоренные методы выявления энтерококков с использованием готовых

питательных сред на подложках

Подложку с питательной средой, разрешенной к применению в соответствии с 8.1.6, готовят к анализу в соответствии с технической документацией на подложку.

Пробы воды фильтруют в соответствии с приложением Е. Фильтры стерильным пинцетом накладывают на подложку и помещают в инкубатор или термостат.

Посевы инкубируют при температуре (36 + 2) °С в течение 18—24 ч.

Идентификацию энтерококков среди выросших колоний проводят по морфологии, цвету колоний в соответствии с технической документацией на подложку (в зависимости от используемой питательной среды).

Обработка по 8.2.1.3.

8.4.3    Сигнальный метод определения энтерококков

Навеску питательной среды для определения энтерококков вносят в 100 см³ исследуемой воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Посевы инкубируют в течение 18—24 ч при температуре (36 ± 2) °С.

Примечание — Допускается в соответствии с прилагаемой инструкцией производителя инкубирование посевов при температуре от 20 °С до 25 °С в течение 48 ч.

После инкубации посевов проводят учет результатов, при этом считают, что:

-    энтерококки отсутствуют, если цвет среды не изменился или отмечено помутнение среды без изменения цвета;

-    бактерии обнаружены, если среда приобрела цвет, описанный в инструкции производителя во всем объеме или верхнем слое. При перемешивании цвет среды не должен измениться.

8.5 Определение колифагов прямым методом

8.5.1    Общие положения

Показатель «Колифаги» предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды в отношении возможного вирусного загрязнения.

Метод основан на предварительном накоплении колифагов в среде обогащения на культуре E.coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) посева газоном E.coli на питательном агаре.

8.5.2    Подготовка тест — культуры E.coli K12F+ Str-r

На всех этапах исследования используют бактериальную взвесь, приготовленную следующим образом: культуру E.coli K12F+ Str-r засевают в пробирку на скошенный питательный агар. Через (18 + 2) ч инкубации при температуре (36 + 2) °С производят смыв бактерий с косяка 5 см³ стерильного физиологического раствора и по стандарту мутности готовят взвесь E.coli в концентрации 10⁹ бактериальных клеток в 1 см³.

Примечание — Допускается использование 4-часовой бульонной культуры E.coli К₁₂ F⁺ Str-r, полученной при температуре инкубации (36 ± 2) °С, для внесения в питательный агар, расплавленный и остуженный до (44,0 ± 0,5) °С. Концентрация 10⁹ бактериальных клеток E.coli содержится в 2 см³ питательного бульона.

8.5.3    Выполнение анализа

В исследуемую пробу воды объемом 100 см³ вносят 10 см³ 10-кратного питательного бульона и 1 см³ подготовленного смыва тест-культуры или 2 см³ 4-часовой бульонной культуры.

Для контроля культуры 0,1 см³ смыва бактерий E.coli (или 0,2 см³ 4-часовой бульонной культуры) помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

Исследуемую пробу воды (100 см³) и чашку Петри с контролем E.coli помещают в термостат при температуре (36 + 2) °С на (18 + 2) ч.

В зависимости от плотности используемого агара проводят посевы воды по 10 см³ на 10 чашек или по 20 см³ на 5 чашек. Для освобождения исследуемой воды от сопутствующей бактериальной флоры, ее обрабатывают хлороформом из расчета 1 см³ хлороформа на 10 см³ воды. Пробу тщательно встряхивают и отстаивают в течение 15 мин при комнатной температуре для осаждения хлороформа. На исследование берут воду над хлороформом. В питательный агар, расплавленный и остуженный до (44,0 + 0,5) °С, добавляют смыв E.coli K₁₂F⁺ Str-r (см. 8.5.2) из расчета 1,0 см³ смыва на каждые 100 см³ агара, после чего перемешивают. Для контроля культуры E.coli на возможную контаминацию ее посторонними колифагами в одну чашку Петри вносят 10 см³ стерильной водопроводной воды, прогретой до температуры от 20 °С до 25 °С, заливают 25 см³ приготовленного агара с E.coli K₁₂F⁺ Str-r и осторожно перемешивают.

11

Исследуемые объемы воды вносят в стерильные чашки Петри и заливают, слегка приоткрывая крышки, 25 см³ смеси агара с кишечной палочкой. При посеве пробы воды объемом 100 см³ ее предварительно нагревают до температуры (20—25) °С.

Содержимое чашек осторожно перемешивают и оставляют при комнатной температуре до застывания. Чашки с застывшим агаром помещают в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (36 + 2) °С в течение (18 + 2)ч.

8.5.4 Учет результатов

Просмотр посевов осуществляется в проходящем свете.

При исследовании 100 см³ воды (5 чашек по 20 см³) подсчитывают и суммируют все бляшки, выросшие на чашках Петри.

Если посевная доза была меньше 100 см³, то число колифагов вычисляют по формуле

Х=^Ж    (3)

где а — сумма бляшек на чашках;

V— объем исследуемой воды.

При исследовании децинормальных разведений, число колифагов в 100 см³ воды вычисляют по формуле

где а — сумма бляшек на чашке;

Pj — /'-е разведение; п — количество Д/разведений.

Результаты выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 см³ пробы воды. В контрольной чашке бляшки должны отсутствовать.

Предварительный учет результатов можно проводить через промежуток времени от 5 до 6 ч инкубации. На этом этапе при наличии четких зон лизиса может быть выдан предварительный ответ о присутствии колифагов в воде.

Окончательный количественный учет прямого посева проводится через (18 ±2) ч. Результаты выражают количеством бляшкообразующих единиц (БОЕ) на 100 см³ пробы воды.

Если отмечен сливной рост бляшек и счет затруднителен, то поданным прямого посева может быть выдан качественный результат: «Обнаружено в 100 см³ воды».

При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат исследования считается недействительным.

8.5.5 Постановка контролей

«Отрицательный контроль» — подтверждает отсутствие контаминации фагом питательных сред, лабораторной посуды, оборудования на этапах подготовки и проведения анализа, а также позволяет оценить способность тест-культуры E.coli давать равномерный газон.

«Отрицательным контролем» служит исследование стерильной водопроводной воды, проводимое аналогично анализируемой пробе воды. С этой целью, в зависимости от посевной дозы исследуемой воды, в стерильную чашку Петри вносят от 1 до 20 см³ стерильной водопроводной воды, заливают смесью мясо-пептонного агара с E.coli и инкубируют в течение 18—20 ч при температуре (36 + 2) °С.

В случае обнаружения бляшек колифагов в чашках с «отрицательным» контролем результаты исследования всей серии проб воды недействительны.

Следует проверить стерильность лабораторного оборудования, посуды, питательных сред, а также повторить контрольный посев на лизогенность тест-штамма E.coli К₁₂ F ⁺Str-r.

Для проверки культуры на лизогенность необходимо использовать новую пробирку с культурой, хранящейся на полужидком агаре. 1 см³ бактериальной взвеси помещают в стерильную чашку Петри и заливают расплавленным и остуженным до температуры в диапазоне от 45 °С до 49 °С питательным агаром, инкубируют при температуре (36 + 2) °С в течение (18 ± 2) ч.

Просмотр посевов осуществляют в проходящем свете. Наличие зон лизиса в контрольном посеве свидетельствует о спонтанно проявившемся свойстве культуры продуцировать фаги или контаминации ее колифагом в процессе работы.

Использование в работе лизогенной культуры запрещается. Необходимо получить новую лиофи-лизированную культуру.

12

ГОСТ 33463.6-2016

8.5.6    Методика подтверждения фаговой природы лизиса

С целью подтверждения фаговой природы лизиса бактериологической петлей извлекают участок агара с бляшкой колифага, вызывающей сомнение, помещают его в 5 см³ питательного бульона, куда добавляют каплю тест-культуры E.coli К₁₂ F⁺Str-r и инкубируют при (36 + 2) °С в течение (18 + 2)ч. Полученную культуру обрабатывают хлороформом или фильтруют через мембранный фильтр и исследуют на наличие фага. Высев осуществляют петлей или пипеткой на поверхность питательного агара содержащего взвесь E.coli, чашки инкубируют в термостате при (36 + 2) °С в течение (18 + 2) ч. Наличие зон лизиса на поверхности агара расценивается как подтверждение наличия фага.

8.6    Определение Р. aeruginosa

8.6.1    Метод 1

При обнаружении на мембранном фильтре, помещенном на среду Эндо, при посеве пробы воды на колиформные бактерии и (или) E.coli роста изолированныхоксидазоположительных бактерий проводят определение показателя Р. aeruginosa и устанавливают «наличие-отсутствие» этих бактерий в исследованной пробе воды.

Для подтверждения показателя Р. aeruginosa снимают с фильтра 2—3 изолированные колонии и производят посев на чашку Петри со средой «Блеск» путем укола, затем культуру растирают вокруг укола в виде бляшки диаметром от 2,0 до 2,5 см. После чего посевы инкубируют в термостате при температуре (36 + 2) °С в течение (24 + 2) ч.

В случае сливного или сплошного роста оксидазоположительных бактерий проводят рассев на чашки Петри с питательным агаром с целью получения чистой культуры, посевы инкубируют в термостате при температуре (36 + 2) °С в течение (24 + 2) ч. После чего повторяют процедуру посева на среду «Блеск».

При наличии роста на среде «Блеск» темно-малиновых колоний с золотыми вкраплениями, имеющих специфический сладковатый цветочный запах, и подтверждении наличия диффундирующего пигмента на скошенном питательном агаре отмечают наличие Р. aeruginosa в исследуемой пробе воды.

8.6.2    Метод 2

Обнаружение Р. aeruginosa в пробе воды состоит из трех этапов:

-    накопление в жидкой среде обогащения;

-    выделение Р. aeruginosa на плотной селективно-дифференциальной среде;

-    идентификация Р. aeruginosa с использованием ограниченного набора наиболее надежных тестов.

Исследуют пробу воды объемом 10ОО см³. В качестве среды накопления используют минеральную среду Бонде с кристаллическим фиолетовым.

В две стерильные емкости мерно наливают по 50 см³ концентрата среды Бонде и по 2,5 см³ 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового, после чего в каждую емкость наливают по 500 см³ пробы воды.

Инкубацию посевов осуществляют при температуре (36 ± 2) °С в течение промежутка времени от 24 до 48 ч. Через 24 ч посевы просматривают. При отсутствии пленки и помутнения среды посевы инкубируют до48 ч. Отсутствие роста в среде накопления через 48 ч позволяет выдать отрицательный ответ.

При помутнении среды «Бонде» и образовании на поверхности тонкой прозрачной пленки, поднимающейся по стенке емкости, проводят пересев из среды обогащения на сектора плотной среды «Блеск» или цетримидный агар или азидной среды. Емкость перед посевом не встряхивают. Бактериологической петлей забирают пленку с поверхности среды и производят посев уколом ближе к краю чашки Петри для снятия излишков посевного материала, потом остаток материала распределяют в виде бляшки диаметром от 2,0 до 2,5 см, далее посев проводят частыми многочисленными штрихами по поверхности среды для получения максимального количества изолированных колоний. Посевы помещают в термостат при (36 ± 2) °С на время от 24 до 48 ч с предварительным просмотром через 24 ч инкубации.

На цетримидном агаре колонии Р. aeruginosa образуют желтовато-зеленый пигмент (пиоцианин), флуоресцирующий в ультрафиолетовом свете (УФ-свете). При нечетком результате проводят идентификацию по дополнительным тестам.

На среде «Блеск» колонии Р. aeruginosa сплошь покрыты золотистым налетом либо содержат многочисленные золотистые вкрапления. Иногда вокруг колонии отмечается просветление или светло-красное окрашивание среды. Часто колонии Р. aeruginosa принимают веретенообразную форму, как бы распространяясь по вдавлению в агаре от штриха петлей. Появление блеска можно наблюдать уже через (21 + 1) ч инкубации при температуре (36 ± 2) °С, но максимальное проявление блеска достигается через (43 + 1) ч. Среда «Блеск» является ингибиторной для всех грамположительных и большинства

грамотрицательных бактерий и лишь немногие ТТХ-резистентные энтеробактерии могут развиваться на среде «Блеск» в виде темно-красных разного размера колоний, лишенных блеска, или выпуклых блестящих ярко-красных колоний.

При наличии множественного роста колоний с золотистым блеском достаточно отобрать для последующего исследования 1—2 изолированные наиболее типичные колонии. При росте единичных колоний с блеском или с золотистыми вкраплениями следует отбирать все типичные колонии, но не более 5—6.

Примечание — В соответствии со стандартами ИСО допускается определение Р. aeruginosa методом мембранной фильтрации с помещением фильтров с посевами на цетримидный агар.

8.6.3 Подтверждение обнаружения Р. aeruginosa

Для подтверждения обнаружения Р. aeruginosa наиболее типичные колонии отсевают на питательный агар и идентифицируют на тест-системе «неферм-тест».

По методу 2 Р. aeruginosa не должны содержаться в 1000 см³ исследуемой воды.

8.7 Определение патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae

8.7.1    Метод 1. Посев проб воды для определения патогенных бактерий семейства

Enterobacteriaceae, в том числе сальмонелл

Для определения патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae исследуют 1000 см³ воды, засевая по 500 см³ в две среды накопления: магниевую среду — для определения сальмонелл (см. Д. 12 приложения Д) и селенитовый бульон — для определения патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae, в том числе сальмонелл (см. Д.15. приложения Д) или другие апробированные и разрешенные к применению для этих целей среды накопления.

При посеве пробы воды в магниевую среду в стерильную емкость с навесками по Д.12 (приложение Д) прибавляют 500 см³ исследуемой пробы воды, после чего добавляют дрожжевой экстракт и бриллиантовый зеленый.

При посеве пробы воды в селенитовый бульон для определения патогенных энтеробактерий к 500 см³ исследуемой воды добавляют 500 см³ селенитового бульона двойной концентрации (см. Д.15. приложения Д).

8.7.2    Метод 2. Посев проб воды для определения сальмонелл методом мембранной

фильтрации

Для посева двух объемов по 500 см³ отбирают 1000 см³ воды. Каждый объем профильтровывают через один или несколько мембранных фильтров. Затем эти фильтры помещают в любые две из перечисленных сред накопления объемом 50 и 100 см³. При затрудненной фильтрации большого объема пробы следует на фильтр с диаметром пор 0,45 мкм наложить фильтр с большим диаметром пор для задержания взвешенных частиц с последующим помещением в питательную среду накопления обоих фильтров.

8.7.3    Проведение анализа

Посевы воды в средах накопления инкубируют при температуре (36 ± 2) °С в течение промежутка времени от 18 до 20 ч. При отсутствии роста в течение 24 ч пробы инкубируют48 ч. При обнаружении роста (помутнения среды) производят высев бактериологической петлей на две чашки с висмут-сульфит-ным агаром (см. Д. 14 приложения Д) и две чашки Эндо (см. Д.4 приложения Д).

Рассев производят одним из методов получения изолированных колоний. Чашки Петри с посевами инкубируют при температуре (36 ± 2) °С в течение промежутка времени от 18 до 24 ч.

На висмут-сульфитном агаре колонии сальмонелл круглые, черные, с металлическим блеском, с сероватым металлическим ободком вокруг колоний, так называемое «зеркало», зеленые с темным центром и без него, вызывающие потемнение среды под колонией до черного цвета.

Выросшие на среде Эндо небольшие колонии бледно-розовые, прозрачные с ровными или неровными краями идентифицируют на принадлежность к патогенным энтеробактериям. В отличие от патогенных бактерий, E.coli и колиформные бактерии образуют круглые, выпуклые, гладкие, малинового цвета колонии с металлическим блеском и без него.

При обнаружении подозрительных на сальмонеллы (Shigella или др.) колонии отсевают по 4—5 каждого вида в пробирки с комбинированными средами для определения биохимических свойств, подтверждающих принадлежность к родам Salmonella (Shigella или др.) типа Клиглера или Олькеницкого.

Окончательное определение биохимических свойств проводят по тест-системам, серологических свойств сероваров — по инструкциям производителя сывороток, разрешенных к применению в соответствии с 8.1.6.

ГОСТ 33463.6-2016

8.8 Интерпретация полученных результатов по санитарно-микробиологическим

показателям

8.8.1    Результат испытаний системы водоснабжения считается положительным, если санитарно-микробиологические показатели соответствуют гигиеническим нормативам и количественный и качественный состав микроорганизмов в пробах исходной воды идентичен количественному и качественному составу микроорганизмов в пробах воды, отобранных из системы водоснабжения объекта испытаний.

8.8.2    В случае, когда в пробах исходной воды и воды из системы водоснабжения объекта испытаний обнаруживаются идентичные по своему видовому составу микроорганизмы, но в системе водоснабжения объекта испытаний их оказывается значительно больше, значит в системе происходят процессы размножения микроорганизмов. Об интенсивности процессов размножения можно судить исходя из следующих условий испытаний:

-    если система была подготовлена (осуществлена дезинфекция, промывка и др., см. приложение А) и пробы воды отобраны в соответствии с 5.2.2, но при этом наблюдается значительное увеличение количества микроорганизмов, можно сделать вывод, что система способствует быстрому процессу размножения и способна в короткие сроки подвергнуться биообрастанию;

-    если пробы исходной воды отличаются от проб воды из системы водоснабжения объекта испытаний по видовому составу микроорганизмов, и в пробах воды из системы водоснабжения обнаруживаются индикаторные и (или) потенциально-патогенные и (или) патогенные микроорганизмы, значит система загрязнена и должна подвергнуться дезинфекции.

9 Методы санитарно-химического анализа

9.1    Определяемые показатели и методы определения

9.1.1    При гигиенической оценке системы водоснабжения объекта испытаний по санитарно-химическим показателям определяют химический состав и свойства воды. Погрешность определения показателей состава и свойств воды не должна превышать норм, установленных ГОСТ 27384.

Номенклатура определяемых санитарно-химических показателей приведена в таблице 1.

Таблица 1

Группа определяемых показателей Наименование показателя Обобщенные показатели Водородный показатель Общая минерализация (сухой остаток) Жесткость общая Окисляемость перманганатная Нефтепродукты (суммарно) Поверхностно-активные вещества (ПАВ) анионо-активные Фенольный индекс Показатели состава Азот аммонийный(ЫНд) Алюминий (А13+) Железо (Fe, суммарно) Кобальт (Со, суммарно) Кадмий (Cd, суммарно) Марганец (Мп, суммарно) Медь (Си, суммарно) Молибден (Мо, суммарно) Мышьяк (As, суммарно) Никель (Ni, суммарно)

Окончание таблицы 1

Группа определяемых показателей Наименование показателя Показатели состава Нитраты (по N03) Нитриты (NO2) Полифосфаты (по РО|“) Свинец(РЬ, суммарно) Сульфаты (ЭОд-) Фториды (F-) Формальдегид Хлориды Хром Цинк (Zn2+) Органолептические показатели Запах Привкус Цветность Мутность

9.1.2    Для определения показателей, приведенных в таблице 1, применяют межгосударственные и национальные стандарты на определение конкретного показателя в воде.

При отсутствии межгосударственных (национальных) стандартов допускается использовать национальные методики на определение конкретных показателей, стандартизованные и аттестованные в установленном национальным законодательством порядке², имеющие характеристики погрешности, не превышающие норм погрешности, установленных в ГОСТ 27384.

9.2    Результаты испытаний по санитарно-химическим показателям

9.2.1    Определяют значения всех указанных в таблице 1 показателей в каждой отобранной пробе воды в соответствии со стандартами или методиками по 9.1.2.

За результат принимается содержание контролируемого показателя без учета значений погрешности. При этом погрешность должна соответствовать нормам, установленным ГОСТ 27384.

9.2.2    Результат испытаний системы водоснабжения считается положительным, если количественный и качественный состав определяемых показателей в пробах исходной воды идентичен количественному и качественному составу этих показателей в пробах воды, отобранных из системы водоснабжения объекта испытаний, и значения этих показателей соответствуют гигиеническим нормативам.

9.2.3    Если в пробах воды из системы водоснабжения объекта испытаний определяются показатели химического состава, не обнаруженные в исходной воде, и (или) их значения больше соответствующих значений показателей в исходной воде на величину, превышающую погрешность методов определения соответствующих показателей, делается вывод о том, что система водоснабжения объекта испытаний ухудшает качество исходной воды, в частности по причинам, связанным с процессами деструкции материалов в системе.

9.2.4    Если санитарно-химические показатели в исходной воде (и, соответственно, в пробах воды из системы водоснабжения) не соответствуют санитарно-гигиеническим нормативам, результат считается недействительным.

ГОСТ 33463.6-2016

Содержание

1    Область применения...................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................1

3    Термины и определения................................................3

4    Общие положения....................................................5

5    Подготовка к испытаниям................................................5

6    Отбор проб.........................................................6

7    Требования к средствам измерений, испытательному и вспомогательному оборудованию, стандарт

ным образцам ......................................................7

8    Методы санитарно-микробиологического анализа................................8

8.1    Определяемые показатели............................................8

8.2    Методы определения общего микробного числа..............................8

8.3    Определение E.coli и колиформных бактерий................................9

8.4    Определение энтерококков...........................................10

8.5    Определение колифагов прямым методом.................................11

8.6    Определение Р. aeruginosa...........................................13

8.7    Определение патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae..................14

8.8    Интерпретация полученных результатов по микробиологическим показателям..........15

9    Методы санитарно-химического анализа.....................................15

9.1    Определяемые показатели и методы определения............................15

9.2    Результаты испытаний по санитарно-химическим показателям....................16

10    Оформление результатов..............................................17

11    Требования безопасности..............................................17

Приложение А (справочное) Подготовка системы водоснабжения......................18

Приложение Б (справочное) Акт отбора проб....................................20

Приложение В (справочное) Средства измерений, испытательное и вспомогательное оборудование,

лабораторная посуда, расходные материалы, реактивы, питательные среды, эталонные микроорганизмы.........................................21

Приложение Г (обязательное) Постановка оксидазного теста.........................24

Приложение Д (обязательное) Приготовление питательных сред, растворов, реактивов........25

Приложение Е (обязательное) Подготовка мембранных фильтров и фильтровального аппарата. . . 30

ГОСТ 33463.6-2016

10 Оформление результатов

Результаты испытаний (анализа) оформляют в виде протокола, который должен содержать следующую информацию:

-    основание для проведения испытаний (номер договора, дата заключения, с кем заключен, или номер иного документа и его реквизиты);

-    наименование объекта испытаний, его заводской (бортовой) номер, дата выпуска;

-    наименование завода-изготовителя объекта испытаний;

-    вид и цель испытаний;

-    место и дата проведения отбора, проведения анализа;

-    перечень средств измерений, испытательного оборудования, использованных для проведения испытаний (наименование, завод-изготовитель, заводской или инвентарный номер, сведения о поверке или иные сведения о выполнении требований по 7.1);

-    условия проведения отбора проб воды, их хранения (транспортировки);

-    наименования определяемых при испытаниях показателей, нормативные значения показателей и сведения о документе, содержащем эти значения (требования);

-    обозначение и (или) наименование документа, содержащего методику проведения испытаний;

-    расположение (схема) точек отбора проб воды в помещениях объекта испытаний;

-    результаты гигиенической оценки системы водоснабжения подвижного состава с указанием фактических значений показателей, полученных в результате микробиологического и санитарно-химического анализа отобранных проб воды;

-    наименование организации, проводящей испытания;

-    дату составления протокола.

11 Требования безопасности и охраны труда

11.1    К проведению испытаний допускают работников, прошедших обучение, инструктажи и проверку знаний требований охраны труда. Порядок и виды обучения, а также организацию инструктажей участников испытаний осуществляют в соответствии с ГОСТ 12.0.004.

Во время отбора проб работники должны соблюдать требования охраны и безопасности труда и правила внутреннего трудового распорядка, установленные в организации, на территории которой проводится отбор проб.

11.2    При проведении отбора проб обеспечивают освещенность места и средств отбора не менее 200 лк.

11.3    Анализ воды на наличие возбудителей инфекционных заболеваний имеют право проводить испытательные центры (лаборатории), имеющие лицензию на осуществление деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, и аккредитованные на проведение санитарно-микробиологических исследований воды.

Анализ воды по санитарно-химическим показателям проводят испытательные центры (лаборатории), аккредитованные на проведение исследований по методикам определения количественного химического анализа воды.

17

Введение

Настоящий стандарт является частью комплекса стандартов из семи частей, устанавливающих методы испытаний по определению значений показателей, характеризующих подвижной состав с точки зрения способности системы жизнеобеспечения создать и поддерживать в его помещениях необходимые, и в первую очередь, безопасные условия для жизнедеятельности человека (условия, безопасные по параметрам микроклимата, шума, вибрации, электромагнитных излучений, по микробиологическим показателям, санитарно-химическим и эргономическим).

Настоящий стандарт устанавливает состав, методы определения и оценки санитарно-микробиологических и санитарно-химических показателей воды в системе хозяйственно-питьевого водоснабжения железнодорожного подвижного состава, порядок отбора проб для проведения санитарно-микробиологического и санитарно-химического анализа по указанным показателям, с тем чтобы дать гигиеническую оценку системы водоснабжения, то есть определить, не ухудшает ли система водоснабжения качество исходной воды, поступающей из централизованной системы водоснабжения, и оценить соответствие качества воды в системе водоснабжения объекта испытаний гигиеническим нормативам.

Требования стандарта сформированы на основе результатов анализа методов контроля качества питьевой воды, приведенных в межгосударственных стандартах, методических документах Российской Федерации, международных стандартах, а также на основе обобщения опыта проведения разработчиками гигиенической оценки систем водоснабжения железнодорожного подвижного состава, позволяющего отразить специфику этой оценки применительно к системе водоснабжения локомотивов, моторвагонного подвижного состава и специального железнодорожного подвижного состава.

IV

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СИСТЕМЫ ЖИЗНЕОБЕСПЕЧЕНИЯ НА ЖЕЛЕЗНОДОРОЖНОМ ПОДВИЖНОМ СОСТАВЕ

Часть 6

Методы гигиенической оценки системы водоснабжения

Life support systems on railway rolling stock. Part 6. Methods of hygienic assessment of water supply system

Дата введения — 2017—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на локомотивы, моторвагонный подвижной состав (МВПС) и специальный железнодорожный подвижной состав (СПС), оснащенный системой хозяйственно-питьевого водоснабжения (далее — система водоснабжения) и устанавливает методы гигиенической оценки этой системы по санитарно-химическим и санитарно-микробиологическим показателям.

Примечание — Настоящий стандарт может быть использован для гигиенической оценки систем водоснабжения, применяемых в изотермических вагонах со служебными и вспомогательными помещениями и иных объектах железнодорожного транспорта. Методы, установленные настоящим стандартом, могут быть использованы для гигиенической оценки системы водоснабжения (или ее элементов) до установки на подвижной состав.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие межгосударственные стандарты: ГОСТ 12.0.004-90 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.4.004-74 Респираторы фильтрующие противогазовые РПГ-67. Технические условия ГОСТ 12.4.253-2013 (EN 166:2002) Система стандартов безопасности труда. Средства индивидуальной защиты глаз. Общие технические требования

ГОСТ 83-76 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия

ГОСТ 245-76 Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2156-76 Натрий двууглекислый. Технические условия

ГОСТ 2493-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4159-79 Реактивы. Йод. Технические условия

ГОСТ 4170-78 Реактивы. Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный 4-водный. Технические условия

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4209-77 Магний хлористый 6-водный. Технические условия ГОСТ 4232-74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия

Издание официальное

4233—77 Реактивы. Натрий хлористый Технические условия

4328—77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

4523—77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

4530—76 Реактивы. Кальций углекислый. Технические условия

5556—81 Вата медицинская гигроскопическая Технические условия

5962—2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

6038—79 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия

6552—80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

6672—75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия

9284—75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

9412—93 Марля медицинская. Общие технические условия

11773—76 Реактивы. Натрий фосфорно-кислый двузамещенный. Технические условия

12026—76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

13805—76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические

17206—96 Агар микробиологический. Технические условия

17269—71 Респираторы фильтрующие газопылезащитные РУ-бОм и РУ-бОму. Техничес-

17626—81 Казеин технический. Технические условия

17726—81 Стерилизаторы медицинские паровые, воздушные и газовые. Термины иопре-

Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия³ Перчатки резиновые технические. Технические условия Хлороформ. Технические условия

Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические усло-

24849—2014 Вода. Методы санитарно-бактериологического анализа для полевых условий 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры

25706—83 Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования

27068—86 Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Техни

ческие условия

ГОСТ 27384-2002 Вода. Нормы погрешности измерений показателей состава и свойств ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31861-2012 Вода. Общие требования котбору проб ГОСТ 31862-2012 Вода питьевая. Отбор проб

ГОСТ 31942-2012(ISO 19458:2006) Вода. Отбор проб для микробиологического анализа ГОСТ 31955-2012 (ISO 9308-1:2000) Вода питьевая. Обнаружение и количественный учет Escherichia coli и колиформных бактерий. Часть 1. Метод мембранной фильтрации

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

ГОСТ 33463.6-2016

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями.

3.1

гигиенические нормативы качества питьевой воды: Совокупность научно-обоснованных и установленных нормативной документацией предельно допустимых значений показателей органолептических свойств, содержания химических веществ и микроорганизмов в питьевой воде, гарантирующих безопасность и безвредность питьевой воды для жизни и здоровья человека независимо от продолжительности ее использования.

[ГОСТ 30813-2002, статья 2]_

3.2

3.3

точка отбора пробы воды: Зафиксированное местоположение отбора проб воды.

[ГОСТ 30813-2002, статья 37]_

3.4    водоочистка: Процесс по очистке, доочистке, обеззараживанию воды в специальных устройствах (устройства водоочистки) с целью улучшить ее качество для питьевых и хозяйственно-бытовых нужд человека.

3.5    общее микробное число; ОМЧ (total plate count): Общее число аэробных и факультативно анаэробных гетеротрофных микроорганизмов, использующих для питания органические вещества, обладающих способностью образовывать видимые при двукратном увеличении на питательном агаре колонии при температуре (36 + 2) °С в течение 24 ч.

Примечание — Входящие в эту группу микроорганизмы при превышении допустимого уровня указывают на биологическое загрязнение, наличие в воде легко усвояемых органических веществ и биообрастаний на поверхностях конструкций систем водоснабжения, на неблагоприятное санитарное состояние систем хранения и подачи воды и целостности распределительных систем, а также являются технологическим показателем эффективности процесса водоочистки.

3.6

индикаторные микроорганизмы: Условные группы микроорганизмов, присутствие которых свидетельствует о наличии антропогенного загрязнения и (или) недостаточной очистке воды.

[ГОСТ 30813-2002, статья 61]_

3.7    колиформные бактерии (coliform bacteria): Грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки семейства Enterobacteriaceae, относящиеся к типу ферментирующих бактерий, обладающие свойством образовывать колонии в аэробных условиях на селективной дифференциальной лактозной среде с образованием кислоты при температуре (36 ± 2) °С в течение 24 ч.

Примечание — Колиформные бактерии — индикаторная группа бактерий, которая указывает на фекальное загрязнение воды и возможность присутствия возбудителей водоассоциированных бактериальных кишечных инфекций. В очищенной и дезинфицированной воде их обнаружение означает, что обработка была проведена некачественно или произошло вторичное микробное загрязнение.

3.8    Esherichia coli; E.coli: Аэробные и факультативно анаэробные колиформные бактерии, обладающие свойством ферментировать лактозу при температуре (44,0 ± 0,5) °С в течение 24 ч с образованием кислоты и газа, а также продуцировать индол из триптофана в течение (21 + 3) ч.

Примечание — Индикаторная группа бактерий, включающая в себя преимущественно Escherichia coli — показатель фекального загрязнения, поступившего в воду недавно, наиболее опасного в эпидемическом отношении.

3.9    бактерии семейства Enterobacteriaceae: Грамотрицательные, оксидазоотрицательные, лактозоотрицательные бактерии, обладающие свойством образовывать колонии в аэробных условиях на селективной дифференциальной лактозной среде и способные ферментировать глюкозу с образованием кислоты и газа при (36 ± 2) °С в течение 24 ч.

Примечание — Бактерии семейства Enterobacteriaceae — лактозоотрицательные бактерии, в том числе патогенные и потенциально-патогенные виды, обнаружение которых указывает не только на фекальное загрязнение, но и позволяет оценить гигиеническое состояние и эпидемическую опасность анализируемой воды.

3.10    энтерококки (Enterococcus): Грамположительные, каталазоотрицательные, полиморфные, круглые или овальные с заостренными концами кокки, располагающиеся попарно или в коротких цепочках, обладающие свойством образовывать колонии на питательных средах, содержащих 0,04 % азида натрия и 2,3,5 трифенилтетразолийхпорид (ИХ), способностью роста на питательной среде, содержащей 6,5 % NaCI и образующие характерные колонии на средах с эскулином.

Примечание — К группе энтерококков (фекальных энтерококков) относят Enterococcus faecalis с биова-рами, Enterococcus faecium, Enterococcus durans. Обнаружение их в воде, даже в отсутствие E.coli, указывает на фекальное загрязнение воды. Обладают высокой устойчивостью в объектах окружающей среды.

3.11    род Псевдомонад: Аэробные грамотрицательные оксидазоположительные каталазоположительные палочки, не образующие спор, распространенные в водной среде, участвующие в образовании биопленок на поверхностях конструкций систем водоснабжения.

Примечание — Псевдомонады, в том числе Pseudomonas aeruginosa (Синегнойная палочка), способны длительно выживать в водной среде и устойчивы ко многим обеззараживающим агентам (по сравнению с колифор-мными бактериями), не требовательны в отношении питательных веществ и температуры размножения, выживают на внутренних поверхностях трубопроводов от 60 до 210 сут при температуре от4 °С до 44 °С, выделяют эндотоксин и другие, активно действующие вещества (эластазу, коллагеназу), ввиду чего вызывают целый ряд различных заболеваний кожных покровов, верхних дыхательных путей, глаз и других слизистых, кишечные инфекции.

3.12

колифаги: Бактериальные вирусы, способные лизировать Е. coli и формировать при температуре (36 + 2) °С через 18—24 ч зоны лизиса на питательном агаре.

Примечание — Благодаря сходству с кишечными вирусами человека и большей устойчивости по сравнению с индикаторными группами бактерий их рассматривают как показатели возможного вирусного загрязнения воды.

[ГОСТ 30813-2002, статья 68]_

3.13    легионеллы (Legionella pneumophila): Разновидность патогенных для человека грамотри-цательных бактерий, колонизирующих системы горячего водоснабжения, оптимальная температура для развития которых от 30 °С до 55 °С.

Примечание — Возбудители пневмонии «болезни легионеров» и лихорадки Понтиака. Путь передачи инфекции — через водные аэрозоли. Активно колонизируют поверхности водопроводного оборудования с образованием биопленок.

3.14    биопленка (биообрастание): Тип устойчивых микробных образований (сообществ), прикрепленных к субстрату (адгезия), у которых экспрессируются иные гены, чем у отдельных свободно живущих микроорганизмов, в результате чего биопленка ведет себя как отдельный «многоклеточный организм», сформированный специфическим образом, при этом каждый слой клеток выполняет определенную функцию: некультивируемое состояние части клеток, питание, защита от внешних воздействий и т. д.

Примечание — Микроорганизмы, живущие в составе биопленок, могут вызывать инфекционные заболевания у людей и биодеструкцию материалов.

3.15

централизованная система питьевого водоснабжения: Комплекс устройств, сооружений и трубопроводов, предназначенных для забора, подготовки или без нее, хранения, подачи к местам потребления питьевой воды и открытой для общего пользования.

[ГОСТ 30813-2002, статья 30]_

3.16 передвижная лаборатория: Средства (мобильного) передвижения и оснащения, предназначенные для проведения санитарно-микробиологического анализа воды на месте отбора проб на специально для этого предназначенных передвижных транспортных средствах (железнодорожный подвижной состав, автомобили), функционирующие при автономном режиме энергообеспечения.

4

ГОСТ 33463.6-2016

3.17 переносная лаборатория: Комплект переносного оборудования для проведения санитарно-микробиологического анализа воды на месте отбора проб с последующей доставкой в стационарную лабораторию на любом транспортном средстве, специально для этих целей не предназначенном.

4    Общие положения

4.1    Методы гигиенической оценки системы водоснабжения основываются на сравнении качества воды из системы водоснабжения железнодорожного подвижного состава, упомянутого в разделе 1 (далее — объект испытаний), и качества исходной (заправляемой) воды по санитарно-микробиологическим и санитарно-химическим показателям.

Примечание — Материалы, из которых изготовлена конструкция системы водоснабжения объекта испытаний и оборудование, используемое для водоочистки (доочистки) и водоподготовки, в процессе его эксплуатации не должны ухудшать качество исходной (заправляемой) воды по санитарно-микробиологическим и санитарно-химическим показателям: ухудшать органолептические свойства воды, приводить к поступлению в воду соединений в концентрациях, превышающих гигиенические нормативы, способствовать биообрастанию деталей конструкции и развитию микрофлоры в воде, образовывать соединения и (или) продукты трансформации в концентрациях, превышающих гигиенические нормативы.

4.2    Для оценки качества воды по указанным в 4.1, 8.1.1, 9.1.1 показателям используют методы санитарно-микробиологического и санитарно-химического анализа питьевой воды, позволяющие определить количественные значения и (или) качественные характеристики показателей.

4.3    Материал для анализа и оценки получают в ходе проведения испытаний, обеспечивающих отбор из системы водоснабжения объекта испытаний проб воды:

отражающих качество (состав и свойства) воды в системе;

в точках, позволяющих оценить различные участки системы (см. 5.1);

в количестве (и объемах), необходимых для последующего анализа (для определения исследуемых показателей);

при соблюдении требований к подготовке системы, к оборудованию для отбора и условиям отбора, хранения и транспортирования проб, обусловленных свойствами объектов анализа.

4.4    Результаты анализа проб воды из системы водоснабжения оценивают по гигиеническим нормативам качества питьевой воды и сравнивают с результатами анализа проб исходной (заправляемой) воды.

Примечание — Качество воды в системах водоснабжения объекта испытания должно соответствовать гигиеническим требованиям к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения*.

5    Подготовка к испытаниям

5.1    Определение точек отбора

5.1.1    Перед испытаниями проводят анализ конструкторской документации, содержащей сведения, необходимые для определения точек отбора проб (схемы, чертежи или описание планировки помещений объекта испытаний), на основании которого определяют количество и места размещения водоразборных устройств системы водоснабжения: кранов (в санузлах, служебных и бытовых помещениях, кафе, барах и т. п.), душевых модулей.

5.1.2    Отбор проб воды проводят в каждой точке потребления воды (из всех кранов системы водоснабжения).

Кроме того, обязательна точка отбора воды (исходной), поступающей в систему водоснабжения объекта испытаний.

Примечание — В вагоне МВПС, СПС салонной или купейной планировки отбирают пробы из всех кранов системы водоснабжения в санузлах, служебных и бытовых помещениях, в вагоне купейной планировки с наличием точек потребления воды в каждом купе — отбирают пробы не менее чем в трех точках потребления (в начале, середине и конце вагона), в вагоне с барами (буфетами) отбирают также пробы в точках потребления воды для целей обслуживания посетителей (из каждого крана).

* На территории Российской Федерации действует СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».

5

5.1.3 При оборудовании системы водоснабжения объекта испытания дополнительными устройствами доочистки и обеззараживания воды точки отбора проб устанавливают до и после доочистки и обеззараживания.

5.2 Подготовка системы водоснабжения

5.2.1    Система водоснабжения объекта испытаний до их проведения должна быть подготовлена к отбору проб воды: проведена дезинфекция и промывка, заправка водой. Порядок проведения дезинфекции и промывки приведен в А.1 (приложение А), порядок заправки системы водоснабжения приведен в А.2 (приложение А).

5.2.2    Система должна быть полностью заправлена водой не менее, чем за 6 ч и не более чем за 12 ч до начала отбора проб по санитарно-микробиологическим и санитарно-химическим показателям.

6 Отбор проб

6.1    Отбор проб воды для гигиенической оценки системы водоснабжения проводят в стационарных условиях.

6.2    Общий порядок отбора проб воды (для микробиологического и санитарно-химического анализа) по ГОСТ 31861.

6.3    В каждой точке (определенной в соответствии с 5.1) системы водоснабжения отбирают по одной пробе воды на санитарно-химические и санитарно-микробиологические показатели.

6.4    Отбор проб воды для микробиологического анализа

6.4.1    Пробы воды для микробиологического анализа отбирают в соответствии с требованиями ГОСТ 31942 (пункты 5.1,5.8,5.9—5.12,6.1.3,6.1.5,6.1.6) с учетом необходимых объемов для определения исследуемых показателей и в соответствии с ГОСТ 31862 (пункт 5.3).

6.4.2    Перед отбором проб водопроводные краны следует предварительно фламбировать (обжечь пламенем), после чего произвести спуск воды продолжительностью не менее 5 и не более 10 мин при полностью открытом кране.

6.4.3    Отбор проб воды на санитарно-микробиологические показатели проводят в стерильные емкости по ГОСТ 31942 (пункты 5.3,5.7), предназначенные для отбора проб питьевой воды, одноразового использования (из полимерных материалов) или многоразового (из стекла) с тиосульфатом натрия из расчета 20 мг/дм³ или 10 мг на 500 см³. Емкости при отборе, не ополаскивая, заполняют на 2/3 их объема.

Примечания

1    Отбор проб воды, поступающей из разводящей сети централизованной системы питьевого водоснабжения и подвергнутой обеззараживанию с помощью дезинфектанта, проводят с нейтрализатором для нейтрализации (дезактивации) остаточного количества дезинфицирующего реагента по ГОСТ 31942 (пункт 5.7, приложение ДВ).

2    Тиосульфат натрия используют для нейтрализации хлора в воде.

6.5    Отбор проб воды для санитарно-химического анализа

6.5.1    Пробы воды отбирают в соответствии с требованиями ГОСТ 31861 (пункты 3.5—3.7) и требованиями по отбору проб межгосударственных и национальных стандартов или методических документов по 9.1.2.

6.5.2    Непосредственно перед отбором проб в течение 2—3 мин осуществляют слив воды.

6.5.3    Отбор проб воды на санитарно-химические показатели проводят в емкости с плотно закрывающимися пробками, снабженными инертными прокладками одноразового или многоразового использования, которые перед заполнением ополаскивают исследуемой водой не менее трех раз, после чего заполняют емкость водой до края, не оставляя воздушного пространства между крышкой и поверхностью воды.

6.6    На емкость (этикетку) наносится маркировка, содержащая информацию о месте отбора, точке отбора, дате и времени отбора в соответствии с ГОСТ 31942 (пункт 8.2).

Допускается кодирование проб с отражением номера в акте отбора проб в соответствии с ГОСТ 31942 (пункты 8.2,8.3).

6.7    Хранение и транспортирование проб воды

6.7.1 Транспортирование проб воды для проведения анализа осуществляется в специальных контейнерах (термосумках), оснащенных термоэлементами, обеспечивающими поддержание температурного режима доставки по 6.7.2.

6

1

На территории Российской Федерации обращение медицинских изделий (в том числе наборов реагентов и сред питательных микробиологических) включает государственную регистрацию, подтверждение соответствия, а также применение на основе технической документации производителя в соответствии с Федеральным законом «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» № 323-ФЗ от 21.11.2011 г. (статья 38, пункты 3, 4,10).

2

В Российской Федерации могут применяться методики количественного химического анализа вод, аттестованные в соответствии с требованиями Федерального закона от 26.06.2008 № 102-ФЗ «Об обеспечении единства измерений» (статья 5) и ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений», а также методики, утвержденные Министерством здравоохранения Российской Федерации.

3

На территории Российской Федерации утратил силу, действует ГОСТ Р 55878-2013 Спирт этиловый технический гидролизный ректификованный. Технические условия.