Межгосударственный совет по стандартизации, метрологии и сертификации

Минск

ЕВРАЗИЙСКИЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (ЕАСС)

EURO-ASIAN COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (EASC)

СОК ЯБЛЫЧНЫ.

СОК ЯБЛЫЧНЫ КАНЦЭНТРАВАНЫ I НАП1ТК1, ЯК1Я ЗМЯШЧАЮЦЬ ЯБЛЫЧНЫ СОК

Метад вызначэння змяшчэння патулжу з дапамогай высокаэфектыунай вадкаснай хромата графи

СОК ЯБЛОЧНЫЙ.

СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

ISO 8128-1:1993 Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice - Method for determination of patulin content using thin-layer chromatography (MOD)

Издание официальное

Минск

Госстандарт Республики Беларусь 2006

Предисловие

Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (ЕАСС) представляет собой региональное объединение национальных органов по стандартизации государств, входящих в Содружество Независимых Государств. В дальнейшем возможно вступление в ЕАСС национальных органов по стандартизации других государств.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-97 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила, рекомендации по межгосударственной стандартизации. Порядок разработки, принятия. применения, обновления и отмены».

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации

3    ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 22 от 6 ноября 2002 г.)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны no МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Армения AM Армстандарт Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан Кыргызстан KG Кыргызстандарт Молдова MD Молдова-Стандарт Российская Федерация RU Госстандарт России Узбекистан UZ Узстандарт Украина UA Гостандарт Украины

4    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 8128-1:1993 «Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Определение содержания патулина. Часть 1. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии», кроме приложения «Библиография».

5    ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 12 сентября 2006 г. № 42 непосредственно в качестве государственного стандарта Республики Беларусь с 1 апреля 2007 г.

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных (государственных) стандартов, издаваемых в этих государствах.

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Республики Беларусь без разрешения Госстандарта Республики Беларусь

Содержание

1    Область применения....................................................... 1

2    Сущность метода.......................................................... I

3    Реактивы................................................................ 1

4    Приборы и лабораторное оборудование.........................................2

5    Отбор проб..............................................................2

6    Проведение испытании.....................................................2

7    Обработка результатов......................................................3

8    Точность метода..........................................................3

9    Протокол испытании.......................................................3

М ЕЖГОСУДЛРСТВ ЕН Н Ы Й СТА Н ДАРТ

СОК ЯМОЧНЫЙ, СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

Метод определения содержания павлина с помощью высоко»ффекшпион жндкосшой хромаю!рафии

Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice. Method for determination of patulin content using high performance liquid chromatography

Дата введения 2007-04-01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулнна в яблочном соке, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок. с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Предел обнаружения патулнна настоящим методом составляет 10 мкг/дм' при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 5 см³.

2    Сущность метола

Метод основан на экстракции патулнна из исследуемой пробы этнлацетатом. очистке экстракта перераспределением в водный раствор карбоната натрия и количественном и качественном анализе экстракта с помощью высоко эффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием спсктрофотомстрнчсского детектора в ультрафиолетовой области.

3    Реактивы

Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации «для ВЭЖХ*.

3.1    Растворитель: этилацетат.

3.2    Подвижная фаза — раствор ацетонитрила в воде объемной концентрации 10 %.

3.3    Экстрагирующий раствор — водный раствор безводного карбоната натрия концентрации 14 г/дм³.

3.4    Ацетатный буфер. pH 4.

Смешивают 16.4 см' уксусной кислоты |с(СН_чСООН) = 0.2 моль/дм | с 3.6 см' раствора ацетата натрия |c(CH,COONa) = 0.2 моль/дм'|.

3.5    Уксусная кислота, ледяная.

3.6    Стандартный раствор патулнна (C^H^Oj).

3.6.1 Приготовление стандартного раствора

Навеску патулнна массой 10.0 мг, взятую с точностью до 0,1 мг. растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см³ в ацетатном буфере (3.4). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером.

Пипеткой переносят 10.0 см³ приготовленного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см³, объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером. Массовая концентрация патулнна в приготовленном стандартном растворе составляет окало 10 мкг/см³.

Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 нм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.

И мание официальное

3.6.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулина

Концентрацию стандартною раствора патулина (3.6.1) р_р5, м кг/см \ вычисляют по формуле

где А — оптическая плотность стандартного раствора патулина;

Affo — молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм. дм³ • моль^-1- см^-1 (А₂7₆ = 14600);

М — молярная масса патулина. г/моль;

С — постоянная прибора (обычно С = I).

4    Приборы и лабораторное оборудование

Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия концентрации 10 г/дм³.

Обычное лабораторное оборудование, в частности следующее:

4.1    Жидкостный хроматограф, снабженный спсктрофотомстричсским детектором в ультрафиолетовой области (пригодным для работы при длине волны 276 нм) и самописцем или интегратором.

4.2    Обрашенно-фаэовая колонка ODS¹* или другая аналогичная колонка со следующими параметрами:

-    эффективность нс менее 35000 теоретических тарелок на метр;

-    длина 250 мм;

-    внутренний диаметр 4.6 мм;

-    неподвижная фаза размером частиц 5 мкм.

5    Отбор проб

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.

6    Проведение испытаний

6.1    Приготовление испытуемого раствора

При испытаниях концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Дальнейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.

6.1.1    Пробу объемом 5.0 см³ экстрагируют порцией этилацетата объемом 5,0 см ' (3.1) в течение нс менее I мин. Экстракцию повторяют еще два раза новыми порциями этилацетата объемом по

5.0    см³. Этнлацетатные фазы объединяют и эктрагнруют раствором карбоната натрия (3.3) объемом

2.0    см³.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Экстракцию раствором карбоната натрия проводят как можно быстрее. например в течение 1—2 мин. из-за нестабильности патулина в щелочной среде.

6.1.2    Карбонатную фазу (6.1.1) экстрагируют свежей порцией этилацетата объемом 5.0 ем³, экстракт объединяют с предыдущими порциями. Карбонатную фазу отбрасывают. К экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты (3.5). смесь перемешивают и упаривают на ротационном испарителе до объема 1—2 см³.

6.1.3    Полученный таким образом раствор количественно переносят во флакон вместимостью около 5 ем³ с помощью нескольких порций этилацетата объемом около 1 ем' каждая. Раствор упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °С. Остаток растворяют в 0.5 см³ подвижной фазы (3.2) или ацетатного буфера (3.4).

6.2 Построение градуировочного графика

Порции стандартного раствора патулина (3.6.1) объемом 1.0; 2.0; 3.0; 5.0 и 7.5 см³ переносят пипеткой в пять мерных колб с одной отметкой вместимостью 10 ем³, объем содержимого в колбах доводит до метки ацетатным буфером (3.4): получают градуировочные растворы.

Устанавливают скорость потока подвижной фазы через колонку жидкостного хроматографа окаю 1см³/мнн. Чувствительность детектора хроматографа устлнаазивают таким образом, чтобы оптической плотности 0.01 соответствовал сигнал величиной на полную шкалу регистрирующего устройств;».

ODS — октадсцилсилан.

В хроматограф (4.1) вводят от 0,010 до 0,030 см ' каждого градуировочного раствора.

Градуировочным график строит, откладывая по оси абсцисс концентрацию патулина в микрограммах на кубическим сантиметр, по оси ординат — соответствующие величины высоты или площади пиков.

6.3 Проведение определения

В хроматограф вводят от 0,010 см³ до 0,030 см³ испытуемого раствора (6.1.3) при тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.

Идентификацию пика патулина в испытуемом растворе проводят сравнением с пиками патулина в градуировочных растворах. Следует отличать пик патулина от пика оксимстилфурфурола (ОМФ).

7 Обработка результатов

Концентрацию патулина в испытуемом раствор определяют непосредственно по градуировочному графику (6.2). Содержание патулина в продукте р_р , мкг/дм³, вычисляют по формуле

(2)

где р_р, — концентрация патулина is испытуемом растворе, определенная по градуировочному графику, мкг/см³.

У, — объем, до которого сконцентрирован этилацетатный экстракт, см³;

У₂ — объем пробы продукта, взятый для экстракции, см³.

8 Точность метода

8.1 Сходимость результатов

г- 41.9 мкг/дм'; s_r = 14.9 мкг/дм³.

где г — предел сходимости;

s_r — сред нсквадратичсс кос отклонение сходимости.

8.2 Воспроизводимое гъ результатов

R = 47,5 мкг/дм³; S_K = 22,6 мкг/дм',

где R — предел воспроизводимости;

S_K — срсднсквадратнчсскос отклонение воспроизводимости.

9 Протокол испытаний

В протоколе испытаний указывают:

-    метод испытаний;

-    результат испытаний;

-    окончательный результате оценкой сходимости, если была проверена сходимость результатов. Также следует отмстить особенности проведения испытаний, нс указанные в настоящем

стандарте или рассматриваемые как несущественные, с побочными обстоятельствами, способными повлиять на результат испытаний.

Протока! испытаний должен содержать мн<|юрмацию. необходимую для полной идентификации образца.

УДК 664.863.001.4:006.354    МКС    67.160.20    Н59    ОКСТУ    9109

Ключевые слова: яблочный сок. концентрированным яблочный сок, напитки, содержащие яблочный сок, патулин, определение содержания, высокоэффективная жидкостная хроматография

Текст печатается по изданию:

ГОСТ Р 51435-99 (ИСО 8128-1-93) - М : ИПК Издательство стандартов. 2000

Ответственный та выпуск В. Л. Гуревич

Сдано в набор 30.10.2006. Подписано в печать 13.11.2006. Формат бумаги 60*84/8. Бумага офсетная. Гарниту ра Таймс. Печать рн тографнчсская Уел. псч. л. 0.93 Уч- н и. л. 0.50 Тираж    экч Закат

Издатель и полиграфическое исполнение НП РУП «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) Лицензия № 02330/0133084 от 30.04.2004.

220113. г. Минск, ул. Мележа. 3.