СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения D-глюкозы и D-фруктозы

COKI ФРУКТОВЫЯ I 3 АГАРОДН1НЫ

Метад вызначэння D-глюкозы i D-фруктозы

Издание официальное

Межгосударственный совет по стандартизации, метрологии и сертификации

Минск

ЕВРАЗИЙСКИЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (ЕАСС)

EURO-ASIAN COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (EASC)

COKI ФРУКТОВЫЯ I 3 АГАРОДН1НЫ

Метад вызначэння D-глюкозы i D-фруктозы

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения D-глюкозы и D-фруктозы

Издание официальное

Минск

Госстандарт Республики Беларусь 2003

Окончание таблицы А.2

Наименование величины, характеризующей круговое испытание Значение величины для пробы А В С D Относительное среднее квадратическое отклонение результатов измерений (RSDr), % Показатель воспроизводимости (R), г/дм3 2,33 4,3 2,87 2,2 2,38 3,7 2,02 4,6 Примечания 1 Установлена линейная зависимость для глюкозы и фруктозы между r,R и средними арифметическими. 2 Характер проб: -    А — яблочный сок, -    В — абрикосовый нектар, -    С — нектар черной смородины, -    D — виноградный сок (красный).

ПРИЛОЖЕНИЕ Б (справочное)

Библиография

[1]    Bestimmung der Glucose und Fructose; Enzymatisch: Nr. 55, 1985. — In: Analysen/[Sammlung] Internationale Fruchtsaft— Union. — Loseblattausgabe, stand 1989. Zug: Schweizerischer Obstverband

[2]    Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von Glucose und Fructose in Fruchtsaeften: F31.00-12, 1984—11. — In: Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 FMBG: Verfahren zur Probenahme und Untersuchung von Febensmitteln, Tabakerzeugnissen, kosmetischen Mitteln und Bedarfgegenstaenden/Bundesgesund-heitsamt. Foseblattausgabe, Stand 31.12.1991, Bd. 1. — Berlin, Koeln: Beuth Verlag GmbH

[3]    ТУ 64—13329 81 Дозаторы пипеточные

[4]    ИСО 5725:1986 Точность методов испытания. Определение повторяемости и воспроизводимости для метода стандартного испытания с помощью межлабораторных испытаний

7

ГОСТ 31083-2002

УДК 663.81.001.4:006.354    МКС    67.080    Н59    ОКСТУ    9109

Ключевые слова: фруктовый сок; овощной сок; нектар; сокосодержащий напиток; D-глюкоза, D-фруктоза; спектрофотометрия

Текст печатается по изданию:

ГОСТ Р 51240-98 - М.: ИПК Издательство стандартов, 1999

Ответственный за выпуск ИА. Воробей

Сдано в набор 04.08.2003 Подписано в печать 06.08.2003 Уел. печ.л. 0,93    Уч.-изд.    л.    0,50

Тираж    экз.    Заказ

Издатель и полиграфическое исполнение:

НПРУП "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации (БелГИСС)" Лицензия ЛВ № 231 от 04.03.2003, лицензия ЛИ № 408 от 25.07.2000

БелГИСС, 220113, г. Минск, ул. Мележа, 3

Предисловие

Евразийский Совет по стандартизации, метрологии и сертификации (ЕАСС) представляет собой региональное объединение национальных органов по стандартизации государств, входящих в Содружество Независимых Государств. В дальнейшем возможно вступление в ЕАСС национальных органов по стандартизации других государств.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-97 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила, рекомендации по межгосударственной стандартизации. Порядок разработки, принятия, обновления и отмены".

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

ВНЕСЕН Госстандартом России

2 ПРИНЯТ Евразийским Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 22 от 6 ноября 2002 г.)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК(ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК(ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения	AM	Армгосстандарт
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Кыргызстан	KG	Кыргызстандарт
Молдова	MD	Молдовастандарт
Российская Федерация	RU	Госстандарт России
Таджикистан	TJ	Таджикстандарт
Украина	UA	Госпотребстандарт Украины

3    Настоящий стандарт идентичен ГОСТ Р 51240-98 «Соки фруктовые и овощные. Метод определения D-глюкозы и D-фруктозы», который представляет собой аутентичный текст национального стандарта Германии ДИН ЕН 1140:1994 «Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение D-глюкозы и D-фруктозы. Спектрофотометрическое определение НАДФ (никотинамидадениндинукпео-тида)» (DIN EN 1140:1994 «Frucht- und Gemiisesafte. Enzymatische Bestimmung des Gehaltes an D-Glucose und D-Fructose. Spektralphotometrische Bestimmung von NADH») и содержит дополнительные требования, отражающие потребности народного хозяйства (разделы 2, 5, 7 - 9 и пункт 6.1

4    ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 28 апреля 2003 г. № 22 непосредственно в качестве государственного стандарта Республики Беларусь с 1 ноября 2003 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных (государственных) стандартов, издаваемых в этих государствах.

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Республики Беларусь без разрешения Госстандарта Республики Беларусь

ГОСТ 31083-2002

Содержание

1    Область применения........................................................1

2    Нормативные ссылки.......................................................1

3    Определение,обозначения и сокращения.........................................1

4    Сущность метода и реакции..................................................2

5    Реактивы.................................................................2

6    Аппаратура...............................................................3

7    Проведение испытания......................................................3

8    Выражение результатов......................................................4

9    Точность определения.......................................................5

10    Отчет об испытании.......................................................5

Приложение А Статистические результаты кругового испытания........................6

Приложение Б Библиография..................................................7

III

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ Метод определения D-глюкозы и D-фруктозы

Fruit and vegetable juices.

Determination of D-glucose and D-fructose content

Дата введения 2003-11-01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовых концентраций D-глюкозы и D-фруктозы.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

3    Определение, обозначения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующими определениями:

массовые концентрации D-глюкозы и D-фруктозы во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовые концентрации D-глюкозы и D-фруктозы, определенные раздельно в соответствии с настоящим стандартом и выраженные в граммах на кубический дециметр.

3.2    В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения.

АТФ    —    аденозин-5'трифосфат;

АДФ    —    аденозин-5'-дифосфат;

НАДФ — Р-никотинамидадениндинуклеотидфосфат;

НАДФН — Р-никотинамидадениндинуклеотидфосфат (восстановленная форма);

Г-6-Ф    —    глюкозо-6-фосфат;

Ф-6-Ф    —    фруктозо-6-фосфат;

ГК    —    гексокиназа;

Г6Ф-ДГ — глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа;

ФГИ — фосфоглюкозоизомераза;

Е    —    международная единица, определяет количество (активность) фермента, которое

служит катализатором для превращения при 25 °С 1 мкмоля вещества в минуту.

Издание официальное

4 Сущность метода и реакции

4.1    Сущность метода

Метод [1, 2] основан на фосфорилировании D-глюкозы и D-фруктозы под действием АТФ в присутствии ГК с образованием Г-6-Ф и Ф-6-Ф, преобразовании Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии Г6Ф-ДГ в глюконат-6-фосфат и НАДФН, фотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДФН, эквивалентной массовой концентрации D-глюкозы; изомеризации Ф-6-Ф в Г-6-Ф в присутствии ФГИ, преобразовании Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии Г6Ф-ДГ в глюконат-6-фосфат и НАДФН, фотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДФН, эквивалентной массовой концентрации D-фруктозы в пробе.

4.2    Реакции, происходящие при определении D-глюкозы:

D -глюкоза + АТФ    ^ГК _; Г-6-Ф + АДФ,    W

Г-6-Ф + НАДФ⁺    глюконат-6-фосфат    +    НАДФН    +    Н⁺.

4.3 Реакции, происходящие при определении D-фруктозы: D-фруктоза + АТФ ^ ₎ Ф-6-Ф + АДФ,

Ф-6-Ф ^ФГИ _: Г-6-Ф,

Г-6-Ф + НАДФ⁺    глюконат-6-фосфат    +    НАДФН    +    Н

5 Реактивы

5.1    Общие требования

При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения D-глюкозы и D-фруктозы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.

Препараты триэтаноламингидрохлорида, динатриевой соли Р-никотинамидадениндинуклео-тидфосфата (р-НАДФ-Ыа₂) и динатриевой соли аденозин-5'-трифосфата (АТФ-Ы^^Г^-ЗГ^О) должны содержать не менее 90 % основного вещества.

5.2    Буферный раствор гидрохлорида триэтаноламина активной кислотностью 7,6 pH

14,0 г триэтаноламингидрохлорида и 0,25 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 растворяют в 80 см³ дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Активную кислотность раствора устанавливают равной 7,6 pH приблизительно 5 см³ раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации с (NaOH) = 5 моль/дм³. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100,0 см³. Буферный раствор устойчив при температуре 4 °С 1 мес.

5.3    Раствор НАДФ

0,06 г динатриевой соли Р-никотинамидадениндинуклеотидфосфата (Р-НАДФ-На₂) растворяют в 6 см³ дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор устойчив при температуре 4 °С 1 мес.

5.4    Раствор АТФ

0,3 г динатриевой соли аденозин-5'-трифосфата (АТФ-^^Г^-ЗГ^О) и 0,3 г углекислого кислого натрия по ГОСТ 4201 растворяют в 6 см³ дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор устойчив при температуре 4 °С 1 мес.

5.5    Суспензия ферментов ГК и Г6Ф-ДГ

Раствор гексокиназы массовой долей 0,002 г/см³ и удельной активностью не менее 280 Е/см³, содержащий глюкозу в качестве субстрата и АТФ, и раствор глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы массовой долей 0,001 г/см³ и удельной активностью не менее 140 Е/см³, содержащий глюкозы-6-фосфат в качестве субстрата, смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с ((NH^SO^ = 3,2 моль/дм³. Суспензия устойчива при температуре 4 °С 12 мес.

2

ГОСТ 31083-2002

5.6 Суспензия фермента ФГИ

Раствор фосфоглюкозаизомеразы массовой концентрацией 0,002 г/см³, удельной активностью не менее 700 Е/см³, содержащий фруктозо-6-фосфат в качестве субстрата, суспендируют в растворе сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с ((NH^SO^ = 3,2 моль/дм³. Суспензия устойчива при температуре 4 °С 12 мес.

6    Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1—6.4.

6.1    Дозаторы пипеточные [3] объемами доз 100, 50 и 25 см³ и относительной погрешностью дозирования ±1 % или пипетки градуированные номинальной вместимостью 2,0; 1,0; 0,5; 0,2; 0,1 и 0,02 см³ и допускаемой относительной погрешностью ±1 %.

6.2    Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм.

6.3    Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленые длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.4    Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм, допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания ±1 %.

6.5    Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 20 г и допускаемой погрешностью ±0,0001 г.

7    Проведение испытания

7.1    Подготовка пробы к испытанию

Как правило, пробы не нуждаются в особых методах подготовки к испытаниям. Результаты испытаний по настоящей методике выражают в граммах на кубический дециметр.

Испытания концентрированных продуктов проводят после их разбавления дистиллированной водой до получения значения относительной плотности разбавленного продукта согласно рецептурам натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. При этом относительную плотность разбавленной пробы выражают в граммах на кубический дециметр.

Результаты испытаний концентрированного продукта могут быть также выражены в граммах на килограмм. При расчете результата испытаний учитывают массу пробы концентрированного продукта и фактор разбавления.

При испытании продуктов высокой вязкости и/или с очень большим содержанием мякоти результаты испытаний выражают в граммах на килограмм продукта.

Продукты с мутной взвесью перед испытанием хорошо перемешивают.

Пробу разбавляют дистиллированной водой до получения значений массовых концентраций D -глюкозы и D-фруктозы в интервале от 0,1 до 1,0 г/дм³. Допускается использование при проведении испытания окрашенной разбавленной пробы.

7.2    Определение

7.2.1    Общие требования

Определение проводят при постоянной температуре в интервале от 20 до 25 °С. Допускается проводить определения при постоянной температуре в интервале от 25 до 37 °С при условии получения равноценных результатов.

Абсорбционный максимум НАДФН находится при длине волны 340 нм. При использовании спектрофотометра переменной длины волны все измерения проводят при максимуме поглощения света НАДФН. При использовании спектрофотометра с ртутной лампой измерения проводят при длинах волн 334 или 365 нм.

Для дозирования буферных растворов, а также растворов проб, ферментов и коферментов используют только градуированные пипетки или автоматические дозаторы.

7.2.2    Контрольный раствор

В фотометрическую кювету вносят 1,00 см³ раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.2, 0,10 см³ раствора НАДФ по 5.3, 0,10 см³ раствора АТФ по 5.4 и 2,00 см³ дистиллированной воды. Раствор перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора — (АД_К относительно оптической плотности воздуха.

3

ГОСТ 31083-2002

9 Точность определения

9.1 Сходимость

Абсолютные расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должны превышать более чем в 5 % случаев значений показателей сходимости г, г/дм³, рассчитываемых по формулам для:

D-глюкозы г = 0,42 + 0,027pj, D-фруктозы г= 0,15 + 0,033р₂,

где р] — среднее арифметическое результатов двух параллельных определений массовой концентрации D-глюкозы;

р₂ — среднее арифметическое результатов двух параллельных определений массовой концентрации D-фруктозы.

9.2 Воспроизводимость

Абсолютные расхождения между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях, не должны превышать более чем в 5 % случаев значений показателей воспроизводимости R, г/дм³, рассчитываемых по формулам для:

D-глюкозы R = 1,00 + 0,042р₃; D-фруктозы R = 1,05 + 0,045р₄,

где р₃ — среднее арифметическое результатов двух измерений массовой концентрации D-глюкозы; Р4 — среднее арифметическое результатов двух измерений массовой концентрации D-фруктозы.

10 Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    информация, которая необходима для идентификации пробы (вид пробы, ее происхождение, описание);

-    ссылка на настоящий стандарт;

-    дата и способ отбора пробы (если возможно);

-    дата доставки пробы;

-    результаты испытаний и наименования единиц измерений, в которых они приводятся;

-    дата испытаний;

-    информация о выполнении условий воспроизводимости метода;

-    замечания об особенностях проведения испытаний;

-    особые условия проведения испытаний, которые не учтены настоящим стандартом, но могли бы оказать влияние на результаты испытаний.

5

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Статистические результаты кругового испытания

Проведенное в соответствии с [4] круговое испытание дало следующие характеристики точности метода для глюкозы и фруктозы, приведенные в таблицах АЛ и А.2.

Испытание проводилось под руководством Отдела пищевой химии Института Макса фон Петтенкофера Федерального министерства здравоохранения, г. Берлин, ФРЕ.

Род проведения кругового испытания    — 1983.

Число участвовавших лабораторий    — 22.

Количество проб    — 4.

Таблица А.1 — Елюкоза

Наименование величины, характеризующей круговое испытание Значение величины для пробы А В С D Число лабораторий, оставшихся после исключения тех, в которых полученные результаты были забракованы 19 17 15 16 Число исключенных лабораторий 3 5 7 6 Число принятых результатов 105 94 80 84 Среднее арифметическое (рх), г/дм3 26,2 34,9 53,5 79,9 Среднее квадратическое отклонение результатов определений (jr), г/дм3 0,389 0,562 0,539 0,959 Относительное среднее квадратическое отклонение результатов определений (RSDr), % 1,48 1,61 1,01 1,20 Показатель сходимости (г), г/дм3 1Д 1,6 1,5 2,7 Среднее квадратическое отклонение результатов измерений (sR), г/дм3 0,754 1,003 1,140 1,403 Относительное среднее квадратическое отклонение результатов измерений (RSDX), % 2,88 2,87 2,13 1,75 Показатель воспроизводимости (R), г/дм3 2,1 2,8 3,2 3,9

Таблица А.2 — Фруктоза

Наименование величины, характеризующей круговое испытание Значение величины для пробы А В С D Число лабораторий, оставшихся после исключения тех, в которых полученные результаты были забракованы 15 16 18 17 Число исключенных лабораторий 6 5 3 4 Число принятых результатов 81 85 100 92 Среднее арифметическое (р2), г/дм3 66,5 27,7 55,6 80,6 Среднее квадратическое отклонение результатов определений (jr), г/дм3 0,887 0,423 0,548 1,011 Относительное среднее квадратическое отклонение результатов определений (RSDr), % 1,33 1,53 0,99 1,25 Показатель сходимости (R), г/дм3 2,5 1,2 1,5 2,8 Среднее квадратическое отклонение результатов измерений (sR), г/дм3 1,553 0,796 1,323 1,630