МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

M ЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Средства воспроизводства ЭМБРИОНЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Технические условия

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. № 45-2014)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны поМК(ИСО 3166)004-97 Код страны no МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Армения AM Минэкономики Республики Армения Киргизия KG Кыргызстандарт Молдова MD Молдова-Стандарт Россия RU Росстандарт Таджикистан TJ Таджикстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 августа 2014 г. N« 890-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 28424-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5    ВЗАМЕН ГОСТ 28424-90

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе к Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты» Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

©Стандартинформ. 2015

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Средства воспроизводства

ЭМБРИОНЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Технические условия

Product for reproduction Bovine embryos Specifications

Дата введения - 2015-07-01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сеежеполученные и замороженные эмбрионы крупного рогатого скота (далее - эмбрионы), предназначенные для пересадки животным-реципиентам.

Требования к качеству и безопасности эмбрионов изложены в 4.1 - 4.4. к маркировке - в 4.5.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.008-76 Система стандартов безопасности труда. Биологическая безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.2.003-91 Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности

ГОСТ 12.3.002-75 Система стандартов безопасности труда. Процессы производственные. Общие требования безопасности

ГОСТ 6259-75 Реактивы. Глицерин. Технические условия

ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 10164 75 Реактивы. Этиленгликоль. Технические условия

ГОСТ 19710-83 Этиленгликоль. Технические условия

ГОСТ 26030-83 Сперма быков замороженная. Технические условия

ГОСТ 27775 88 Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. Термины и определения

ГОСТ 28085 89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю «Национальные стандарты», составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом, следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 27775.

4    Технические требования

4.1    Общие требования

4.1.1    Эмбрионы должны соответствовать требованиям настоящего стандарта и (1). быть получены в центрах и пунктах трансплантации эмбрионов в соответствии с требованиями (2). правилами по трансплантации эмбрионов и ветеринарно-санитарными требованиями, действующими на территории государства, принявшего стандарт.

4.1.2    Все манипуляции по получению, обработке, использованию и хранению эмбрионов проводят в соответствии с 4.1.1 с использованием стерильных инструментов, материалов и сред, безопасных для эмбрионов.

4.2    Требования к донорам яйцеклеток (в последующем - эмбрионов) и спермы

4.2.1    Эмбрионы получают от клинически здоровых самок крупного рогатого скота, осемененных спермой быков по ГОСТ 26030.

4.2.2    Доноров яйцеклеток (в последующем - эмбрионов) отбирают из поголовья, на которое не наложены ветеринарные ограничения по причине наличия болезни или возбудителя болезни, которые не входят в категорию 1 в соответствии с приложением А.

4.2.3    Доноры яйцеклеток (в последующем - эмбрионов) должны подбираться с учетом комплекса селекционно-генетических признаков, иметь продуктивность (молочную, мясную, мясомолочную), превышающую стандарт породы.

4.2.4    Самок крупного рогатого скота перед отбором в качестве доноров яйцеклеток (в последующем - эмбрионов) подвергают клиническому осмотру. На каждое животное оформляют документ с указанием клинического состояния здоровья, благополучия по инфекционным заболеваниям с указанием даты проведения последних диагностических исследований и обработок.

4.2.5    Быки-производители, сперму которых используют для осеменения самок-доноров. должны находиться на племенных предприятиях, отвечающих требованиям по ветеринарному благополучию и здоровью животных, а также по соблюдению санитарно-гигиенических условий отбора, замораживания, хранения и отправки спермы, действующих на территории государства, принявшего стандарт.

4.2.6    Племенные животные должны иметь подтверждение достоверности происхождения и отсутствия генетических аномалий.

4.3    Требования к процедурам предотвращения распространения инфекционных заболеваний через эмбрионы, отобранные in vivo

4.3.1    По отношению к болезням, не входящим в категорию 1 (см. приложение А), учитывают ветеринарно-санитарное положение страны или зоны, экспортирующей эмбрионы, ветеринарносанитарное состояние поголовья и доноров эмбрионов, а также патогенность возбудителей, от которых стремится защититься страна, импортирующая эмбрионы.

4.3.2    Для предотвращения заражения инфекционными заболеваниями, которые не входят в категорию 1 (см. приложение А), проводят надзор за животными - донорами яйцеклеток (в последующем - эмбрионов) и поголовьем их происхождения в течение средней длительности инкубационного периода болезней, а также лабораторные исследования жидкостей после отбора и отмывки эмбрионов или других биологических материалов (например, крови) на предмет определенных патогенных возбудителей болезней.

4.4    Характеристики эмбрионов

4 4.1 Полученные на седьмой день после искусственного осеменения самок-доноров эмбрионы должны быть на стадии развития ранней морулы (Mo I). поздней морулы (Mo II). ранней бластоцисты (Бл I), экспандированной бластоцисты (Бл II), полностью экспандированной бластоцисты (Бл III) с показателями в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1- Характеристика стадий развития эмбрионов

Стадия развития эмбриона Показатели Морфология Время с момента оплодотворен ия. ч Размер, мм Число бластомеров Ранняя морула 90 - 125 0.13 16-32

ГОСТ 28424-2014

Окончание таблицы 1

Стадия развития эмбриона Показатели Морфология Время с момента оплодотворен ия. ч Размер, мм Число бластомеров Поздняя морула 120-145 0.13 32-64 Ранняя бластоциста 140-175 0,13-0.15 Более 64 Экспандированная бластоциста 160-210 0.14-0.20 64-130 « Полностью экспандированная бластоциста 160-210 0.14 - 0,20 130-200 u j V/

4.4.2 В зависимости от оценки морфологических показателей, указанных в таблице 2. полученным эмбрионам присваивают код качества от 1 до 4 в соответствии с приложением Б.

3

ГОСТ 28424-2014

4.4.3 В коммерческих целях могут быть использованы только эмбрионы, которым присвоен код качества 1.

4.4    4 Свежеполученные эмбрионы не должны быть контаминированы патогенными и условно патогенными микроорганизмами, грибами, вирусами и другими микроорганизмами.

4.5    Упаковка

4.5.1    Каждую партию свежеполученных эмбрионов после определения морфологических показателей помещают и укупоривают в пайеты со средой для хранения эмбрионов, представляющую собой стерильный фосфатно-буферный раствор, содержащий альбумин сыворотки крови крупного рогатого скота (BSA) концентрацией 4 г/дм³ или фетальную сыворотку крови крупного рогатого скота (FCS) концентрацией 20 см’/дм и антимикробный препарат (гентамицин концентрацией 0,05 г/дм³ или полиген концентрацией 0.3 г/дм³).

4.5.2    Эмбрионы, предназначенные для замораживания, после промывки и экспозиции в криопротекторе (глицерин концентрацией 1.0 моль/дм^ или 1.4 моль/дм³ по ГОСТ 6259 или этиленгликоль концентрацией 1.5 моль/дм' по ГОСТ 10164 или ГОСТ 19710. помещают в пайеты, укупоривают и замораживают в предусмотренных для этих целей программных замораживателях в соответствии с правилами, действующими на территории государства, принявшего стандарт.

4.5.3    Пайеты с замороженными эмбрионами помещают в контейнеры (гоблеты. канистры, тубы), которые переносят в сосуд Дьюара с жидким азотом по ГОСТ 9293.

4.5.4    Упаковочные и укупорочные материалы должны соответствовать требованиям документов, в соответствии с которыми они изготовлены, и обеспечивать сохранность качества и безопасность эмбрионов при перевозках, хранении и реализации.

4.6    Маркировка

Кахщую пайету маркируют, нанося маркером номер партии и дату получения эмбрионов.

5    Требования безопасности

5.1    Производственный процесс и оборудование должны соответствовать требованиям ГОСТ 12.2.003 и ГОСТ 12.3.002.

5.2    Требования безопасности. производственной санитарии и санитарно-противоэпидемического режима должны соответствовать требованиям ГОСТ 12.1 008 и требованиям, действующим на территории государства, принявшего стандарт.

5.3    Утилизацию эмбрионов проводят кипячением в течение 20 мин.

6    Правила приемки

6.1    Свежеполученные и замороженные эмбрионы принимают партиями.

Под партией понимают любое количество эмбрионов, полученное от одного донора эмбрионов за один технологический цикл и оформленное одним документом, удостоверяющим качество и безопасность эмбрионов.

6.2    Каждая партия свежеполученных и замороженных эмбрионов должна быть проверена и принята соответствующим специалистом предприятия-изготовителя.

6.3    Экспортируемые эмбрионы должны сопровождаться документом, подтверждающим благополучие животных, от которых они получены, а также соответствие условий получения и замораживания эмбрионов международным требованиям (3) (см. приложение В).

6.4    Каждая партия замороженных эмбрионов, предназначенных для пересадки, должна быть принята специалистом по пересадке эмбрионов предприятия-изготовителя или предприятия-получателя.

7    Методы контроля

7.1    Определение качества эмбрионов по морфологическим показателям

Качество эмбрионов по морфологическим показателям определяют у всех свежеполученных эмбрионов. Качество замороженных эмбрионов после оттаивания определяют в случае использования многоступенчатого насыщения эмбриона криопротектором или. при необходимости, в случае одноступенчатого насыщения (при использовании этиленгликоля).

7.1.1    Оборудование, материалы и среды

7.1.1.1    Термостат, обеспечивающий поддержание температуры (37 ± 1) ®С.

7.1.1.2    Микроскоп инвертированный.

7.1.1.3    Лупа бинокулярная.

7

ГОСТ 28424-2014

7.1.1    4 Столик нагревательный.

7.1.1.5    Сифон или фильтр для отбора промывной среды.

7.1.1.6    Чашки Петри диаметром 90 и 35 мм для поиска и сбора эмбрионов.

7.1.1.7    Флаконы вместимостью 450 - 500 см³.

7.1.1    8 Пипетки для отлова эмбрионов

7.1.1.9    Среда фосфатно-буферная, содержащая альбумин сыворотки крови крупного рогатого скота (BSA) концентрацией 4 г/дм' или фетальную сыворотку крови крупного рогатого скота {FCS) концентрацией 20 см'/дм³ и антимикробный препарат (гентамицин концентрацией 0,05 г/дм или полиген концентрацией 0.3 г/дм³).

7.1.1.10    Трипсин, раствор массовой долей 0.25 %.

Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками, а также материалов и сред по качеству не ниже вышеуказанных

7.1.2    Подготовка к испытанию

Раствор, полученный с соблюдением правил асептики в отдельный флакон после вымывания эмбрионов из каждого рога матки самки-донора, выдерживают при температуре от 18 °С до 25 °С в течение 20 мин или в термостате при температуре 37 °С в течение 20 мин для осаждения эмбрионов. Верхнюю часть раствора удаляют с помощью сифона, оставляя 80 - 100 см³ раствора. Оставшийся раствор переносят в две-три чашки Петри диаметром 90 мм.

При использовании промывочной системы с фильтром отфильтрованный раствор просматривают непосредственно в прилагаемой к системе емкости для сбора эмбрионов.

7.1.3    Проведение испытания

Эмбрионы просматривают под бинокулярной лупой при увеличении 20^х - 28^х.

Эмбрионы с оценкой «непригодные» удаляют.

Эмбрионы, пригодные к пересадке и замораживанию и отобранные в чашки Петри диаметром 35 мм со средой по 7.1.1.9. не менее десяти раз переносят для промывки в чистую фосфатнобуферную среду, используя при каждом переносе эмбрионов новую пипетку. Допускается групповая промывка эмбрионов, взятых у одной самки-донора, но их число не должно превышать десяти в каждой промывке.

В случае, когда требуется проведение операций по инактивации или удалению вирусов (например. герпесвирус-1 крупного рогатого скота, вирус болезни Ауески). проводят дополнительную промывку 0,25 %-ным раствором трипсина.

После промывки зону пеллюцида каждого эмбриона исследуют по всей поверхности при увеличении 50^х - 100^х для признания ее неповрежденной и не имеющей никаких посторонних включений.

7.1.4    Обработка результатов

Оценку качества эмбрионов по морфологическим показателям проводят на соответствие требованиям, указанным в 4.4.

Свежеполученные эмбрионы с оценкой «отличные и хорошие» подлежат прямой пересадке животным-реципиентам или замораживанию.

Свежеполученные эмбрионы с оценкой «удовлетворительные», «условно пригодные» пересаживают животным-реципиентам.

Замороженные эмбрионы, получившие после оттаивания оценку «отличные и хорошие», «удовлетворительные» и «условно пригодные», пересаживают животным-реципиентам.

Эмбрионы с оценкой «непригодные» выбраковывают.

7.2 Определение санитарного состояния эмбрионов

7.2.1    Санитарное состояние определяют у свежеполученных эмбрионов, подлежащих пересадке или замораживанию.

7.2.2    Санитарное состояние свежеполученных эмбрионов, а также эмбрионов, подлежащих замораживанию, устанавливают на основании выборочного микробиологического исследования предпоследнего промывочного раствора соответствующей среды, не менее чем от шести партий эмбрионов в один квартал.

7.2.3    Для определения санитарного состояния эмбрионов отбирают по 2 см' соответствующей среды - 1 см' среды используют для микробиологических исследований. 1 см' среды помещают в пробирку, плотно закрывают, маркируют и хранят в замороженном виде до использования всех эмбрионов данной партии.

7.2.5    Контроль стерильности сред проводят по ГОСТ 28085.