МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ГОСТ

13979.9-69

Методика выполнения измерений активности уреазы

Oilcakes and oilmeals.

Measurement of urease activity

ОКСТУ 9146

Постановлением Комитета стандартов, мер и измерительных приборов при Совете Министров СССР от 17 февраля 1969 г. № 204 срок введения установлен

с 01.01.70

Ограничение срока действия снято по протоколу № 2—92 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 2—93)

1.    Настоящий стандарт распространяется на жмыхи и шроты, получаемые при переработке соевых семян, и устанавливает методику выполнения потенциометрического измерения активности уреазы в интервале значений 0,05—2,0 pH.

Сущность метода заключается в изменении pH фосфатного буферного раствора, который образуется в результате воздействия уреазы на содержащуюся в растворе мочевину.

(Измененная редакция, Изм. № 1, 2, 3).

2.    Отбор проб - по ГОСТ 13979.0-86.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

2а,3—7. (Исключены, Изм. № 2).

8. МЕТОДИКА ВЫПОЛНЕНИЯ ПОТЕНЦИАЛЬНОГО ИЗМЕРЕНИЯ АКТИВНОСТИ УРЕАЗЫ

8а. Для проведения испытания должны применяться следующие аппаратура, материалы и реактивы:

весы лабораторные по ГОСТ 24104-88¹ класса точности 2 с наибольшим пределом взвешивания 200 г или другие весы с таким же классом точности;

весы лабораторные по ГОСТ 24104-88 класса точности 3 с наибольшим пределом взвешивания 500 г, или другие весы с таким же классом точности;

pH-метр или аналогичный прибор, с пределами измерений от минус 1 до 14 единиц pH с ценой деления индикатора от 0,01 до 0,1;

электрокофемолка бытовая по ГОСТ 19423-81 или аналогичное измельчающее устройство; баня водяная с терморегулятором или другое термостатирующее устройство, позволяющее поддерживать температуру (30 + 2)°С;

электроплитка бытовая по ГОСТ 14919-83;

термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498-90, позволяющий измерять температуру в диапазоне 0—50 °С, с ценой деления 1—2 °С; колба мерная 1—100—2 по ГОСТ 1770-74; стаканы В-1—100 или В-1—150 ТС по ГОСТ 25336-82;

колбы конические Кн-2—500 (1000)—34 ТХС или колбы плоскодонные К-2—500 (1000) —34 ТХС по ГОСТ 25336-82;

цилиндр 1—50, 3—50 по ГОСТ 1770-74;

сито с отверстиями 0,25 мм из набора лабораторных сит;

*С 1 июля 2002 года вводится в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).

Издание официальное    Перепечатка воспрещена

^    Издание    с    Изменениями    №    1,    2,    3,    утвержденными    в    марте    1983    г.,

июне 1987 г., апреле 1995 г. (ИУС 7-83, 10-87, 6-95)

С. 2 ГОСТ 13979.9-69

мочевина по ГОСТ 6691-77;

известь натронная;

раствор фосфатный буферный образцовый с pH около 7 по ГОСТ 8.135-74;

калий фосфорнокислый однозамещенный (КН₂Р0₄) по ГОСТ 4198-75 или натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный (NaH₂P0₄ • 2Н₂0) по ГОСТ 245-76;

калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный (К₂НР0₄ • ЗН₂0) по ГОСТ 2493-75 или натрий фосфорнокислый двузамещенный безводный (Na₂HP0₄) по ГОСТ 11773-76, или натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный (Na₂HP0₄ • 12Н₂0) по ГОСТ 4172-76;

вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72, не содержащая углекислого газа.

Допускается применение другой аппаратуры и реактивов, по качеству и метрологическим характеристикам не уступающих перечисленным выше.

(Измененная редакция, Изм. № 1, 2, 3).

9. ПОДГОТОВКА К ИЗМЕРЕНИЯМ

9а. Обработка дистиллированной воды

Дистиллированную воду кипятят на электроплитке в течение 15 мин для удаления углекислого газа и охлаждают в колбе, закрывающейся пробкой, снабженной трубкой с натронной известью.

(Введен дополнительно, Изм. № 1).

96. Приготовление буферных растворов

При отсутствии стандарт-титров буферный раствор готовят следующим образом.

На весах класса точности 2 с записью результата до третьего знака взвешивают две пробы однозамещенной и двузамещенной солей калия или натрия в количествах, соответствующих приведенным в табл. 2, растворяют в дистиллированной воде, подготовленной по и. 9а, в мерной колбе вместимостью 1000 см³ и доводят объем раствора до 1000 см³.

Полученный буферный раствор А хранят в темном месте не более 1 мес.

Для приготовления буферного раствора Б с мочевиной растворяют мочевину в растворе А в колбе вместимостью 500 или 1000 см³ из расчета 1,5 г мочевины на 50 см³ раствора А.

Раствор Б хранят в темном месте не более 10 дней.

Таблица 2*

Масса однозамещенной соли,г Масса двузамещенной соли,г КН2Р04 NaH2P04 ■ 2Н20 NaHP04 безводный К2НР04 ■ зн2о Na2HP04 2Н20 3,4 — 3,5 — — 3,4 — — 5,7 — 3,4 — — — 8,95 — 3,9 3,5 — — — 3,9 — 5,7 — — 3,9 — — 8,95

9в. Подготовка образца

Из средней пробы методом диагонального деления отбирают пробу для анализа массой около 10 г.

Пробу измельчают до прохода не менее 60 % ее через сито с отверстиями диаметром 0,5 мм. Просеянный материал вновь смешивают с остатком на сите и используют для взятия пробы.

При масличности продукта более 2 %, после измельчения его обезжиривают в соответствии с ГОСТ 13979.2-94.

Допускается использовать содержимое патронов, оставшееся после определения масличности жмыхов и шротов, по ГОСТ 13979.2-94.

96, 9в. (Измененная редакция, Изм. № 1, 3). ¹

ГОСТ 13979.9-69 С. 3

10. ПРОВЕДЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ

На весах классов точности 2 или 3 с записью результата до второго знака берут три пробы измельченного материала массой (1 ± 0,01) г и помещают в стеклянные стаканы вместимостью 100 и 150 см³.

В один стакан приливают 50 см³ раствора А и помещают его в водяную баню с температурой (30 ± 2) °С.

Во второй и третий стаканы с интервалом в 5 мин приливают по 50 см³ раствора Б и помещают их немедленно после приливания раствора в ту же водяную баню.

Время термостатирования — 30 мин, при этом следует каждые 5 мин перемешивать содержимое стаканов стеклянной палочкой, заканчивая перемешивания за 5 мин до конца нагрева. По истечении 30 мин выдержки жидкость над осадком из каждого стакана декантируют в стаканчики прибора и определяют pH каждого раствора в соответствии с прилагаемой к прибору инструкцией.

(Измененная редакция, Изм. № 1,3).

11. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

Активность уреазы в единицах pH вычисляют по формуле

А = рН_х — рЩ,

где рН_г — значение pH в основном измерении (с раствором Б); pH₀ — значение pH в контрольном измерении (с раствором А).

За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных измерений, расхождения между которыми не должны превышать 30 % от среднего арифметического значения pH при доверительной вероятности 0,95. Все вычисления проводят с записью результата до второго десятичного знака.

(Измененная редакция, Изм. № 1, 3).

37

1

Табл. 1 исключена.

36