Министерство сельского хозяйства Российской Федерации
Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРБДЕСборник № 22 Часть 2-ая
МОСКВА
ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1994 г.
УТВЕРЖДЕНО
МИНИСТЕРСТВОМ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР и 29 м июля 1991 t*.
» 6192-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ДИМЕТОМОРФА (АКРОБАТА) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1.Краткая характеристика препарата
Диме то морф (акробат)-экспериментальный фунгицид, предназначенный для борьбы с фитофторой.
Химическое название-(E,Z)-3 /3-(4-хлорофенил)-3“(3,4-ДИметокси-фемил) акрилоил/морфолин.
Бесцветное.твердое кристаллическое вещество,без запаха,реакции изомеризации происходят в различных растворителях под влиянием света. Температура плавления 127-148°С.Легко растворим в ацетоне.ацетонитриле и метаноле,плохо растворим в гексане 0,122 г/л и воде 0,060 г/л.Препарат малотоксичен.УЦЦп для мышей - 3700 мг/кг,а для крыс- 390<.» шг/кг, не оказывает кожно-раздражающего действия.
Разработчики:Рева Н.И.,Ракитский В.Н. ,ВНИИГИНТ0КС,Кивв.
2.Характеристика метода
Метод основан па использовании газожидкостной хроматографии с при мепением детектора по захвату электронов (ДЭЗ) или тонкослойной хфом&то-графш.
Отбор проб производится с концентрированием на бумажном фильтре "синяя лента".
Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме 0.5 нг (ГЖХ),
1 мкг (ТСХ).
Нижний предел измерения в воздухе 0,001 мгЛг* (ГЖХ),0,05 мгЛг* (ТСХ),при отборе 150 л воздуха.
Диапазон измеряемых концентраций 0,001-0,04 (ГЖХ),0,05-0,25 (ТСХ).
Измерению не мешают другие фунгициды.
Суммарная погрешность измерения не превышает - 20,0Х ГЖХ и - 25/.
ТСХ.
3. Реактивы, растворы и материалы
Диме то морф 95.6/.-НЫЙ препарат.
Стандартный раствор диметоморфн с концентрацией 100 мг/мл готовят растворением 10,5мг препарата в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Годен к употреблению в течение 30 дней.
Рабочие растворы димотоморфа концентрации 2,51 5,0; 10 Д 20,0мкг/мл готовят в градуированных пробирках вместимость» 10 мл соотвотствукщвм разбавлением ацетоном стандартного раствора. Хранят рабочие растворы диме то морфа в холодильнике. Годен к употреблению в течение 1.-3 дней.
Натрия сульфат безводный, хч., ГОСТ 4166-76.
Ацетон, ч., ГОСТ 2603-79.
Гексан, ч., ТУ 6-06-33/Г-78.
Азот газообразный, ГОСТ 9Р83 74, в баллоне с редуктором.
Аммиак 25/.-нъ1Й, ГОСТ 3760-74.
Вром-феполовый синий, чда., ТУ 6-99-3719-03.
35
Кислота лимонная. хч., ГОСТ 3652-74, 2Х-ный йодный раствор.
Кислота уксусная, хч., ГОСТ 18290-75; 5/.~ный водный раствор.
Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81.
Проявляиций реагент 1;
смесь растворов бромфеполового синего (БФС) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5И водио-ацотоиовый (1:3) раствор азотнокислого серебра. 2. 10 мл 0,057-ного раствора бромфеполового
синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до обьема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном прохладном мосте. Годен к употреблению в течение 3-5 дней.
Проявляющий реагент 2 *.
растворяют 0,5 г AgNO^ в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют
5- 7 мл аммиака и доводят ацетоном до 100 мл. Хранят в темном месте.
Фильтры бумажные обеззолешше "синяя лента", диаметр 5-6 см,ТУ
6- 09-1678-77.
Хромосорб 750 с 37. 0V-17.
4. Приборы и посуда
Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов.
Весы аналитические ВЛА-200М.
Испаритель ротационный ИР-IM, ТУ 25-11-917-74.
Холодильник, бытовой.
Шкаф олоктрический сушильный, ТУ 64-1-1411-72.
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76,
Ваккумный водоструйный насос, ГОСТ 25336-82.
Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82,вместимостью 50-100 мл (для отгонки растворителя).
Холодильник, ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные, цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.
Воронки лабораторные,, диаметр 5-6 см, ГОСТ 25336-82.
Пипетки,ГОСТ 20292-74. на 1; 6? 10мл,
Воронки делительные,ГОСТ 25336-62, на 250 мл.
Микро пиле тки,ГОСТ 20292-74. ни 0,1; 0,2.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-62.
Скальпель.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-62.
Камора для опрыскивания пластинок, ТУ 25-11-430-70.
Колба с тубусом, ГОСТ 25336-82.
Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-80.
Секундомер, ГОСТ 5072-79.
Аспирационное устройство, ТУ 64-1-862-77.
Фильтродержатель.
УФ лампа, типа ПРК-4 или аналогичная.
5. Отбор пробы воздуха
Воздух со скоростью. 5 л/мин. аспирируют через бумажный фильтр "синяя лента", закрепленный в фильтродержателе. Продолжительность отбора пробы- 30 мин. Длительность хранения проб в стеклянной таре в затемненном от света месте не более 5 суток.
6. Подготовка к измерению
Пластинку "Силуфол" помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь растворителей ацетона-25Х-аммиак в соотношении 7:3 /об/об/ глубина погружения пластинки в растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры, и выдерживают на воздухе до испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению.
7. Проведение измерения
Бумажный фильтр, содержащий димотоморф (акробат) из фильтродержател*
37
переносят в целительную воронку и заливают 15-20 мл. ацетона. Экстрагируют пестицид из фильтра в течение 10-15 мин. периодически перемешивая содержимое емкости. Экстракцию повторяют дважды свежими порциями ацетона, вкстракты объединяют, отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре бани не выше 55°С. К сухому остатку пипеткой добавляют 1,5 мл ацетона.
8. Метод ТСХ
0,2 мл полученного раствора наносят микропипеткой на очищенную пластинку "Силуфол". Рядом с пробой наносят по 0,2 мл. каждого рабочего раствора диметоморфа, что соответствует содержанию в пятно 0,5; 1,0;
2,0 мкг препарата.
Пластинку помещают в хроматографимоскую камеру, куда за 10-15 мин. до хроматографирования наливают смесь раотворителой: гексен-ацетон (111) в таком количестве, чтобы глубина погружения пластинки в растворителе составляло 0,5 см. После подъема фронта растворителя от линии старта на высоту 10 см хроматографирование прекращают. Пластинку выдерживают в вытяжном шкафу до испарения растворителей и обрабатывают одним из проявляющих реагентов. При обработке азотнокислым серебром (проявляющий реягопт ?) пластинку орошают до влажного состояния, выдерживают в вытяжном шкафу 15-20 мин. (до исчезновения запаха аммиака) и подвергают У<Г>-(>блучению в течении 10-15 мин. (нефильтрованные УФ-дучи лампа ПРК-4). Пластинку помещают на растоянии 20 см. от источника света. При наличии димотоморфю на хроматограмме проявляются пятно серо-черного цвета.
После обработки пластинки бро«феноловым реагентом (проявляющий реагент 2) пластинку опрыскивают раствором лимонной (или уксусной) кислоты. 0 наличии диметоморфа в пробе свидетельствуют появление в этом случае синего пятна на желтом фоне. Величина R^= 0,5-0,2.
33
9.Метод ГЖХ
Детектор постоянной скорости рекомбинации.
Колонка стеклянная - 1000 х 3 мм.
Твердый носитель - Хромосорб - 750.
Жидкая фаза - ЭХ 0V-17.
Температура термостата колонки - 185°С
детектора-250°С
испарителя-200°С.
Газ-носитель - азот особой чистоты.
Скорость движения диаграммной ленты - 60 мм/мин.
Скорость потока азота через колонку - 60 мл/мин.
Скорость потока через детектор - 150 мл/мин.
—1Р
Рабочая шкала электрометра - 20.10 .
Время удерживания - 7 мин 30 сек.
Объем вводимой пробы -3-5 мкл.
Линейность детектирования 0,5-20,0 мкг.
10.Расчет концентрации
Концентрацию даме то морфа в мг/м^ в воздухе вычисляют по формуле:
Тонкослойная хроматографы»
С . V
G-количество диме то морфа в пятне пробы,найденное путем сравнения со стандартами, мкг;
V-окончательный объем экстракта пробы,мл;
0,2-обьем экстракта пробы,нанесенный на пластинку,мл;
V20”oc3beM ПР°^Ы воздуха,отобранный для анализа и приведенный к нормаль-
ным условиям,л.
39
Газожидкостное хроматограффование
х_ ст gp 1 от .где
S6r,Vrip*V20
Бур-площадь пика анализируемой пробы, мм2;
Б„_-площадь пика стандарта,мм2;
ч/Т
Ост-ордержание диметоморфа в стандарте,мкг/мл;
Уст-обьем стандартного раствора.введенного в хроматограф,мкл; Vyp-обьем хроматографируемой пробы,введенной в хроматограф,мкл;
Vj-общий объем пробы,мл;
V20 -объем воздуха,отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям,л.
11.Требование безопасности
Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях,а также правила устройства,техники безопасности, производственной санитарии,противовпндемиологического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделах,отделениях) санитарно-опи-демиологических учреждений системы М3 СССР Л 2455-81 от 20.10.81 г.
40