Министерство сельского хозяйства Российской Федерации
Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ
МОСКВА
ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1994 г.
Утверждено
Министерством здравоохранения СССР
и 29 „ шаля 1991 Гв Л 6106-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГЛУФОСИНАТ АММОНИЯ (БАСТА) В ВОДЕ И РАСТ1ГГБЛБНЫХ КУЛЬТУРАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1.Краткая характеристика
Глуфосинат аммоний (баста),ХОЕ 039866-БЬ-гомоалашш-4-ил-(метил)-
фосфонат аммония (по номенклатуре ИШАК)
О
CBgP-CHg-CBg-CH-COOH/ nh4
Ч0 iffln
М.м. 198,19
Белое кристаллическое вещество, температура плавления 215^0.
Растворим в воде, не растворим в органических растворителях.ОДУ в воде водоемов 0,02 мг/л.
Гербицид для борьбы с широким спектром одно - и многолетних двудоль-ешх и злаковых сорняков в овощеводстве, виноградарстве, садоводстве.
2. Методика определения глуфосината аммония (баста) в воде и растительных культурах
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на концентрировании водного экстракта, очистке л выделении глуфосината аммония на колонке с нолисорбом и определении препарата
Разработчики: Письменен М.В. .Гальперина С.Р. .ВНИИГШТОКС,. Киев.
из аликвоты подготовленного экстракта хроматографией нашгастинках "силу-фол11 с обнаружением басты по реакции о ниыгидрином.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода Минимально детектируемое количество - 0,1 мкг;
Нижний предел определения вода 0,025 мг/л растения:
овощи,фрукты 0,1 мг/кг зерно 0,2 мг/кг
зеленая масса (травянистая растительность,хвоя) - 0,5мг/кг Размах варьирования, У вода 70-102 растения 66-105 Среднее значение определения, У вода 37 растения 83 Стандартное отклонение,У. вода 5,6 растения 6,4 Доверительный интервал среднего при р=0,955 П=5 вода - 15,6 растения - 18
Поправочный коэффициент, учитывающий потери при концентрировании вымораживанием до 2-3 мл, равен 1,2
х/
Примечание: методика разрабатывалась на яблоках различных сортов, кожуре цитрусовых, травянистой растительности, хвое, зерне, картофеле; при определении в других культурах необходимо предварительно провести анализ контрольной пробы исследуемого
продукта.
2.1.3 .Избирательность метода
Определению не мешают другие ФОГТ»в том числе водорастворимые глифосат фосфамид.Определению могут мешать водорастворимые коекстрактивные вещества , содержащие аминогруппу-В связи с этим проводится ТСХ анализ контрольного образца исследуемой культуры как описано ниже (п.2.5.1.).
2.2.Реактивы и растворы Ацетон,х.ч.,ГОСТ 2603-79* н-Гексан,х.ч.,ТУ 6-09-3375-78.
Полисорб С~60/100,ТУ 6-05-211-1313-86*
Метанол,*,ч.,Г0СТ 6995-77-Аммиак водный,25/,ч.,ГОСТ 3760-79*
Этилацетат,х.ч.,Г0СТ 22300-^81.
Этанол 96/.» ГОСТ 5962-81.
Медь сернокислая,чда.,ГОСТ 19347-84,прокаленная при t=160°C до светлоголубого цвета.
Натрия хлорид,ч.,ГОСТ 4233-77 -Диэтиловый афир,медицинский,ГОСТ 6265-74.
Вата обезжиренная (промытая эфиром)*
Бинт или марля.
Глуфосинат аммоний с содержанием основного вещества не менее 99/. Основной стандартный раствор (0СР) глуфосината аммония:100 мг вещества растворяют в 100 мл 1Х-ного водного раствора аммиака .Раствор хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.
Рабочие стандартные растворы 1-100, 2-10 мкг/мл, 3-1 мкг/мл готовят разведением 0СР 1/-ным раствором аммиака.
Растворы хранить в холодильнике не более 2-х недель.
Проявляющий реагент:2Х-ный раствор нингидрина в ацетоне.Хранить в темной склянке.
26
2.3. Приборы и посуда
Аппарат для встряхивания АВУ-1,ТУ 64-11081-83»
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М с набором колб,ТУ 25-11-9IT-
74.
Вакуумный водоструйный насос.
Колба Бунзена емк.250 мл,ГОСТ 25336-82.
Воронка Бюхнера,(1=75 мм,ГОСТ 9147-80.
Электроплитка с закрытой спиралью.
Холодильник бытовой с морозильной камерой.
Колбы конические,250,50 мл,ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные,100,50 мл,ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные,50,100 мл,ГОСТ 1770-74.
Пробирки мерные,10 мл,ГОСТ 1770-74-
Выпарительные чашки 40-50 мл, ГОСТ 9147-80.
Колонки хроматографические а -18 мм, высота 20 см.
Пипетки на 1-10 мл, ГОСТ 1770 -74.
Микрошшетки на 0,1; 0,2 мл, ГОСТ 1770-74, или дозаторы пипеточные на 0,1; 0,2 мл, III, ТУ 84-1-3329-81, или
шприц на 1 мл.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и обьектах окружающей среды11, утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, Я 2051-79.
2-5- Проведение определения
2-5-1- Экстракция глуфосинатз аммония из вода и растений
Вода. 200 мл анализируемой пробы помещают в круглодонную колбу емкостью 500 мл. Присоединяют колбу к ротационному испарителю, помещают
27
|||
ее в баню с мелко раздробленным льдом с солью (10:3) . Вращают колбу
на ротационном испарителе (без включения вакуума), чтобы вода в колбе начала кристаллизоваться. Кристаллизацию проводят до тех пор, пока в колбе не останется « 20 мл воды. Оставшуюся воду переносят в отгонную колбу емкостью 50-100 мл и продолжают кристаллизацию до тех пор, пока в колбе не останется 2-3 мл. Быстро сливают воду в мерную пробирку (V^ ). Либо оставшуюся воду («20 мл) сливают в выпарительную чашку и упаривают на кипящей водяной бане до обьема « 2 мл ( Осторожно! Не выпаривать досуха чашку периодически ополаскивают водой, оставшейся в чашке). Переносят оставшуюся воду в мерную пробирку. Измеряют объем (V\j). Отбирают 1 мл пробы, прибавляют к нему 1 мл этанола и 1 мл (1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают, дают отстояться и аликвоту 0,1-0,3 мл наносят на хроматографическую пластинку.
Растительные продукты. Овощи, фрукты, траву измельчают до 0,5-1 см, зерно до 2-3 мм (отсеивают от муки) и отбирают среднюю пробу: овощи, фрукты 100 г, травы 20 г, зерна 50 г. Пробу помещают в плоскодонную колбу и заливают точно измеренным объемом воды: овощи, фрукты - 150 мл, траву зерно - 100мл. Встряхивают пробу в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Отбирают часть экстракта (овощи, фрукты 80-90 мл, зерно, трава-60-70 мл), фильтруя его под вакуумом водоструйного насоса в колбу Бунзена через двойной слой марли, вложенной в воронку Бюхнера. Из колбы Бунзена отбирают в цилиндр точно половину прибавленного к исследуемому образцу обьема воды: овощи, фрукты-75 мл (соответствует массе ,,Р“-50 г), трава, зерно - 50 мл (масса 10 и 25 г соответственно). Измеренный водный экстракт
переносят в делительную воронку и промывают зтилацетатом 2 х 30 мл;этил--
х /Примечание:Приготовленную смесь лед с солью можно повторно заморозить в холодильнике,чтобы использовать в дальнейшем.
28
ацетат (верхний слой) отбрасывают-Водный экстракт переносят в колбу для отгонки растворителей емкостью 100-150 мл и концентрируют вымораживанием до 2-3 Мл,как описано для воды.Далее проводят очистку образца на колонке, как описано ниже.
Одновременно с анализируемым образцом подготавливют экстракт аналогичного контрольного образца.
Очистку экстрактов проводят на колонке с полисорбом.
Подготовка колонки. Колонку присоединяют к колбе Бунзена, соединенной с водоструйным насосом.В колонку помещают тампон из обезжиренной ваты, на-сыпают 15 см^ полисорба,наливают 10 мл ацетона и включают водоструйный насос. Затем на слой полисорба помещают ватный тампон и промывают слой еще 40 мл ацетона при легком просасывании водоструйным насосом.чтобы полностью удалить ацетон.Затем насос отключают.
К подготовленному как описано выше экстракту (2-3 мл) прибавляют 50 ш ацетона и хорошо перемешивают. Пропускают полученный ацетоновый раствор через колонку под вакуумом водоструйного насоса, промывают колонку 20 мл ацетона (под вакуумом).затем 20 мл смеси ацетон-вода 9:1 (под вакуумом) и вес! элюат отбрасывают.Колбу отключают от вакуума,пропускают через колонку 15 mj воды при прокапывании без отсоса.Когда над слоем сорбента останется ~ 0,5 см воды,подключают колбу с колонкой к водоструйному насосу.Сливают элюат из колбы в мерную пробирку и измеряют точно
Примечание: Можно (за исключением образцов, содержащих крахмал, например картофель, зерно) вместо концентрирования вымораживанием использовать только способ концентрирования упариванием, но при этом использовать небольшие выпарительные чашки, а пробу доливать в чашку по мере упаривания. Упаривать осторожно, чтобы остаток в чашке каждый раз был не менее 2 мл). При этом способе концентрирования перед очисткой на колонке экстракт в чашке (2-3 мл) охлаждают 10 минут в холодильнике (t+4*6°C). К охлажденному экстракту прибавляют ацетон как описано ниже.
объем-(должно быть ~10 мл).Отбирают 1 мл экстракта,прибавляют к нему 1 мл этанола и 1 мл (1,2 г) прокаленной сернокислой меди,перемешивают,дают отстояться и аликвоту О,1-0,2 мл анализируют методом ТСХ.
Одновременно готовят элюат контрольного образца.Из подученного контрольного алюата (10 мл) отбирают в две пробирки по 1 мл,в одну из которых прибавляй» микрогашеткой 1 мкг гдуфосината аммония (0,1 мл рабочего стандартного раствора 2).Если нет возможности подготовить экстракт контрольного образца (см п.2.1.3.),то обязательно от полученного элюата исследуемого образца отбирают 1 мл и прибавляют в него микропипеткой 1 мкг гдуфо* сината аммония.Далее прибавляют по 1 мл атанола и поступают как описано выше для исследуемого образца.
2.5-2.Тонкослойная хроматография
Пластинку "силуфол" размером 15 х 15 см делят на 5 полосок шириной 3 см.С нижнего края пластинки,на расстоянии 1,5 см от края,по центру каждой полосы, наносят микропипеткой (шприцом) или пипе точным дозатором по 0,2 мл контрольного элюата,алюата с внесенным глуфосинатом аммония,елю-ата исследуемого образца, 0,2 мл рабочего стандартного раствора 3,что соответствует (0,2 мкг) и 0,1 мл рабочего стандартного раствора 2,что соответствует 1 мкг.Пластинку при нанесении проб и стандартов для более быстрого испарения воды можно подогревать на электрогрелке.Когда вода испарится , пластинку помещают в хроматографическую камеру ,в которую налита смесь метанол-аммиак (7:3).Дают растворителю подняться на 10 см от старта и вынимают пластинку из камеры.Помещают ее под УФ свет на 25 минут,располагая на расстоянии 20 см от источника света.После облучения опрыскивают пластинку проявляющим реагентом и помещают на 1 мин в сушильный шкаф при тем-
Примечание:при увеличении температуры и времени прогрева,а также при более длительном хранении (уже после проявления стандартов) в некоторых образцах проявляются коэкстрактивные вещества с 0,68-0,05 и 0,72-0,05, 0,5-0,05-30
пера туре 40^С. Затем вынимают из шкафа и оставляют при комнатной температуре (исключить прямое попадание солнечного света).Через 5-7 минут проявляются сиренево-красного цвета пятна гдуфосината аммония с 0,7-0,5, в том числе стандарт «внесенный в контрольный экстракт (или элюат исследуемого образца).Сразу после проявления стандартов проводится оценка содержания пестицида в исследуемом образце.
2.6.Обработка результатов анализа
Количественное определение проводится путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и пятен стандартных растворов. При этом следует обратить внимание на пятно стандарта,содержащего 0,2 мкг и пятно,где 0,2 мкг внесено в пробу.Наиболее точно (ошибка -11Х) количественная оценка достигается при концентрациях 0,2-1 мкг.При большем содержа-нии баста в исследуемом образце необходимо разбавить елюат (исходный объем =10 мл) и повторить ТСХ определение как описано выше в п.2.5.2.
Расчет результатов содержания баста в образце проводят по следующей формуле:
Х-содержание баста в образце,мг/кг;
A-содержание баста,найденное в образце на пластинке,мкг;
V-j-общий объем водного елюата,мл;
В-кратность разведения V\j ;
У2~обьем этанольного экстракта,нанесенного на пластинку,мл;
P-масса анализируемой пробы,мл или г (для растений с учетом взятой аликвоты соответствует 1/2 навески);
К-коеффициент, учитывающий потери при концентрировании вымораживанием до объема 2-3 мл,равен 1,2.
31
3.Техника безопасности.
Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями,кислотами и щелочами.
Зё
