Министерство сельского хозяйства Российской Федерации
Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕСборник № 24
МОСКВА
ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1996 г.
"Утверждено" Министерством здравоохранения СССР
"29" июля 1991 г.
N 6091-91.
Временные методические указания по определению оксима дикамбы в воде, почве, зеленой массе и зерне зерновых культур методом тонкослойной хроматографии.
1. Краткая характеристика препарата.
Химическое название: Ы-циклогексанон-0-(2-метокси-3,6 -дихлорбензо-ил) оксим. Один из компонентов смесевого препарата чистолан, НИТИГ, Башкирия.
Структурная формула:
Эмпирическая формула: C14H15NO3CI2
Молекулярная масса 316,17.
Физико-химические свойства: белое кристаллическое вещество, Тпл 56-60° С. Растворим в хлороформе, ацетоне, этилацетате, циклогексаноне, бензоле, четыреххлористом углероде, гексане. Практически нерастворим в воде. При температуре выше 155° С автокаталитически разлагается.
Применяется в качестве гербицида в посевах зерновых культур.
2. Методика определения оксима дикамбы в воде, почве, зеленой массе и зерне зерновых культур тонкослойной хроматографией.
2.1. Основные положения.
2.1.1. Принцип метода.
Метод основан на экстракции пестицида из воды гексаном, из почвы ацетоном, из зеленой массы и зерна ацетонитрилом, очистке экстрактов и хроматографическом определении в тонком слое силикагеля при обнаружении зон локализации обработкой 0,5%-ным спиртовым раствором дифениламина и экспозиции в УФ-свете.
Разработчики: РТ.Юркова, И.И.Пиленкова, ВНИТИГ, г. Уфа
11
2.1.2. Метрологическая характеристика метода. |
М строло ги ч сск и е характеристики |
Значение метрологических характеристик |
вода |
почва |
зеленая масса, зерно |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг, мг/л |
0,005-1,5 |
0,02-1,0 |
0,01-1,0 |
Предел обнаружения, мкг |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
Предел обнаружения в пробах, мг/кг, мг/л |
0,005 |
0,02 |
0,01 |
Среднее значение определения стандартных количеств, % |
90,0 |
80,0 |
85,5 |
Число параллельных определений, п |
9 |
9 |
9 |
Стандартное отклонение S, % |
7,5 |
4,2 |
3,4 |
Относительное стандартное отклонение
AS, % |
0,08 |
0,05 |
0,04 |
Доверительный интервал среднего при Р-0,95 и п-9, % |
90,0±6,4 |
80,0±3,2 |
85,5±2,6 |
|
2.1.3. Избирательность метода.
Метод селективен. Определению не мешают хлорорганические пестициды, симмтриазины.
2.2. Реактивы и растворы.
Оксим дикамбы с содержанием основного вещества не менее 96%.
Ацетон, чда., ГОСТ 2603-79.
Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-74.
Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
Спирт этиловый технический ректификованный, ГОСТ 18300-87. Хлороформ, чда., ГОСТ 20015-74.
Алюминия оксид нейтральный для хроматографии Л 40/250 производства ЧСФР.
Силикагель для хроматографии ЛС5/40с 13% гипса, производства фирмы "Хемапол" (ЧСФР).
Дифениламин, чда., ГОСТ 5825-70.
Натрий сернокислый безводный, хч., ГОСТ 4166-76.
Бумага фильтровальная.
Вата.
Пластинки "Силуфол" размером 150x150 мм производства фирмы "Хемапол".
12
Стандартный раствор N 1 оксима дикамбы с концентрацией 1000 мкг/ мл готовят в мерной колбе вместимостью 100 мл растворением навески 0,1000 г в гексане.
Стандартные растворы NN 2-7 оксима дикамбы с концентрациями 5; 10; 25; 50; 100; 150 мкг/мл готовят в мерных колбах вместимостью 100 мл разбавлением 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10,0 и 15,0 мл стандартного раствора N1 гексаном.
Стандартные растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.
Проявляющий реактив - 0,5%-ный спиртовой раствор дифениламина. Раствор устойчив длительное время.
2.3. Приборы и посуда.
Весы лабораторные аналитические, ГОСТ 24101-80.
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25211-917-74.
Монохроматор КФ-4 или аналогичный источник УФ-света.
Насос вакуумный ВН-461М.
Штатив лабораторный, ТУ 64-1-707-76.
Электроплитка, ТУ 92-275-76.
Воронки делительные, ГОСТ 10054-82, вместимостью 250 и 500 мл.
Воронки химические конусообразные, ГОСТ 25336-82Е.
Камера хроматографическая стеклянная типа СП-4,0 или СЦ-4,0 ГОСТ 25336-82Е.
Камера для опрыскивания, ГОСТ 11413-70.
Капилляры стеклянные.
Колонка хроматографическая стеклянная размером 30x0,8 см.
Колбы конические на шлифах, ГОСТ 25336-83Е, вместимостью 250 мл.
Колбы грушевидные для отгонки растворителя на шлифах, ГОСТ 25336-82Е, вместимостью 100 мл.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74Е, вместимостью 100 мл.
Мельница лабораторная (кофемолка).
Микрошприц МШ-10М.
Пипетки различной вместимости с ценой деления 0,01 и 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Стаканы химические, ТУ 25-11-944-74.
Цилиндры различной вместимости, ГОСТ 1770-74Е.-
2.4. Подготовка к определению.
2.4.1. Приготовление подвижной фазы.
В хроматографической камере за 30 мин до хроматографирования смешивают гексан с хлороформом в объемном соотношении 1:1 в таком количестве, чтобы высота слоя растворителей не превышала 0,5 см.
2.4.2. Подготовка хроматографической колонки.
Стеклянную колонку размером 30x0,8 см заполняют оксидом алюминия на
13
высоту 2 см (низ) и силикагелем на высоту 2 см (верх) при уплотнении сорбента легким постукиванием по колонке.
2.4.3. Приготовление стандартной шкалы.
На хроматографической пластинке "Силуфол" на расстоянии 15 см от нижнего края намечают линию старта. Справа и слева от центра на расстоянии 15 мм друг от друга наносят серию стандартных пятен - по 0,2 мл стандартных растворов NN 2-7. Диаметр пятен не должен превышать 10 мм. Содержание оксима дикамбы в пятнах стандартной шкалы соответствует 1; 2; 5; 10; 20 и 30 мкг.
2.5. Отбор проб.
Отбор проб производится в соответствии с" Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.1979 г., N 2051-79.
2.6. Проведение определения.
2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов.
Вола. Пробу воды объемом 20-200 мл приливают в делительную воронку и препарат экстрагируют тремя порциями гексана по 50 мл. Гексановые экстракты последовательно пропускают через безводный сернокислый натрий (20 г), помещенный на бумажный фильтр в конусообразную воронку.Фильтрат концентрируют с помощью ротационного испарителя при температуре бани не выше 40° С до объема 0,5-1 мл, а затем в слабом токе воздуха до 1-2 капель. Остаток растворяют в 0,2 мл гексана.
Почва. 30-50 г воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу с притертой пробкой и препарат экстрагируют дважды ацетоном порциями по 30 мл, встряхивая каждый раз по 30 мин. Почву отфильтровывают под вакуумом. Объединенный фильтрат концентрируют до 5-7 мл, разбавляют 25 мл дистиллированной воды и интенсивно встряхивают в течение 2-3 мин.Выпавшие хлопья отфильтровывают через бумажный фильтр, помещенный в коническую воронку. Фильтр промывают смесью ацетона (1мл) и воды (5 мл). Оксим дикамбы дважды экстрагируют из фильтрата гексаном порциями по 50 мл. Гексановый экстракт пропускают через безводный сернокислый натрий (50 г.), концентрируют с помощью ротационного испарителя до 0,5-1 мл, а затем в слабом токе воздуха до 1-2 капель. Остаток растворяют в 0,2 мл гексана.
Зеленая масса и зерно. 30-100 г измельченной на кофемолке пробы помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают 80 мл смеси ацетонитрила и дистиллированной воды (10:1), встряхивают в течение 30 мин и фильтруют под вакуумом. Пробу на фильтре тщательно отжимают и промывают 30 мл той же смеси. Фильтрат переливают в делительную воронку и экстрагируют гексаном порциями по 10 мл до тех пор, пока гексановый экстракт не станет бесцветным (5-7 экстракций) .Гексановые вытяжки отбрасывают. Ацетонитрильный слой разбавляют 110 мл хлороформа и осушают пропусканием через безводный сернокислый натрий (50 г), образец концентрируют с помощью
14
ротационного испарителя при температуре бани не выше 40°С до 0,5-1 мл, а затем - в слабом токе воздуха до 1-2 капель.Остаток с помощью гексана количественно переносят в колонку с сорбентом и коэкстрактивные вещества элюируют под вакуумом 50 мл гексана со скоростью 40-80 капель в мин, оксим дикамбы собирают в другой приемник при элюировании 20 мл смеси гексан:аце-тон (50:1). Элюат, содержащий препарат, осторожно концентрируют при указанных выше условиях. Остаток растворяют в 0,2 мл гексана.
2.6.2. Хроматографирование.
Раствор исследуемой пробы в гексане с помощью стеклянного капилляра наносят в центр линии старта хроматографической пластинки, на которую нанесена стандартная шкала. Пластинку помещают в наклонном положении в хроматографическую камеру с подвижной фазой, элюируют на высоту поднятия фронта растворителя 10 см, после чего пластинку вынимают из камеры и подсушивают на воздухе в вытяжном шкафу.
Пластинку обрабатывают из пульверизатора проявляющим реактивом и, не подсушивая, помещают под источник УФ-света на 5-10 мин. Оксим дикамбы проявляется в виде фиолетовых пятен на светлом фоне с Rf 0,23 ± 0,02.
2.7. Обработка результатов анализа.
Количественное определение оксима декамбы проводят путем измерения площадей пятен пробы и соответствующего ему по интенсивности окраски стандартного пятна с помощью прозрачной миллиметровой бумаги.
Содержание оксима дикамбы в пробе (X) в мг/кг (мг/л) вычисляют по формуле:
A.Snp
Sct.P
где А - количество оксима дикамбы в стандартном пятне,мкг;
2
Snp,ScT - площади пятен пробы и стандарта соответственно,мм ;
Р - навеска или объем анализируемой пробы, г(мл).
3. Требования техники безопасности.
Соблюдать все необходимые требования техники безопасности при работе в химических лабораториях, правила производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Минздрава СССР. (N455-81 от 20.10.81 г.)