ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ К. А. ТИМИРЯЗЕВА

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ институт агрохимического ОБСЛУЖИВАНИЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

(Часть 1)

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ К: А. ТИМИРЯЗЕВА

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ ИНСТИТУТ АГРОХИМИЧЕСКОГО ОБСЛУЖИВАНИЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

(Часть 1)

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

Приложение 1

Отбор проб растительного материала на корню (из «Унифицированных правил отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроксхличеств пестицидов*, утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача А. И. Зайченко 21X56.1979 г. № 2051—79).

Кормовые культуры (на корню)

Кукуруза СС (не менее 18 Початки с 18 рас Зерно отделить, измель 0.25-0,50 растений) тений чить и отвесить средний образец Кормовые бобы пд 1000 бобов То же 0.5 -1.0

осить несъедобные части растений, остатки материала вымыть, обсушить. крупные овощи разделить на 4 части и взять '/«. Пробу измель-

вертинок срезать и отбросить поверхность предыдущего среза, отбросить несъедобные листья, измельчить и выделить средний образец

Отбросить несъедобные части, растения вымыть, очистить, измельчить и выделить средний образец

Отбросить непригодные части, измельчить, перемешать и отвесить средний образец

Измельчить целые растения, перемешать и отвесить средний образец Отбросить несъедобные части, растения измельчить, перемешать и отвесить средний образец. Для лука и лука-порея с каждой штуки взять половину

-J 00

Макси миль-яи величина Величина средней Подготовка среднего образца Величина пола млн пар- Растительный материал Способ отбор» проб • пробы влв среднего образца, кг таи при отбо- исходного образца ре проб 5 га Лук-резамец, лук-ба- ПД (целые растс- Лук. лук-порей — 0.5—1 кг, лук-ре- То же 0,25 тун, лук-порей в ран- ния) ней стадии развития залец, лук-батун — 0,25 кг 5 га Фасоль, горох, бобы То же 0,5—1 кг бобов Семена выделить, нзмель- 0,5 чигь и выделить средний образец 50 га Фасоль «зеленый боб» » 0.5 кг Целые бобы измельчить, перемешать и выделить средний образец 0,5 0.5 20 га/ЗОт Помидоры, перец ПД (целые раете- Мелкие овощи Овощи вымыть, нзмель- ния) 0,5—2 кг, крупные — 2 кг чить и выделить средний образец 0,5 20 га/500 т Огурец н бахчевые То же 10 овощей, масса Овощи вымыть, нзмель- пробы крупных чить и выделить средний бахчевых — образец, из крупных бах- 0,5—3 кг чевых взять вырезки 0,25—0,5 5 га Спаржа » 0,5 кг Растения вымыть, измельчить и выделить средний образец После удаления листо- 5 га Ревень ПД (выборочно 2 кг (без листовых 0.5 листья) пластинок) вых пластинок растения вымыть, высушить и выделить средний образец Грибы _ Шампиньоны и дру* К (руководство- Не менее 0,5 кг Грибы измельчить, пере- 0.5 гне грибы ватъея правилами мешать к отвесить сред- сбора грибов) ний образец Плодово-ягодные, орехоплодные, виноград 200 га/500 т Семечковые До 30 деревьев — До 30 деревьев — Плоды почетвертовать. выборочно, свыше 30 ПД в завися- 5 кг, до 1 га — от каждого плода взять 7 кг. 1—10 га — ■/«, четвертинки нзмель- мости от площади. 10 кг, 10—30 га — чить, перемешать и от- с 20—30 деревьев 12 кг, свыше 30 га весить средний образец (плоды следует снимать с разных сторон дерева, с - 15 кг разной высоты и глубины кроны) До Косточковые персик. До 30 деревьев — До 30 деревьев — Плоды поделить попо- 0.5 200 га/200 т абрикос, слива выборочно, свыше 4 кг; до 1 га — лам, от каждого взять 30 деревьев — 6 кг, свыше — 1 га половину без косточки. ПД с 15-20 де- 8 кг измельчить, перемешать ревьев и выделить- средний об- То же раэец До Косточковые вишня До 30 деревьев — Косточки удалить, пло- 0.5 200 га/100 т черешня, слива 1,5 кг; до 1 га — ды измельчить, переме- 2 кг. свыше 1 га — шать и отвесить средний 2.5 кг образец Орехи (грецкие, ле- » До 30 растений — Из орехов вынуть ядра, 0,25—0,5 шина) 1 кг, свыше 30 — измельчить их. переме- 1,5 кг шать и отвесить средний ч (О образец

g    Продолжение ¹

Максимальная величина поля или партии при отборе проб	Растительный материал	Способ отбора проб •	Величина средней пробы или исходного образца	Подготовка среднего образца	Величина среднего образца, кг
Юга	Смородина, крыжовник	До 30 кустов пробу взять с каждого куста с разной его стороны н глубины, свыше 30 кустов — метод СС с 25—35 кустов	До 30 кустов не менее 1 кг (с крупными плодами — не менее 1.5 кг), свыше 30 кустов — не менее 1.5 кг	Из тщательно перемешанного исходного образца взять половину, измельчить ее, перемешать и отвесить средний образец	од
До 200 га	Виноград	СС, боковые части кистей	1,5 кг	Взять отдельные от основания боковые части кистей, тщательно перемешать исходный образец и взять половину, измельчить ее, перемешать и отвесить средний образец	0.5
До 1 га	Земляника, малина	ПД	До 500 м* — 1,5 кг, 500 м* — 0,25 га-2.5 кг, свыше 0,25 га — 2,5 кг	Тщательно перемешать исходный образец, взять половину, измельчить ес, перемешать и отвесить средний образец	0.5

Приложение 2

Максимально допустимые уровни (МДУ) регуляторов роста в пищевых продуктах, предельно допустимые концентрации (ПДК) в воде водоемов и в воздухе рабочей зоны, утвержденные Министерством здравоохранения СССР

Регулятор роста	МДУ, мг/кг	ПДК В воде водоемов, мг/л	ПДК в воздухе рабочей зоны и ОБУВ, мг/м*
Г идрел	Томаты, огурцы, картофель, яблоки, черешня, мандарины, хлопковое масло — 0,15	0,25	1,0
Днгидрел	—	0,05	0,8
ДЯК	Яблоки — 3,0	0,05	1,7
Кампо-зан М	Томаты, огурцы, зерно хлебных злаков — 0,5	3,0	—
Кротоно- лактон-сы-	Зерно (пшеница, кукуруза) — 0,2
рец МГ-натрия	Картофель, свекла, лук, чеснок, морковь, томаты, арбузы (в кожуре), табак — 8,0	—	—
Хлорхолин- хлорид	Томаты, яблоки, груши, виноград — 0,05, зерно хлебных злаков — 0,1	0,2	0,03
Фоспинол	Картофель — 0,2	—	3,0

УДК 632.95.028(0.83.131)

Методические указания по определению микроколичеств регуляторов роста в растительной продукции и объектах окружающей среды (под ред. кандидата сельскохозяйственных наук И. К. Бли-новского и доктора биологических наук В. Ф. Ладонина) включают разработки ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс и его филиала (г. Ереван), Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева, ВНИИ химических средств защиты растений. Института физиологии растений АН СССР, Института физиологии растений АН УССР, Научно-исследовательского зонального института садоводства Нечерноземной полосы, Московского государственного университета имени М. В. Ломоносова, Новосибирского института органической химии СО АН СССР, Узбекского НИИ санитарии, гигиены и профзаболеваний.

Методические указания одобрены лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Министерства здравоохранения СССР и утверждены заместителем Главного государственного санитарного врача СССР в качестве официальных.

Методические указания предназначены для специалистов контрольно-токсикологических лабораторий, санитарно-эпидемиологических станций, осуществляющих контроль за применением регуляторов роста растений, и научно-исследовательских лабораторий, занимающихся определением микроколичеств регуляторов роста при разработке технологий их применения.

Члены редколлегии: Ю. А. Бунятян, М. А. Клисенко, М. И. Лунев, С. В. Лопатко.

Методические указания по определению микроколичеств регуляторов роста в растительной продукции и объектах окружающей среды (часть 1)

Зав. редакцией А. Я- Рогачева Редактор Р. А. Антипина Технический редактор Е. Э. Пчурова Корректор Н. Я. Туманова

Сдано в набор 24.05.85. Подписано к печати. 06.02.86. Т03074.

Формат 84х 108'/|з. Бумага тип. № 3. Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. печ. л. 4,2. Уч.-изд. л. 4,63. Уел. кр.-отт. 4,41.

Тираж 6000 экз. Заказ Л*« 3322. Бесплатно.

Ордена Трудового Красного Знамени ВО «Агропромиэдат* 107807, ГСП, Москва, Б-53. ул. Садовая-Спасская, 18.

170000, г. Калинин, Студенческий пер., 28.

Обл. типография.

© Государственный агропромышленный комитет СССР, 1986

Успехи, достигнутые в последние годы в области разработки теоретических основ и практического использования регуляторов роста и развития растений, определили их как самостоятельное и перспективное направление химизации земледелия.

В настоящее время применение синтетических регуляторов роста (химического, микробного или растительного происхождения) в целях повышения урожайности, устойчивости к неблагоприятным факторам внешней среды, качества и сохранности продукции становится важным звеном в технологиях возделывания многих сель^ скохозяйственных культур.

Разработанная в нашей стране целевая комплексная научно-техническая программа создания и широкого внедрения регуляторов роста растений, обеспечивающих повышение урожайности и качества сельскохозяйственных культур, нацеливает усилия химиков и биологов на поиск и создание препаратов, действующих на такие важнейшие процессы жизнедеятельности растений, как рост стебля (повышение устойчивости к полеганию, устранение перерастания рассады, ограничение крон многолетних растений и кустарников, увеличение биомассы и др.); плодоношение (ускорение у многолетних культур, повышение завязываемости и др.); устойчивость к стрессовым воздействиям (засухе, низким температурам, переувлажнению); рост корней (стимуляция при размножении черенками, рассадой, пересадке растений и др.); созревание (ускорение или замедление); накопление и распределение ассимилятов (повышение интенсивности фотосинтеза, усиление оттока ассимилятов к зерновкам, плодам); опадение плодов и листьев (облегчение механизированной уборки и дефолиация); покой (повышение лежкости при хранении или стимуляции прорастания); сексуализация (регулирование пола растений в сторону увеличения женских или мужских цветков); рост и дифференциация тканей (при размножении оздоровленного посадочного материала и в селекции).

При всем многообразии действия регуляторы роста и развития растений могут быть определены как вещества, которые влияют на жизненные процессы растений, не оказывая токсического действия, и не являются источником питания (в отличие от пестицидов и удобрений).

Большинство регуляторов роста в зависимости от культуры, времени и норм применения имеет многоцелевое назначение. Так, этиленпродуценты могут использоваться для торможения роста стебля (рожь, ячмень), стимулирования плодоношения (яблоня), ускорения созревания (вишня, томат), повышения лежкости (картофель, свекла), сдвига пола (огурец, плодовые культуры, хлопчатник), образования отделительного слоя (облегчение механизированной уборки и дефолиация).

Широкий спектр действия регуляторов роста предполагает постоянное расширение сферы их применения в растениеводстве. При этом увеличивается потенциальная опасность загрязнения имц сельскохозяйственной продукции и объектов окружающей среды. Постановлением Совета Министров СССР о дополнительных мерах но усилению контроля за применением в народном хозяйстве пестицидов и регуляторов роста растений в целях недопущения вредного воздействия их на здоровье населения предложено ужесточить требования к применению в народном хозяйстве пестицидов и регуляторов роста растений, усилить контроль за соблюдением установленных правил хранения, транспортировки и применения их, разработать и осуществить дополнительные мероприятия по предотвращению загрязнения окружающей природной среды пестицидами, регуляторами роста растений и основными токсичными продуктами их разложения исходя из необходимости охраны здоровья населения.

В настоящие указания включены методы определения микроколичеств регуляторов роста растений, уже разрешенных для применения в сельском хозяйстве (или проходящих государственные испытания).

Учитывая важность отбора представительной пробы анализируемой растительной продукции, в указания включено извлечение из «Унифицированных правил отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденных Министерством здравоохранения СССР 21.08. 1979 г. (приложение 1).

Публикация подобных материалов будет осуществляться периодически, по мере внедрения в сельскохозяйственное производство новых регуляторов роста, разработки методов контроля за их применением и появления более совершенных и унифицированных методов определения микроколичеств препаратов в сельскохозяйственной продукции, кормах и объектах внешней среды.

Утверждаю:

заместитель Главного государственного санитарного врача СССР

А. И. ЗАЙЧЕНКО

21.11. 1984 № 3162—84

Временные методические указания по определению гибберсиба в воде и почве методом тонкослойной хроматографии ²

1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА

Натриевая соль гибберелловой кислоты (или гиб-береллин А₃) — основное действующее начало препарата гибберсиб.

Структурная формула

О

со

он

СН3 COONa

Эмпирическая формула Ci9H₂i0₆Na.

Молекулярная масса — 368.

Гибберсиб — мелкий однородный гигроскопичный порошок, получаемый высушиванием на распылительной сушилке продуктов метаболизма грибка Fusarium inoni-liforme Sheld.

Препарат является смесью натриевых солей гиббе-реллинов, карбоновых кислот и карбоната натрия.

Растворимость гибберсиба в воде при 20°С — 2 г/л. Растворим в этиловом и метиловом спиртах, эти-лацетате, ацетоне. Нерастворим в бензоле, гексане.

Гибберсиб разрешен для опытно-производственного применения на томате.

2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

2.1.    Основные положения

2.1.1.    Принцип метода. Определение основано на экстракции гиббереллинов из воды и почвы этилаце-татом с последующей тонкослойной хроматографией экстракта на пластинках Силуфол. Обнаружение гиббе-реллина А₃ проводят путем обработки пластинок 70 %-ной серной кислотой и проявления в УФ-свете.

2.1.2.    Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций — 0,05—0,5 мг/л в воде и 0,4—5 мг/кг в почве. Предел обнаружения препарата на пластинках 3 мкг, в воде — 0,05 мг/л, в почве — 0,4 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств гиббереллина А₃ для воды 74%, для почвы 66%; стандартное отклонение ±12% для воды, ±9% для почвы; относительное стандартное отклонение ±16% для воды, ±14% для почвы; доверительный интервал среднего значения при Р₀95 и п = 5 для воды ±15 и для почвы ±14%.

2.1.3.    Избирательность м е т о д а. Определению не мешает присутствие солей других гиббереллинов А₄, А₇, А₉, Аи, неорганических компонентов и экстрактивных веществ из почвы.

2.2.    Реактивы и материалы

Этилацетат ч., ГОСТ 8981-78.

Хлороформ х. ч., ГОСТ 20015-74.

Метанол ч. д. а., ГОСТ 6995-77.

Кислота серная х. ч., ГОСТ 4204-77, 70%-ный раствор.

Аммиак водный технический, ГОСТ 9-77.

Гиббереллин кристаллический (А₃, 80%-ный), ТУ 64-3-103—75.

Натрий хлористый, ГОСТ 4233-77.

Уксусная кислота ледяная, ГОСТ 61-75.

Пластинки Силуфол (ЧССР).

Стандартный раствор гиббереллина (А₃) с содержанием 1000 мкг в 1 мл этилацетата.

2.3.    Приборы, аппаратура и посуда

Ультрахемископ типа «Хроматоскоп».

Центрифуга типа ЦЛС-31М.

Испаритель роторный типа ИР-1М или любой другой.

Весы аналитические с отсчетом до 0,0001 г типа ВЛР-200.

38

Весы технические типа В ЛТК-500.

Универсальная встряхивающая машина типа LE-203 лабор. 2162.

Камера для хроматографии из комплекта КТХ-01 или сосуды цилиндрические типа СЦ.

Пульверизатор стеклянный.

pH-метр типа pH-262.

Воронка делительная на 250 мл, ГОСТ 8613-75.

Колбы типа КНКШ-100 250 29/32. ГрКШ-10-14/23, ГОСТ 25336-82.

Пипетка 1-1-1, ГОСТ 20292-74.

Линейка измерительная металлическая, ГОСТ 427—

75.

Микрошприц на 100 мкл МД-100 ТУРА (ЧССР).

Капилляры стеклянные.

Сито с отверстиями 1 мм.

2.4.    Подготовка к определению

2.4.1.    Приготовление системы растворителей. Смешивают хлороформ с метанолом в соотношении 10:1 (система 1) и хлороформ, метанол, уксусная кислота в соотношении 10: 1 :0,1 по объему (система 11).

2.4.2.    Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08. 1979 г. № 2051—79 (приложение 1). Анализы производят в день отбора проб или на следующий день.

2.5.    Проведение определения

2.5.1. Экстракция гиббереллинов. Из воды. К 200 мл анализируемой воды приливают 80 мл 0,5%-ного раствора аммиака, гомогенизируют на встряхивающей машине в течение 15 мин и доводят pH раствора до 2,2±0,2. Приливают 25 мл насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют в делительной воронке этилацетатом порциями 50, 40, 40 мл. Этилацетатный экстракт освобождают от воды на центрифуге в течение 10 мин при 5000 об/мин и упаривают до объема -—-0,1 — 0,2 мл.

Из поч в ы. Почву просеивают через сито с отверстиями 1 мм, к 100 г почвы приливают 80 мл 0,5%-ного раствора аммиака, гомогенизируют в течение 15 минут

39

на встряхивающей машине и осаждают на центрифуге в течение 10 мин при 5000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок промывают в 30 мл 0,5%-ного раствора аммиака, еще раз центрифугируют. Объединяют обе порции и доводят pH до 2,2±0,2. Приливают 25 мл насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют в делительной воронке этилацетатом порциями 50, 40, 40 мл. Этилацетатный экстракт освобождают от хлопьев и воды на центрифуге в течение 10 мин при 5000 об/мин. Экстракт сливают, отделяя воду на делительной воронке, а осадок промывают в 10 мл этил-ацетата, еще раз центрифугируют, объединяют с экстрактом и упаривают до объема ~0,1—0,2 мл.

2.5.2. Хро м а тогр а ф и р о в а н и е и проявле-н и е. Экстракт из воды. Упаренный экстракт количественно (пятно диаметром 10—12 мм) наносят на пластинку при помощи пипетки с оттянутым концом, капилляром или микрошприцем и параллельно наносят 0,02 мг стандарта (пятно такого же диаметра), подсушивают на воздухе и хроматографируют в системе растворителей хлороформ—метанол в соотношении 10: 1 (по объему). После элюции пластинки подсушивают под тягой, опрыскивают из пульверизатора 70%-ной серной кислотой и рассматривают в УФ-свете. Обводят пятна, соответствующие гиббереллину А₃, в пробе и стандарте.

Экстракт из почвы. На пластинку, в левый угол, на расстоянии 15—20 мм от ее края, количественно наносят пятно (диаметром 10—12 мм) упаренного экстракта и хроматографируют в системе растворителей хлороформ—метанол—уксусная кислота в соотношении 10:1:0,1. Когда фронт растворителя дойдет до края пластинки, ее вынимают, поворачивают на 90° и помещают в ту же систему для двумерной хроматографии. Параллельно помещают пластинку с нанесенным стандартом (~0,02 мг). После элюции пластинки обрабатывают, как указано выше.

2.6. Обработка результатов анализа Замеряют пятна проб и стандарта линейкой или миллиметровой бумагой и определяют их площади.

Содержание (С) гиббереллина А₃ рассчитывают по формуле

г*_ А * S2

^ P-S, ’

где С — содержание гиббереллина в пробе, мг/л или мг/кг; А — 40

количество стандартного раствора, мг; $2 — площадь пятна пробы, мм²; Р — масса или объем пробы, взятые для анализа, кг или л; Si — площадь пятна стандартного раствора, мм².

3. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

Выполняются требования по технике безопасности, необходимые при работе в химической лаборатории.

1

В приложении приняты следующие услояиые обозначения способа отбора проб: ПД __ по диагонали; СС — по смежным сторонам поля; К — метод конверта; ОШ — отбор штук.

2

Временные методические указания разработали С. М. Обут, В. Н. Кобриков (НИОХ СО АН СССР).

37