ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИИ И СОРНЯКАМИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯпо определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде
Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии, болезнями растений и сорняками
Г0СУЛАРСТНЕШШ1 КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С ВРЕДИТЕЛЯМИ БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИИ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ „ КОЖАХ И ВЫШНЕЙ СРЕДЕ
Данные методшш апробированы в рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при 1Ъскомяссиы„болезнями растений и сорняками
Москва- 1987 г,
220
вормтедей хлороформ-ацетон 10:1. Первую фракцию - 10 од отбрасывают, последующие 50 ид собирают. Упаривают в ротационном иснаритеде до объема 0,2-0,3 ил.
Растительность. Исследуемую навеску растительности - 20 гр измельчают, помещают в плоскодонную колбу, заливают 150-200 мд хлороформа и оотавллют на I час; периодически встряхивал. Фильтруют экстракт через бумажный фильтр с сульфатом натрия Пробу также переносят на фильтр и промывают 2 раза хлороформом порциями по 10-15 мл. Фильтрат упаривают в ротационном испарителе досуха, ристворнют сухой остаток небольшим количеством ацетона и оставляют на ночь в холодильнике. Затем отфильтровывают воска через бумажный фильтр о натрием сернокислым безводным, осадок на фильтрате промывают охлажденным ацетоном. Очистку проводят в хроматографической колонке так ье как и для экстрактов из почвы. Цосде очистки в колонке собирают первые «10 ыд ц упаривают до объема 0,2 - 0,3 мл в ротационном испарителе.
2.5.2.1. Хроматографирование в топком сдое.
Оставшиеся 0,2-0,3 мд фильтрата наносят на пластинку (если предполагаются количества препарата превышающие 15 мкг, то на пластинку наносят аликвоту). Колбу двахду промывают хлороформом порциями по 0,2 мд н такие наносят на пластинку. 3 качестве свидетеля на ту ае пластинку, что а пробу наносят рабочий стандартный раотвор препарата ь количестве, соответствующем предполагаемому количеству препарата в пробе.
Пробы доочищают хроматографируя в системе этилацетэт-метанод 9:1. Пооде того, как пластинка просохнет в вктяхном шкафу (20 шш) ее помещают в систему пропанол-вода 10:1 (фронт растворителя в первой система поднимается на 10 см, во второй на 6 см).Сушат пластинки в вытяжном шкафу (до исчезновения запаха).
Затем хроматограмму помещают в камеру для опрыскивания а проявляют реактивом Драгендорфа. Препарат проявляется в виде оранжевых пятен на бдедно-кедтом фоне с = 0.7+0,06. Оценивают визуально в течение 20 млнут по размеру пятна и интенсивности окраски.
Пропорциональная зависимость количества препарате от площади пятна наблюдается в интервале от 0,2 мкг до 15 мкг.
221
2.5.2.2. Обработка результатов анализа для метода тошшодо&ной хроматография
Содерааыяе пеотдцмда в пробе (X мг/кг) рассчитывают по формуле: А
где; А - оодериание пестицида в проба, найденное по сравнению оо отеадартои, мят;
Р - маооа проб^ взятия для анализа (г)
2.6. Требования техники безоиасиоста Необходимо ооблюдать иравшш техника безопаоноотя, рекомендованные ирд работе о хдмдчоокаия веществами.
2.7 Разработчики
ibrsBsuua Н.И., Маиййо НЖ (ВШШ тгаеш а тоиаикологиэ пестацадов, полимеров в оластвческях касс, г.Киев), Сайта П.А.* Жарков А.ВО0 tiazoauoao Д.й. (Ленинградский КОД лесного хозяйства, г, Деав играл)
2.0 Апробаторы Кара а теки 8 филиал 7кр НИИ лесного хозяйства
Настоящее методичеокпе указания предиаэвачеиы для оанзтар-но- ei?пдемяологическая станций п научко-сдтдедовагедьоаак учреа-девпй Минздрава ОССРс а такие ветеринарныя0огрохомпчеокп20иоа-тродьно-токсцкодоглчеокия дзбораяорпИ Гооогропрона СССР а лабораторий другая Министерств п ведомств0зашшавдякол определением оояаточпых подачеств пестицидов и биопрепаратов о продуктов питания,, порток а виеипеП 0редео
Срои деЙотвпя временник методичбошн указаний уотоиш~ дпваетбя до утверпдеаия гнгпеничеокик нормашвов.
Методичеокае указания есробпровонн п рекомгвдог>оцы в качестве официальных ГруппоП экспертов при Госкомпссаи «о ишп-чеокпы сргдотааа борьбы о вредителям „болезнями раотопиО в оор-аяяшп.
Методические указания согдасовосн с одобреиы Лобо разорены оовотои при Гдеовом еапитарко-спсдемиологочеоиои увровдепап Минздрава ССС?с
РШК1Ш0ННЛЯ КОЛЛЕГИЯ
Л.Г.Дяексацдрово0 JLBornpenKO„ ЛЖКедиппне ( эам.иредоедотвая), Мвй.Кдисэпго ( председатель) о Г. во Коротко во 0 В.ВоК^ао0ачуао ГвЛ«ХоКольцова рА.МсВьсгадвсое
213
"Утверждаю"
Заместитель Главного Государственного санитарного врача СССР
А.И.Зайченко 31 июля 1934 г.
У 3065
ВРЕМЕ1ШЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ВЕЛПАРА В ВОДЕ, ПОЧВЕ И ЛЕСНОМ РАЗНОТРАВЬЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗО-ВДКОСТНОЯ ХРОМАТОГРАФИИ
Т. Краткая характеристика
Велпар (Vbtp&r) - З-циклогексил-б-(диметиламино)- I -метил -1,3,5-триазин - 2,4 (Т Н,ЗН)-дион. Активный ингредиент -ДРХ-3674 (гексазион). Структурна»* формула:
Эмпирическая формула CjoHgQA^Og. Молекулярная масса - 253,3. Велпар - белое кристаллическое вещество с незначительным запахом. Температура плавления П5-Т17°С, давление пара - 2,7.Ю"^1 Па при 25°С. Растворимость в роде - 33 г/л, ацетоне - 7Э0 г/л, хлороформе - 388 г/л. Водные растворы стабильны при pH - 5,7,9 и температура - 37°С.
Период полураспада от 2 до 6 месяцев. Выпускается в виде 90# порошка, 24 раствора и Т05С таблеток. ГЩК не установлены.
Рекомендуется для борьбы с сорняками и нежелательной растительностью при уходе за сосной обыкновенной, кедром сибирским, елью европейской, а также для уничтожения растительности на промышленных площадках, дорогах и аэродромах.
ж
2о Кэтодшя опрздоденшз ввдпаро d вод©, зочво п раотдтедьноста, идущей не корщ споту, вето -деш хроматографии в тонкой одсю а гаво-ицдкоотноП хроматографией
2,1, Основные положения
2.1 Д. Принцип метода
веддара
Метод основан на опредеденшгиетодамд газо-йядкоотной а тото-одойной хроматографии посла извлечения аз анализируемой пробы органически раотворитвдем (хлороформ, ацетоЕ-водо) в очпотке полученных экстрактов на колонке о сорбвнташ.
2.1,2. Метрологическая характеристике дал метода тоикоолоОной хроыатогрефпн
Диапазон on |
редедяемых на шшотпнке концентраций о? 0,2 до 15мкг, |
Анализируемая
проба |
Размах варьирования в пробах стандартных количеств, % |
Среднее зна-ченле опре -деления стандартных количеств, % |
Число параллель -них
опре -делен. |
Доверительный ангар -вал среднего пра Р = 0.95 п п = 5 |
. Почва 74 - 94 84,8 5 ± 9,4
(раоче? проведен для конц.
10 ыг на 100 г почвы).
Предел обнаружения I ыкг
Растительность, 75 - 95 84,6 5 £ 3,7
идущая на кора
скоту (расчет
проведен для
конц, 0,5 ыг/кг)
Предел обнаружения - 3 ыкг
Метрологическая характеристика для иетода газо-гшдкостыой хроматографии Диапазон определяемых концентраций: в почве 0,1-10,0 мг/кг в воде - 0,01 - 10 ыг/л.
Предел обнаружения - 0,01 ыкг
215
Аналдва-
руеыоя
проба |
Концант-рацая препарата в
пробе. чг/кг /в почве али иг/л /в воде/ |
Среднее значения определения стандарт ннх количеств,
% |
Чяоло
парал
лельных
опреде
лений |
Стандартное отклонение,
% |
Относительное стандартное откдо -нение,
1 |
Довери
тельный
интервал
среднего
значения
при
Р * 0,95 п =* 5 |
|
0,10 |
92.8 |
5 |
5,0 |
5,4 |
± 6,2 |
Почва |
0,40 |
91,8 |
5 |
8,6 |
9,4 |
±Ю,2 |
|
1,00 |
‘92,4 |
5 |
10,4 |
II, 3 |
±12,9 |
|
0,01 |
92,0 |
5 |
16,4 |
17,8 |
±20,4 |
Вода |
0,08 |
92,3 |
5 |
И.7 |
12,7 |
±14,4 |
|
0,10 |
91,0 |
5 |
8Д |
8,9 |
±10,0 |
2.1.3. Избирательность метода
Другие пестацнды, в там числе гербициды из клпооа трявзицов (атразин, оямвэян, пропазнн.тербутялазип) определению велпара не иеяшют).
2.2. Реактивы, материале п раотворы Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79
Хлористоводородная кислота 0,1н, х.ч., ч.д.а., ч,,ГОСТ 3118-77 Аю*гок водный 23£-ный, ГОСТ 3760-79
Хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-4263-76, свекеперегиянннй (хранят в течение оуток)
Этанол, ГОСТ 5962-81,л.v.
Йетаиол, х.ч., ГОСТ 6995-77 Сульфат натрия безводный, х.ч.,ГОСТ 4166-76 Хроматоил/-*ич>*а$ (0,15 - 0,17 им) йетнлсйляконовлй эластомер оу-г (ЗХ)
Азот газообразный, оообой чистота, ГОСТ 9293-74 Водород, из баллоне идя получаемый яз генератора водорода Воздух, на баллона иля нагнетаевьй компреооороы.
Стандартный раствор велпара в метаноле концентрации 0,1 vtr/нл для ГКТ (хранят в холодильнике в течение 3 месяцев)
Пропглгтай спирт, х.ч.« 77-6-09-4344-77
216
Вода дистиллированная,
Этилацетат, ГОСТ 22300-76 ,х. ч.
Нмтрат висмута, ч.д.а.,ГОСТ 4110-75
Оксид алюминия для хроматографии, П от.акт,- ТУ 6-09-3916-75 Серная кислота, ч., ГОСТ 4204-77 Йодид калия, ГОСТ 4232-74,х.ч.
Силикагель ЛС 5/40 + 13% гипоа ^£Л2члх PfiAHA-cuCHOSuih Уголь активированный БАУ (СКТЭддд
Основной стандартный раствораготовят из химически чистого препарата в хлороформе. Концентрация - I мг/д, орок хранения 2 ме-ояца. Рабочие стандартные раствори готовят из основного стандартного раотвора; концентрации 0,1 мг/мл и 0,01 мг/ыл.
Реактив Дрпгендорфа^ 850 мг нитрата висмута раотворлют в смеси состоящей из 40 мл дистиллированной воды и 10 мл 40% оерноЙ кнсдо-ти. К этому раствору прибавляют раствор, содержащий 8 г йодида калия в 20 ид воды. Непосредственно перед применением к 6 мл полученной смеси прибавляют 6 ил 2QS-U серной кислоты и 3-4 мл воды.
2.3. Приборы, аппаратура и посуда Газожидкостный хроматограф о пламенным ионизационным детектором Вакуумный ротационный иопаритель » ТУ 25-II-9I7-76 Встряхиьатель электромеханический ду 64-I-I08I-73 Насос вакуушшй водоструйный, ГОСТ 10696-^
Хроматографическая колонка стеклянная длиной 180 ш и внутренние диаметром 0,4 мы
Воронка Itaaopa tf I (65 мм ), ГОСТ 9147-73 Колба Бунзена на 0,25 л, ТУ-25-11-435-69 Воронки делительные на I д, ГОСТ 8613-75 Воронки делительные на 0,25 л, ГОСТ 10054-75 Стакан на 0,1 л, ГОСТ 10394-72
Колбы плоскодонные ПКШ на IOOui, 250мл, 50Оал.ГОСТ 10394-72 Воронки конусообразные i& 4 /7йш/ и J& 5 /IOGmm/ ГОСТ 8613-64 Цилиндры измерительные на ОД; 0,25 и 0,5 л, ГОСТ 1770-64 Колбы круглодонные ККШ на 0,1, 0,25 и 0,5 л. ГОСТ I0Q94-72 Колбы мерные на 50 и 100 мд, ГОСТ 1770-74 Сито 0,5 мм из набора сит "Физпрмбор"
Секундомер ,Г0СТ 16820-71
Бумага универсальная индикаторная, pH 1-10
217
Фильтры бумажные, ТУ 609-1706-72 Фильтры бумажные плотные /онняя лента/
Пульверизаторы стеклянные ,Г0СТ 10391-74
Камера для хроматографирования, 0 Т5 см, h* 20 см,ГОСТ 10565-74
Микропнпетки, ГОСТ 177094
Баня водяная ,ТУ 46-22-608-75
Термометр ртутный, ГОСТ 6079-51
Камера для опрыскивания, СТУЗО-6192-62
Стеклянные плаотинки размером 9х12-’см
Колонки стеклянные 0 1,8 см, h± 18-10 ом,
2.4. Подготовка к определению
2.4.1. Отбор, хранение и доотавка проб
Отбор и хранепие проб производят в соответствии о *Унифицированными правилами отбора проб...", утвержденными заместителем Главного Государственного ошштэрного врана СССР А.И.Зайченко э a # 2051-79 от 21 августа 1979 г.
2.4.2, Получение чистого вещества велпара из технического препарата
5 г 9С|?-го технического препарата растворяют в 4fru
дистплляролапной воды о добавлением 1,5 мл этанола при нагревании в термостойком стакане и непрерывном перемешивании. Горячий раствор фильтруют через воронку Бюхнера о помощью вакуумного водоотруй-пого паооса. Подученный раствор охлаждают. Образовавшийся кристаллический осадок отфильтрош вают и высушивают в сушильном шкафу при 50°С до постоянного веса. Хроматогрефичеоки чистый велпар (Т пл,-И6°С) используют для приготовления стандартного рвствора.
*2»4 .3 Додготрвцд,ДДА(УШШ1У На тиатедьио вымытые и обезжиренные эфиром я ацетоном стеклянные плаотинки иапосяг 20-.Т5 г сорбционной массы (40г силикагеля с гмпсои и 80 мл води) п равномерно распределяют по воев поверхности плаотинки. Пластинки сушат в горизонтально* положении в течения 24 часов. Хранят в аксяхяторе.
2.4.4 Лшигцхо£ДД^ШД01ШК« Вымытые и высушенные колонли заполняют ватой (0,5 ом).осторожно поотуклвея по стенкам, углем (3 см), оул>4»этои иятрия безводным (4 ом), овс«дом[влвм*иия для xpcuarorp»-фии (II см).
218
2.5.1. Проведение определения методов газо-иадкостной хроматография
Jo ч.д а Пробу почвы (100 г) помещают в плоскодонную колбу на 0,5 л а экстрагируют 250 мл сыеои ацетон-вода в соотношении 8:2 на электромеханическом встряхивателе в течение I часа. Экотрект фильтруют через бумажный фильтр в кругдодонную колбу на 0,5 д. Экстракцию повторяют еще 2 раза, добавляя к почве 100 мл той не смеси и проводя каадый раз встряхивание по I часу. Объединенный ацетоно-водный экотракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 40°С. Сухой остаток растворяют в 1-2 мл ацетона, добавляют 20 мл 0,1 н раствора хлористоводородной кислоты а фильтруют через плотный бумаакый фильтр в делительную воронку. Колбу и фильтр промывают дваады по 15 мл того не раствора хлористоводородной киодоты. Фильтрат подщелачивают 8-10 каплями 25#-ного водного аммиака до pH 8-9. Определяемое вещество экстрагируют из фильтрата тремя порциями по 30 мл овеаеперегнанного хлороформа. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют через безводный сульфат натрия на плотном бумажном фильтре в кругдодонную колбу на 100 мл н упаривают на ротационном вакуумном испарителе дооуха. Сухой остаток растворяют в 0,3 мд метанола, тщательно обмывая ш колбу и аликвоту <I—10 мкд) вводят* в хроматограф.
Вода» Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку на I л и триады экстрагируют сведеперегнанным хлороформом каадый раз иоподъзуя для этого в количестве 75 мд н встряхивают делительную вороику по 2 мин. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют через бумашшй плотный фильтр с безводным сульфатом натрия в круглодонную колбу на 0,25 л и упаривают* на ротационном вакуумном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 0,3 мл метанола, тщательно обмывают ям колбу и полученный раствор хроматографируют.
2.5.1.1. Условия хроматографирования для метода
газо-надкостной хроматография
Хроматограф с ионизацяонно-пламеннш детектором, колонка стеклянная длиной 160 см, внутренний диаметр 4 гсзв заполнена хроыатоном A/-AW’0nc.$ (0,18-0,17 газ) с 3£оу-1 0 Скорость
движения ленты самописца 0,5 см/мин. Расход газов: азота - 35 мл/мин водорода - 45 мл/мин, воздуха - 250 мл/ман. Температура термостэ-
219
те* колонка,двтект— - испарителя - 250°С. Линейность детектирования соблюдается в пределах I-IO нг. Время удерживания велпара 4 мкн.ЗОоек. ^ ? сек.
2.5.1.2. Обработка результатов анализа методом газо-жидкоотной хроматографии
Содержание велпара в анализируемых пробах вычииляют по формуле:
C-1 2 3 4I .S2 .V3
S -V . Р.к I 2
где: С - концентрация стандартного раствора, нг ;
V, - объем стандартного раствора, вводимого п хроматограф, мкл;
Vj - общий объем экстракта, мл;
К - коэффициент открываемости, определяемый предварительно (т.е. средние значения определения заданиях количеств велпара в почве, воде, выраженные в долях единицы);
V - объем раствора анализируемой пробы, вводимого в хро-
z матограф, мкл;
X - количество препарата в пробе, мг/л, мг/кг;
5г - площадь пика анализируемой пробы, мм^;
Sj г площадь пика стандартного раствора, мм^;
Р - навеска анализируемой пробы, г или объем воды, мл
2.5.2. Экстракция и очистка на колонке для метода тонкослойной хроматографии
1
о ч в а. Исоледуемур воздушносухую навеоку почвн - IOOrp. помешают в плоскодонную колбу, заливают I00-150 ил хлороформа л оставляют на I час, периодически поудевшвяя (или ие встряхивая в течение 30 мин на электромеханическом встряжпвателе). Затеи
2
экстракт фильтруют через бумажный фильтр, пробу также переносят на фильтр и проминают 2 раза хлороформом порциями по 10-15 мл. Подученный фильтрат упвривают в ротационном испарителе до объема 5 мл
3
при температуре бани но более 50°С, Оставшиеся 5-7 цд фильтрат»
4
вносят в хроматографическую колонку. Элюируют препарат смесью рас?-