ВМУ 3064-84
Временные методические указания по определению витавакса в зерне и воде методом тонкослойной хроматографии

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИИ И СОРНЯКАМИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде

Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии, болезнями растений и сорняками

Г0СУЛАРСТНЕШШ1 КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С ВРЕДИТЕЛЯМИ БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИИ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ „ КОЖАХ И ВЫШНЕЙ СРЕДЕ

Данные методшш апробированы в рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при 1Ъскомяссиы„болезнями растений и сорняками

Москва- 1987 г,

229

марганцовокислого калия. Оставляют раствор на 15 кинут. Затем прибавляют 10 мл 0,3£-иого раствора соляной кислоты и 5 мл I н. раствора щавелевой киолоты и ждут до тех пор, поха раствор обесцветится. Прибавляют 20 мл ацетона и ставят в морозильную камеру на 60 мин. Фильтруют раствор через плотный бумажный фильтр /синяя лента/. Экстрагируют хлороформом трижды по 50 мл в течение 3-5 мин. каждый раз. Экстракты объединяют, суазат безводным сернокислым натрием и упаривают до небольшого объема. Сконцентрированную пробу количественно наносят на пластинку.

В случае определения в пробе одних метаболитов в ходе анализа марганцевокиолый калий и щавелевую кислоту не прибавляют.

Для определения в зерне витавакса по II варианту к сухому остатку, полученному после упаривания сконцентрированного хлороформенного экстракта, добавляют дистиллированную воду (30-35 мл), тщательно перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 2 часа,периодически перемешивая. Водный экстракт переносят в делительную воронку на 250 мл через бумажный фиььтр /оиняя лента/.Экстракцию витавакса повторяют еще 2 паза в течение 30 мин.и переносят экстракт в ту же воронку. В ворон*у прибавляют 0.1 г хлорида натрия, 15 мл хлороформа и встряхивают содержимое в течение 5 мин. ХлороформенныИ слой отделяют. Экстракцию витавакса из водного раствора повторяют еще три раза.Экстракты объединяют, оувот безводным сернокислым натрием и упаривают на ротационном испарителе до небольшого объема /*0,1 мл/.Остаток наносят на хроматографическую пластинку.

2.5.2. Хроматографирование.

При определении в анализируемых пробах оумьы витавакса а его

2S0

метаболитов /I вариант/ используют подвижную фазу хлороформ + »фир /5:2/, 8 качества "свидетеля” наносят стандартна раство-ры витавакоа, обработанные марганцевокиедим кадием /как описано выше - приготовление "свидетеля"/. После хроматографирования пластинку сушат и облучают У4-светом в течение 20 мин. Обнаружение зон локализации оульфоксида витавакса производят путем последовательной обработки пластинки раствором нитрита натрия в солянокислой среде и раствором Л/-/1-нафтилэтнлендиамина/ либо (£-нафталамина /^-нафтола/. При наличии внтавакса /метаболитов/ появляется пятна фиолетового либо розового цвета соответственно. Be личина Ry сульфоксида 0,38 /"силуфол"/ и 0,65 /силикате ду/

При определении внтавакса по II варианту в качестве подвижно* фази используют смесь н-гексана и ацетона б соотношении 3:2 или н-гексана и эфира в соотношении 1:1.

В качестве "свидетеля" наносят стандартный раствор витоводса /200 мкг/мд/ в количестве 0,005-0,05 мл, что соответствует I-10 ыкг пестицида. Пооле хроматографирования пластинку сушат и обрабатывают омесью растворов бромфеполового синего в ацетона и азотнокислого серебра в во дё&Го отношении 1:1. Для устранении фона пластинку обрабатывают раствором лимонной кислоты.Расход проявляющих реактивов на одну пластинку составляет 4-5 мд.Ботанике проявляется в виде синих пятен на светло-желтом фоне.

Вэличинай1витавакса - 0.50 /н-гексан ♦ ацетон в соотношении 3: оы

2/ на свликагеле~1Г'0,б5 /н-гексан * зфир в соотношении 1:1/ на "силуфоде" и силикагеле соответственно.

Возможно также обнаружение зон локализации витаваяса по реакции диаэотированил и азосочетония /I вариант/.

*31

2»6© Обработка рэзультатоэ ав«гв&.

Коле^0«^в8с^?оо опрадолегате производитоя путем оравнэния иятвививнооти вкрвсюг и pns>sepa пяте я пробы я стандартных раат~ воров*

Содержание препарата б анализируэюой пробэ рассчитывает по формула    _A._s

К *    *-

где:    У    *    оодетиаптге препарота в анализируемой пробе ,кг/л,

мг/кг.

А - содержание препарата в стандартном растворе,мкг.

* площадь пятна стандартного раствора, ни^?

$ 2 * площадь пятна проба, юг.

Р - объем пробы /иЛ! воо/,взятий не РИПЛИ9.мл /г/.

?_%7, Требования техники безопасности.

Соблюдать требования техники безопасности,обычно рекомендуем не для работы о оргонпческжин раатвортлями и УФ-оветом.

Метеддчосгне указания подготовлен»: кандихпм.нвук Н,И*К«*св левой, В»/_вТнвоненко С ВоеаоваянЯ научно-неслэдоватвль-о кий ивотитут ригнеиы н токочкологми пеготтаддов, полимеров и пластических наос, г.Киев), каид*хим_Рнаук В.Н*Кагацкивв и ет* иккенерои-химиком r»B.fysmx С Украинский научно-иоаледсватель-вкий институт завиты растений'у г*Кпев).

Настоящее методичеокпе указания предиаэвачеиы для оанзтар-но- ei?пдемяологическая станций п научко-сдтдедовагедьоаак учреа-девпй Минздрава ОССР_с а такие ветеринарныя₀огрохомпчеокп2₀иоа-тродьно-токсцкодоглчеокия дзбораяорпИ Гооогропрона СССР а лабораторий другая Министерств п ведомств₀зашшавдякол определением оояаточпых подачеств пестицидов и биопрепаратов о продуктов питания,, порток а виеипеП 0реде_о

Срои деЙотвпя временник методичбошн указаний уотоиш~ дпваетбя до утверпдеаия гнгпеничеокик нормашвов.

Методичеокае указания есробпровонн п рекомгвдог>оцы в качестве официальных ГруппоП экспертов при Госкомпссаи «о ишп-чеокпы сргдотааа борьбы о вредителям „болезнями раотопиО в оор-аяяшп.

Методические указания согдасовосн с одобреиы Лобо разорены оовотои при Гдеовом еапитарко-спсдемиологочеоиои увровдепап Минздрава ССС?_с

РШК1Ш0ННЛЯ КОЛЛЕГИЯ

Л.Г.Дяексацдрово₀ JLB_ornpenKO„ ЛЖКедиппне ( эам.иредоедотвая), Мвй.Кдисэпго ( председатель) о Г. во Коротко во ₀ В.ВоК^ао0ачуа_о Г_вЛ«ХоКольцова рА.МсВьсгадвсое

222

УТВЕРЖДАЮ

Заместитель Главного Государственного санитарного врача СССР _А.И.Зайченко

"31 " июля 1984 г.

» 3064 -84

ВРЕ МЕННЫЕ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ВИТЛВАКСА В ЗЕРНЕ И ВОДЕ ЮТОДОМ ТОНКОСЛОЙЮЙ ХРОМАТОГРАФИИ

I.Краткая характеристика пестицида.

Витавакс/карбоксин/ - 3“Ыетил-2-фенилкарбаыоид-5,6-дигидро-1,4-окоатииипредставляет собой белое криоталличеокое вещеотво о т.пл. 9I,5-9?.5°C.

Растворимость в воде - 0,17 г в 100 г.Хорово растворяется в хлороформе, ацетонебензоле, метаноле и этаноле.

Молекулярная масса: 235,3

ЛА^О для мыией и крыс 3200 мг/кг.

ГЦК в воздухе рабочей зоны I иг/м^, в продуктах питания - нс допуокается.

Используется для протрав?%я сеням зерновых культур в борьбе о пильной головней. Эффективен также против ртавч$1ыхгрибов на раз личных ду/ьтурах.

Выпускав rot в форме 75£-есго с .п.

При окиолении его перекисью водорода получается плантвако

/ I /.

В растениях/в течение 6 недель/ ьитавакс подвергается окислению, образуя, в основном, оульфоксид /5,6-дигидро-2-метил-1,^-оксатиин-Э-кврбоксанилид-4-окоид/ и в небольших количеотвах оуль-фон /5,6-Аигидро-2-метил-1,4~оксатиин-Э-карбокоанилид-4,4-диокоид/ В воде при pH 2 и Ч через несколько недель обнаружены витавакс, оульфоксид и в незначительных количествах оулъфон. В почве окисление витавакса до сульфоксида полностью завершается sa 2 недели.

Окиоденив витавакса до сульфоксида наблюдаетоя в растворах некоторых органических растворителей /2/.

2. Методика определения витавакса в зерне и воде.

2.1.Основные положения.

2.1.I.Принцип метода.

Вариант I. Суммарное определение витавакса и его метаболитов.

Метод определения витавакса и его метаболитов основаи на их экстракции органическим растворителем, окислении витавакса перманганатом калия до сульфоксида, очистке экстракта, переэкстрак-ции в органический растворитель и дальнейшем определении в тонком слое адсорбента /' Силуфол , силикагель/.

В качестве подвижной фазы используют смесь хлороформа и эфира в соотношении 5:2.

Обнаружение зон локализации сульфоксида витавакса в тонком слое сорбента основано на его У^-разложении до аминосоединения, деазотировании нитритом натрия в солянокислой среде и азосочета-иии полученных солей фениддиаэония с Л/-/1-нафтилэтилендиамином^ либо «//-нафтолом, bU-нафти лани ном.

Вариант 2-Определение витавакса.

Метод определения яитавакса основан на экстракции его из ана-

234

лизируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта перераспределением пестицида в оиотеме: органический растворитель - вода - органический растворитель с последующим определением в тонком слое силикагеля ИОК-2,5 или силуфола.

Подвижная фаза - смесь н-гексана и ацетона в соотновении 3:2 или н-гекоана и эфира в соотновении 1:1.

Обнаружение зон локализации пеотиципа производят смесью реактивов: 0,05^-ного раствора бромфекодового синего в 50^-ном этаноле и I^-ного раствора азотнокислого серебра в воде о последующе П обработкой пластинок 2^-ным раствором лиманной кислоты.

Продукты окиоления витавакоа данным реактивом не обнаруживаются.

Возможно обнаружение витавакоа по реакции, опксаннсП зыхэ /вариант I. УФ-разложение, диазотирование и азосочетание./

2.1.2.    №тро логическая характеристике метода.

Нижний предел обнаружения оульфокоида витавакоа о помощь» реакции диаэотирования и озосочетаиия - азоооставляющая^/1-наф-ти л этиле иди а мин/ - 0,5-1,0 мкг и аэосоотавлчощие с^нафтиламин.оС-нафтол - 1,0-Т,5 нкг.

Диапазон определяемых концентраций - 1-30 мкг.

Й5тролоп:ческая характеристика метода представлена в таблице.

2.2.    Реактивы и растворы.

Ацетон, х.ч.^ТУ-6-09-3513-7

н-гексан,₍ ч.,ТУ 6-09-3375-78.

Гнпо /кальций оернокиолый СаУО^ . Н₂0/гССТз2Ю -7U. В точение 2 суток прокаливают прм 180^ и просеивают че^з ом то J00 нес.

Калий едкий. ч.д.а.^ГОСТ 9286-78.

Кадий марганце воки ели в, ч. д.а. .ГОСТ 20*Ч>-75.

22S

Таблица.

№трологическая характеристика метода.

Наименование ‘Нижний аналиэируе- . предел обна? мого объекта ‘ружения, . мл/л, иг/кг . Среднее * • значение . определе-‘ ния, % Стандартное отклонение, % Доверительный . интервал сред-‘ него, % Вода /1,11 вариант/ 0,02 88,0 2.6 88,0 + 3,2 Зерно пшеницы / I вариант / 0,1 85,0 8.0 85.0 ± 8,7 Зерно пшеницы / II вариант / 0,1 83,0 **.0 83,0 г 6,1

Крахмал водорастворимый, ч.ГОСТ 10163-76 Кислота соляная^ГОСТ 3116-77,отн.пл.1,18 Натрий сернокислый безводный,ТОСТ **166-76,

Натрий а эотн сто к ис лн 1, ГрСТ ДГ47-75, oc.v.

Спирт эти ловый ^ректификат 96^-ный, ТУ-6-09-1710-77 Хлороформ. х.ч.,ГОСТ 200-15-7**

Эфир для наркоза_; Госфармакопея СССР.

Пластинки "Силуфол" /ЧССР/

Силикагель для хроматографии, КСК-2,5,ТУ-6-09-2523-72.Измельчают, просеивают через оито 100 меш.

Приготовление проявляющих реактивов.

№ 1.а/ К смеси, состоящей из **6 мл дистиллированной воды и *♦ мл концентрированной соляной кислоты.прибавляют 1г азотистокислого натрия.

б/А/- /I-нефтилэтилендиамин/ дигидрохлорид, ч.ТУ 6-09-25****-

828

•72_? 1£-ный раствор в этиловом опирте.

в) . *6-нафталамин, ч,д.а._?Г0СТ 8827-74, 12-ный раствор в этиловом спирте.

г) . „6-нафтол, ч*д.а^0СТ 5838-70.3 г едкого кали раотворяют в 50 мл дистиллированной воды, затем прибавляют 0,5 г об-наф-тола .

Реактивы готовят непосредственно перед проявлением.Расход реактивов 4-5 мл на одну пластинку.

Р2.а).0,05Я-ный раствор бромфекодового сииего(ч.д.а.,ТУ 6-09-1058-76)в 50^-ном этаноле.

б) Л% водный раствор азотнокислого оеребре(ч.д.а^ОСТ 1277-75). Растворы а)и б) смешивают в соотношении 1:1.

в) .22 водный раствор лимонной кислоты .х.ч^ГОСТ 3652-69.

Растворы хранят в темной пооуде в течение месяца.

Стандартный раствор витавакса готовят растворением 10 мг

препарата в ацетоне /50 мд/.Раствор содержит 200 мкг/мл.Устойчив при хранении в холодильнике в течение 3-х месяцев.

2.3.Приборы и посуда.

Аппарат для встряхивания. ТУ 64-Г-ЮР Г-78

Баня водяная,ТУ 64-1-2850-76

Воронки химические, днаыэтр 6 см^ГОСТ 26-13-74

Воронки делительные.еик.250,500 мл.ГОСТ IC054-75

Камера для опрнскивания_;ТУ П-430-70

Камера для хроматографирования размером 150x200 мм.

Колбы мерные .емк.50, 100 нл.ГОСТ 17-762-74.

Колбы кр/глодонные оо плмфани. вмн.150,200 мл.Д*ОСТ 10-394-72. Лампа кзарцевлв ПРК-4 или ПРК-7.

&1кропипетка,Г0СТ 1770-74 /для йенесонкк стандартного раствора/

227

Пластинки стеклянные размером 9Ох Шйм.

Пипетки емкостью I, 5. 10 мл.ГОСТ 1770-74.

Прибор для отгонки раотворитедя, fy 25-11-917-76 Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74 Цилиндры мерные, емк.25,50.100,250 мд^ГОСТ 1770-74.

2.4.Подготовка к определенно.

2.4.1. Приготовление пластинок.

40 г силикагеля марки ^ИЛ" либо НСК-2,5 растирают в фарфоровой ступке о 2 г гипса. Прибавляют воду /90 мл/ небольшие порциями и разменивают до обриаования однородной массы. На пластинку размером 9 х 12 см наносят 5 г массы, равномерно распределяют ее по поверхности. Сушат пластинки на воздухе в течение оуток при комнатной температуре.

2.4.2. Приготовление "овидетеля^и.

В колбочку вносят 0,025-0,05 мл стандартного раствора вита-вакса /200 мкг/мд/, что соответствует 5-10 икг препарата, упаривают в токе теплого воздуха досуха, прибавляют 10 мл 0,l£-ного раствора марганце вокиолого калия .Оставляют раствор на 15 мин. Затем прибавляют 10 мд 0,3^-ного раствора ооляной кислоты и 5 мл I ы щавелевой кислоты ц хд/т до тех пор, пока раствор обесцветится. Экстрагируют хлороформом тридды по 50 мл в течение 3-5 мин. каадый раз.Экстракты объединяют, сушат безводным сернокислым натрием и упаривают до небольшого объема.Сконцентрированную пробу количественно наносят на пластинку.

2,4.3.Отбор проб.

Отбор проб домен проводить с я в соответствии с "Унифициро-

228

ванными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов".

2.5.Проведение определения.

2.5.1. Экстракция.

Пода. 2СО мл анализируемой пробы воды помещают в делительную воронку и экстрагируют хлороформом трижды по 50 ыл в течение 5 мин. каждый раз. Экстракты объединяют и фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и упаривают досуха на ротационном испарителе.

При необходимости определения в воде оуммы зитавакса и его метаболитов /I вариант/ к сухому остатку прибавляют 10 мл Одного раствора марганцевокиолого калия и делают дальше так, как описано в приготовлении "Свидетеля".

.раствррн,

При определении только метаболитов марганцевокиолого калия и щавелевой кислоты не прибавляют /остальное делают также/.

Для определения тольхо витавакса в воде по II варианту сконцентрированный хлороформенный экстракт /описано выше/ нанооят на пластинку, покрытую тонким слоем адсорбента и производят хроматографирование.

Зерно.50-100 г зерна пшеницы помещают в коническую колбу, прибавляют 60-120 мл хлороформа и экстрагируют 2 часа на аппарата для встряхивания. Экстракцию повторяют еще ра-з в течение 30 мин. Экстракты объединяют, сушат безводным сернокислым натрием, фильтруют через бумажный фильтр /синяя лента/ и упаривают дсоуха на ротационном испарителе.

При определении в зерне оуммы вптавакса и его метаболитов /I вараант/ к оухому оотатку добавляют 10 ыл 0,1^-ного раствора