ГОСКОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С ВРЕДИТЕЛЯМ. БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МИНСЕЛЬХОЗЕ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОКОДЕ ЧЕС ТЗ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ * КОРМАХ И ВНЕ&-НЕЙ СРЕДЕ

ЧАСТЬ ХЕ-я

Москва - 1983

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

МБТОДИЧВСКИВ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕС1В ПЕС1ИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ,КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

ЧАСТЬ ХШ

Данные методики апробированы и рекомендованы в качвотва официальных группой экспертов при Гоокомиосии ло химическим оредотвам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками

при МСХ СССР

Москва-1983

^_ст - копц* стандартного раствора вещества , мг/мл, rij - высота пика анализируемого вещества, мм, п_ст - высота гдаг.а стандартного раствора вещества, им, а - объем вводимого в колонку хроматографа вещества, икл, п - навеска анализируемой пробы, г.

Если при введении в хроштограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание**, готовят менее концентрированные раствори, добавляя в анализируемый очищенный экстракт замеренное количество дополнительного растворителя,

2,7. Настоящие методические указания разработаны Г.Ф.ВЦлег-жаниной (ВНИИШЗР;;

3. Требования безопасности Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые для работы с органическими растворителями, концентрированными кислотами и сжатыми газами.

7АШ1Ц 2

Метрологическая характеристика петела определение аналогов свеняльного гормона с помссво газо-жидкостной хроматографии Сдовервтохьвая вероятность ©С- 0,95 )

Прсгарат	I ООьвКТ ; исследо-: вавяя : • • •	: Предел Юбнаруяе-: ния, : нг • • •	Число определе ний п	: Среднее -.‘значение :определе : ния. f : : X •	: Средняя :квадратич--:иая отиОка гедивичясгс :измс рения |	: Сгедияя:Кое$1фл- : Гкьадра- фциент ва-; :тичяая :риа1П!и : :овибка :единичпо-: :среднего:го нэш- : :арнфю- :рения, % : :тхческого • £х 5 w 1		Доверительный интервал, % АХ	: Относ и тс л, ;ная погрешность яз-:ыерення, ? ; ^ •
А л? осях	растения картофеля	0,04	9	83,52	3,91	1,30	4,68	3.58	2,99
	почва	0,12	9	73,10	11,30	3,77	15,45	II.90	8.70
Алтозар	растения картофеля	0,02	9	91,05	*2,31	4,10	14,30	10,30	f\> 9.46
	почва	0,06	12	8*.65	5.07	1,46	5,-Э	3,79	3.21
п-Ьрои- растения феккловый картофеля »?лр гъра- НЕО.’Е U		0,00 0.2*	12 б	113,76 90,93	10,48 9,68	3.02 4,07	9,21 10,77	5,83 11,50	6,65 10,46

ТАШЦА 3

Величины препаратов в различных системах подвппгшх растиорятелей

Препарат :    Подвигай    растворитель__

:гзксан-этоловыЯ *фяр уксусной ? гексан- ацетон !    квслоты    :

:    ($:1)    г    (1:1)    J    0>:lj    0>tf)

Алтосид 0,30 0,80 0,80 0,82 Алтозар 0,72 0,77 0,78 0,85 п-Броыфе таловый 0,64 0,57 - 0,40

»$ир гераниола

-259-

ССДБРЖАНИЕ

ХЛОРОРГАНлЧЕСКИБ ПЕСТИЦИДЫ

I.Временные методические указания указания по

определению ХОП (ДДТ,ДДЗ,ДДД, -ГХЦГ) в рыбе и рыбной продукции методом газожидкостной хроматографии.

2. Методические указали® по определению ХОП и сим-триазиновых пестицидов при их совместном присутствии в почве с помощью Г1Х*

3* Временные методические указания по определению остаточных количеств митрана в воде,сливах и

^яблоках методом ТСХ.

ШЙОРОРГАНИЧВСКИВ ПЕСТИЦИДУ

1.    Мотодические указания по определению афоса в воздухе рабочей зоны методами ГЬХ и ТСХ.

2,    Временные методические указания по определению боя-стара в ботве и клубняах картофеля,листьях и стеблях хлопчатника,капусте,почве к водэ ТСХ и ГЗЕХ.

3* Методические указания по определению глифосата и его метаболита- аминометилфосфоновой кислоты методом хроматографии в воде,почве,растительном материале,

4.    Мотодические указания по определению остаточных количеств дурсбана в воде,почве,лесной растительности

и биосредах методом ТСХ.

5.    Временные методические указания по определению каун-тора в растениях сахарной свеклы и почве методом ТСХ,

260-

6* Методические указания по определению метилмеркалто-фоса в воде,почве,винограде и зеленой массе хмеля ГЖХ и ТСХ.    67

7.    Временные методические указания по определению о<$у-

нака методами ГЖХ и ТСХ в почЕе,растениях,воде водоемов.    76

8.    Зременные методические указания по определению протио-фоса в растительном материале,почве и воде методами

ГКХ и ТСХ.    82

9.    Временные методические указания по определению се-лекрона в растительной продукции,почве и воде ТСХ

и ГЖХ.    91

10.    временны» методические указания по определению хлоро

фоса энзимно-хроматографическим методом в листьях болладоны и траве мяты перечной.    90

11.    Методические указания по определению в зерне и про

дуктах его переработки ФОП.применяемых для обеззараживания зерна и зернохранилищ,хроматографическими методами.    ₁₀₅

АЗОТСОДЕРЖАЩИЕ ПЕСТИЦИД]

1.    Методические указания по определению остаточных количеств пкрекса,диносеба,каратака,ДНОКа в воде,почве.

и растительном материале    хроматографическими методами. цу

2.    Временные методические указания по определению байгой*

методом ГЗКХ в молоке.    138

3.    Временные методические указания по определению барнона в воде,почве,растениях методом ГЖХ.

Настоящие методические указания предназначены для

санитарно-эпидемиологических станций и научно-исслодова-телъских учреждений Минздрава СССР,а также ветеринарных_вагрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других Министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания,кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качество официальных группой экспертов при Госкомиссни по химическим средствам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками при ИЛ СССР.(Председатель группы экспертов - М.Д.Клисенко).

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования саяэпидслу^бы ИМПиТМ им.Мар-нпновского Е.Я. и лабораторным советом при Главней санитарно-эпидемиологическом управления Кик здрава СССР.

"Утверядаю*

Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР

А.И.Зайченко

19 октября 1979г * 2077-79

ВРЕМЕННЫЕ

Методические указания по определению остаточных количеств некоторых аналогов гвенилъного гормона: алтоснда* ал товара н п-броыфелилового эфнра гераниола в растениях картофеля к почве методами тонкослойной и газо-гидкостной хроштографии ^{1 2}

-24&-

фенкдового эфира гераниола - 0,08 нг в 2 мкл хроматографируемого экстракта,

2.1,2 Метрологическая характеристика метода приведена в табл. 2v 2.'2. Реактивы и растворы

я-Те¹ сан, ч., ТУ 6-09-3375-78 Циклогексан, ч., МРТУ 6-09-3112-66 Хлороформ, чда., ГОСТ 3160-51^

Ацетон, чда., ГОСТ 2603-^f

Метилен хлористый, ч*., ТУ 6-U9-3716-74

Этиловый эфир уксусной кислоты, хч., ГОСТ 5-J070-7I

Диэтяловый эфир; для наркоза

Натрий сернокислый б/в, хЧ.,ГОСТ 4166-66

Алюминия окись для хроматографии, П-оЙ ст^акт'., МРТУ 6-09-5296-68 Кремневая кислота для тонкослойной хроматографии, чда.,ГоОСТ 4214-70 Кремний окись (1У) для люминофоров , МРТУ 6-69-485-67 Пластинки Силуфол 150 х 150 мм или 5 х 150 мм (ЧССР)

5%-ный раствор фосфорно-молибденовой кислоты Сч.,МРТУ 6-09-47-67; в 96%-ном этиловом спирте, готовят свежий еженедельно, хранят в холодильнике

2%-ный раствор ванилина в конЛсерной кислоте (ч&а, ГОСТ 4204-66) готовят свежий жаждые 2-3 дня хранят в холодильнике Проявляющий реактив: 0,25 г азотнокислого серебра растворяют в I мл джст'.водя, прибавляют IJ2 мл кони*, аммиака (25%*) и доводят ацетоном до 25 ыл^ Хранят в холодильнике.

Соляная кислота, xomf., чда., ГОСТ 3118-67

5%-ный водный раствор калия марганцовокислого (чда; ГОСТ 4527-65),

243-

2£-fшй раствор п-нитробеизилпиридина (ч, ЮТУ 6-09-А737-67) в ацетоне, хранят в холодильнике,

10^-ный раствор тетраэтилеяпентамана (ч, МРТУ 6-09-3206-66) в ацетоне, хранят в холодильнике.

Азот, осч, ЮТУ-6-02-375-66,

Водород,

Хроматон    (0,16-0,20    мм)    с 5*5Е~30,

Хроиатон W-AW-mAS (0,16-0,20 иц) с 5* ХБ-6U,

Ставдартнис растворы в гексане алтоснда и алтоэара (ч) - 100 и 10 мкг/мл и п-бромфенилового э^яра гераниола в циклогексане -100 мкг/мл.

2,3, Приборы к посуда Гомогенизатор, тип 302 (ПНР) или люосй другой Ротационный испаритель

Аппарат для встряхивания (АВУЛ,АВУ-2 нли аналогичный)

Прибор для инкросублкмацни Вакуумный насос масляный

Колбы конические со ст.ил,29 мы, емкостью 500 и 250 ил (тип КНКШ) Колбы круглодонные со сг.пл, 29 мм, емкостью 500 ■ 250 их (тип КНКШ) Воронки химические диаметром 4-8 см

Пробирке градуированные с притертыми пробками со ст.вл, 14_#5 мм, емкостью 10 мл (тип ПОТа)

Мик рога сетки на 0,1 и 0,2 мл

Пластинки стеклянные для ТСХ размером 8 х 16 см или 20 х 20 см Пульверизатор

Сосуды ( камеры ) для хроштографирования Прибор для отгона растворителей Газовый хроматограф серии •'Цвет*

Калогкж стеклянные: длина 1-2 м, диаметр 3 кем-

-250-

Мжкрооприцы на Ю мкл Сехундомэр

Колонки стеклянные хроматографические: длина 40 си, днаистр 18 им Мерные цилиндры на 100 ил

2*4* Ход анализа

Г\4,1, Извлечение алтосида и адтсзара из проб растительного происхождения

Отвешивают 20 г из измельченной средней пробы растений картофеля в стакан гоиогенизатора. заливают 100 ил к-гексана и гоиоге-визируют I минуту при 6-7 тыс.оборотов, Фильтруют экстракт через бумажный фильтр в круглодонную колбу. Ополаскивают 2-3 раза растительный остаток и фильтр 50 ил гексана, присоединяя его к основному экстракту*. Объединенный фильтрат упаривают на ротационном-пленочном испарителе при 40° С до 5-7 мл. Остаток экстракта переносят количественно в сосуд для млкродистилляции в вакууме.

2.4.2. Извлечение п-бромфенилового эфира гераниола яз проб растительного происхождения

Отвешивают 20 г из измельченной средней пробы растений картофеля в стакан гомогенизатора, заливают 100 их циклогексана и гомогенизируют I минуту при 6-7 тыс. оборотов. Фильтруют экстракт через бумажный фильтр в круглодонную колбу. Остаток растительной массы 2-3 раза ополаскивают при перемешивании 50 мл циклогексана, присоединяя его х основному экстракту*. Объединенный фильтрат упаривают на ротационном пленочном испарителе до 5-7 мл.

2'.4.3^ Извлечение алтосида, алтоэара и п-бромфевилового эфира гераниола из почвы

Отвешивают жз средней пробы жзиельченной н подготовленной для анализа почвы 100 г, помещают в коническую колбу, заливают 200 их хлороформа или хлористого метилена и встряхивают на а пса-

*•251-

рате для встряхивания в течение 1-2 часов* Фильтруют экстракт че-чез бумажный фильтр. Ополасг.ИЕают почву и фильтр 2-3 раза по 50 мл растворителем. Объединенный экстракт упаривают на ротационном пленочном испарителе до 5-7 мл. Остаток используют для очистки.

2.4.4. Очистка экстрактов от примесей Пробы/, содегдащие алтосид и алтозар. Упаривают остаток растворителя в сусуде для микросублкмацки токои воздуха полностью. Подключают прибор к вакууму и дистиллируют при 85° С и 1-2 мм рт.ст. в точение 30 минут. После окончания микросублимации отключают вакуум, смывают дистиллят с "пальца" 5-7 ид свекепорегнаняого диэти-лового эфира. Добавляют до метки эфир. Используют очищенный экстракт для ТСХ качественной идентификации я для количественного 1ЪХ определения'.

Пробы, содержащие д-бромФениловыР. эфир гераниола. Уиаривают остаток растворителя в токе азота досуха. Растворяют экстракт пробы в 10 мл циклогексана к очищают на хроматографической колонке. В хроматографическую колонку вкладывают ватный тампон,толщина сл^я 3 -- 5 мм, затем насыпают сверху слоя сернокислого натрия б/в - 2 см, слой окиси алюшння для хроштографик П-ой ст. активности - 7 см, снова, слой сернокислого натрия б/в - 2 см. Предварительно пропустив через колонку 20-25 цл циклогексана, вносят в колонку растительный или. почвенный экстракт и элюируют n-бромфениловый эфир гераниола 100 ui циклогексана. Упаривают растворитель до 3-5 их на ротационном пленочном испарителе. Очищенный экстракт после упаривания переносят количественно из колбы в градуированную пробнрку и доливают растворитель до определенного объема. Используют очищенный экстракт для ТСХ качественной идентификации и количественного ГЫ определена г.

-252-

£.5. Качественная идентификация

На расстояний 2 см от нижнего края пластинки на стартовую линию наносят очищенные экстракты из проб, соответствующие 2-5 г растений и 10-20 г почвы. Рядом наносят серю стандартных растворов препарата. Пластинки помещают в камеру для хроматографирования и проявляют алтосид и алтоэар в системе гексан-этилацетат (9*1), а п-<5ромфениловый э<1яр гераниола в системе гексан-этилапетат (1*1; или гексан-апетон (4:1;. Вынимают пластинку и сушат на воздухе.

Аля обнаружения алтосида и алтозара пластинку опрыскивают из пульверизатора 5%-ным спиртовым раствором фосфорно-молибденовой кислоты или 2%-ным раствором ванилина в конц. серной кислоте. Нагревают пластинку в термостате 5 минут при 110° С. Алтосид и алтоэар при проявлении фосфорно-молибденовой кислотой обнаруживаются в виде синих пятен на желтом фоне, при использовании ванилина - розовато-сиреневых пятен нз белом Фоне.

Для обнаружения п-бромфенилового эфира гераниола пластинку поела проветривания на воздухе от следов органического растворителя помещают в сосуд над газообразным хлором, получаемым смешением 12%-нбй соляной кислоты с 5%-ннм раствором марганцовокислого калия# Проветривают пластинку от избытка хлора в вытяжном шкафу. Затем опрыскивают ее проявляющим реактивом ( раствором азотнокислого серебре й аммиака В ацетоне)* Облучают пластинку ультрафиолетовым свеТоЫ. п-греифениловый эфир гераниола обнаруживается в виде пятна серого цвета на белом фоне.

При наличии п-нитробензилпиридина п-бромфениловый эфир гераниола можно обнаруживать опрыскиванием пластинки 2%-ныи раствором п-нятробейзклпиридина в ацетоне, нагреванием в течение 5 минут при 150° 0 в последующей обработкой 10%-ным раствором тетра этиле нпеыт-ашна в ацетоне. В этом случае п-бромфекиловыйэ эфир гераниола ddo-

-253-

является синим пятном яа белом фоне.

Величины алтосида, алтозара и n-Сромфенивового эфира гераниола в разных системах подьижныхрастворителей представлены в таблице 8. Алтозар и алтосид не мешают обнаружению п--бромфекилового вфир! гераниола.

г.б. Количественное определение

Условия для хроматографирования алтозара и алтосида на газовом хроматографе *Цввт-106* с пламенно-ионизационным детектором:

Стеклянная колонка длиной I и диаметром 3 мм заполнена Хроиатоном

(0.16-0,20 ми) с 5* Л-30.

Для алтосида температура испарителя 220° С, колонки - 200° С_#

для алтозара, соответственно. - 200°и 183° С. Поток азота 30 мл

в мин, водорода 30 ия/мин, воздуха 24 л/ч, икала электрометра -

- 2.1<Г^П в.

Условия для хроматограФировапия п-бромфенилового эфира гераниола на Хроматографе "Цвет-106* с пламенно-ионизапионным детектором:

стеклянная колонка длиной 2 м диаметром 8 ш заполнена Хроиатоном N-AW-МДО (0,16-0,20 ии) с 5^ ХЕ-60, температура испарителя колонки - 175° С, поток азота - 60 мл/мин, водорода - 30 т/мин, воздуха - 24 л/ч, икала электрометра - 2.1°“** а*

Скорость протяжки ленты 860 мм/ч.

Для количественного определения указанных веществ шкрошпри-цоы вводят в колонку газового хроматографа 2 мкл очищенного экстракта м сравнивают высоты пика анализируемой пробы с высотами пиков оеркж стандартных растворов препаратов, содержащих различные количества действующего вещества. В случае низкого содержания аналогов ювенального гормона в анализируемой пробе упаривают очищенный экстракт до 1-2 мл и вновь вводят в колонку 2 мкл экстракта.

Рассчитывают содержание а залогов ювенильного гормона в анализируемом объекте по уравнению:

1

   Краткая характеристика препаратов (см,табл,1)*

2

   Методика определения алтесжда, адтозара н п-брои|*ннлового эфира гераниола ь растениях картофеля и почве

2*1. Основные положения

2,1 Л. Принцип метода. Метод основан на извлечении препаратов на растительной пробы ж почвы органическим растворителем, очистке экстрактов методом мккрсднстнлляцаж в вакууме кли колоночной хроматографией на окиси алкшкня, качественной идентификации в тонком слое кремневой кислоты ж количественном определения методом газо-жядкостной хроматографии^ Предел определения методом ТСХ для алтосида ж адтозара - 0,05 мг/кг, для п-бром-феянлового эфира геражиода - 0,10 мг/кг. Минимально детектируемые количества алтоенда - 0,04 нг, адтозара - 0,02 нг, п-бром-