ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

(Сборник нормативных материалов)

Москва, 1994 г.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

(Сборник нормативных материалов)

Москва, 1994 г.

ВВЕДЕНИЕ

Загрязнение пищевых продуктов токсичными чужеродными веществами является частью глобальной проблемы загрязнения окружающей среды, поэтому в настоящее время очень важным аспектом является определение микропримесей загрязняющих веществ в продуктах питания и снижение их содержания. В последние годы все больший приоритет приобретают исследования по определению таких токсикантов как различные микотоксины (афла-токсины, патулин, зеараленон, вомитоксин, трихотецены и др.), соли тяжелых металлов, нитриты, нитраты, N-нитрозамины и др.

Настоящий сборник включает в себя ранее изданные Методические указания по определению наиболее приоритетных загрязнителей пищевых продуктов, разработанные научно-исследовательскими институтами медицинского профиля и утвержденные Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Минздрава СССР и ГКСЭН РФ.

В соответствии с Постановлением Госкомсанэп ид надзора Российской Федерации от 06.02.92 г. № 1 *0 порядке действия на территории Российской Федерации нормативных актов бывшего Союза ССР в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения» на всей территории Российской Федерации действуют общесоюзные санитарные правила и нормативные акты впредь до принятия соответствующих нормативных актов Российской Федерации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения.

Сборник предназначен для санитарно-гигиенических лабораторий центров Госсанэпиднадзора, НИИ и учреждений гигиенического профиля, кафедр гигиены питания медицинских институтов и институтов усовершенствования врачей, а также может быть использован лабораториями других организаций, занимающихся исследованиями пищевых продуктов.

Будем признательны за все критические замечания и пожелания, направленные на улучшение данного Сборника или составление аналогичных Сборников по другим разделам исследований пищевых продуктов.

Л. Г. Подунова

МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ, ИДЕНТИФИКАЦИИ

И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИСТАМИНА В РЫБОПРОДУКТАХ (КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД)¹

1. Сущность метода

В основе колориметрического метода определения гистамина лежит измерение величины абсорбции окрашенного производного, полученного при взаимодействии гистамина с диазореактивом. Предел обнаружения метода — 10 мг/кг, относительное стандартное отклонение при определении гистамина в интервале концентраций 20—175 мг/кг изменяется от 0,08 до 0,25. Степень извлечения добавленного к образцу стандарта гистамина —94—99%.

2.Аппаратура, материалы, реактивы

Баня водяная.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-80 с допускаемой погрешностью взвешивания 0,001 г.

Весы лабораторные общего назначения 3-го клсса точности с наибольшим пределом взвешивания 1 кг по ГОСТ 24104-80 с допускаемой погрешностью взвешивания 0,1 г.

Воронки В-100-150-ХС; В-35-50-ХС по ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные ВД-3-250-29/32 ХС по ГОСТ 25336-82.

Колбы конические К„-10-100-29/32 ТС по ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные 1-100-2 или 2-100-2 по ГОСТ 1770-74.

Колориметр фотоэлектрический по ГОСТ 12083-78 со светофильтром в длиной волны 490 ±10 нм или спектрофотометр СФ-26 (или другой аналогичный).

Микроразмельчитель тканей РТ-2 по МРТУ 64.1.1505-63.

Мясорубка по ГОСТ 4025-83.

Пипетки 4-1-1 или 5-1-1, 7-1-5 или 7-2-5; 7-1-10 или 7-2-10 по ГОСТ 20292-74.

Пробирки мерные П-2-10 или П-2-15 по ГОСТ 1770-74.

Термометр 0—100° С по ГОСТ 2045-71.

Холодильник бытовой.

Шкаф лабораторный сушильный.

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919-83.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76.

н-Бутанол по ГОСТ 6006-78, ч.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Гистамин или гидрохлорид гистамина.

Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, хч, раствор 3,75 г/дм³ (0,1 н. раствор).

Кислота трихлоруксусная По ТУ 6-09-1926-77, раствор 50 г/дм³ (5%-ный раствор).

Натрий азотистокислый по ГОСТ 4197-74, чда, раствор 50 г/дм³ (5%-ный раствор).

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, чда, раствор 200 г/дм³ (5 н. раствор).

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166-76 хч, прокаленный.

Натрий углекислый по ГОСТ 83-79, хч, раствор 40 г/дм³ (4%-ный раствор).

Пара-нитроанилин, чда.

Этилацетат по ГОСТ 22300-76, чда.

3. Подготовка к испытанию

3.1. Приготовление раствора пара-ннтроаннлнна

Пара-нитроанилин очищают путем перекристаллизации в воде. Для этого растворяют его в горячей дистиллированной воде и охлаждают раствор до комнатной температуры. Выпавшие кристаллы отфильтровывают и высушивают при 80° С в течение 10—15 мин. 0,1 г паранитроанилина растворяют в 100 см³ 0,1 н соляной кислоты. Хранят раствор в холодильнике до момента употребления.

3.2. Приготовление диазореактива

Диазореактив получают непосредственно перед использованием путем смешивания 10 см³ раствора 1 г/дм³ пара-нитроанилина в 0,1 н соляной кислоте и 1 см³ раствора 50 г/дм³ азотистокислого натрия и охлаждают до 0° С.

3.3. Приготовление н-Бутанола, насыщенного водой

Для приготовления н-Бутанола, насыщенного водой, встряхивают 50 см³ н-Бутанола и 20 см³ дистиллированной воды в делительной воронке. После разделения фаз отделяют верхний бутанольный слой.

ill

3.4. Подготовка проб к анализу

Отбор проб проводится по ГОСТ 7631-85 «Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний» по ГОСТ 87-56.0-70 «Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию».

Образцы доставляют в лабораторию сразу же после отбора пробы. В случае длительной транспортировки (более 1 часа) рыба-сырец должна транспортироваться в охлажденном состоянии, а мороженная —в замороженном состоянии. Исследование образцов должно проводиться в день доставки их в лабораторию. При отсутствии такой возможности образцы должны храниться при температуре не выше минус 8° С не более трех суток.

Доставка и хранение образцов консервов и другой продукции должны проводиться с соблюдением режимов, предусмотренных НТД (действующими инструкциями и стандартами).

3.5. Экстракция

Навеску 10 г (с точностью до 0,01 г) приготовленного образца помещают в сосуд микроразмельчителя тканей, добавляют 25 см³ 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и перемешивают 5 минут. Полученную смесь переносят в плоскодонную коническую колбу на 100 см³, ополаскивают сосуд смесителя дважды 5—10-ю см³ 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и растворы объединяют. Колбу снабжают воздушным холодильником и выдерживают на водяной бане при 60° С в течение 15 мин. Охлажденную смесь переносят количественно в цилиндр, доводят до 50 см³ 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты и фильтруют через складчатый бумажный фильтр (фильтрат 1).

3.6. Построение калибровочной кривой

Готовят стандартные растворы гистамина с концентрацией 5, 10, 20 и 40 мкг/см³ в 5%-ной трихлоруксусной кислоте. Для приготовления основного раствора гистамина с концентрацией 40 мкг/см³ 4,0 мг гистамина помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в 5%-ной трихлоруксусной кислоте и доводят объем до метки. Рабочие растворы гистамина с концентрациями 20; 10; 5 мкг/см³ получают путем разбавления 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты основного раствора в 2, 4 и 8 раз соответственно. Основной раствор гистамина хранят в холодильнике неделю, рабочие растворы готовят в день проведения анализа.

5 см³ каждого стандартного раствора помещают в пробирки с притертыми пробками, добавляют 1 см³ 20%-ого раствора гидроксида натрия и вносят в раствор при перемешивании безводный углекислый натрий до получения насыщенного раствора.

Добавляют 5 см³ н-Бутанола, насыщенного водой, и энергично встряхивают пробирки в течение 30 сек. После разделения фаз отбирают пипеткой или шприцем 3 см³ верхнего бутанольного слоя и переносят в другую пробирку с притертой пробкой, содержащую 3 см³ 0,1 н раствора соляной кислоты. Встряхивают содержимое пробирки в течение 30 сек. После разделения фаз отбирают 2 см³ нижнего водного слоя, переносят в другую пробирку, добавляют 2 см³ 4%-ного раствора углекислого натрия и выдерживают 5 мин. при 0°С. Приливают к охлажденному раствору 2 см³ холодного свежеприготовленного диазореактива, встряхивают и вновь выдерживают 5 мин. при 0°С. Добавляют 4 см³ этилацетата и энергично встряхивают в течение 30 сек. После разделения фаз сухой пипеткой отбирают верхний слой и переносят в пробирку, содержащую безводный сульфат натрия (раствор окрашенного производного в этилацетате должен быть прозрачным). Измеряют величину абсорбции раствора при 495 нм в кювете толщиной 1 см. В качестве раствора сравнения используют этилацетат. На основании полученных данных строится калибровочная кривая зависимости величины абсорбции от концентрации гистамина в растворе.

4. Проведение испытаний

5 см³ фильтрата 1, полученного по п. 35., помещают в пробирку и проводят процедуру, описанную в п. 3.6, начиная с добавления раствора гидроокиси натрия.

Если образцы содержат гистамина более 200 мг/кг, необходимо разбавить полученный фильтрат 5%-ным раствором трихлорук-сусной кислоты.

Для определения концентрации гистамина в экстракте используется калибровочная кривая.

5. Обработка результатов

Содержание гистамина в образце продукта Г (мг/кг) вычисляют по формуле:

^{c v} А

^г-—^ф,г^де:

С — концентрация гистамина, найденная по калибровочной кривой, мкг/см³;

V — объем экстракта, см (50 см );

М — навеска образца продукта, г (10 г);

Ф — фактор разбавления:

V фильтрата 1 + V 5% р-ра трихлорукс. к-ты V фильтрата 1

S-220

Вычисление проводят до единиц. За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение результатов трех параллельных определений. Допустимое расхождение между результатами параллельных определений не должно превышать 50% по отношению к среднему арифметическому значению.

Определение гистамина проводится в отдельных видах рыб и рыбных продуктах в пунктах выработки продукции.

Периодичность контроля лабораториями санэпидстанций устанавливается не реже 1 раза в квартал. Содержание гистамина в экспортных и импортных консервах определяется в каждой партии отраслевыми лабораториями. В случае нарушения температурного режима хранения консервов проводится внеочередной контроль.

114

СОДЕРЖАНИЕ

I    МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ    *

1.    Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах методом тех.................................... 3

2.    Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах с

помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии    ...    11

3.    Методика определения афлатоксинов в продуктах животного

происхождения ................................. 19

4.    Методика определения содержания патулииа в фруктовых и

овощных соках и пюре............................ 26

5.    Методика определения мпкотоксина патулииа в продуктах

переработки плодов и овощей ....................... 31

6.    Методика определения зсарпленопл в пищевых продуктах    ....    37

7.    Методика определения дсзоксинивалспола (вомитокспна) в    зерне

и зернопродуктах................................ 41

8.    Методика определения дсзоксинниллснола и зсараленона в зерне

и зернопродуктах ............................... 45

9.    Методика определения Т-2 токсина в пищевых продуктах и

продовольственном сырье.......................... 53

10.    Методика определения охратоксина А в пищевых продуктах ...    57

11.    Методики определения мпкотокеппои: Т-2 токсина, зсараленона

(Ф-2) и охратоксина А............................ 63

II. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ 77

12.    Атомно-абсорбционные методы определения токсинных элементов в пищевых продуктах и пищевом сырье.............. 77

13.    Методика определения мстил-этилмсркурхлорида в пищевых

продуктах, кулннарно обработанных ................... 93

14.    Методика определения содержания общей ртути в пищевых

продуктах методом беспламенной атомной абсорбции....... 97

15.    Методика по определению хрома в овощных консервах...... 103

16.    Методика определения содержания гистамина в рыбопродуктах

(флуоромстричсский метод)......................... 105

17.    Метод выделения, идентификации и количественного определения

гистамина в рыбопродуктах (колориметрический метод)...... ПО

18.    Методика определения нитратов и нитритов в молоке и молочных

продуктах..................................... 114

19.    Методика определения жиратов и нитритов в плодовоощной

консервированной продукции........................ 124

биологических жидкостях .......................... 133

21.    Методика определения остаточных количеств

Эстрадиола-17/? в продуктах животноводства ............. 138

22.    Методика определения антибиотиков тстрациклинового ряда методом тонкослойной хромато<рафии (качественный анализ) ...    142

23.    Методика определения антибиотиков тетрацикл и нового ряда

<]»луоримстричсским методом (количественный анализ) ...... 143

24.    Определение летучих N-нитрозаминов в продовольственном сырье

и пищевых продуктах........................ .    .    .    ]4<з

Брагина И. В., Орехова II. Л- — специалисты лаборатории физико-химических методов исследований Российского Республиканского информационно-аналитического центра.

Под редакцией: Подуповой JI. Г. — заместители Главного государственного санитарного врача РФ, заслуженного врача РФ.

Подписано к печати. 21.11.94.

Формат 60 х 88/16. Бумага офсетная. Уел. псч. л. 9,8. Уел. кр.-огг. 9,8. Тираж 1000 экз. Зак. 220.

Изготовлено в Московской типографии № 11 Комитета по печати РФ. 113105, Москва, ул. Нагатинская, 1,

1

   -- Дополнение к документу «Временные гигиенические нормативы и метод

определения содержания гистамина в рыбопродуктах» СанПиН 42-123-4083-86 от 27.03.86 г., утв. М3 СССР 31.03.87 № 4274-87