ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

(Сборник нормативных материалов)

Москва, 1994 г.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

(Сборник нормативных материалов)

Москва, 1994 г.

ВВЕДЕНИЕ

Загрязнение пищевых продуктов токсичными чужеродными веществами является частью глобальной проблемы загрязнения окружающей среды, поэтому в настоящее время очень важным аспектом является определение микропримесей загрязняющих веществ в продуктах питания и снижение их содержания. В последние годы все больший приоритет приобретают исследования по определению таких токсикантов как различные микотоксины (афла-токсины, патулин, зеараленон, вомитоксин, трихотецены и др.), соли тяжелых металлов, нитриты, нитраты, N-нитрозамины и др.

Настоящий сборник включает в себя ранее изданные Методические указания по определению наиболее приоритетных загрязнителей пищевых продуктов, разработанные научно-исследовательскими институтами медицинского профиля и утвержденные Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Минздрава СССР и ГКСЭН РФ.

В соответствии с Постановлением Госкомсанэп ид надзора Российской Федерации от 06.02.92 г. № 1 *0 порядке действия на территории Российской Федерации нормативных актов бывшего Союза ССР в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения» на всей территории Российской Федерации действуют общесоюзные санитарные правила и нормативные акты впредь до принятия соответствующих нормативных актов Российской Федерации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения.

Сборник предназначен для санитарно-гигиенических лабораторий центров Госсанэпиднадзора, НИИ и учреждений гигиенического профиля, кафедр гигиены питания медицинских институтов и институтов усовершенствования врачей, а также может быть использован лабораториями других организаций, занимающихся исследованиями пищевых продуктов.

Будем признательны за все критические замечания и пожелания, направленные на улучшение данного Сборника или составление аналогичных Сборников по другим разделам исследований пищевых продуктов.

Л. Г. Подунова

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АНТИБИОТИКОВ В ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОВОДСТВА¹

Определение остаточных количеств антибиотиков проводят по ♦Методическим указаниям по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства¹ № 3049-84 от 29.06.84 г. При отсутствии возможностей использовать микробиологический метод можно использовать метод тонкослойной хроматографии.

Определение антибиотиков тетрацнклннового ряда методом тонкослойной хроматографии (качественный анализ)

1. Оборудование

Стеклянный сосуд для тонкослойной хроматографии

Стеклянные пластины размером 9 х 18 см

Пресс для приготовления кашицы из тканей (диаметр пор 1 мм)

Механическая мешалка с тефлоновым пестиком

Пробирки со шлифом

Пипетки разные

Камера для обнаружения тетрациклина на пластинах

Пульверизатор

Сушильный шкаф до 120° С

Стекла часовые (диаметр 8—9 см).

2. Реактивы

Н-бутанол перегнанный

Метанол перегнанный

Раствор лимонной кислоты 10%

Раствор соляной кислоты 0,1 н.

Раствор соляной кислоты 1,0 н.

Растворы соляной кислоты готовят из концентрированной соляной кислоты с маркой чда.

Силикагель с гипсом (ЛС 5/40 ц).

Раствор аммиака 25%.

3. Стандартный раствор тетрациклина

Раствор тетрацикл и на-гидрохлорида готовят из расчета 100 мкг в 1 мл 0,1 н раствора соляной кислоты.

4. Ход определения

4.1. Приготовление пластин с силикагелем. 3,75 г силикагеля с гипсом смешивают в ступке с 10,5 мл дистиллированной воды и быстро наносят на чистую обезжиренную пластину размером 9 х 18 см и помещают на горизонтальную плоскость, выверенную по уровню. Пластин ы оставляют на ночь до полного высушивания, затем их активируют один час при 120°С. После охлаждения на пластины наносят экстракт из тканей и стандартный раствор антибиотиков в разных разведениях (от 0,1 до 3 мкг/0,1 мкл).

5. Экстракция тетрациклина из тканей

0,5 г образца свежей или замороженной ткани помещают на пресс, продавливают, гомогенизируют в механической мешалке, взвешивают по 100 мг и погружают в центрифужную пробирку, куда предварительно добавляют 1,9 мл 0,1 н раствора соляной кислоты. Пробирку помещают в холодильник на один час с периодическим встряхиванием. После этого смесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 30 минут. Экстракт выпаривают на часовом стекле при 37° С. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл 0,1 н раствора соляной кислоты. На пластину для хроматографии наносят 0,02 мл. После просушивания нанесенных пятен на воздухе пластины помещают в сосуд с системой Н-бутанол-метанол-10% раствор лимонной кислоты (4:2:4) на 2,5 часа. Затем пластины высушивают на воздухе, опрыскивают из пульверизатора 1 н раствором соляной кислоты, прогревают при температуре 50° С одну минуту и помещают в камеру, насыщенную парами аммиака на пять минут, после чего пластины просматривают в ультрафиолете. Тетрацикли-ны флуоресцируют лимонно-желтым цветом.

143

Необходимым условием при определении антибиотиков методом тонкослойной хроматографии является проведение всех операций п темноте (особенно разгонка в системе, высушивание и выдерживание в парах аммиака).

Чувствительность метода ОД—0,2 мкг/г ткани.

Определение антибиотиков тетрацнклинового ряда флуориметрнческнм методом (количественный анализ)

В основу положен метод Kohn, принцип которого заключается в образовании комплекса из тетрациклинов и барбитурата кальция, флуоресцирующего в ультрафиолете.

1. Оборудование Флюориметр типа ФМ-1

Пресс для приготовления кашицы из тканей (диаметр пор 1 мм) Механическая мешалка с тефлоновым пестиком Центрифуга типа ЦЛР-1 Пробирки со шлифом на 20 мл Пипетки разные (от 0,1 мл до 10 мл).

2.    Реактивы

Раствор соляной кислоты ОД н (готовится из концентрированной соляной кислоты марки чда).

Раствор натриятбарбитала 0,9 М

Хлористый кальций ОД М и 0,04 М (готовится из безводного) Этил-ацетат (перегнанный)

Этилендиамииотетраацетат натрия (ЭДТА — натрия) 0,9 М Трихлоруксусная кислота 0,44 н

Раствор однозамещенного фосфата калия (КЩРСЬ) 0,004 М в трихлоруксусной кислоте 1,5 н

Гаствор нитрата свинца РЬ(ГЧОз)2 в 0,06 н растворе натрия ацетата 2,0 М

Раствор иодноватистокислого калия (КЮз) 0,32 М.

3.    Стандарт

Раствор тетрациклина-гидрохлорида готовится из расчета 100 мкг в ОД н растворе соляной кислоты (1 мл — 100 мкг, ОД мл — 10 мкг, 0,01 мл — 1 мкг).

4. Ход определения

0,5 г образца свежей или замороженной ткани помещают на пресс, продавливают, гомогенизируют в механической мешалке, взвешивают по 100 мг и погружают в пробирку со шлифом, куда

144

предварительно добавляют 1,9 мл 0,1 н раствора соляной кислоты. Пробирку помещают в холодильник на один час с периодическим встряхиванием. После этого центрифугируют при 1500 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость сливают в центрифужную пробирку объемом 10 мл и добавляют 1 мл смеси 0,004 М раствора однозамещенного фосфата калия в 1,5 н растворе трихло-руксусной кислоты для осаждения белка. Затем центрифугируют 30 минут при 1500 об/мин.

К надосадочной жидкости добавляют 2,0 мл 0,06 н раствор нитрата свинца в 2,0 М растворе натрия-ацетата (для осаждения солей фосфора).

Образцы оставляют стоять 30 минут при комнатной температуре до полного осаждения, затем центрифугируют.

К надосадочной жидкости добавляют 1,0 мл 0,32 М раствора иодноватистокислого калия (для осаждения избытка свинца) и оставляют стоять на 30—60 минут, затем центрифугируют.

Надосадочную жидкость сливают в пробирку со шлифом, содержащую 3,0 мл этил-ацетат 0,9 М ЭДТА — натрия; 3,0 мл 0,9 М натрия-барбитала; 3,0 мл 0,1 М раствора хлористого кальция. Пробирки энергично встряхивают в течение двух минут и оставляют для расслоения (барбитал вначале выпадает в осадок, затем растворяется в фазе этил-ацетата). Измеряют флюоресценцию верхнего слоя.

5.Расчет

Для расчета содержания тетрациклина в опытных образцах первоначально устанавливают показатель флюориметра на отметку 100, используя стандартный раствор тетрациклина.

Для этого берут 0,1 мл стандартного раствора, содержащего 10 мкг тетрациклина, в пробирку со шлифом и доводят до объема 2,5 мл дистиллированной водой. Затем в эту пробирку добавляют последовательно: 2,0 мл 0,44 н раствора трихлоруксусной кислоты;

2.0    мл 0,44 М раствора хлористого кальция; 3,0 мл этил-ацетата и

3.0    мл 0,9 М натрия-барбитала.

Расчет производят следующим образом:

v А*В    ,

X “ —— • 10 мкг/г ткани, где:

А — количество тетрациклина стандартного раствора;

В — показание прибора опытной пробирки;

С — показание прибора стандартного раствора;

10 — коэффициент для расчета количества тетрациклина в 1 г ткани.

Чувствительность метода: 0,1—0,2 мкг/100 мг ткани.

10-220

СОДЕРЖАНИЕ

I    МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ    *

1.    Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах методом тех.................................... 3

2.    Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах с

помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии    ...    11

3.    Методика определения афлатоксинов в продуктах животного

происхождения ................................. 19

4.    Методика определения содержания патулииа в фруктовых и

овощных соках и пюре............................ 26

5.    Методика определения мпкотоксина патулииа в продуктах

переработки плодов и овощей ....................... 31

6.    Методика определения зсарпленопл в пищевых продуктах    ....    37

7.    Методика определения дсзоксинивалспола (вомитокспна) в    зерне

и зернопродуктах................................ 41

8.    Методика определения дсзоксинниллснола и зсараленона в зерне

и зернопродуктах ............................... 45

9.    Методика определения Т-2 токсина в пищевых продуктах и

продовольственном сырье.......................... 53

10.    Методика определения охратоксина А в пищевых продуктах ...    57

11.    Методики определения мпкотокеппои: Т-2 токсина, зсараленона

(Ф-2) и охратоксина А............................ 63

II. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ 77

12.    Атомно-абсорбционные методы определения токсинных элементов в пищевых продуктах и пищевом сырье.............. 77

13.    Методика определения мстил-этилмсркурхлорида в пищевых

продуктах, кулннарно обработанных ................... 93

14.    Методика определения содержания общей ртути в пищевых

продуктах методом беспламенной атомной абсорбции....... 97

15.    Методика по определению хрома в овощных консервах...... 103

16.    Методика определения содержания гистамина в рыбопродуктах

(флуоромстричсский метод)......................... 105

17.    Метод выделения, идентификации и количественного определения

гистамина в рыбопродуктах (колориметрический метод)...... ПО

18.    Методика определения нитратов и нитритов в молоке и молочных

продуктах..................................... 114

19.    Методика определения жиратов и нитритов в плодовоощной

консервированной продукции........................ 124

биологических жидкостях .......................... 133

21.    Методика определения остаточных количеств

Эстрадиола-17/? в продуктах животноводства ............. 138

22.    Методика определения антибиотиков тстрациклинового ряда методом тонкослойной хромато<рафии (качественный анализ) ...    142

23.    Методика определения антибиотиков тетрацикл и нового ряда

<]»луоримстричсским методом (количественный анализ) ...... 143

24.    Определение летучих N-нитрозаминов в продовольственном сырье

и пищевых продуктах........................ .    .    .    ]4<з

Брагина И. В., Орехова II. Л- — специалисты лаборатории физико-химических методов исследований Российского Республиканского информационно-аналитического центра.

Под редакцией: Подуповой JI. Г. — заместители Главного государственного санитарного врача РФ, заслуженного врача РФ.

Подписано к печати. 21.11.94.

Формат 60 х 88/16. Бумага офсетная. Уел. псч. л. 9,8. Уел. кр.-огг. 9,8. Тираж 1000 экз. Зак. 220.

Изготовлено в Московской типографии № 11 Комитета по печати РФ. 113105, Москва, ул. Нагатинская, 1,

1

   — Методические указания по определению остаточных количеств анти

биотиков тетради клинового ряда (хлортетрациклии, окситетрациклин, тетрациклин) в мясных продуктах микробиологическим и химическим методами, утв. М3 СССР 07.04.75 г.