ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ НО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С Вгудашыи, Б0ЛЕ8НЯНН РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

УТВЬРаДА»:

Заместитель Главного санаторного врача Сосза ССР

Д.Н .ЛОРАНО КИЙ SO апреля 1969 года

МЕТОДЫ

ОН РЕДЕЛИ НИИ МИКРОКОЛИЧИСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, ФУР АЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ

г.Москва

*i

Метод определения 2,4-Д в раотптельных тканях

Л.Л .Стопов и В.I! .Фофанов (ВНИИХС8Р)

Для определепия 2,4-Д в растительных тканях (если применяются соли 2,4-Д, то в кйслой вытяхко из почвы, а также в воде) испольэуетоя метод хроматографии в тонких слоях, отличающийся высокой производительностью, скоростью и лёгкостью проведения анализа. Кроме того, на хроматографичоскоН плаотинке проявляются в вило отдельных пятен не только чистая 2,4-Д, но и нокоторне метаболиты её, е такхо эфиры 2,4-Д и 2,4-лихЛорфоноп, которые можно определить и в техническом продукте, используя приведенные в мото-дико растворители.

Для анализов тробуютоя: аппарат Шталя, выпаритель-вонцентра-тор, стеклянный опрыскиватель (пульверизатор), водяная баня, камера для проявления илаотикок и источник УФ-свото.

В качестве реактивов применялись: соляная кислота концентрированная и разбавленная (для приготовления последней к 60 мл концентрированной IICI добавляют воду до объема I л)| фосфорноволь-фрат4озап кислота или фосфориомолибденовая (растворяют 200 г фос-форновольфрамовой кислоты в поде и обтёк раствора доводят водой до 500 мл); хлороформ чистый перегнанный; этиловый спирт 96^-пый и одкиН натр, О,Г# раствор.

В качестве растворит"лей используют смеси: аиклогекоан + бензол + ледяной уксусная кислота в соотношении 10:2:8 или I2j2i8 (In i\)kcqii + бон пол ♦ ледяная уксусная ююлота + нитрометан ♦

+ хлороформ в соотношепин Ю:?:3:2:2/оиеоь II). Реактив для проявления I получается сполуюиим образом. Растворяют 0,5 г IfJnO^ в 47,5 ил лиртиллировпиноИ воды и добавляют 2,5 мл концентрированной нpS 0^. Гошсгии для иронвлоиип II продставлпт собой 0,1 н раствор А^Жо_а в 3 н.

Экстратш и выделение 2.4-А. Навеску сырого раотительного материала (1-10 г)^х' гомошнизпруют в фарфоровой ступка о чистым

х) отбор про'* и обрницол пповолпт iibhccthip способом. При увеличений навески соотыяст ценно удлинивиотсн и количество при-ociiiicnitx рсоктпоол, Так, при поддоне .'0 г бсрстсп 50 мл растлен':» • :(!Л('ЧП н но '44 ил coTninfl и Фосторновольфрамовой кислот.

42

песком или битым степлом, заливаю» 20-25 ил и,5% раствора ЖаОН и, периодически помеммвая, оставляю на 20-30 шш« Затои содержимое фарфоровой ступки тщательно переносят в стакан емкостью 100-250 мл(остатки со ступки смывают разбавленной соляной кислотой) • Прибавив ю-15 ил фосфорновольфраиовоИ кислоты и 10-15 ил концентрированноЛ соляной, хороао перемащивают стоклянноЙ палочкой. Фосфорновольфраиовую кислоту можно заменять фосфорномолиб-доновой в тех же количествах.. Через 20-30 иин. (порше 10-15 мин. раствор иеремеииьают) содержимое стакана отфильтровываю через плотный фильтр на воронке Бюхнера диаметром 7 см. Остатки из стакана смывают на фильтр разбавленной HCI. Осадок на фильтре проиывают этой же соляной кислотой (порциями по 25 ил); общий объем Прониной жидкости - 150-200 мл. Содержимое колбы Бунзена переносят в делительную воронку еикостью 500 мл (промывать колбу можно дистиллированной водой).

2,4-Д экстрагируют тремя порциями хлороформа по 50 мл.

После добавлении каждой порции делительную воронку необходимо тщательно встряхивать не менее 2 мин.

Экстракт каждый раз сливают в вшшритель-кснцентратор, который затем ставят на водяную баню дли выпаривания хлороформа досуха. После охлаждения стенки колбы омывают 1-3 мл этилового спирта и выпаривают его. Затем осадок растворяют в нужном объеме этилового спирта (0,2-0,4 ил). Колбу закрывают притертой пробкой. Полнота извлечения составляет 65-I0C#.

Приготовление хроматографических пластинок. Пластинку можно готовить любым известным способои. Толщина слоя должна быть не более 300 мк. Используются пластинки размером 15x20 см. Для приготовления сорбента к 3-5 г силикагеля КСК с размером частиц

0,06 им добавляют 0,2-0,4 г медицинского гипса. Ьсё эхо смеоивают с фарфоровой чайке, добавляют 10,5-12 ми дистиллированной воды, быстро и тщательно переценивают пестиком (30-100 сек), поренссят на чистую пластинку и распределяют unигелом, затем слой выравнивают путём встряхивании пластинки. Вся эта операция должна длиться нс более 2 мни. Подготовленную пластинку помещают на ровное место и суыат при каинатной температуре но менее 20 часов.

Ход-ЛИЦлини. Пород опродмлониои И» КОЛОН о анплиэируо-

чсокую плпотипку л пило пятин. Рилом наноситттио отанлартпо-ГО РООТЛОрП (опиртопой pnOTlHip ЧИОТОЙ    .

Пятно poor попои долтнм быть иоОольпою диаметра (не болое I 014) ₉ их нужно подсушивать тёплым воздухом (удобен ллп этой цели ручной фон)• Питии иополит п один рпл нп расстоянии 2 си от низкого крап пластинки.

В качеству рвадолитплыюИ капоры ллп нобольсгих шшотпнок иояно исиольпояоть стеклянные вегетационные сосуды с хорспо притертом крмякоИ или окоичоторы. И помору наливает растворители слоен I см«

Для хорошего и быстрого хроматографирования в камере нооб-ходимо создать насыщенную парами растворителем среду (для этом цели стенки каморы обычно рыстилают фильтровальной бумагой и камеру хорошо встряхивают), Нооло того, кок пластинка покошена в камеру, открнвать^иаыеру но следует. Путь, проходимый веществом от моста понесения, лоя-тон бить не менее 10 см.

При использовании указанных выше растворителей процесс раэлелонил длится SS-a⁰ мин. Через 2-5 мин. после извлечения пластинки из разделительной камеры мокко проявлять хроматограмму, Яыбор реактива зависит от цели работы. Если необходимо найти только 2,4-Л, то лучоо опрыснуть пластинку реактивом II и им до pa кт ь её в УФ-сието 10-15 1*1111, 2,4-Д проявляется в этом случпо » виде тёмных пятен. Чувствительность проявления на пластинке - О,С-0,? мкг. Если хп необходимо определить пенимо 2,4-Д чё бут.; .овчИ эфир или 2,'1-дихясрфеиол, то пластинку лучше опрыснуть реактивом f. .Татем её номесадэт в сучильный шкаф с температурой по волю 1<"^,о0. Если проявление нс очень чёткое,

хх) Но обязательно лг*ть «томно такое количество, иочио

нанести и весь oOiou (143-0,4 мл), но пае :: ичзо толью л тех случаи.*:, когда искомого нелестна •'•п.м- мало в на-веско. IIри зтом отоиви колбы ебммыитг <    мл спирта

и смыв помечают в центр иитна она"нэнруо юг** иястлора.

одедует опрыснуть пластинку ещё раз и подогреть со, 2,4-Д в этой случае проявляется на розовой или серой фоне в виде белых иятен, Чувствительность проявления - 1-2 мхг,

В присутствии 2,4-Д можно определять указанный методой 2U-4X, золи применяется, смесь растворителей I.

2,4,5-Т имеет .такое же значение/#^, как и 2,4-Д, поэтому последняя исиает ее определению. Однако 2,4,5-Т (в случае обработки растений только этим препаратом) можно определять этим методом.

Другие распространенные хлорсодержащие песчициды (ДДГ, далапон, гексахлорбутадиен) в данных условиях не проявляется и определению не мешают,

Количественная оценка хроматограмм ь тонких слоях.

Для количественной оценки хроматограмм без экстракции разделённых веществ можно использовать визуальное сравнение пятом о пятнами эталона, а также возмонность получении фотокопий с последующим измерением площадей пятем. Бысирее и лучше применять •;ю'^,оденсигоиатричоокое определение. Недостатком этого метода является необходимость строить для ка:удий хроматограммы свои график, т,к, толщина слон ни равных пластинках (особенно при ручном приготонлошш их) неодинакова,

iзкомендуетсн следующий способ. На пластинку от старта до ир.'кта иаыосили (но шаблону) линии толщиной до I мм, которые: делили ее на 10 равных чостей, Пнть-иесть полос использовались для получения данных для построения калибровечиого граб ит, я четыре-пять полос - для анали^исследуемого вощо-

Пятно наносили посередине каждой части в самом начале ее.

Калибровочный грзфик. Пожду логарифиом количества ве-!>dci ва в квадратным корнем из значения площади пятна (мм^) существует прямо пропорциональная зависимость.

График дучме строить для веществ в количестве от I до 1C-15 мх£* Исходный раствор готовят, растворяя 0,2 г чистой 2,‘г-Д в 100 мл этилового спирта; I мл содержит 2 мг 2,4-Д,

45

Для приготовления xpouororpoMM стандартных я исследуемых веществ нп плпотинку лучше наиооить одинаковые обкомы растворов в каждую' точку. Предварительно необходимо провести приб-ли8ИталМ10^опрало^,«''МИв 2,4-Д в анализируемой пробе.

Поело пролвношш в УФ-свето пластинку помещают на расстоянии 15-20 см от лншш (ртутнокварцевой с горелкой IIГК-2 или IIPK-4), плтна не просвет снимают на кальку и площадь их (мм^) определяют по миллиметровой бумаге (ещё лучпе сделать увеличенную фотокопию хроматограммы или еб проекцию и определять плошадь пятна планиметром). Затем извлекают квадратные корни из площадей пятен и находя^огарифмы от количества стандартного вещества в пятнах. Зпачония квадратных корней откладывают па оси ординат, а логарифмы - па оси абсцисс.

Нахождение неизвестной концентрации по графику. Напарив

площади 3-4 пятен анализируемого вещества, вычисляют среднее значение их и из этой величины извлекают квадратный корень. Затем на графике походят соответствующий логарифм, а но таблице антилогарифмов - его антилогарифм (количество определяемого вещества).

Паленные данные иоМю получить, если в навеске додержится около 10 мкг ле;;хэства. Ошибка определения составляет +5-^.

Содержание 2,4-Л (х) в навеске анализируемого вещества вычисляют по Формуле    ^

^у%

где:    А    -    количество вещества, найденное по калибровочному

графику;

т- объем пиплиэируемого раствора (вытяжка), м;;

\f ^ объеи растворе, нанесённый на пластинку, мл.

Чувствитолыюоть мотода. Препараты наносили на листья растений, a таило вносили в гомогенат из растений (были использованы натриивой соль и бутиловый эфир 2,4-Д). Как называлось выир, чувствитолыюоть проявления пптей на плесу инке при использовании УФ-оиотн - 0,1-0,2 мч*', з при опрыскивании раствором КШ1О4 - 1-2 М}(Г.