«УТВЕРЖДАЮ»

Заместитель Министра

ранения - Главный ценный санитарный врач Беларусь

В.И.Качан 2010г. ионный №091 -0610

МЕТОДЫ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ПРОДУКЦИИ. ПРЕДНАЗНАЧЕННОЙ ДЛЯ ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ

Инструкция по применению

Учреждение-разработчик:    государственное    учреждение

«Республиканский научно-практический центр гигиены»

Авторы:    И.П.Щербинская,    Н.В.Дудчик,    Т.С.Трешкова,    В.В.Трейлиб,

О.Е.Шедикова.

Минск-2010

2

ГЛАВА 1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1.    Настоящая Инструкция по применению «Методы санитарномикробиологического контроля продукции, предназначенной для детей и подростков» (далее - Инструкция) устанавливает методы определения показателей микробиологической безопасности игрушек, формующихся масс и красок, наносимых пальцами, а также щеток зубных, массажеров для десен, изделий санитарно-гигиенических разового использования, аналогичных изделий для ухода за полостью рта и др.

2.    Настоящая Инструкция предназначена для лабораторий учреждений, осуществляющих государственный санитарный надзор за качеством и безопасностью продукции, предназначенной для детей и подростков, а также испытательных лабораторий, аттестованных в установленном порядке и аккредитованных на проведение данного вида исследований.

ГЛАВА 2

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РЕАКТИВЫ

3. Оборудование

Анализатор потенциометрический с погрешностью измерений pH ±0,1 (рН-метр)

Аппарат для встряхивания жидкости в колбах или пробирках

Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру (45±0,5) °С Весы лабораторные квадрантные 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г Дистиллятор электрический Лупа с пятикратным увеличением Микроскоп световой биологический с увеличением 900 -1000'

Прибор вакуумного фильтрования Прибор для счета колоний бактерий ПСБ Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные Стерилизатор сухожаровой с автоматической регулировкой температуры (100 - 220)°С Термометр (0 - 100) °С, цена деления 1 °С

11

К 90 см³ основы среды добавляют асептически 5,0 см³ желточной эмульсии и стерилизованные фильтрованием через мембранный фильтр растворы: 6,3 см³ раствора глицина концентрации 200 г/дм³, 5,0 см³ раствора пирувата натрия концентрации 200 г/дм³ и 1,0 см³ раствора теллурита калия концентрации 10 г/дм³; хранят при температуре (+4 - 10)°С не более 48 часов.

Маннитно-солевой агар: в колбу с 1 дм³ дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 75,0 г натрия хлорида безводного, 10,0 г маннита. Все ингредиенты растворяют в воде, затем вносят 2,5 см³ 1%-ного раствора фенолового красного, тщательно перемешивают, устанавливают pH (7,6±0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, прибавляют ai'ap микробиологический, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 14 сут.

Допускается использовать среду № 10 сухую (для индетификации стафилококков).

Среда Гисса с маннитом и мальтозой:    в    колбу    с    1    дм³

дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативною сухого или Бактофока-МК, 5,0 г натрия хлорида безводного, 10,0 г маннита или мальтозы. Все ингредиенты растворяют в воде, затем вносят 2,5 см³ 1%-ного раствора фенолового красного, тщательно перемешивают, устанавливают pH (7,6±0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, прибавляют заранее замоченный агар микробиологический, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при температуре (115±1) °С в течение 15 мин; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 14 сут.

ГЛАВА 4

ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО

АНАЛИЗА

13.    При отборе проб следует руководствоваться требованиями действующих ТИПА.

14.    Пробы изделий для микробиологического анализа отбирают до отбора проб для физико-химических, органолептических и других видов испытаний с соблюдением правил асептики, чтобы исключить вторичное загрязнение продукта.

15.    Подготовка проб для проведения микробиологического анализа

15.1.    Для подготовки к анализу следует использовать образцы испытуемых изделий, не подвергавшихся внешнему воздействию.

15.2.    Отбирают (10,0±0,1) г (см³) средней пробы с соблюдением правил асептики и помещают в стеклянные колбы или флаконы.

12

содержащие (90±1) см' физиологического раствора, содержимое тщательно перемешивают.

15.3.    Взятие смывов производят стерильным ватным увлажненным в физиологическом растворе тампоном с поверхности площадью 1 Ох 10 см². Тампон помещают в 100 мл стерильного физиологического раствора, содержимое тщательно перемешивают.

15.4.    Получают первое разведение подготовленной пробы, в 10 см³ которой содержится 1 г (1 см², 1 см³) образца - 1:10(10*'). 1 см³ материала из первого разведения переносят в пробирку с 9 см³ стерильного физиологического раствора, перемешивают новой стерильной пипеткой и получают второе разведение 1:100 (10*²). 1 см³ из второго разведения переносят в следующую пробирку с 9 см³ стерильного физиологического раствора, перемешивают новой стерильной пипеткой и получают третье разведение 1:1000 (10*³) и т.д. В результате исследуемая продукция оказывается разведенной в 100 (10*²), 1000 (10*³) и более раз. Полученные разведения используют для посевов.

15.5.    Анализ подготовленных образцов должен быть выполнен в течение 30 мин. При невозможности выполнения этого условия анализ допускается проводить не позже чем через 3 часа после подготовки проб, сохраняя их в холодильнике при (+4 -10) °С.

ГЛАВА 5 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

16.    При определении показателей микробиологической безопасности

игрушек используют стандартизированные методы микробиологического посева. Определяют следующие группы микроорганизмов: мезофильные аэробные    и    факультативно-анаэробные микроорганизмы, дрожжи,

дрожжеподобные и плесневые грибы, бактерии семейства Enterobacteriaceae. бактерии вида Staphylococcus aureus, бактерии вида Pseudomonas aeruginosa.

В микробиологических лабораториях, осуществляющих контроль качества и безопасности игрушек, допускается применение импедансных методов    для    проведения исследований с использованием

микробиологических анализаторов в соответствии с нормативными документами, утвержденными в установленном порядке.

17.    Определение общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (МАФАнМ)

17.1. Сущность метода

Метод основан на выявлении и количественном подсчете всех выросших колоний микроорганизмов при культивировании посевов в аэробных условиях при температуре (30±1) °С в течение (72±3) часов и в

13

последующем пересчете их количества на 1 г(1 см², 1 см³) исследуемого образца.

17.2.    Проведение анализа

Метод глубинного посева:

исследуемый материал в количестве 1 см³ из соответствующего разведения вносят стерильной пипеткой в две параллельные чашки Петри и не позже, чем через 15 мин заливают расплавленной и охлажденной до (45±1) °С одной из сред для культивирования аэробных и факультативноанаэробных бактерий в количестве (10-15) см³. Быстро перемешивают, аккуратно вращая чашку по поверхности стола. После застывания среды чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (30±1) °С в течение (72±3) часов.

Двухслойный агаровый метод:

исследуемый материал в количестве 1 см³ из соответствующего разведения вносят стерильной пипеткой в две пробирки с 4 см³ одной из сред для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, предварительно расплавленной и охлажденной до температуры (45±1) °С. Быстро перемешивают содержимое пробирок и переносят в две параллельные чашки Петри с застывшей средой для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, распределяя его равномерно по поверхности среды. После застывания чашки перемещают в термостат вверх дном и термостатруют при температуре (30±1) °С в течение (72±3) часов.

17.3.    Обработка и выражение результатов

Результаты оцениваются по каждой пробе отдельно.

Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 300 колоний микроорганизмов, колонии суммируют и вычисляют среднее арифметическое значение из посевов одного разведения.

Допускается учитывать колонии с помощью лупы с пятикратным увеличением.

Полученное среднее арифметическое число колоний округляют следующим образом:

-    если число меньше 100, его округляют до ближайшего числа, кратного 5;

-    если число больше 100 и его последняя цифра 5, его округляют до ближайшего числа, кратного 20;

-    если число больше 100 и его последняя цифра не 5, его округляют до ближайшего числа, кратного 10.

Общее количество мезофильных аэробных и факультативноанаэробных микроорганизмов (X) вычисляют по формуле:

14

_4r_ax\0^N л —-

Я

где а - округленное среднее арифметическое число колоний; q - объем посевного материала, внесенного в чашки, см³;

N - степень десятикратного разведения образца продукта.

Результаты анализа выражают числом (от 1,0 до 9,9) xlO^N, где «N» -соответствующая степень десятикратного разведения продукта.

Если среднеарифметическое значение числа колоний, выросших на чашках Петри, в посевах одного разведения меньше 15, то результаты выражают следующим образом: количество микроорганизмов меньше 15

умножают на — КОЕ/г(см², см³).

я

Если на чашках с разведением 1:10 не обнаружено роста микроорганизмов, то результаты выражают следующим образом: менее 1,0x10' КОЕ/г (см², см⁵).

Если на чашках выросло более 300 колоний, то учитывают результаты на чашках с последующим разведением.

18. Определение общего количества дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов

18.1.    Сущность метода

Метод основан на выявлении и количественном подсчете всех выросших колоний микроорганизмов, типичных по макро- и (или) микроскопической морфологии, на селективной агаризованной питательной среде Сабуро, при культивировании посевов при температуре (24±1) °С в течение (120±3) часов и в последующем пересчете их количества на 1 г (1 см², 1 см³) исследуемого образца.

18.2.    11роведение анализа

Метод глубинного посева:

исследуемый материал в количестве 1 см³ из соответствующего разведения вносят стерильной пипеткой в две параллельные чашки Петри и не позже, чем через 15 мин заливают расплавленной и охлажденной до (45±1) °С средой Сабуро в количестве (10 - 15) см³. Быстро перемешивают, аккуратно вращая чашку по поверхности стола. После застывания среды чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (24±1) °С в течение (120±3) часов.

Двухслойный агаровый метод:

исследуемый материал в количестве 1 см³ из соответствующего разведения вносят стерильной пипеткой в две пробирки с 4 см³ предварительно расплавленной и охлажденной до температуры (45±1) °С агаризованной среды Сабуро. Быстро перемешивают содержимое пробирок и переносят в две параллельные чашки Петри с застывшей агаризованной средой Сабуро, распределяя его равномерно по поверхности среды. После

15

застывания чашки перемещают в термостат вверх дном и термостатируют при температуре (24±1) °С в течение (120±3) часов.

18.3. Обработка и выражение результатов

Предварительный учет типичных колоний проводят через (72±3) часа термостатирования посевов, а окончательный - через (120±3) часов. Результаты оцениваются по каждой пробе отдельно.

На поверхности плотной среды рост и развитие дрожжей характеризуется появлением плоских или выпуклых колоний белого или кремового, иногда серо-белого цвета. В глубине агдра дрожжи образуют чечсвицеобразн ые колон и и.

Развитие плесневых грибов характеризуется появлением сметанообразных, слизистых колоний различной окраски с последующим опушением.

Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 5 до 150 колоний дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов, колонии суммируют и вычисляют среднее арифметическое значение из посевов одного разведения.

Допускается учитывать колонии с помощью лупы с пятикратным увеличением.

Полученное среднее арифметическое число колоний округляют как описано в п. 17.3.

Общее количество дрожжей, дрожже!юдобных и плесневых фибов (X) вычисляют по формуле:

Ч

где а - округленное среднее арифметическое число колоний; q - объем посевного материала, внесенного в чашки, см³;

N - степень десятикратного разведения образца продукта.

Результаты анализа выражают числом (от 1,0 до 9,9) *10^N, где «N» -соответствующая степень десятикратного разведения продукта.

Если среднее арифметическое значение числа колоний дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов меньше 5, то результаты выражают следующим образом: общее количество дрожжей, дрожже подобных и/или

плесневых тибов меньшее 5 у множают на — КОЕ/г(см², см³).

ч

Если на чашках с разведением 1:10 не обнаружено роста дрожжей, дрожжеподобных и плесневых фибов, то результат записывают так: «не обнаружены».

Если на чашках выросло более 150 колоний дрожжей, дрожжеподобных и плесневых фибов, то учитывают результаты на чашках с последующим разведением.

19. Выделение и идентификация бактерий семейства Enterobacteriaceae

16

19.1. Сущность метода

Метод основан на выявлении бактерий семейства Enterobacteriaceae с использованием накопительных и селективных питательных сред с дальнейшей идентификацией выявленных бактерий по нижеследующим биохимическим тестам.

К семейству Enterobacteriaceae относятся грамотри нательные неспорообразующие палочки, которые дают отрицательную оксидазную реакцию, ферментируют глюкозу с образованием кислоты и восстанавливают нитраты в нитриты.

19.2 Проведение анализа

Подготовленный образец в количестве 10 см³ вносят стерильной пипеткой во флакон с 90 см³ одной из питательных сред обогащения для бактерий семейства Enterobacteriaceae.

Содержимое перемешивают и инкубируют при температу ре (37±1) °С в течение (24-48±3) часов. При наличии признаков роста на средах (помутнение среды, изменение ее цвета) делают пересев петлей обогащенной культуры на среду Эндо, разлиту ю в две стерильные чашки Петри в количестве (10 - 15) см³, которые инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24-48±2) часов.

Если после инкубации на среде Эндо отмечен рост колоний темнокрасного цвета с металлическим блеском и без него или розовых, бесцвегных, выпуклых, диамегром (2-4) мм, т.е. подозрительных на принадлежность к семейству Enterobacteriaceae, проводят подтверждающие и де нт и ф и циру ющие тесты.

Петлей снимают подозрительные колонии (каждую отдельно) и готовят мазки на предметных стеклах для окраски по Граму. Мазки фиксируют трехкратным проведением над пламенем. На препарат накладывают полоску фильтровальной бумаги, на нее наливают пипеткой (0,5 - 1,0) см³ карболового раствора генциана фиолетового на 1 мин. Затем бумагу снимают, на препарат пипеткой наливают (0,5 - 1,0) см³ раствора Люголя, выдерживают в течение 1 мин, препарат тщательно промывают спиртом этиловым ректификатом, затем - водой дистиллированной и докрашивают (1 - 2) мин раствором Фуксина Циля, предварительно разведенным водой дистиллированной в объемном соотношении 1:10. Учитывают наличие грамотрицательных неспорообразующих палочек (окрашенных в розовый цвет).

Колонии, выросшие на среде Эндо, подозрительные по морфологии (каждую отдельно), пересевают петлей на одну из скошенных сред для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных бактерий. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение (24±3) ч.

Полученные чистые культуры наносят штрихом на фильтровальную бумагу, предварительно смоченную реактивом для определения цитохромоксидазы. В месте внесения бактериальной массы бумага не

3

Термостаты электрические суховоздушные с автоматическим терморегу лятором до 50 С°, позволяющие поддерживать заданную температуру с погрешностью ±1 °С Холодильник бытовой Электроплитка бытовая

4.    Материалы

Бумага индикаторная универсальная

Бумага фильтровальная лабораторная

Вата медицинская гигроскопичная

Картон для предварительной фильтрации марки КФБЖ

Картон для предварительной фильтрации марки КФМП

Марля медицинская

Колбы плоскодонные конические или круглые разной

вместимости

Ножницы

Петли бактериологические

Пинетки разной вместимости 2 класса точности

Пробирки бактериологические типов П1 и П2

Спиртовки лабораторные стеклянные

Стекла предметные

Стекла покровные

Ступки фарфоровые

Цилиндры на 100 - 250 см³

Флаконы стеклянные градуированные вместимостью 100, 200, 500 см⁵

Стандарт титры для приготовления образцовых буферных растворов для рН-метрии Штативы для пробирок Шпатели стеклянные Чашки Петри 90-100 мм

5.    Питательные среды и реактивы

Лгар микробиологический в порошке или волокнах Агар сухой питательный для культивирования микроорганизмов Агар Эндо

Бульон мясопептонный

4

Бром крезол о вы й пурпурный (индикатор)

Вода дистиллированная Вода мясная

Гидролизат казеина панкреатический

Глюкоза

Глицерин

Желчь сухая медицинская Калий сернокислый Калия нитрат

Калий фосфорнокислый однозамещенный

Калий фосфорнокислый двузамещенный

Калия теллурит, раствор с массовой концентрацией 2%

Кислота соляная, раствор с массовой концентрацией 0,1

моль/дм³

Кислота сул ьфа н иловая Кислота тиогликолевая Кислота уксусная ледяная Кислота карболовая (фенол)

Литий хлористый, 6-водный Магний хлористый Малахитовый зеленый, индикатор Маннит Мальтоза

Масло вазелиновое медицинское Масло иммерсионное Метиленовый синий

Натрия гидроокись, раствор с массовой концентрацией 0,1 моль/дм³

Натрия резазурнн, раствор массовой концентрацией 1,0

г/дм³

Натрий сернистокислый, раствор с массовой концентрацией 1,0 г/дм³ Натрия тиогликолят Натрий хлористый

Натрий фосфорнокислый однозамещенный Натрий фосфорнокислый двузамещенный Ы,Ь1-диметил-п-фенилендиамин дигидрохлорид, раствор массовой концентрации 1 %

1-Нафтилам и н

1-Нафтол, спнртовый раствор

Основа бактериологическая питательных сред сухая (Вактофок-МК)

5

Пептон сухой ферментативный

Питательная среда № 1 (для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов), сухая Питательная среда № 2 (для выращивания грибов), сухая Питательная среда № 3 (для обогащения бактерий семейства Enterobacteriaceae), сухая Питательная среда № 6 (для определения ферментации глюкозы)

Питательная среда № 7 (для определения восстановления нитратов в нитриты)

Питательная среда № 8 (для выращивания Р. aeruginosa и S. aureus), сухая

Питательная среда № 9 (для выявления пигмента пиоцианина Р. aeruginosa), сухая Питательная среда № 10 (для идентификации S. aureus), сухая

Плазма кролика, сухая цитратная, для реакции плазмокоагуляции

Растворы и реактивы для окраски мазков по Граму Реакгив Грисса

Спирт этиловый ректификованный Спирт этиловый ректификованный технический Феноловый красный, индикатор Цистин (цистеин)

6.Штаммы микроорганизмов

Штамм Staphylococcus aureus, обладающий ферментом коагулазой, полученный из государственных коллекций

Допускается применение оборудования и материалов с аналогичными по назначению техническими и метрологическими характеристиками, а также использование других коммерческих питательных сред и диагностических препаратов аналогичного назначения для проведения исследований в соответствии с данным документом. При их применении следует руководствоваться рекомендациями изготовителя. Питательные среды и биологические препараты импортного производства должны иметь международный сертификат качества ИСО 9000 или EN 29000, питательные среды и препараты отечественного производства должны вырабатываться по нормативной документации, утвержденной в установленном порядке.

6

ГЛАВА 3

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И РЕАКТИВОВ

7.    Подготовку и стерилизацию посуды для микробиологического анализа производят согласно требованиям СТБ ГОСТ Р 51446-2001 «Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований».

8. При взвешивании компонентов сред и испытуемых образцов допускается погрешность 0,1 %.

9.    Для приготовления растворов реактивов и питательных сред используют дистиллированную воду, если нет специальных указаний, и реактивы квалификации «х.ч.» или «ч.д.а.».

10.    Необходимое значение водородного показателя pH (далее - pH) растворов и питательных сред устанавливают с помощью раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 0,1 моль/дм' или раствора кислоты соляной объемной долей 0,1 моль/дм'. pH растворов и питательных сред определяют с помощью pH-метра. Ориентировочное определение pH растворов и питательных сред допускается проводить с помощью индикаторной бумаги.

11.    Приготовление растворов реактивов

11.1.    Изотонический 0,85    %    раствор    хлористого    натрия

(физиологический раствор)

0,85 г хлористого натрия растворяют в 100 см³ дистиллированной воды и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.

Хранят при комнатной температу ре не более 14 сут.

11.2.    Раствор фенолового красного массовой концентрации 1 %

0,1 г феноловою красною растирают в ступке, добавляя небольшими порциями 2,82 см³ 0,1 М раствора натрия гидроокиси и 20 мл 96% спирта. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см* и доводят водой до метки.

Хранят во флаконе из темного стекла в холодильнике при температуре (+4 - 10) °С в течение 7 суток.

11.3.    Раствор малахитового зеленого массовой концентрации 0,5 %

0,5 г малахитового зеленого помещают в стерильный флакон,

заливают 100 см³ горячей дистиллированной воды и помещают на 24 ч в термостат с температурой (37±1) °С, периодически перемешивая.

Хранят во флаконе из темного стекла в холодильнике при температуре (+4 - 10) °С в течение 7-10 суток.

11.4.    Приготовление реактива Грисса

Во флакон со 100 см' водного раствора кислоты уксусной с массовой долей 12 % вносят 10,0 г сухого реактива Грисса, растворяют при перемешивании.

7

При отсутствии сухого реактива Грисса его готовят следующим образом:

-    раствор № 1: 0,5 г кислоты сульфаниловой растворяют в 30 см³ ледяной уксусной кислоты, прибавляют 100 см³ воды дистиллированной, фильтруют через бумажный фильтр. Раствор годен в течение месяца;

-    раствор № 2: 0,1 г 1-нафтиламина растворяют в 100 см³ кипящей дистиллированной воды, охлаждают, прибавляют 30 см³ ледяной уксусной кислоты, фильтруют через бумажный фильтр. Раствор годен в течение 7 суток.

Перед применением смешивают равные объемы растворов № 1 и № 2.

11.5. Реактив для определения наличия фермента цитохромоксидазы

Раствор № 1. 1,0 г 1-нафтола растворяют в 100 см³ спирта этилового.

Раствор № 2. 1,0 г Ы,Ы-диметил-п-фенилендиамин д и гидрохлорида растворяют в 100 см³ дистиллированной воды.

Перед употреблением смешивают растворы №1 и №2 в соотношении

2:3.

Хранят во флаконах из нейтрального светозащитного стекла при температу ре (4 - 10) °С в течение 14 сут.

12. Приготовление питательных сред

12.1.    Среды для культивирования аэробных и факультативноанаэробных бактерий

Мясо-нентонный агар с глюкозой: в колбу с 1 дм³ мясонептонного бульона (далее - МПБ) вносят 10,0 г пептона, 5,0 г натрия хлорида, 1,0 г глюкозы. Все ингредиенты растворяют, прибавляют 13,0 г агара микробиологического, нагревают смесь на электроплитке до полного растворения агара при перемешивании, фильтруют в горячем виде через воронку с ватно-марлевым или бумажным фильтром, устанавливают pH (7,3±0,1), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 1 месяца. Вместо МПБ можно использовать перевар Хоттингера с концентрацией аминного азота не менее 100 мг/дм³.

Питательный агар «МК» с глюкозой: в колбе с 1 дм³ воды дистиллированной растворяют 20,0 г Бактофока-МК, 5,0 г натрия хлорида,

1,0 г глюкозы, прибавляют 13,0 г агара микробиологического, нагревают смесь на электроплитке до полного растворения агара при перемешивании, фильтруют в горячем виде через воронку с ватно-марлевым или бумажным фильтром, устанавливают pH (7,3±0,1), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (121 =fc 1) °С в течение 20 мин; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 1 месяца. Допускается использовать агар сухой питательный для культивирования микроорганизмов или питательную среду № 1 сухую.

12.2.    Среды для выращивания плесневых грибов и дрожжей (Сабуро)

8

Среда для выращивания плесневых грибов и дрожжей (Сабуро): в колбу с 1 дм* дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 40,0 г глюкозы или мальтозы, прибавляют 13,0 г агара микробиологического, нагревают смесь на электроплитке до полного растворения всех компонентов при перемешивании, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH (5,8±0,2), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (112±1 )°С в течение 20 мин.; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 1 месяца. Допускается использовать питательную среду № 2 сухую.

Среда Сабуро жидкая: в колбу с 1 дм* дистиллированной воды вносят

10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 40,0 г глюкозы или мальтозы, нагревают смесь на электроплитке до полного растворения всех компонентов при перемешивании, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH (5,8±0,2), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (112±1) °С в течение 20 мин.; хранят при температуре (+4 -10) °С не более 14 сут.

12.3.    Среды обогащения для бактерий семейства Enterobacteriaceae

Среда для выращивания бактерий семейства Enterobacteriaceae: в

колбу с 1 дм* воды дистиллированной вносят 20,0 г пептона сухого ферментативного или Бактофока-МК, 7,5 г натрия фосфат дву замещенного, 2,5 г калия фосфорнокислого однозамещенного. Смесь перемешивают при нагревании до полною растворения солей, вносят 10,0 г глюкозы, прибавляют 8 см* 1%-ного водного раствора феноловою красного и 3 см* 0,5%-ного водною раствора малахитовою зеленого, устанавливают pH (7,5±0,1), нагревают до полного растворения компонентов, фильтруют через бумажный фильтр, разливают во флаконы по 100 см и стерилизуют при температуре (121±1) С° в течение 20 мин; хранят при температу ре (+4 -10)°С не более 14 сут.

Среда Мак-Конки: в колбу с 1 дм* воды дистиллированной вносят 20,0 г пептона сухого ферментативного или Бактофока-МК, 10,0 г лактозы, 5,0 г желчи сухой, 0,01 г бромкрезолового пурпурного. Все ингредиенты растворяют в воде, нагревают до полного растворения компонентов, устанавливают pH (7,5±0,1), фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы по 100 см* и стерилизуют при температуре (121±1 )°С в течение 20 мин.; хранят при температу ре (+4 - 10) °С не более 14 сут.

Допускается использовать среду № 3 сухую.

12.4.    Питательные среды для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae

Агар Эндо: готовят из среды Эндо сухой по указанию (прописи) на этикетке; хранят при температу ре (+4 - 10) °С не более 5 сут.

Среда для определения ферментации глюкозы: в колбу с 1 дм* дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК. 5,0 г хлорида натрия, растворяют при нагревании, вносят

9

40.0    г глюкозы, прибавляют 8 см³ 1%-ного водного раствора фенолового красного, устанавливают pH (7,4+0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки с поплавками по (4 - 5) см³ и стерилизуют при температуре (121+1) °С в течение 20 мин. По окончании стерилизации среду как можно скорее охлаждают; хранят при температуре (+4-10) °С не более 14 сут. Допускается использовать среду № 6 сухую.

Среда для определения восстановления нитратов в нитриты: в колбу с 1 дм³ дистиллированной воды вносят 5,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 5,0 г натрия хлорида, 1,5 г калия нитрата, растворяют при перемешивании и нагревании, устанавливают pH (7,2±0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки по (4 - 5) см³ и стерилизуют при температуре (121+1 )°С в течение 20 мин; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 14 сут. Допускается использовать среду № 7 сухую.

Среда Хью-Лейфсена: в колбу с 1 дм³ дистиллированной воды вносят

2.0    г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 10,0 г глюкозы,

5.0    г натрия хлорида, 0,3 г калия фосфорнокислого дву замещенного, добавляют 3,0 г агара микробиологического, растворяют при перемешивании и нагревании, кипятят на электроплитке в течение 2-3 мин, устанавливают pH (7,4±0,1), фильтруют через ват но-марлевый фильтр, разливают в пробирки но 10-15 см³ и стерилизуют при температуре (121 + 1 )°С в течение 20 мин. Цвег среды до автоклавирования - синий, после - травянисто-зеленый. Хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 14 сут.

12.5. Среды для обогащения бактерий вида Pseudomonas aeruginosa

Мясо-пептонный бульон с глюкозой: в колбу с 1 дм' мясной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого, 5,0 г натрия хлорида, 1,0 г глюкозы, растворяют при перемешивании и нагревании, устанавливают pH (7,3±0,2), фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы по 100 см и стерилизуют при температуре (121+1) °С в течение 20 мин; хранят при температу ре (+4 - 10) °С не более 14 сут.

Питательный бульон «МК» с глюкозой:    в колбу с 1 дм³

дистиллированной воды вносят 10,0 г Бактофока-МК, 1,0 г глюкозы, 5,0 г натрия хлорида. Все ингредиенты растворяют при перемешивании и нагревании, устанавливают pH (7,3±0,2), фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы по 100 см’ и стерилизуют при температуре (121+1) °С в течение 20 мин. Хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 14 сут.

Среда для обогащения бактерий вида Pseudomonas aeruginosa: в колбу с 1 дм дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативною сухого или Бактофока-МК, 5,0 г натрия хлорида, 2,5 г калия фосфорнокислого дву замещен ною. растворяют при перемешивании и

10

нагревании, вносят 2,5 г глюкозы, устанавливают pH (7,3±0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают во флаконы по 100 см* и стерилизуют при температуре (121 ±1 )°С в течение 20 мин; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 14 сут. Допускается использовать среду № 8 сухую.

12.6.    Среды для идентификации бактерий вида Pseudomonas aeruginosa

Среда для выявления пигмента пиоцианина (Среда Кинг-А): в колбу с

1 дм* дистиллированной воды вносят 20,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 5,0 г магния хлорида безводного, 1,0 г калия сульфата безводного. Все ингредиенты растворяют в воде и оставляют на 15 мин. Затем вносят 10,0 см* глицерина, тщательно перемешивают, растворяют при нагревании, у era на вливают pH (7,2±0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, прибавляют агар микробиологический, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 14 сут. Допускается использовать среду № 9 сухую.

12.7.    Среды для обогащения бактерий вида Staphylococcus aureus

Солевой бульон: в колбу со 100 см* мясо-пептонного бульона вносят

6.0    г хлорида натрия, устанавливают pH (6,9±0,1), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 14 сут. Допускаегся использовать среду № 8 сухую.

12.8.    Среды для идентификации бактерий вида Staphylococcus aureus

Желточно-солевой агар:

эмульсия яично-желточная:    куриное    яйцо протирают ватой,

смоченной этиловым спиртом, помещают в стерильную чашку Петри, стерильным инструментом пробивают с противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно отверстие полностью удаляют белок, затем, увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу с 50 см* физиологического раствора, содержимое встряхивают до однородной массы; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 72 ч.

1 дм* мясо-пептон ного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95,0 г хлористого натрия, охлаждают до температуры (45±1) °С и добавляют 100 см* яично-желточной эмульсии. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри; хранят при температуре (+4 - 10) °С не более 5 сут.

Агар Байрд-Паркер: в 1 дм* мясопептонного бульона вносят 17,9 г лития хлорида, 15 г агара микробиологического в волокнах или порошке,

5.0    г мясного экстракта и 5,0 см* экстракта дрожжевого, перемешивают и нагревают до полного растворения компонентов. Охлаждают до 50-60 °С, устанавливают pH (6,9±0,1), разливают во флаконы по 100 см* и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.