ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ

П. И. Барышников, В. В. Разумовская

- САНКТ-ПЕТЕРБУРГ • •МОСКВА-• КРАСНОДАР -•2015-

Краткий словарь использованных ветеринарных терминов    655

MIIIWIMinHIUIIIH!W»UIU|IIIIWIlll№initn!lffilMllHIIIIWIIIMIIlW11MimiilU|llf|MlM|IIII|llilMIIHHU|llWIH'IMttWlMillMUIHlHMIIIMIUtllNMtllHU(llMn1I|№l

В, безоболочечные — вирусы, в структуре которых отсутствует липопротеидная оболочка.

В. оболочечные — вирусы, в структуре которых присутствует липопротеидная оболочка.

Вирусоскопия (вирусы 4- вкорео ~~~ смотрю, наблюдаю) — ме~ тод микроскопического изучения морфологии вирусов»

Гемаггдютинация (греч. haima — кровь + agglutinatio —

склеивание) — склеивание и выпадение в осадок эритроцитов под воздействием вирусов, бактерий, токсинов идр., способных адсорбироваться на поверхности эритроцитов, а также ге-магглютикинов.

Гемадсорбция (греч. haima — кровь + adsorbtio ~~ поверхностное поглощение) — способность культур клеток, зараженных вирусами, адсорбировать эритроциты различных животных, что объясняется включением в плазматическую мембрану синтезирующихся вирусных белков.

Диагностика (греч. diagnostics — способный распознавать) — раздел клинической ветеринарии о методах исследования животных для распознавания их болезней и состояния организма с целью назначения необходимого лечения и профилактических мероприятий.

Диагностический набор — набор стандартных препаратов, используемых для постановки диагноза (антиген, специфическая и контрольная сыворотки идр.).

ДНК-зондов метод — метод генодиагностики, основанный на способности меченой одноцепочечной молекулы ДНК взаимодействовать с комплементарной ей молекулой нуклеиновой кислоты определенного вируса с образованием двухцепочечной структуры.

ДНЕ-содержащие вирусы — вирусы, имеющие один тип нуклеиновой кислоты — ДНК, у большинства она представлена двухцепочечной структурой, у некоторых — одной цепью.

Идентификация (лат. identlftco —- отождествляю) — признание тождественности, опознание-определение видовой (типовой) принадлежности микроорганизма на основании всестороннего изучения его свойств.

Еммуноферментный анализ — группа методов, позволяющих выявлять комплекс антиген — антитело с помощью субстрата, который расщепляется ферментом (пероксидазой, щелочной фосфатазой идр.) с появлением окрашивания.

Инактивация вирусов (лат. inaetivus —- неактивный) — уничтожение инфекционной активности вирусов путем повреждения генома физическим или химическим воздействием.

656    Лабораторная    диагностика вирусных болезней животных

l4ri«||f||IIJiriP!|liftMIII|IJ lljflilll(il|llliMIJ|IFri|llll|l||llillliC|l||lllfld|im!IFf||l|f|IHfllfiHIFE|f||illl !4llll|||IIIIBIII(|ililiir]rLIJI№EIIHMiHJflFIIIII||IIJIIIlJ!IHI!RHI6CIIIIIIII|ll|f IdirfllllUlHimiEErillllieifl

Индикация возбудителя инфекции {лат, indicatio — указание)— выявление и идентификация патогенных микроорганизмов в различных объектах.

Инокуляция возбудителя (лат. inoculatio — прививка) — введение возбудителя путем инъекции (искусственное заражение или внесение его в организм животного членистоногими переносчиками при укусах).

Консервирование вирусов (лат. conservare — сохранять) — общее название методов воздействия физическими и (или) химическими факторами на какие-либо объекты с целью длительного сохранения в них вирусов.

Контаминация (лат. contaminatio — смешение) — обсеменение поверхности тела животного, предметов ухода, почвы, воды, кормов, биопрепаратов и других объектов патогенными микроорганизмами.

Культивирование вирусов — выращивание вирусов в искусственных условиях.

Культуры клеток (клеточные культуры) — клетки многоклеточного организма, живущие вне его в искусственно созданных условиях среды.

Куриный эмбрион — оплодотворенное куриное яйцо, выдержанное в инкубаторе.

Лабораторные животные — животные, используемые в лабораториях при проведении исследований (мыши, крысы, кролики, морские свинки, хомяки, голуби и др.).

Лнофилизация (греч. 1уо — растворяю + phileo — люблю) — высушивание предварительно замороженного материала в глубоком вакууме.

Моноклональные антитела — строго специфические антитела, способные выявить минимальные различия в химическом составе и пространственной конфигурации молекул, являются продуктом отдельных клонов антителопродуцирующих клеток.

Парные сыворотки — сыворотки, взятые в самом начале заболевания и 2...3 недели спустя. Повышение титра антител в 4 раза и более считается основой положительной реакции.

Пассаж (фр. passage — переход) — последовательное заражение восприимчивых объектов (животные, куриные эмбрионы, культуры клеток) микроорганизмами.

Полимеразная цепная реакция (от англ. Polymerase Chain Reaction, ПЦР) — метод генодиагностики, основанный на многократном увеличении копий строго определенных фрагментов

Краткий словарь использованных ветеринарных терминов    657

..................................................................................................................................................................................................................

молекулы ДНК вируса при помощи фермента термостабильной ДНК-полимеразы.

Реакция гемагглютинации (РГА) — метод обнаружения и идентификации вирусов, основанный на способности многих вирусов, обладающих тканевым тропизмом, агглютинировать эритроциты определенных видов животных.

Реакция иммуиофлуоресценции (РИФ) (лат. fluorescens — светящийся) — серологическая реакция, основанная на взаимодействии антиген — антитело, при этом один из компонентов, участвующий в реакции, связан с флуоресцирующим красителем.

Реакция нейтрализации (PH) — метод идентификации вируса, основанный на феномене потери им инфекционности в результате взаимодействия со специфическими антителами.

Реакция связывания компемента (РСК) — метод серологического исследования, основанный на способности образующегося комплекса антиген — антитело связывать комплемент, что выявляется по отсутствию гемолиза при добавлении гемолизина и эритроцитов.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) — метод идентификации вируса или выявления противовирусных антител в сыворотке крови, основанный на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов вирусом, в присутствии специфических к нему антител.

РНК-содержащие вирусы — вирусы, имеющие один тип нуклеиновой кислоты — РНК, у большинства она представлена одной цепью, у некоторых — двухцепочечной структурой.

Серовариант — самостоятельная группа внутри определенного вида и серогруппы (серотипа) микроорганизмов, обусловленная наличием антигенов, отличающихся от антигенов других микроорганизмов этого вида и серогруппы (серотипа), что выявляется с помощью серологических реакций.

Серогруппа (серотип) — самостоятельная группа внутри определенного вида микроорганизмов, обусловленная наличием антигенов, отличающихся от антигенов других микроорганизмов этого вида, что выявляется с помощью серологических реакций.

Серологические реакции — реакции, широко используемые при постановке диагноза инфекционных болезней, методы обнаружения антител и антигенов в крови и других тканях.

Сыворотка крови (лат. serum — сыворотка + sanguis — кровь) — составная часть крови, представляющая собой плазму, из которой удалены форменные элементы и фибрин в процессе свертывания крови.

Лабораторная диагностика вирусных болезней животных

Тельца включения — своеобразные морфологические образования, обнаруживаемые» цитоплазме или ядрах клеток определенных тканей при некоторых вирусных инфекциях и состоящие из скопления вирионов и вирусных белков.

Термолабильность (греч. thermos ~~ теплый + лат. labilis — нестойкий) — неустойчивый к тепловому воздействию, изменяющийся при нагревании.

Термостабильность (греч. thermos — теплый + лат. stabilis — неизменный) — сохраняющий свои свойства при нагревании.

Титр вируса — концентрация инфекционных единиц вируса в определенном объеме материала.

Цитопатогеиыое действие вирусов (ЦПД, цитопатический эффект) — специфическая морфологическая деструкция (разрушение) и функциональная патология зараженных вирусами клеток в культурах.

Штамм (нем. Stamm — род, корень) — культура микроорганизмов одного вида с одинаковыми морфологическими и биологическими свойствами.

Элементарные тельца — см. Вирион (2, 3).

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ

СПИСОК

1,    Лабораторные исследования в ветеринарии. Вирусные» риккетсиозные и паразитарные болезни: справочник / шд ред. Б. И. Антонова. — М.: Агропромиздат, 1987. — 240 с.

2.    Бакулов, И. А, Эпизоотологический словарь-справочник/ И. А. Бакулов, Г. Г. Юрков» В. А. Ведерников {и др.]. — М.; Россеяьхозиздат» 1986,

8. Мымм, Э. М. Словарь ветеринарных микробиологических и вирусологических терминов / Э. М. Нымм, К. А. Петерсон, Э. А. Аавер [и др.]. — М.; Росагропромиздат, 1989.

1П11|1ПШ111Ш11М1Ш1!111111тП1[!111и№111]1Ш1Ш1[|111ШШШиШ111ШН11

ПРЕДМЕТНЫЙ

УКАЗАТЕЛЬ

Агар мясо-пептонный (МПА) 101, 109, 125, 326, 337, 444, 456, 476, 433, 542, 533 Альбумин бычий 7, 226, 613 Аппарат Киппа 126, 436 Бульон мясо-пептонный (МПБ) 73, 101, 106, 125, 326, 444, 456, 476, 433, 466, 542, 533 —    триптозо-фосфатный 519 Буфер вероналовый 35, 375 —    боратный 148 —    фосфатно-солевой 174, 315, 328, 561, 604 калий'фосфатный 231, 236, 407 —    карбонатно-бикарбонатный 335, 561, 604, 613 Гемолизин 25, 114, 300, 366, 507 Гемолитическая система (гемсистема) 25, 116, 216 Жидкость Руге 1 Об, 446 —    Карнуа 103 Иммуноасцитическая жидкость (ИАЖ) 34 Комплемент 27, 116, 216, 300, 370, 507

Метод вирусоскопии 66, 443, 543 —    Кербера 66 —    иммуноферментного анализа (ИФА) 33, 156, 173, 223, 233, 244, 314, 323, 335, 346, 406, 406, 436,561, 603, 609, 617 —    кофал-теста 514 перекрестного иммунитета 64 —    полимеразной цепной реакции (ПЦР) 130, 253, 307, 342, 416, 425, 625 —    Рида и Менча 66, 242, 267, 324, 330, 364, 500, 523, 552, 556 —    электронной микроскопии 327, 593 Окраска гистопрепаратов по Ленцу 80 —    Турбиной 584 ~~ Туревичу 31,584 —    мазков по Борману — Гайнуллиной 74 —    Михину 74 —    Морозову 100, 446 ~ Муромцеву 73 —    Пашену 100, 447 —    Селлерсу 74 Перевиваемая линия почки свиньи (СПЭВ) 70, 386, 392

---

661

uMiiiiuiiiuMfluiuMiiiuiuiuiiiiiiii

662    Лабораторная    диагностика    вирусных    болезней    животных

<1НМНШ1Н11141111 mill ИИ1IIIIIII Him IIК...........................................................................................................................................................................

СОДЕРЖАНИЕ

1. Болезни, общие для всех

или нескольких видов животных.............. 5

Ящур..........................................5

количественному определению антител к вирусу ящура в сыворотке крови животных (утверждены 10 февраля 1983 г., МЫ 15-6а)............5

1.2.    Методические указания по выделению и идентификации штаммов вируса ящура (одобрены и рекомендованы

15 октября 1973 г., б/н).......... 20

Бешенство.................. 72

1.3.    Методические указания

по лабораторной диагностике бешенства

(утверждены 27 февраля 1970 г,, б/н).....72

Болезнь Ауески................................82

1.4.    Методические указания по лабораторной

диагностике болезни Ауески животных (рекомендованы 18 мая 1978 г., б/н)......82

1.5.    Инструкция по применению набора для определения антител к гликопротеину g\

свиней методом конкурентного иммуноферментного анализа

«ZETECT-Серелиза-АУЕСКИ-Ат»........88

Оспа.........................................98

1.6. Методические указания по лабораторной диагностике оспы крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и верблюдов (утверждены 12 ноября 1985 г,, № 115-6а) . 98

664    Лабораторная    дишшсмит    вирусных    §мезтй    штатных

|IW«WWMIIll«^IIIHIIMIIIIl№Himil|IWMU!0HIIIIIIIIIIINIIi;HtinrtlMIVIHHIIIIHIIIUUIHIIIHtlllllltNltNmMIINll|*lliWlinillllUHIIIIllimillinWI№linNlllNKNllllfl№liniUin

Катаральная лихорадка крупного

рогатого скота» овец и коз.......................107

1.7. Методические указания по лабораторной диагностике катаральной лихорадки крупного рогатого скота, овец и коз (утверждены 11 июня 1986 г.» JSft 432*5) .. 107

2. Болезни лошадей ...... 123

Грипп ................ 123

Рмнонневмония......... 140

2.3.    Методические указания

по лабораторной диагностике ринопневмонии лошадей (утверждены 27 августа 1980 г., б/н)..... 140 Инфекционная анемия................. 145

2.4.    Инструкция по применению набора для диагностики инфекционной

преципитации (РДП)

(утверждена 24 марта 2009 г.)..... 145

3. Болезни крупного рогатого скота........... 153

Лейкоз ........ 153

3.1.    Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота (утверждены 23 июля 2000 г.»

№ 13-7*2/2180) ......... 153

3.2.    Инструкция да применению набора

173

ЛАБОРАТОРНАЯ

ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ

Составители:

П. И. Барышников,

В. В» Разумовская

Издание второе, исправленное

ДОПУЩЕНО

Министерством сельского хозяйства РФ в качестве учебного пособия для студентов вузов, обучающихся по направлению подготовки (специальности) «Ветеринария»

ДОПУЩЕНО

УМО вузов РФ по образованию в области зоотехнии и ветеринарии в качестве учебного пособия для студентов вузов, обучающихся по направлению подготовки (специальности) ¹ Ветеринария»

(квалификация (степень) «Ветеринарный врач»)

3.4, Инструкция по применению тест-системы «ЛЕЙКОЗ» для выявления вируса лейкоза крупного рогатого скота (КРС) методом

по лабораторной диагностике вирусных

респираторно-кишечных инфекций / крупного рогатого скота

(рекомендованы 25 июля 1978 г., б/к)\ . . , 208 Вирусная диарея......... 228

3.6.    Наставление по применению набора компонентов для диагностики вирусной диареи — болезни слизистых крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа (утверждено 15 июля 1997 г.,

М 13-7-2/1012) ........ 228

3.7.    Инструкция по применению набор для диагностики вирусной диареи — болевши слизистых КРС методом иммуноферментного анализа

3.8.    Методика по исследованию спермы крупного рогатого скота

на контаминацию вирусом инфекционного ринотрахеита — пустулезного вульвовагшшта (ИРТ-ИЛВ) (утверждена 8 февраля 1983 г.» б/н) ..... 238

3.9.    Инструкция по применению набора для определения антител к вирусу инфекционного ринотрахеита/ инфекционного пустулезного вулъвовагинита крупного рогатого скота в сыворотке крови методом непрямого иммуноферментного анализа

*ZETECT-Серелиоа-ИРТ/ИПВ-Ат» ...... 244

ЗЛО. Инструкция по применению тест-системы

для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции (утверждена 21 мая 2009 г.) ....... 253

ББК 48.7я73 Л 12

Л12 Лабораторная диагностика вирусных болезней животных / Сост, IL И. Барышников, В. В. Разумовская: Учебное пособие. — 2-е изд., испр. — СПб,: Издательство «Лань», 2015,— 672с,: ил, — (Учебники для вузов. Специальная литература).

ISBN 978-5-8114-1882-4

Учебное издание содержит действующие методические указания, наставления и инструкции по лабораторной диагностике ви-русных болезней животных, утвержденные Министерством сельского хозяйства СССР, РФ и Россельхознадзором РФ. Документы систематизированы по видам животных, В большинстве прошли многолетнюю аппробацию в Алтайской краевой ветеринарной лаборатории и включены в «Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения» (по состоянию на июль 2011 г.). Приводятся предметный указатель и библиографический список.

Предназначено для студентов, обучающихся по специальности «Ветеринария» и направлению «Ветеринарно-санитарная экспертиза», ветеринарных врачей и лаборантов ветеринарных лабораторий.

ББК 48.7я73

Рецензенты:

Я, Я. ГУСЛАВСКИЙ — доктор ветеринарных наук, профессор кафедры микробиологии, эпизоотологии, паразитологии и ВСЭ Алтайского государственного аграрного университета;

В. Я. ПЛЕШАКОВА — доктор ветеринарных наук, профессор, зав. кафедрой ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии Омского государственного аграрного университета им. П. А. Столыпина;

В. А. СИНИЦЫН — доктор ветеринарных наук, зав. отделом ФГБУ «Новосибирская межрегиональная ветеринарная лаборатория».

Обложка © Издательство «Лань», 2015 Е. А. ВЛАСОВА © Коллектив авторов, 2015 © Издательство «Лань»,

художественное оформление, 2015

367

нпттмт«титшпшттимшмимт№|шш№мштм|{ш11йт«п|ш1мш

ПАРВОВИРУСНАЯ БОЛЕЗНЬ

6.10.

МЕТОДИЧЕСКИ! УКАЗАНИЯ ПО ДИАГНОСТИКЕ ПАРВОВИРУСНОЙ БОЛЕЗНИ СВИНЕЙ (утверждены 21 января 1989 §., б/н)

1.    Обхцие положения.

1.1.    Парвовирусная болезнь свиней — контагиозное вирусное заболевание, сопровождающееся нарушением воспроизводительной функции свиноматок. Возбудитель болезни — парвовируе свиней.

1.2.    Диагноз на парвовирусную болезнь свиней устанавливают на основании характерных клинических признаков болезни у свиноматок (прохолосты, малоплодные пометы, мумифицированные плоды) и обнаружение вирусного антигена в суспензии внутренних органов плодов или специфических антител в сыворотке крови новорожденных поросят до приема молозива.

1.3.    Для исследования в ветеринарную лабораторию направляют абортированные плоды длиной не более 15 см, сыворотки крови (по 2...5 см⁸) от свиноматок с нарушением воспроизводительной функции и по 2...3 новорожденных поросенка до приема молозива от каждой из этих свиноматок.

2.    Лабораторные исследования.

2.1. Специфические антитела в сыворотке крови свиней и новорожденных поросят до приема молозива определяют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с помощью диагностического набора, состоящего из специфического инактивированного антигена парвовируса свиней, специфической и нормальной сывороток свиней. Все компоненты набора расфасованы по 1 см⁸ в инсулиновые

358    Лабораторная    диагностика    вирусных    болезней    животных

IIIlUlinilllUillllllllllUUI>linilllllllllHIIHI№[UlHlllMllimillllHlliniUllllrill1IIIIIIIIIIUIIIIIMHlEllllllilllH1IILIIIIIIIIIIIIIIIIIJMllllltlllllilttFlllinilMI(inill(IIIH!11llllll|lllllllllI!IIIIIHHIllll!llllilll!d

флаконы, лиофилизированы и пригодны в течение двух лет. Перед постановкой реакции каждый компонент набора растворяют в 1 см³ дистиллированной воды.

2.2. ВРТГА используют рабочее разведение антигена, содержащее в 0,025 см³ 8 гемагглютинирукпцих единиц (ГАЕ). Для этого антиген разводят фосфатно-буферным раствором во столько раз, сколько получают от деления гем-агглютинирующего титра антигена, указанного на этикетке флакона, на 8.

2.3.    Сыворотки крови перед постановкой реакции разводят в 32 раза фосфатно-буферным раствором, прогревают на водяной бане при (56±1)°С в течение 30 мин и обрабатывают эритроцитами морской свинки. К 0,2 см³ инактивированной сыворотки добавляют 2 капли осадка эритроцитов и выдерживают 1 ч при температуре (20±2)°С в течение 1 ч. Эритроциты осаждают центрифугированием 20 мин при 2000 об/мин и сыворотки используют для постановки РТГА.

2.4.    РТГА ставят микрометодом в лунках полистироловых пластин с U-образным дном с использованием 0,6% -ной суспензии эритроцитов морской свинки. В лунки пластины вносят по 0,025 см³ фосфатно-буферного раствора и готовят двукратные разведения сывороток. В каждую лунку добавляют 0,025 см^а рабочего антигена (8 ГАЕ) и выдерживают 1 ч при температуре (20±2)°С. Затем в каждую лунку вносят 0,025 см⁸ 0,6%-ной суспензии эритроцитов морской свинки. Пластину осторожно встряхивают и оставляют при температуре (6±2)°С в течение 2...3 ч, За титр антител принимают предельное разведение сыворотки, полностью подавляющее гемагглютинирующую активность антигена (8 ГАЕ). При обнаружении в сыворотках специфических антител в разведении 1:64 и выше реакцию считают положительной.

2.6. В РТГА ставят контроль эритроцитов на спонтанную агглютинацию в фосфатно-буферном растворе, контроль рабочей дозы антигена (8 ГАЕ) и контроль специфичности антигена с гипериммунной и нормальной сыворотками свиней.

Для контроля эритроцитов на спонтанную агглютинацию в 3 лунки вносят по 0,025 см³ фосфатно-буферного рас-

5, Ёмши тиней

твора к добавляют равный раствор 0,6% -ной суспензии эритроцитов морской свинки» Эритроциты в фосфатно-буферном растворе не должны спонтанно агглютинироваться.

Для контроля рабочей дозы антигена в 5 лунок пластины вносят по 0,025 см³ фосфатно-буферного раствора. В первую лунку добавляют 0,025 см³ рабочего разведения антигена и после смешивания 0,025 см⁸ жидкости переносят во вторую лунку и т. д. Из последней лунки 0,025 см³ жидкости удаляют. Затем во все лунки добавляют но 0,025 см³ 0,6%-ной суспензии эритроцитов морской свинки. При правильном приготовлении рабочего разведения антигена в первой, второй и третьей лунках, содержащих соответственно 4,2 и 1 ГАЕ, должна быть полная агглютинация эритроцитов, В четвертой и пятой лунках агглютинация эритроцитов должна отсутствовать или быть незначительной.

Контроль специфичности антигена с гипериммунной и нормальными сыворотками свиней ставят, как описано в п, 2.4. Гипериммунная сыворотка свиней должна полностью подавлять гемагглютинкрующую активность антигена в титре, указанном на этикетке флакона. Нормальная сыворотка свиней не должна подавлять гемагглютинирую-щую активность антигена.

2.6. Парвовирусный антиген в суспензии внутренних органов абортированных плодов определяют в реакции гем-агглютинации (РГА), Для постановки реакции из легких, почек, печени и кишечника плодов длиной не более 15 см готовят 30% -ную суспензию на фосфатно-буферном растворе, Суспензию центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин и надосадочную жидкость используют в РГА. Плоды старше 70-дневного возраста (длиной более 17 см) непригодны для обнаружения парвовирусного антигена.

2.7'. В лунки пластины вносят по 0,025 см³ фосфатнобуферного раствора и готовят двукратные разведения исследуемого материала. Затем в каждую лунку вносят 0,025 см⁸ 0,6%-ной суспензии эритроцитов морской свинки. Пластину осторожно встряхивают и выдерживают при температуре 6...8°С в течение 2„.8 ч. За титр гемаггл юти пирующего антигена принимают его наибольшее разведение, которое вызывает полную агглютинацию эритроцитов.

360    Лабораторная диагностика вирусных болезней животных

..........................cm......................................................ни......шиш.................................................ишинпмшишад.......

При обнаружении в испытуемых пробах гемагглютшшру-ющего антигена в разведении 1:32 и выше реакцию счита-ют положительной.

2.8.    Идентификацию гемагглютинирующего антигена проводят в РТГА с использованием гипериммунной сыворотки и специфического антигена, входящих в состав диагностического набора. Реакцию ставят с испытуемым гем-агглютинирующим и специфическим антигенами в рабочей дозе (8 ГАЕ), как описано в п. 2.4. Готовят двукратные разведения гипериммунной сыворотки параллельно в двух рядах пластины и в лунки каждого ряда добавляют отдельный антиген. Если титр гипериммунной сыворотки с испытуемым гемагглютинирующим антигеном отличается не более, чем в 2 раза, от титра этой же сыворотки со специфическим антигеном, то результат идентификации считают положительным.

2.9.    Диагноз на заболевание считается установленным при положительной реакции на наличие парвовирусного антигена в суспензии внутренних органов плодов или специфических антител в сыворотки крови новорожденных поросят до приема молозива и характерных клинических признаков болезни у свиноматок. Обнаружение антител к парвовирусу свиней в сыворотке крови только свиноматок и хряков-производителей недостаточно для постановки диагноза на парвовирусную болезнь свиней и свидетельствует лишь о циркуляции вируса в хозяйстве,

С утверждением настоящих методических указаний Методические указания по диагностике трестируемой болезни свиней, утвержденные Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 19 февраля 1986 г.» отменяются.

Директор Всесоюзного ордена Ленина научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко Г, Ф. Коромыслов.

ПРИЛОЖЕНИЕ к «Методическим указаниям по диагностике парвовирусной болезни свиней».

1. Приготовление фосфатно-буферного раствора, pH 7,2.

В1 дм³ дистиллированной воды растворяют 8,0 г натрия хлористого, 2,83 г натрия фосфорнокислого двузамещен-

5. Болезни свиней

UMMIIIIilUHMimilfffilJWIillltHIII

ного 12-водного (или 1,22 г 2-водного) и 0,2 г калия фосфорнокислого однозамещенного.

2.    Приготовление раствора Альсевера.

В 1,2 см³ дистиллированной воды растворяют 24,6 г глюкозы, 9,6 г натрия лимоннокислого трехзамещенного и 5,04 г натрия хлористого. Раствор стерилизуют на кипящей водяной бане в течение 30 мин.

3.    Приготовление эритроцитов морской свинки.

Кровь у морской свинки берут стерильно из сердца, помещают в раствор Альсевера в соотношении 1:5 и хранят при температуре 6.. ,8°С. Эритроциты пригодны для использования в течение 3...4 недель. Смесь крови с раствором Альсевера центрифугируют 20 мин при 2000 об/мин, надо-садочную жидкость удаляют и осадок эритроцитов три раза отмывают фосфатно-буферным раствором до получения прозрачной жидкости над осадком эритроцитов. Отмытые не-разведенные эритроциты используют для обработки сывороток и приготовления 0,6%-ной суспензии эритроцитов.

Н1Шт1Ш1Н!111т1Ш11111Ш1[1(№1Ш11ШШ1111ШШО1Ш11(И«!1||1ПШЙМН11Ш911!111Ш1№1ИМ1|11ЯЯ11Ш1[111ШШ]|И11Ш1тП11П09

КРАТКИЙ СЛОВАРЬ ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ВЕТЕРИНАРНЫХ ТЕРМИНОВ

Антигены (анти + грен, genes — порождающий) — чужерод-ные для организма высокомолекулярные органические вещества коллоидной структуры (белки, белкою-липидные и белково-полисахаридные комплексы), способные при поступлении (введении парентерально) вызывать синтез особых глобулинов-антител и вступать в специфическое взаимодействие с ними.

Антитела (анти. + тело) —• противотела — специфические белки (иммуноглобулины), образующиеся в организме под воздействием антигенов. Они накапливаются в сыворотке крови и тканях, вступают в специфическую связь с соответствующими антигенами и разрушают или обезвреживают их.

Биологическая проба (биопроба) — один из методов диагностики инфекционных болезней с помощью заражения патологическим материалом подопытных животных (куриных эмбрионов, культур клеток) и их исследования,

Бирион — полноценная внеклеточная вирусная частица.

Вирусовьщеление — выделение возбудителей инфекции из организма больного животного или вирусоноеителя.

Вирусояоеительстдо ■— наличие возбудителя инфекции в определенных органах и тканях клинически здорового животного, не сопровождающееся иммунологической перестройкой организма.

Вирусы (лат. virus — яд) — облигатные внутриклеточные паразиты, отличающиеся от растительных и животных организмов малыми размерами, отсутствием клеточного строения и автономного метаболизма, наличием только одного типа нуклеиновой кислоты и дезъюнктивным способом размножения.

1

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ • МОСКВА ¹ КРАСНОДАР -• 2015•