СПРАВОЧНИК

ЛАЮРАТОРНЫЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ

В ВЕТЕРИНАРИИ

•

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ

ИНФЕКЦИИ

Под редакцией Б. И. АНТОНОВА

МОСКВА АГРОПРОМИЗДДТ 1986

ПРЕДМЕТНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ

Агар глкжозо-кровяной 227 —    дрожжевой 27 —    картофельный 82 —    кровяной 230 —    молочно-солевой 228 —    мясо-пептон ный печеном no- глюк озо - глицериновый (МПП1ТА) 82 —    печеночно-аминопептидиый 85 —    печеночн о-глюкозо-глицериновый (ГИТА) 82 —    плоти ы й печейочно-сыворо-точпый 85 —    полужидкий печеночно-сывороточный 85 —    полужидкий с дефибриннро-ванной кровью 248 —    сывороточпо-дскстрозный 85 —    шоколадный 239 Бульон глюкозо-сывороточпый 227 —    дрожжевой 27 —    мисо-псптопиый печеночный (МППБ) 82 —    печеночпо-глкжозо-глицери-новый 82 —    с желчью 10%-ный 186, 227 —    40%-ный 230 Вода мясная 82 —    печеночная 82 Выбор питательных сред 271 Гель агаровый 1%-ный 31 Дезагрегация ткани 314 Жидкость Карлу а 309 Индикатор для определения анаэробных условий 39 Консервирующая смесь глицериновая 185 --фосфатная буферная 185 Лизис желчью 225

Метод выявления калеулообра-зования 13, 14 —    определения вирулентности сибиреязвенных культур 14 —    флуоресцирующих антител (МФА) 189 Молоко с метиленовым синим 228 —    с 0,02%-ныт метиленовым сипим 230 Обнаружение индола 217 Окраска мазков гематокенлил-эозином 309 —    — по Козловскому 81 --ио методу Гипса 239 —    — по Романовскому — Гнм-зе 309 —    — по Стампу 81 --по Фельгену 309 --по Шуляку — Шину 82 Определение гемолитической активности 8 —    концентрации углекислого газа 85 Получение и подготовка эритроцитов барана для постановки РСК и РДСК 86 Приготовление индикаторных бумажек 187 Раствор антибиотиков 272 —    веронал-мединаловый буферный 329 —    верее}]а 282 —    гидролизата лактоальбумина 0,5%-ный 283 —    гидролизата мышечных белков 0,3%-пып 282 —    глицерина 216 —    двууглекислого натрия 282 —    дву хромовокислого калия 279 —    поли этиленгликоля 326 —    Тироде 281 —    трипсина 283 —    уксусной кислоты 282 347

---

—    физиологический хлорида натрия с добавлением ионов магния и кальция (для постановки РСК и РДСК) 86 —    Хепкеа 281 —    хлорида натрия фенолезиро-ваниые для РА 86 Реактив биуретовып 328 —    йодистый калий 3.28 Реакиля дмсjxf>yзiiой лреципитании в геле 333 —    с мстил ротом 218 —    нейтрализации с целью выявления антител к вирусу инфекционного ринотрахентя и Ш!русной диареи 332 —    непрямой гем агглютинации (РИГА) 332 —    преципитации 8 —    связывания комплемента (РСК) 334 —    торможения гемагглютина-ЩП1 (РТГ'А) 332 ■— Фогеса — Проскауэра 218 —    Эрлиха 181 —    метиленового синего 226 Среда Бигтера с рамнозой 187 —    водно-сывороточная 146 —    дифференциальная висмут-сульфат-агар 186 —    — Левина 186 —    — Плоски рева 186 —    — трехуглеводная с мочевиной 186 --Эндо 186 —    для обнаружения сероводорода 216 —    для определения способности бактерий расщеплять мочевину 218 —    для посева по Свену — Гарду 187 —    Дюбуа — Смита 90 —    Заксе. 243 —    Игла 282, 324

—    из гидролизата мышцы сердца крупного рогатого скота 252 —    fin куриного мяса 260 —    Кларка 218 —    Клнглера 217 —    комбинированная Олькеииц-кого 216 —    Мартена 251, 260 —    плотная ВИЭВ для изоляции ка.мпплобактерий 125, 126 —    гафрапино-железо-новобиоцн-новая 123, 124 —    Симмонса 216 —    с лактозой 252 —    с повышенным содержанием лактозы 137 —    с теллуритом калия 228 —    триптический перевар бычьего сердца 337 —    Ферворта — Вольфа в модификации С, И. Тарасова 146 —    Флетчера 146 —    6,5%-ного хлорида натрия 228 —    Хоттингера 259 —    Эдварда 258 —    энтсрококковая дифференциально-диагностическая 228 Среды индикаторные с амидочерным 168 —    — с конгоротом 168 —    — с лакмусом 167 —    — с мстил ротом 167 —    — с иейтральротом и метиленовой синью 167 —    — обогащения Кауфмана 186 -- Киллиана 186 —    — Мюллера 186 —    — селенитовая 185 —    плотные питательные 252 Тест «жемчужного ожерелья» 6,7 Фа готипирование 17—28 Экстракт дрожжевой 252 Зрнтрит-агар 85

---

Временные методические указания по обнаружению возбудителя копытной гнили в патологическом материале от больных овец с помощью непрямого метода иммунофлуорссцеи-

ции.......................... 59

Бруцеллез......................... 00

Наставление по диагностике    бруцеллеза    животных ...    00

Паратуберкулез .    *.................... 89

Наставление по диагностике паратуберкулезного энтерита

{паратуберкулеза) крупного рогатого скота    '....... 89

Методика обнаружения в патологическом материале возбудителей туберкулеза и паратуберкулеза методом люминесцентной микроскопии.................. 92

Временное наставление по постановке реакции связывания комплемента для диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец с антигеном Сибирского научно-исследовательского ветеринарного    института    ........ 94-

Сап ............................ 104

Методические указания по лабораторной диагностике сапа 104

Кампилобэктерпоз (вибрпоз)................ 112

Извлечение из временной инструкции по диагностике, профилактике и ликвидации вибриоза крупного рогатого скота к овец........................ 112

Наставление по применению вибриозных агглютинирующих

моноспецифическнх сывороток........... .    .    116

Наставление по применению кампилобактериозных (вибриозных) люминесцируюших сывороток при лабораторной диагностике камин лобактериоза (вибриоза)    животных    ....    120

Рекомендации Центральной ветеринарной лаборатории по приготовлению и применению сафранино-желсзо-новобиоци-новой среды (СЖН) при лабораторной диагностике вибриоза    123

Временные рекомендации Центральной ветеринарной лаборатории по приготовлению и применению плотной среды ВИЗВ

для изоляции камгшлобактсрий............. 125

Наставление по применению кампилобактериозного (внбри-озпого) антигена для реакции агглютинации с вагинальной

слизыо (РАВС)..................... 126

Лептоенпроз......................... 123

Методические указаЕшя по лабораторной диагностике легт-

тоснироза животных................. 128

Методические указания по применению групповых агглютинирующих лептоспирозиых сывороток.......... 14G

Методические указания по применению флуоресцирующего

глобулина для диагностики лептослироза ......*    148

Листериоз......................... 151

Наставление по лабораторной диагностике листериоз а животных ......................... 151

Методические указания по применению набора лиофилизи-рооаипых бактериофагов для идентификации возбудителя

лкетериоза....................... 169

Рожа свиней........................ 170

Методические указания по лабораторным исследованиям на

рожу свиней...................... 170

Наставление по применению сухих рожистых лгоминесци-рующих сывороток (для прямого метода иммунофлуоресценции) .......................... 173

то

Пастереллез , . . ....... 175

Наставление по лабораторной диагностике пастереллеза птиц 175

Сал ьмонсллсзы....................... 177

Методические указания по бактериологической диагностике

сальмонеллезов животных................ 177

Наставление по применению наборов сывороток сальмсшел-лезнмх О-комплексных и монорецепторных О- и Н-агглютн-лирующнх для экспресс-идентификации сальмонелл в РА на

стекле......*    *................. 192

Наставление по применению комплексной л групповых саль-мопеллезлых флуоресцирующих сывороток (для прямого метода иммупофлусресценции).......*....... 195

Временная методика серологической диагностики сальмонеллеза овец в реакции непрямой (пассивной) гем агглютинации (РИГА)..... 205

Наставление по применению серогрупновых антигенов и сывороток В, и Dj для диагностики сальмонеллеза в пробирочной реакции агглютинации (РА) .........    207

Колибактериоз ....................... 209

Методические указания по бактериологической диагностике колибактерноза (эшерихмоза)    животных........ 209

Наставление по применению агглютинирующих G-кол и-сывороток....................... 218

Диплококковые заболевания................ 221

Методические указания по лабораторным исследованиям па пневмококковую (диплокок ковую)    инфекцию животных 221

Стрептококкозы сельскохозяйственных животных...... 224

Методические указания по лабораторной диагностике стреп-

тококкоза животных....... 224

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококковой септицемии птиц............... 228

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкового полиартрита ягнят .............. 230

Методические указания по лабораторной диагностике мыта 233

Псевдомоноз........................ 235

Временное наставление по применению набора О-агглютннн-рующих сывороток для диагностики псевдомоноза ....    235

Гемофилезы......................... 237

Временные методические указания по лабораторном диагностике гемофнлезпого полисерозита свиней..... 237

Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофил ез мой плевропневмонии ев и псп..... 240

Методические указании по лабораторной диагностике контагиозного мегрнта лошадей..... 243

Микоплазмозы.................... 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной агалнктии овец и коз ............ 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной плевропневмонии коз........ 253

Наставление но диагностике респираторного мнкоплаэмозя

птиц........ 257

Реакция шгдюпшащш для диагностики респираторного микоплазмола птиц с дельной кровью (ККРА) и сывороткой крови (СКРА)...... 204

351

Наставление по постановке РСК при псрипневмошги крупного рогатого скота * . *...............

Дизентерия свиней.....................

Методические указания по лабораторным исследованиям на

дизентерию свинен, вызываемую треп он ем ой.......

Методические указания по определению чувствителыюсти к антибиотикам возбудителен инфекционных болезней сельскохозяйственных животных ................

Методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях ..................

Методические рекомендации по получению, культивированию и использованию в научных и производственных ветеринарных лабораториях первичных, перевиваемых и диплоидных культур

клеток животного происхождения..............

Наставление по применению гидролизата мышечных белков ферментативного сухого (ФГМ-С) для питательных сред тканевых

культур.......*..................

Рекомендации по профилактике, диагностике коктаминнрования культур клеток микроорганизмами и меры по их деконтаминации Методические указания по получению и применению в вирусологической практике перевиваемых линий клеток из лимфоидных

органов крупного рогатого скота и почек теленка ......

Методические рекомендации по очистке сыворотки крови крупного рогатого скота, используемой для культивирования клеточных

культур...................,......

Временное наставление по получению, контролю и использованию сыворотки крови животных для культивирования клеток и

вирусологических исследований , *.............

Предметный указатель...................

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ: Бактериальные инфекции

Составители: Борис Иванович Антонов,

Валерия Валентиновна Борисова, Г а ли на Михайловна Волкова и др*

Заведсюший редакцией В. Г, Федотов. Редактор В, И, Сайтаниди. Худ ожпнк А. И. Бершаче.вская. Художественный редактор /VI. Д. Севе-рина, Технический редактор Я. В. Соломович. Корректоры //. Д. Туманова , Т. Н. Бобрикова, М. В. Писарева

ИБ И* 4Ш

Сдано г набор 13.00,85, Поди и сазго к печати 0о,12.85. Т-22156. Формат 8т X ¹ 0Я¹ Д_е. Бумага тип. Л'г 3 . Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. неч. л. 18-18. Уел. кр.-отт. 18,1S. Уч -над. л. ’’37,27. Изд. дт 300. Тираж 29000 экз. Заказ ,V?    .    Цена    1    р.    40    к.

Ордена Трудопого Красного Знамени ВО «Агроиромп.здат», 107807, ГСП, Мосина, Б-53, ул. Садовая-Опасенаи, 1$

Набрано п ордена Октябрьской Резолюции и ордена Трудопого Красного Знамени Mi 10 «Первая Образцовая типографии имени Л. Л. Жданова » Союз пол иг-рзфмр.!ма при Государственном комитете СССР по делам издательств, полигра-фи и и книжной торговли: 113034, Москва, Валовая, 28

Отпечатано с матриц во Владимирской типографии Союзполиграфпрома при Государственном комм'готе СССР по долам издательств, полиграфии и книжной торговли, 600000, г. Владимир, Октябрьский проспект, д. 7.

ББК 48.73 Л 12

УДК 619:616.9—08 (031)

Составители: В. И. Лнтошх?, В. В. Борисова, Я. М. Волкова, Л. Я. Каменева, Л. Я. Кошеленко, Г. Л. Михальский, В. В. Поповцев, Л. Я. Прянишникова, В. Е. Храпова

Лабораторные исследования в ветеринарии. Бакте-Л12 риальные инфекции: Справочник/Сост. Б. И, Антонов, В. В. Борисова, П. М. Волкова и др.; Под ред. Б. И. Антонова.— М.: Агропромиздат, 1986.— 352 с.

В книге даны методы лабораторных исследований патологического матер нала с целью определении возбудители инфекционной болезни Она изложены но единой схеме; бактериологические п блктгриоскоп ичсск но исследовании, био проба, идентификация и дифференциация возбудителей. Методы унифицированы и гтандартнэнрованы.

Для ветврачей и фельдшеров, л я бор ниток ветеринарных лабораторий.

3805020000—079    ББК 48.73

^Л 035(01)—86

© ВО «Агропромиздат», 1986

ПРЕДИСЛОВИЕ

\\ деле выполнения решений партии и правительства по дальнейшему развитию животноводства, а также задач, поставленных Продо-ши|ы’ I пен пой программой страны, ветеринарной службе большую помощь оказывают ветеринарные лаборатории.

Ветеринарные лаборатории осуществляют диагностику инфекционных и паразитарных болезней животных, выявляют нарушения опмеил веществ в их организме, проводят исследования, направленные н I предупреждение отравлений, помогая тем самым специалистам сов--миоп, колхозов и других хозяйств успешно осуществлять лечебно-|||нн|шлактические мероприятия. От того, насколько своевременно tiiiniiTCH диагноз, разработаны и рекомендованы, профилактические и лечебные меры, зависит успех ликвидации болезней, сохранность ши одонья животных и повышение их продуктивности.

I Ьследнее время в лабораториях появилось много приборов и приспособлений, облегчающих труд специалистов и позволяющих проводить исследования на более современном и качественном уровне, с болы мой достоверностью. В связи с этим многие ранее действовавшие методические указания переработаны.

Кроме того, ежегодно для лабораторной практики предлагаются новые методы диагностики. В отечественной и зарубежной литературе ИМГ10ЯШЮ публикуется большое количество материалов о новых метола,ч исследований, предлагаются различные модификации существующих методик, вводятся дополнительные диагностические тесты.

Ветеринарные лаборатории в своей работе не могут использовать всего многообразия имеющихся в литературе методов исследования или и I за того, что они недостаточно апробированы, или из-за сложности применяемого оборудования. Иногда методы, предлагаемые различными авторами, при определении одних и тех же показателей дают несовпадающие результаты.

В связи с этим в справочник включены методы лабораторных исследований патологического материала, получаемого от больных, убитых или павших сельскохозяйственных животных, апробированные i Митральной ветеринарной лабораторией и утвержденные Главным у правлением ветеринарки Министерства сельского хозяйства СССР, К и и е ' а с од о р ж: и т методик ески е указ анн я п о ди агностике и: кфекдп ошшх Полезней бактериальной этиологии, а также методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях.

Методики изложены по единой схеме: взятие и пересылка патологи-чм'кого материала, методы его обработки и обогащения; бактериоско-ипческие исследования, включая световую и люминесцентную микроскопию; выделение культур возбудителей инфекционных болезней на ниппельных средах; заражение лабораторных животных как с целью выделения чистой культуры возбудителя, так и определения степени ее наI(ценности; гистологические исследования; идентификация и дифференциация возбудителей с использованием различных методов; сероло-I пческие исследования для определения вида возбудителя.

3

Приведенные в справочнике методы лабораторных исследований унифицированы и стандартизированы. В широком смысле слова унификация и стандартизация подразумевают применение для различных исследований одних и тех же аппаратов, приборов, инструментов, посуды, реактивов, исключая, конечно, специальные методы исследования; применение стандартных (унифицированных) питательных сред и диагностикумов; разработку методических указаний по единой форме. Все это позволяет лабораторным работникам с меньшей затратой сил и средств, на высоком методическом и техническом уровне, качественно и в срок проводить диагностические исследования. Таким образом, стандартизация методов исследования явится способом наведения строгого тюрпдка в работе ветеринарных лабораторий.

Книга предназначена для ветеринарных врачей, фельдшеров, а также лаборантов в старин а рных диагностических л абораторн й.

В справочник не вошли материалы по диагностике туберкулеза., так как они пересматриваются и дополняются, поэтому их публикация будет осуществлена в последующих изданиях.

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЙ ОТЕК

Методические указания по лабораторным исследованиям на злокачественный отек животных

(Утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 5 января 1984 г,)

1. Общие положения.

1.1.    Злокачественный отек — острая неконтагнозная инфекционная болезнь всех видов животных, возникающая после ранений, родов, травм, кастраций и характеризующаяся быстрым появлением газовых отеков, распадом тканей и сепсисом.

1.2.    Злокачественный отек имеет полимикробную этиологию. Основными возбудителями являются Cl. septicum, Cl. oedematiens, Cl. sordellii, Cl. perfringens, Cl. histolyticum, иногда Cl. chauvoei, каждый из которых может вызвать заболевание самостоятельно, но чаще в ассоциации друг с другом, другими анаэробными или аэробными микроорганизмами, Из сопутствующих микроорганизмов наиболее важную роль играет Cl. sporcgenes, который усиливает действие других патогенных анаэробов, придает процессу гнилостный характер и тем самым отягощает течение болезни,

40

1.3.    Диагноз на злокачественный отек ставят на основании клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных с обязательным подтверждением лабораторными исследованиями.

1.4.    Для исследования в лабораторию направляют кусочки пораженных мышц, тканевый экссудат и паренхиматозные органы, а от групов овец, кроме того, направляют часть сычуга и тонкого отдела кишечника с содержимым (для одновременного исследования на б раде от и з нтеротоксемию).

1.5.    Исследование на злокачественный отек включает микроскопию мазков из патологического материала, посевы на питательные среды и заражение лабораторных животных.

2.    Микроскопическое исследование.

2.1.    Из пораженных тканей и другого патологического материала делают мазки-отпечатки и окрашивают их по Граму или Муромцеву.

2.2.    При микроскопии мазков отмечают форму микробов, их расположение, наличие вегетативных форм, спор (споры окраску не воспринимают), капсул. Описание морфологии отдельных возбудителей дано в таблице 1.

3.    Бактериологическое исследование.

3.1.    Высевы из патологического материала делают в среду Китта — Тароцци, МПБ и на МПА. Среду Китта — Тароцци предварительно регенерируют прогреванием в кипящей водяной бане в течение 15— 30 мин, после чего быстро охлаждают до 45—50°С.

Одновременно высев можно делать и на глюкозо-кровяной агар Цейс-слера в чашках Петри.

3.2.    Засеянные пробирки помещают в термостат на 24—48 ч при 37—38°С. Чашки выдерживают в анаэробных условиях 24—48 ч.

3.3.    Для создания анаэробных условий наиболее приемлем физический метод. Чашки, не переворачивая (дном вниз), помещают в микро-анаэростат или эксикатор, из которого удаляют воздух при помощи вакуум-насоса.

Из других методов можно применять химический с использованием гидросульфита натрия (Na₂S₂0₄) и бикарбоната натрия (Na₂C0₃).

3.4.    При просмотре роста в жидких питательных средах необходимо обращать внимание на интенсивность и равномерность помутнения среды, степень газообразования. Характеристика роста отдельных возбудителей дана в таблице 1.

3.5.    При обнаружении в среде Китта — Тароцци роста микроорганизмов, сходных с возбудителями злокачественного отека, делают дробный пересев на 3—4 чашки с агаром Цейсслера. Посевы инкубируют, как указано в п. 3.3. Просмотр посевов проводят с помощью лупы или под малым увеличением микроскопа, обращая внимание на форму колоний и наличие гемолиза (см. табл. 1).

4.    Биологическое исследование.

4.1.    Одновременно с посевом материала на питательные среды проводят заражение морских свинок. Для этого кусочки пораженных тканей и другой патологический материал измельчают, тщательно растирают в стерильной ступке с песком и готовят равномерную взвесь, добавляя небольшое количество МПБ. Полученную взвесь вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам массой 350—400 г в дозе 0_}5—1,0 мл.

4.2.    При наличии в исследуемом материале возбудителей злокачественного отека морские свинки погибают через 16—48 ч в зависи-

41

Продолжение

Л (г* i я Характеристика роста Формы колоний на О Г? на среде Китта — глюкозо-кровяном S д О Тароцци агаре Цейсслера ■Е ЕЙ t*. I ё. , £ гс л ГС К О, Ь гс ^ ГС 0) 5 0*1

40 Раннее помутнение и Округлые, гладкие, вы-бурное, интенсивное пуклые, серовато-зеле-газообразование    ные    колонии.    Гемолиз

сильный, грязно-коричневого цвета, имеет две зоны. Среда буро-коричневого цвета (I форма)

Мелкие, круглые, гладкие колонии с ровными краями, гемолиз отсутствует, иногда незначительный (VIII форма)

5—20 Рост обильный, кусочки печени обволакиваются слизистым осадком, верх среды прозрачный, газообразование слабое. Культура издает неприятный гнилостный запах

мости от вида возбудителя. При вскрытии у павших животных обнаруживают патологоанатомические изменения, характерные для того или иного возбудителя (см. табл. 2).

4.3.    Из трупа морской свинки делают посевы из места введения материала, крови сердца и печени в среду Китта — Тароцци, МП Б и на МПА. Мазки ^отпечатки готовят из тех же органов, а также с диафрагмальной поверхности печени.

4.4.    При необходимости проверки вирулентности выделенных культур суточную культуру, выращенную на среде Китта — Тароцци, вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам в дозе 0,5—1,0 мл.

4.5.    Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 8 сут.

5.    Диагноз на злокачественный отек считается установленным б случае получения одного из следующих результатов:

выделение из патологического материала культуры со свойствами, характерными для одного из возбудителей данного заболевания, и гибель хотя бы одной из двух зараженных исходным материалом или полученной культурой морских свинок с типичной для данного возбудителя патологоанатомической картиной и выделением из органов культуры возбудителя;

гибели хотя бы одной морской свинки из двух, зараженных исходным материалом, при наличии у нее типичной для данного возбудителя патологоанатомической картины и выделения из нее культуры возбудителя, если даже в посевах из исходного материала культуры возбудителя но выделено.

6.    Срок исследования 8 сут.