СПРАВОЧНИК

ЛАЮРАТОРНЫЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ

В ВЕТЕРИНАРИИ

•

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ

ИНФЕКЦИИ

Под редакцией Б. И. АНТОНОВА

МОСКВА АГРОПРОМИЗДДТ 1986

Временные методические указания по обнаружению возбудителя копытной гнили в патологическом материале от больных овец с помощью непрямого метода иммунофлуорссцеи-

ции.......................... 59

Бруцеллез......................... 00

Наставление по диагностике    бруцеллеза    животных ...    00

Паратуберкулез .    *.................... 89

Наставление по диагностике паратуберкулезного энтерита

{паратуберкулеза) крупного рогатого скота    '....... 89

Методика обнаружения в патологическом материале возбудителей туберкулеза и паратуберкулеза методом люминесцентной микроскопии.................. 92

Временное наставление по постановке реакции связывания комплемента для диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец с антигеном Сибирского научно-исследовательского ветеринарного    института    ........ 94-

Сап ............................ 104

Методические указания по лабораторной диагностике сапа 104

Кампилобэктерпоз (вибрпоз)................ 112

Извлечение из временной инструкции по диагностике, профилактике и ликвидации вибриоза крупного рогатого скота к овец........................ 112

Наставление по применению вибриозных агглютинирующих

моноспецифическнх сывороток........... .    .    116

Наставление по применению кампилобактериозных (вибриозных) люминесцируюших сывороток при лабораторной диагностике камин лобактериоза (вибриоза)    животных    ....    120

Рекомендации Центральной ветеринарной лаборатории по приготовлению и применению сафранино-желсзо-новобиоци-новой среды (СЖН) при лабораторной диагностике вибриоза    123

Временные рекомендации Центральной ветеринарной лаборатории по приготовлению и применению плотной среды ВИЗВ

для изоляции камгшлобактсрий............. 125

Наставление по применению кампилобактериозного (внбри-озпого) антигена для реакции агглютинации с вагинальной

слизыо (РАВС)..................... 126

Лептоенпроз......................... 123

Методические указаЕшя по лабораторной диагностике легт-

тоснироза животных................. 128

Методические указания по применению групповых агглютинирующих лептоспирозиых сывороток.......... 14G

Методические указания по применению флуоресцирующего

глобулина для диагностики лептослироза ......*    148

Листериоз......................... 151

Наставление по лабораторной диагностике листериоз а животных ......................... 151

Методические указания по применению набора лиофилизи-рооаипых бактериофагов для идентификации возбудителя

лкетериоза....................... 169

Рожа свиней........................ 170

Методические указания по лабораторным исследованиям на

рожу свиней...................... 170

Наставление по применению сухих рожистых лгоминесци-рующих сывороток (для прямого метода иммунофлуоресценции) .......................... 173

то

Пастереллез , . . ....... 175

Наставление по лабораторной диагностике пастереллеза птиц 175

Сал ьмонсллсзы....................... 177

Методические указания по бактериологической диагностике

сальмонеллезов животных................ 177

Наставление по применению наборов сывороток сальмсшел-лезнмх О-комплексных и монорецепторных О- и Н-агглютн-лирующнх для экспресс-идентификации сальмонелл в РА на

стекле......*    *................. 192

Наставление по применению комплексной л групповых саль-мопеллезлых флуоресцирующих сывороток (для прямого метода иммупофлусресценции).......*....... 195

Временная методика серологической диагностики сальмонеллеза овец в реакции непрямой (пассивной) гем агглютинации (РИГА)..... 205

Наставление по применению серогрупновых антигенов и сывороток В, и Dj для диагностики сальмонеллеза в пробирочной реакции агглютинации (РА) .........    207

Колибактериоз ....................... 209

Методические указания по бактериологической диагностике колибактерноза (эшерихмоза)    животных........ 209

Наставление по применению агглютинирующих G-кол и-сывороток....................... 218

Диплококковые заболевания................ 221

Методические указания по лабораторным исследованиям па пневмококковую (диплокок ковую)    инфекцию животных 221

Стрептококкозы сельскохозяйственных животных...... 224

Методические указания по лабораторной диагностике стреп-

тококкоза животных....... 224

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококковой септицемии птиц............... 228

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкового полиартрита ягнят .............. 230

Методические указания по лабораторной диагностике мыта 233

Псевдомоноз........................ 235

Временное наставление по применению набора О-агглютннн-рующих сывороток для диагностики псевдомоноза ....    235

Гемофилезы......................... 237

Временные методические указания по лабораторном диагностике гемофнлезпого полисерозита свиней..... 237

Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофил ез мой плевропневмонии ев и псп..... 240

Методические указании по лабораторной диагностике контагиозного мегрнта лошадей..... 243

Микоплазмозы.................... 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной агалнктии овец и коз ............ 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной плевропневмонии коз........ 253

Наставление но диагностике респираторного мнкоплаэмозя

птиц........ 257

Реакция шгдюпшащш для диагностики респираторного микоплазмола птиц с дельной кровью (ККРА) и сывороткой крови (СКРА)...... 204

351

Наставление по постановке РСК при псрипневмошги крупного рогатого скота * . *...............

265

268

268

270

279

279

298

299

314

326

337

347

Дизентерия свиней.....................

Методические указания по лабораторным исследованиям на

дизентерию свинен, вызываемую треп он ем ой.......

Методические указания по определению чувствителыюсти к антибиотикам возбудителен инфекционных болезней сельскохозяйственных животных ................

Методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях ..................

Методические рекомендации по получению, культивированию и использованию в научных и производственных ветеринарных лабораториях первичных, перевиваемых и диплоидных культур

клеток животного происхождения..............

Наставление по применению гидролизата мышечных белков ферментативного сухого (ФГМ-С) для питательных сред тканевых

культур.......*..................

Рекомендации по профилактике, диагностике коктаминнрования культур клеток микроорганизмами и меры по их деконтаминации Методические указания по получению и применению в вирусологической практике перевиваемых линий клеток из лимфоидных

органов крупного рогатого скота и почек теленка ......

Методические рекомендации по очистке сыворотки крови крупного рогатого скота, используемой для культивирования клеточных

культур...................,......

Временное наставление по получению, контролю и использованию сыворотки крови животных для культивирования клеток и

вирусологических исследований , *.............

Предметный указатель...................

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ: Бактериальные инфекции

Составители: Борис Иванович Антонов,

Валерия Валентиновна Борисова, Г а ли на Михайловна Волкова и др*

Заведсюший редакцией В. Г, Федотов. Редактор В, И, Сайтаниди. Худ ожпнк А. И. Бершаче.вская. Художественный редактор /VI. Д. Севе-рина, Технический редактор Я. В. Соломович. Корректоры //. Д. Туманова , Т. Н. Бобрикова, М. В. Писарева

ИБ И* 4Ш

Сдано г набор 13.00,85, Поди и сазго к печати 0о,12.85. Т-22156. Формат 8т X ¹ 0Я¹ Д_е. Бумага тип. Л'г 3 . Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. неч. л. 18-18. Уел. кр.-отт. 18,1S. Уч -над. л. ’’37,27. Изд. дт 300. Тираж 29000 экз. Заказ ,V?    .    Цена    1    р.    40    к.

Ордена Трудопого Красного Знамени ВО «Агроиромп.здат», 107807, ГСП, Мосина, Б-53, ул. Садовая-Опасенаи, 1$

Набрано п ордена Октябрьской Резолюции и ордена Трудопого Красного Знамени Mi 10 «Первая Образцовая типографии имени Л. Л. Жданова » Союз пол иг-рзфмр.!ма при Государственном комитете СССР по делам издательств, полигра-фи и и книжной торговли: 113034, Москва, Валовая, 28

Отпечатано с матриц во Владимирской типографии Союзполиграфпрома при Государственном комм'готе СССР по долам издательств, полиграфии и книжной торговли, 600000, г. Владимир, Октябрьский проспект, д. 7.

ББК 48.73 Л 12

УДК 619:616.9—08 (031)

Составители: В. И. Лнтошх?, В. В. Борисова, Я. М. Волкова, Л. Я. Каменева, Л. Я. Кошеленко, Г. Л. Михальский, В. В. Поповцев, Л. Я. Прянишникова, В. Е. Храпова

Лабораторные исследования в ветеринарии. Бакте-Л12 риальные инфекции: Справочник/Сост. Б. И, Антонов, В. В. Борисова, П. М. Волкова и др.; Под ред. Б. И. Антонова.— М.: Агропромиздат, 1986.— 352 с.

В книге даны методы лабораторных исследований патологического матер нала с целью определении возбудители инфекционной болезни Она изложены но единой схеме; бактериологические п блктгриоскоп ичсск но исследовании, био проба, идентификация и дифференциация возбудителей. Методы унифицированы и гтандартнэнрованы.

Для ветврачей и фельдшеров, л я бор ниток ветеринарных лабораторий.

3805020000—079    ББК 48.73

^Л 035(01)—86

© ВО «Агропромиздат», 1986

ПРЕДИСЛОВИЕ

\\ деле выполнения решений партии и правительства по дальнейшему развитию животноводства, а также задач, поставленных Продо-ши|ы’ I пен пой программой страны, ветеринарной службе большую помощь оказывают ветеринарные лаборатории.

Ветеринарные лаборатории осуществляют диагностику инфекционных и паразитарных болезней животных, выявляют нарушения опмеил веществ в их организме, проводят исследования, направленные н I предупреждение отравлений, помогая тем самым специалистам сов--миоп, колхозов и других хозяйств успешно осуществлять лечебно-|||нн|шлактические мероприятия. От того, насколько своевременно tiiiniiTCH диагноз, разработаны и рекомендованы, профилактические и лечебные меры, зависит успех ликвидации болезней, сохранность ши одонья животных и повышение их продуктивности.

I Ьследнее время в лабораториях появилось много приборов и приспособлений, облегчающих труд специалистов и позволяющих проводить исследования на более современном и качественном уровне, с болы мой достоверностью. В связи с этим многие ранее действовавшие методические указания переработаны.

Кроме того, ежегодно для лабораторной практики предлагаются новые методы диагностики. В отечественной и зарубежной литературе ИМГ10ЯШЮ публикуется большое количество материалов о новых метола,ч исследований, предлагаются различные модификации существующих методик, вводятся дополнительные диагностические тесты.

Ветеринарные лаборатории в своей работе не могут использовать всего многообразия имеющихся в литературе методов исследования или и I за того, что они недостаточно апробированы, или из-за сложности применяемого оборудования. Иногда методы, предлагаемые различными авторами, при определении одних и тех же показателей дают несовпадающие результаты.

В связи с этим в справочник включены методы лабораторных исследований патологического материала, получаемого от больных, убитых или павших сельскохозяйственных животных, апробированные i Митральной ветеринарной лабораторией и утвержденные Главным у правлением ветеринарки Министерства сельского хозяйства СССР, К и и е ' а с од о р ж: и т методик ески е указ анн я п о ди агностике и: кфекдп ошшх Полезней бактериальной этиологии, а также методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях.

Методики изложены по единой схеме: взятие и пересылка патологи-чм'кого материала, методы его обработки и обогащения; бактериоско-ипческие исследования, включая световую и люминесцентную микроскопию; выделение культур возбудителей инфекционных болезней на ниппельных средах; заражение лабораторных животных как с целью выделения чистой культуры возбудителя, так и определения степени ее наI(ценности; гистологические исследования; идентификация и дифференциация возбудителей с использованием различных методов; сероло-I пческие исследования для определения вида возбудителя.

3

Приведенные в справочнике методы лабораторных исследований унифицированы и стандартизированы. В широком смысле слова унификация и стандартизация подразумевают применение для различных исследований одних и тех же аппаратов, приборов, инструментов, посуды, реактивов, исключая, конечно, специальные методы исследования; применение стандартных (унифицированных) питательных сред и диагностикумов; разработку методических указаний по единой форме. Все это позволяет лабораторным работникам с меньшей затратой сил и средств, на высоком методическом и техническом уровне, качественно и в срок проводить диагностические исследования. Таким образом, стандартизация методов исследования явится способом наведения строгого тюрпдка в работе ветеринарных лабораторий.

Книга предназначена для ветеринарных врачей, фельдшеров, а также лаборантов в старин а рных диагностических л абораторн й.

В справочник не вошли материалы по диагностике туберкулеза., так как они пересматриваются и дополняются, поэтому их публикация будет осуществлена в последующих изданиях.

ДИЗЕНТЕРИЯ СВИНЕЙ

Методические указания по лабораторным исследованиям на дизентерию свиней, вызываемую трепонемой

(Утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 25 декабря 1983 г.)

1. Общие положения.

1.1.    Дизентерия свиней, вызываемая трепонемой (Treponema hyodysenteri ае),—■ остр а я пн фек цн о и и ая бол езиь.

Бактероиды, фуаобактерии, вибрионы, кл остр ид пи и другие микроорганизмы кишечника свиней способствуют созданию благоприятных условий для проявления трепонемамн патогенного действия.

L2. Диагноз на дизентерию свиней ставят на основании эпизоото-логических, клинических н пэталогоанатомнческих данных, а также результатов лабораторного исследования.

1.3.    Лабораторные исследования на дизентерию заключаются в обнаружении третюнем при микроскопическом исследовании патологического материала.

1.4.    Материалом для прижизненной диагностики служат фекалии, для посмертной — слизистая оболочка большой ободочной кишки павших или убитых с диагностической целью свиней.

1.4.1.    Фекалии от больных свиней берут ватным тампоном из прямой кишки. Для этого стерильный ватный тампон вводят в прямую кишку на глубину 7—8 см и делают вращательные движения, прижимая тампон к cTetiKe вдщгки, затем его извлекают и помещают в пробирку с 8—10 мд физиологического раствора,

1.4.2.    У животных, у битах с диагностической целый, вырезают участок большой ободочной кпщкн, освобождают ее от содержи мог о > промывают водопроводной водой, затем соскабливают скальпелем около 1 г слизистой оболочки, переносят в пробирку о $—10 мл физиологического раствора и суспендируют.

Допускается отбор материала и от трупов не позднее 2 ч после гибели.

1.5.    Приготовленную суспензию исследуют непосредственно в хозяйстве или отправляют в ветеринарную лабораторию. При пересылке материала в лабораторию пробирки закрывают резиновыми пробками и помещают в термос со льдом.

1.6.    Материал должен быть исследован в течение 2—4 ч, при хранении на холоде — в течение 6—8 ч.

2. Порядок исследования материала.

2.1.    Материал исследуют микроскопически, методом фазового контраста, путем просмотра в темном поле или в проходящем свете (подкрашенных и окрашенных препаратов).

2.1.1.    Стекла, используемые для микроскопии, должны быть бесцветными, прозрачными, чистыми, без царапин и бликов.

2.2.    Метод фазового контраста. Для исследования этим методом используют устройство КФ-4 или МФА-2, осветитель ОИ-9 или подобный, окуляр 7Х—1 ОХ , объектив 40Х и светофильтр ЗС-2. Установку фазово-контрастного устройства и работу с ним выполняют, руководствуясь указаниями прилагаемой к нему инструкции.

2.2.1.    Для исследования на чистое обезжиренное предметное стекло наносят 1—2 капли заранее приготовленной суспензии слизистой оболочки или фекалий и накрывают их покровным стеклом, избегая образования под ним пузырьков воздуха. На одном предметном стекле можно готовить три раздавленных капли.

2.3.    Микроскопия в темном поле. Препараты готовят, как указано в подпункте 2.2.1, и просматривают при: увеличении в 280—400 раз (окуляр 7Х или 10Х, объектив 40X —водная иммерсия).

2.4.    Исследование подкрашенных нативных препаратов. На предметное стекло наносят каплю суспензии исследуемого материала и к ней добавляют каплю красителя (см. приложение), накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом в проходящем свете при увеличении в 200—400 раз.

2.5.    Исследование окрашенных препаратов. Из суспензии готовят мазки, фиксируют метиловым спиртом или над пламенем горелки и окрашивают по Граму, Романовскому — Гимзе или фуксином Пфейффера.

2.6.    В нативных препаратах трепонемы имеют вид подвижных извитых нитей с острыми концами, перемещающихся поступательно, змеевидно. Различают 3 вида трепонем свиней: крупные — длиной до 20 мкм, шириной 0,2 мкм, с 8—12 завитками; средние — длиной 8—12 мкм, с 6—8 завитками и малые — длиной до 8 мкм, шириной 0,1 мкм, с 3— 4 завитками. Завитки расположены равномерно.

По размерам вибрионы в сравнении с трепонемами в 2—4 раза толще, с тупыми концами. Могут приобретать вид спирали с тремя и более изгибами, но меньшей амплитудой их расположения, чем у трепонем. Движение вибрионов — вращательное вокруг длинной оси.

У большинства больных дизентерией свиней при исследовании раздавленной капли в одном поле зрения микроскопа обнаруживают 5—10 и более (в зависимости от тяжести процесса) средних и крупных трепонем.

В окрашенных фиксированных препаратах обнаруживают грам-отрицательные микроорганизмы с характерной для трепонем морфологи ей *

259

Приложение Приготовление растворов красителей

К Краситель состоит из метиленовой сини — 3 г, спирта-ректификата — 25 мл, воды дистиллированной — 90 мл* I % -нот раствора едкого кали — I мл* глицерина — К) мл.

Метиленовую синь растворяют в в одно-спиртовой смеси к помещают на 48 ч в термостат при 37°С. Затем фильтруют и добавляют раствор едкого кали и глицерина.

2. При отсутствии метиленовой сини можно использовать краску, приготовленную по следующей гтропнсн: бытовая краска для шерсти — черная 1!Лн коричневая — 1 таблетка (около 5 г), сгшрт-ректификат — 25 мл, вода дистиллированная — 65 мл, карболовая кислота кристаллическая — 1 г, глицерин — 10 мл.

Техника приготовления краски такая же, как указано в п. 1.

ПРЕДМЕТНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ

Агар глкжозо-кровяной 227 —    дрожжевой 27 —    картофельный 82 —    кровяной 230 —    молочно-солевой 228 —    мясо-пептон ный печеном no- глюк озо - глицериновый (МПП1ТА) 82 —    печеночно-аминопептидиый 85 —    печеночн о-глюкозо-глицериновый (ГИТА) 82 —    плоти ы й печейочно-сыворо-точпый 85 —    полужидкий печеночно-сывороточный 85 —    полужидкий с дефибриннро-ванной кровью 248 —    сывороточпо-дскстрозный 85 —    шоколадный 239 Бульон глюкозо-сывороточпый 227 —    дрожжевой 27 —    мисо-псптопиый печеночный (МППБ) 82 —    печеночпо-глкжозо-глицери-новый 82 —    с желчью 10%-ный 186, 227 —    40%-ный 230 Вода мясная 82 —    печеночная 82 Выбор питательных сред 271 Гель агаровый 1%-ный 31 Дезагрегация ткани 314 Жидкость Карлу а 309 Индикатор для определения анаэробных условий 39 Консервирующая смесь глицериновая 185 --фосфатная буферная 185 Лизис желчью 225

Метод выявления калеулообра-зования 13, 14 —    определения вирулентности сибиреязвенных культур 14 —    флуоресцирующих антител (МФА) 189 Молоко с метиленовым синим 228 —    с 0,02%-ныт метиленовым сипим 230 Обнаружение индола 217 Окраска мазков гематокенлил-эозином 309 —    — по Козловскому 81 --ио методу Гипса 239 —    — по Романовскому — Гнм-зе 309 —    — по Стампу 81 --по Фельгену 309 --по Шуляку — Шину 82 Определение гемолитической активности 8 —    концентрации углекислого газа 85 Получение и подготовка эритроцитов барана для постановки РСК и РДСК 86 Приготовление индикаторных бумажек 187 Раствор антибиотиков 272 —    веронал-мединаловый буферный 329 —    верее}]а 282 —    гидролизата лактоальбумина 0,5%-ный 283 —    гидролизата мышечных белков 0,3%-пып 282 —    глицерина 216 —    двууглекислого натрия 282 —    дву хромовокислого калия 279 —    поли этиленгликоля 326 —    Тироде 281 —    трипсина 283 —    уксусной кислоты 282 347

---

—    физиологический хлорида натрия с добавлением ионов магния и кальция (для постановки РСК и РДСК) 86 —    Хепкеа 281 —    хлорида натрия фенолезиро-ваниые для РА 86 Реактив биуретовып 328 —    йодистый калий 3.28 Реакиля дмсjxf>yзiiой лреципитании в геле 333 —    с мстил ротом 218 —    нейтрализации с целью выявления антител к вирусу инфекционного ринотрахентя и Ш!русной диареи 332 —    непрямой гем агглютинации (РИГА) 332 —    преципитации 8 —    связывания комплемента (РСК) 334 —    торможения гемагглютина-ЩП1 (РТГ'А) 332 ■— Фогеса — Проскауэра 218 —    Эрлиха 181 —    метиленового синего 226 Среда Бигтера с рамнозой 187 —    водно-сывороточная 146 —    дифференциальная висмут-сульфат-агар 186 —    — Левина 186 —    — Плоски рева 186 —    — трехуглеводная с мочевиной 186 --Эндо 186 —    для обнаружения сероводорода 216 —    для определения способности бактерий расщеплять мочевину 218 —    для посева по Свену — Гарду 187 —    Дюбуа — Смита 90 —    Заксе. 243 —    Игла 282, 324

—    из гидролизата мышцы сердца крупного рогатого скота 252 —    fin куриного мяса 260 —    Кларка 218 —    Клнглера 217 —    комбинированная Олькеииц-кого 216 —    Мартена 251, 260 —    плотная ВИЭВ для изоляции ка.мпплобактерий 125, 126 —    гафрапино-железо-новобиоцн-новая 123, 124 —    Симмонса 216 —    с лактозой 252 —    с повышенным содержанием лактозы 137 —    с теллуритом калия 228 —    триптический перевар бычьего сердца 337 —    Ферворта — Вольфа в модификации С, И. Тарасова 146 —    Флетчера 146 —    6,5%-ного хлорида натрия 228 —    Хоттингера 259 —    Эдварда 258 —    энтсрококковая дифференциально-диагностическая 228 Среды индикаторные с амидочерным 168 —    — с конгоротом 168 —    — с лакмусом 167 —    — с мстил ротом 167 —    — с иейтральротом и метиленовой синью 167 —    — обогащения Кауфмана 186 -- Киллиана 186 —    — Мюллера 186 —    — селенитовая 185 —    плотные питательные 252 Тест «жемчужного ожерелья» 6,7 Фа готипирование 17—28 Экстракт дрожжевой 252 Зрнтрит-агар 85

---