Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
Документ предназначен для ветврачей и фельдшеров, лаборантов ветеринарных лабораторий.
1 Общие положения
2 Компоненты реакции, материалы и приготовление системы
3 Постановка реакции диск-преципитации
4 Учет результатов
5 Оценка результатов
Приложение. Приготовление очищенного 1-процентного агарового геля
Дата введения | 01.01.2021 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.02.2020 |
Актуализация | 01.01.2021 |
24.06.1980 | Утвержден | Главное управление ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР | |
---|---|---|---|
Издан | Агропромиздат | 1986 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
СПРАВОЧНИК |
|
ЛАБОРАТОРНЫЕ
ИССЛЕДОВАНИЯ
В ВЕТЕРИНАРИИ
•
БАКТЕРИАЛЬНЫЕ
ИНФЕКЦИИ
Под редакцией Б. И. АНТОНОВА
МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986
ББК 48.73 Л 12
УДК 619:616.9—08(031)
Составители: Б. И. Антонов, В. В. Борисова, Я. М. Волкова, »/7. Я. Каменева, Л. В. Кошеленко, Г. А. Михальский, В. В. Лоповцев, Л. И. Прянишникова, В. Е. Храпова
Лабораторные исследования в ветеринарии. Бакте-Л12 риальные инфекции: Справочник/Сост. Б. И. Антонов, В. В. Борисова, П. М. Волкова и др.; Под ред. Б. И. Антонова.— М.: Агропромиздат, 1986.— 352 с.
В книге даны методы лабораторных исследований патологического материала с целью определения возбудителя нпфекционноЛ болезни. Они изложены по единой схеме: бактериологические и бактериоскопнческие исследования, биопроба, идентификация и дифференциация возбудителей. Методы унифицированы и стандартизированы
Для ветврачей и фельдшеров, лаборантов ветеринарных лабораторий.
3805020000-079 035 (01)-86
305—86
ББК 48.73
© ВО «Агропромиздат», 1986
В деле выполнения решении партии и правительства по дальнейшему развитию животноводства, а также задач, поставленных Продовольственной программой страны, ветеринарной службе большую помощь оказывают ветеринарные лаборатории.
Ветеринарные лаборатории осуществляют диагностику инфекционных и паразитарных болезней животных, выявляют нарушения обмена веществ в их организме, проводят исследования, направленные на предупреждение отравлений, помогая тем самым специалистам совхозов, колхозов и других хозяйств успешно осуществлять лечебнопрофилактические мероприятия. От того, насколько своевременно ставится диагноз, разработаны и рекомендованы профилактические и лечебные меры, зависит успех ликвидации болезней, сохранность поголовья животных и повышение их продуктивности.
Последнее время в лабораториях появилось много приборов и приспособлений, облегчающих труд специалистов и позволяющих проводить исследования на более современном и качественном уровне, с большой достоверностью. В связи с этим многие ранее действовавшие методические указания переработаны.
Кроме того, ежегодно для лабораторной практики предлагаются новые методы диагностики. В отечественной и зарубежной литературе постоянно публикуется большое количество материалов о новых методах исследований, предлагаются различные модификации существующих методик, вводятся дополнительные диагностические тесты.
Ветеринарные лаборатории в своей работе не могут использовать всего многообразия имеющихся в литературе методов исследования или из-за того, что они недостаточно апробированы, или из-за сложности применяемого оборудования. Иногда методы, предлагаемые различными авторами, при определении одних и тех же показателей дают несовпадающие результаты.
В связи с этим в справочник включены методы лабораторных исследований патологического материала, получаемого от больных, убитых или павших сельскохозяйственных животных, апробированные Центральной ветеринарной лабораторией и утвержденные Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР. Книга содержит методические указания по диагностике инфекционных болезней бактериальной этиологии, а также методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях.
Методики изложены по единой схеме,- взятие и пересылка патологического материала, методы его обработки и обогащения; бактериоско-пические исследования, включая световую и люминесцентную микроскопию; выделение культур возбудителей инфекционных болезней на питательных средах; заражение лабораторных животных как с целью выделения чистой культуры возбудителя, так и определения степени ее патогенности; гистологические исследования; идентификация и дифференциация возбудителей с использованием различных методов; серологические исследования для определения вида возбудителя.
Приведенные в справочнике методы лабораторных исследований унифицированы и стандартизированы. В широком смысле слова унификация и стандартизация подразумевают применение для различных исследований одних и тех же аппаратов, приборов, инструментов, посуды, реактивов, исключая, конечно, специальные методы исследования; применение стандартных (унифицированных) питательных сред и диагностикумов; разработку методических указаний по единой форме. Все это позволяет лабораторным работникам с меньшей затратой сил и средств, на высоком методическом и техническом уровне, качественно и в срок проводить диагностические исследования. Таким образом, стандартизация методов исследования явится способом наведения строгого порядка в работе ветеринарных лабораторий.
Книга предназначена для ветеринарных врачей, фельдшеров, а также лаборантов ветеринарных диагностических лабораторий.
В справочник не вошли материалы по диагностике туберкулеза, так как они пересматриваются и дополняются, поэтому их публикация будет осуществлена в последующих изданиях.
Временные методические указания по постановке реакции диск-преципитации при диагностике сибирской язвы и идентификации ее возбудителя
(Утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 24 июня 1980 г.)
1. Общие положения.
1.1. Реакция диск-преципитации используется при диагностике сибирской язвы и дифференциации ее возбудителя от подобных ему сапрофитных микробов рода Bacillus.
1.2. Реакция диск-преципитации основана на взаимодействии антигена — нативных продуктов метаболизма растущего в жидкой питательной среде возбудителя сибирской язвы — с антителами преци-питирующей сибиреязвенной сыворотки, выражающемся образованием диска прецитггации в слое агарового геля, расположенного между антигеном и сывороткой.
1.3. Реакцию диск-преципитации используют при исследовании только свежего патологического материала.
Загнивший материал исследуют по реакции преципитации, поставленной общепринятым пробирочным методом с экстракцией антигенов.
2. Компоненты реакции, материалы и приготовление системы-
2.1. Для постановки реакции диск-преципитации необходимо иметь:
преципитирующую сибиреязвенную сыворотку;
очищенный 1%-ный агаровый гель (приготовление см. в приложении) или 1%-ный агар Дифко;
жидкую питательную среду, пригодную для культивирования возбудителя сибирской язвы (мясо-пептонный бульон, среда ГКИ, бульон Хоттингера с 40% инактивированной сыворотки крови или др.);
стерильные бактериологические пробирки, мерные и пастеровские пипетки.
2.2. Приготовление системы для постановки реакции диск-преци-питацми.
2.2.1. Преципитирующую сибиреязвенную сыворотку разливают по 0.5—1 мл в стерильные бактериологические пробирки.
2.2.2. На поверхность сыворотки, по стенке пробирки, наслаивают мерной или пастеровской пипеткой расплавленный и охлажденный до 45—50°С 1%-ный агаровый гель столбиком высотой 5—7 мм. Пробирки необходимо держать в вертикальном положении до застывания агара.
2.2.3. На поверхность застывшего агара вносят 1 — 1,5 мл жидкой питательной среды. При идентификации культур, выделенных из объек-
тов внешней среды и сырья животного происхождения, в качестве жидкой питательной среды лучше использовать среду ГКИ или бульон Хоттиигера с сывороткой крови, в этом случае одновременно можно провести исследование на капсулообразовапие.
2.2.4. Систему готовят и используют в день постановки реакции.
3. Постановка реакции диск-преципитации.
3.1. При исследовании патологического материала и мяса вынужденно убитых животных посев проводят пастеровской пипеткой в мясо-пептонный бульон, находящийся над слоем агарового геля. Не следует вносить в среду большое количество крови или крупные кусочки крове-наполненных органов, так как это затрудняет обнаружение специфического диска преципитации вследствие окрашивания геля.
3.2. При идентификации культур посевы делают из каждой колонии в отдельности или высевают суспензию, приготовленную из нескольких колоний (5—10).
3.3. Посевы выдерживают в термостате при 37—38°С в течение 16— 20 ч.
4. Учет результатов.
4.1. Учет результатов проводят визуально через 1G—20 ч инкубации посевов в термостате и при отрицательном результате — повторно через 3—4 ч дополнительной инкубации.
4.2. Пробирки вынимают из термостата и оставляют на 10—15 мин при комнатной температуре, после чего просматривают в проходящем свете на черном фоне.
4.3. Возбудитель сибирской язвы образует в средней части столбика агарового геля тонкую с четкими границами белую линию (диск) преципитации, которая сохраняется в течение 4 дн.
4.4. Почвенные сибиреязвенноподобные сапрофитные баЦиллы, за исключением некоторых штаммов Вас. anthracoides, дают отрицательный результат (диск преципитации отсутствует). Эти штаммы через 16— 20 ч образуют в нижней части агарового столбика на границе с преци-питирующей сывороткой рыхлую зону преципитации, которая не имеет четких границ и значительно толще, чем диск преципитации, образуемый возбудителем сибирской язвы. Через 36—40 ч зона преципитации, образуемая Вас. anthracoides, разрыхляется и сливается с преципити-рующей сывороткой.
4.5. В качестве контроля при постановке реакции могут быть использованы посевы из противосибиреязвенной вакцины СТИ.
5. Оценка результатов.
5.1. При исследовании патологического материала и мяса вынужденно убитых животных полученные результаты оценивают, как и результаты реакции преципитации, поставленной общепринятым методом.
5.2. При исследовании выделенных культур поступают следующим образом.
5.2.1. Культуры, давшие положительные результаты по реакции диск-преципитации или нечеткие результаты (рыхлое кольцо), идентифицируют общепринятыми методами в соответствии с действующими методическими указаниями.
5.2.2. В случае обнаружения диска преципитации при посеве суспензии из нескольких культур каждую культуру, включенную в суспензию, исследуют отдельно теми же методами.
5.2.3. Культуры, давшие отрицательный результат, дальнейшему исследованию не подлежат.
Приложение Приготовление очищенного 1%-ного агарового геля
Сначала готовят нейтральную дистиллированную воду (pH 7,0). Для этого определяют pH имеющейся дистиллированной воды и в зависимости от полученных результатов ее нейтрализуют 1%-ным раствором двууглекислой соды (при кислой реакции) или 0,1%-ным раствором соляной кислоты (при щелочной реакции).
Необходимое для нейтрализации количество раствора определяют следующим способом: к 100 мл воды небольшими порциями (миллилитрами или каплями) добавляют один из указанных растворов, постоянно определяя pH; по достижении нейтральной реакции (pH 7,0) точно учитывают количество раствора, пошедшее на нейтрализацию 100 мл воды. Затем рассчитывают количество раствора, необходимое для нейтрализации всего объема дистиллированной воды.
Берут 5 г агар-агара, заливают 300 мл нейтральной дистиллированной воды, ставят в кипящую водяную баню и нагревают до полного расплавления агар-агара.
Одновременно готовят водный раствор .белка куриного яйца. Берут охлажденное яйцо массой не менее 56 г и отделяют белок, который тщательно взбивают до образования пенистой массы, и растворяют в 200 мл нейтральной дистиллированной воды. Приготовленный раствор белка делят на две части по 100 мл.
В расплавленный агар добавляют 0,5 г хлористого кальция (СаС12«
• 6Ы20), растворяют его и охлаждают до 50°С. Затем вливают 100 мл водного раствора белка куриного яйца, ставят в кипящую водяную баню .и нагревают до появления хлопьев коагуляции (примерно 15—20 мин).
Если белок не свертывается или коагуляция происходит плохо, то вносят еще 0,25—0,5 г хлористого кальция и продолжают нагревать до появления хлопьев коагуляции.
Горячий агар фильтруют через предварительно смоченный в горячей дистиллированной воде и отжатый ватный фильтр.
К профильтрованному агару добавляют вторую часть (100 мл) водного раствора яичного белка, хорошо смешивают и снова нагревают в кипящей водяной бане до появления хлопьев коагуляции. В случае плохого свертывания белка поступают так же, как и при внесении первой порции (см. выше).
После свертывания белка агар вновь фильтруют в горячем виде.
Очищенный 1%-ный агаровый гель должен быть прозрачным.
Отфильтрованный агаровый гель разливают в пробирки или колбы и стерилизуют автоклавированием при 0,5 атм в -течение 20 мин.
Если после автоклавирования выпадает осадок, агаровый гель фильтруют и стерилизуют повторно.
Готовую среду хранят в холодильнике (2—4°С) и используют в течение 6 мес.