ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ

БИОХИМИЧЕСКИЕ И МИКОЛОГИЧЕСКИЕ

Под редакцией Ь. И. АНТОНОВА

МОСКВА ВО «АГРОПРОМИЗДАТ» 1991

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ:

БИОХИМИЧЕСКИЕ И МИКОЛОГИЧЕСКИЕ

Справочник

Составители: Антонов Борис Иванович, Яковлева Татьяна Федоровна,

Дерябина Валентина Ивановна,

Сухая Наталья Александровна

Зав. редакцией В. Г. Федотов Художественный редактор Н. А. Никонова Технический редактор В. А. Зорина Корректоры Т. И. Кононенко, Н. Я. Смолина

ИБ № 7286

Сдано в набор 10.09.90. Подписано в печать 05.12.90. Формат 60х887и- Бумага кн.-журнальная. Гарнитура Литературная. Печать офсетная. Уел. печ. л. 17,64. Уел. кр.-отт. 17,64. Уч.-нзд. л. 26.40. Изд. .Nf 100. Тираж 15 000 экэ. Заказ Л» 484. Цена 1 р. 40 к.

Ордена Трудового Красного Знамени ВО «Агропроынздат», 107807, ГСП-6, Москва, Б-78, ул. Садовая-Спасская, 18.

Московская типография St 11 Госкомпечати СССР 113105, Москва, Нагатинская ул., д. 1.

ББК 48.73 Л12

УДК 619 : 616—002.828—078(035)

Составители- В И Антонов, Т. Ф Яковлева, В. И. Дерябина, Н. А. Сухая, Г Г. Башкиров, Л. А. Растегасоа

Редактор В. Н. Сайтаниди

Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимиче-Л12 ские и микологические: Справочник/сост.- Антонов Б. И., Яковлева Т. Ф., Дерябина В. И. и др.; Под ред. Антонова Б. И. — М.. Агропромиздат, 1991, —287 с.: ил.

ISBN 5—10—002256—6

Описаны методы биохимических исследований крови, молока и мочи животных с целью определения в них белка, кетоновых тел, витаминов, макро- и микроэлементов, что необходимо для постановки диагноза Представлены методики диагностики микозов, микотоксикозон скота н птицы, санитарно-микологичсских исследований кормов А также даны методы гидрохимических исследований и диагностики отравтения рыб Для ветеринарных специалистов

„ 3706000000—096 ^Л 035(01)—91    ^96-91

(gj Ь И Атонов. Т Ф Янонлсна, Ъ И Дерибмва. Н \ Сухая. Г. Г. Банширпя, Д. A. Parrwйена, состди.теиио, 1941

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ АСПЕРГИЛЛЕЗА ПЧЕЛ

(Утверждены 10 мая 1984 г.)

1.    Общие положения.

1.1.    Аспергиллез пчел (аспергилломнкоз, каменный расплод) инфекционная болезнь взрослых пчел н расплода, вызываемая грибом Aspergillus flavus, а также A. fumigatus, A. niger.

1.2.    Диагноз ставят на основании эпизоотологическнх данных, обнаружения характерных изменений у пчел н расплода, результатов микроскопического исследования препаратов и наличия типичных колоний в посевах.

1.3.    В лабораторию направляют не менее 50 живых пчел с клиническими признаками болезни или столько же трупов из свежего подмора подозреваемых семей и вырезки расплода с погибшими личинками (10X15 см). Материал посылают в стеклянных банках с притертыми пробками. Срок доставки в лабораторию — в течение суток с момента отбора материала.

2.    Лабораторные исследования.

2.1. Лабораторные исследования включают внешний осмотр пчел и личинок, микроскопическое исследование соскобов и выделение культуры возбудителя.

2.2.    При осмотре пчел я личинок обращают внимание на наличие на

поверхности тела грибного налета желто-зеленого или черного цвета в зависимости от вида поражающего гриба. Налет также хорошо заметен на дне ячейки после извлечения из нее личинки, которая может прикрепляться к ячейке сота разросшимся мицелием, высохшие личинки имеют твердую консистенцию (каменный расплод).    ♦

2.3.    Для микроскопического исследования готовят препараты Соскобы с поверхности погибших пчел, личинок, а также сотов помещают на предметное стекло в каплю раствора, состоящего из равных частей спирта, воды и глицерина, покрывают покровным стеклом и исследуют под малым и средним увеличением микроскопа

2 4*. С целью выделения культуры возбудителя заболевания кусочки трупов пчел и личинок помешают в чашки Петри на агар Чапека н культивируют при 25—30 °С. Для предупреждения роста^ посторонней микрофлоры к среде добавляют антибиотики (пенициллин 50 ЕД/мл, стрептомицин 100 ЕД/мл).

Через 3—4 дня на среде появляются желто-зеленые мелкозернистые колонии гриба A. flavus с воздушным мицелием по краям. Мицелий белого или желтого цвета с отходящими от него многочисленными коиидиеносцами, на концах которых имеются булавовидные утолщения, несущие радцдльво расположенные одноярусные или двухъярусные стеригмы с цепочками бес цветных округлых конидий 3—6 мкм в диаметре.

В посевах из патологического материала колонии A. fumigatus темнозеленого цвета, A. niger черно-коричневого

2 5. Лабораторный диагноз на аспергиллез считают установленным при обнаружении характерных изменений у пчел и расплода и возбудителя болезни в препаратах из материала от них или выделении культуры возбудителя даже при отсутствии характерных изменений у пчел

2.6. Срок проведения лабораторных исследований до 5 днеГт.

Предисловие    ................ 3

Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследовании крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях ................ 5

Отбор и    подготовка проб крови......... 5

Определение общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом     6

Определение общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции    .     7

Определение белковых фракций в сыворотке крови нефелометриче-

скнм методом    .     8

Определение мочевины в сыворотке крови с диаиетилмояооксимом 9 Определение глюкозы в безбелковом фильтрате крови по цветной

реакции с ортотолуидином     10

Определение глюкозы в безбелковом фильтрате крови по методу

Сомоджн ........ 11

Определение мочевины в сыворотке крови с диацетилмонооксимом

(вариант 2)     13

Определение общих липидов в сыворотке крови по Бауман .    .    14

Определение общего холестерина по Ильку......14

Определение общего количества кетоновых тел в безбелковом

фильтрате крови йодометрическим методом .....15

Определение общего кальция в сыворотке крови комплексометрн-

ческим методом по Уилкинсону ........16

Определение неорганического фосфора в безбелковом фильтрате

крови с ванадат-молибдатным реактивом......17

Определение неорганического магния в безбелковом фильтрате

крови с титановым желтым     18

Определения калия и натрия в плазме, крови пламенной фотометрией ............... 19

Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови

по гидролизу бета-глицерофосфата     2!

Определение щелочного резерва в плазме крови диффузионным

методом    .     22

Определение витамина А и каротина в плазме (сыворотке) крови

спсктрофотомстрическим методом .     23

Определение витамина А в плазме крови колориметрическим методом .................24

Определение каротина в плазме (сыворотке) крови фотометрическим

методом.................26

Определение витамина С в плазме крови.......27

Определение йода, связанного с белком, в сыворотке крови по Ак-

ланду в модификации С. В Силаевой........28

Определение общих липидов в сыворотке крови с сульфофюсфова-нилиновым реактивом............29

Определение кобальта в крови по методу С. /Л Гусева в модификации А. А. Титовой.......... 30

Определение марганца в крови перйодатным методом ....    32

Определение меди и железа в крови по Сейделу в модификации

С. Г. Кузнецова     33

Определение цинка в крови с дитизоном по Н А Чеботаревой    34

Методика определения витамина £ в биологическом материале .    37

Методические указания по групповой диагностике и профилактике Е-вк

тамнниой недостаточности у    птиц     39

Методические указания по групповой диагностике н профилактике К*ги*

повитамииоза у птиц..............43

Методы биохимических исследований ........45

Определение витамина В₂ (рибофлавина) в органах и тканях по

Б. А. Лаврову................45

Определение витамина В, в органах и тканях.......46

Микробиологический метод определения витамина B_t2 в крови (по

Н. И. Пушкиной)...............47

Определение кальция в сыворотке крови трилояометрическим методом

с флюорексоном     50

Определение меди, марганца, цинка, кобальта и железа в одной навеске 50 Определение содержания железа (с салицнловокнслым    натрием)    51

Определение меди с помощью диэтнлднтиокарбамата по Тауинню .    51

Определение содержания марганца персульфатным    методом    ...    53

Определение кобальта в крови с помощью нитрозо-И-соли ...    53

Определение молибдена в биологических объектах    по    Тауинню    55

Определение концентрации калия в сыворотке крови    ..... 56

Определение кетоновых тел в крови животных в сдвоенных колбах ло

методу Р. Я. Трубки..............56

Определение неорганического фосфора в сыворотке крови по В. Ф. Ко-

ро мыс лов у и Л. А. Кудрявцевой.......... 58

Определение витамина B_f в крови птиц по лировиноградиой кислоте

Йосвенный метод)...............59

иагностика недостаточности витамина D по содержанию лимонной кислоты В сыворотке крови птиц ...........60

Определение витамина В_с (фолиевой кислоты) в печени птиц    61

Колориметрический метод определения натрия в плазме (сыворотке)

крови по Олбенису и Лейну............62

Исследование молока.............63

Исследование мота ....     64

Определение концентрации хлоридов в крови.......67

Определение остаточного азота в крови с реактивом Несслера ...    67

Определение молочной кислоты а крови колориметрическим методом (по

Баркеру и Саммерсону).......... 68

Определение серы в биологическом материале (С.    Г.    Кузнецов)    69

Методика флюориметрического определения селена в органах н тканях

животных и продуктах животноводства.........70

Методические указания по диагностике, лечению н профилактике гипо-гаммаглобулннемни у молодняка сельскохозяйственных    животных    72

Микологические и микотоксикологкческие исследования    ...    .73

Методические указания по лабораторной диагностике возбудителей дер*

матомиколов животных........... 73

Временные методические указания по лабораторной диагностике де{5ма-

тофилеэа сельскохозяйственных животных........80

Методические указания по лабораторной диагностике аспергиллеза пчел 83 Методические указания по лабораторной диагностике аскосфероза пчел и выделению возбудителя из пыльцы (перги).......84

Методические ухазания по лабораторной диагностике меланоза пчел    86

Методические указания по лабораторной диагностике мускарднны тутового шелкопряда..... 87

Методические указания по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов..............88

Извлечения из Методических указаний о ветеринарно-санитарном контроле импортных кормовых средств..........107

Извлечение из Указания № 435-2 о встсринарио санитарных требованиях при импорте в СССР фуражного зерна, тапиоки к соевых бобов для кормовых целей, шротов из арахиса,    сои    и    семян рапса    ....    108

Методика определения токсичности фуражного зерна, продуктов его

переработки и комбикормов............108

Методика определения токсичности шротов, жмыхов и кормовых дрожжей ..................Ш

Методика определения токсичности комбикормов на куриных эмбрионах 112 Методика определения токсичности кормов микробиологического синтеза 114 Методика микробиологического определения токсичности культур грибов 115 Методические указания по микологическому исследованию фузариозного

зерна пшеницы ..............,116

Методика качественного определения    мнкотоксииа    Т-2    в    зернофураже    119

Методические указания по количественному определению T-2-токсииа

в зерне и комбикормах ............. 122

Методика определения микотокенка зсаралснона (Ф-2) в фуражном зерне и комбикормах...............125

Извлечения из Методических указаний по диагностике к профилактике

зсараленон токсикоза свиней и птиц .     126

Методика количественного определения афлатоксинов Bi и G_t в кормах 127 Методические указания но определению афлатоксинов (В_ь В₂, Gi_f Gj)

в кормах для рыб ..............130

Методика определения охратоксина А в зернофураже, продуктах его

переработки и комбикормах.......... 133

Извлечения из рекомендаций по диагностике и профилактике охратокси-

коза у свиней .....     135

Методика определения стеригматоцистина в зернофураже, продуктах его

переработки и комбикормах............136

Методика определения в кормах микотоксина патулнна    138

Извлечение из Методических указаний по диагностике и профилактике

пзтулинотоксикоза у свиней ........... .141

Методические указания по микробиологическому способу выявления

комплекса микотокенков в зерне, отрубях и муке......142

Методические указания по организации мккотоксикологического контроля фузариозного зерна и продуктов его переработки фуражного назначения ............•......144

Рекомендации по использованию пораженного фузэриозом зерна пшеницы, ячменя, продуктов их переработки — отрубей, мучки, побочных продуктов, лузги н зерноотходов для кормления сельскохозяйственных животных и птицы...............149

Методика определения микотокенна Ф-2 (зеараленона) в органах и тканях животных................151

Методика определения охратоксина А    в    органах и тканях животных .    153

Временное наставление 117-11 по применению стандарта зеараленона

при микотоксикологических исследованиях........155

Временное наставление по применению стандарта патулнна при мико-

токсикологпчегких исследованиях..........157

Наставление по применению стеригматоцистина при микотоксикологи-ческих исследованиях......... 159

Наставление по применению охратоксина при микотоксикологических

исследованиях................162

Временное наставление по применению T-2-токсинз при мнкотокенколо-

гических исследованиях.............164

Методика одновременного определения микотокеннов Т-2, Ф-2, афлаток-

сина В| и стеригматоцистина в фуражном    зерне......166

Методические указания по определению содержания T-2-токсияа в биологических тканях и экскретах...........171

Санитарно-микологическое исследование    спермы......174

Методика микологического исследования и оценки спермы, применяемой при искусственном осеменении сельскохозяйственных животных ..................174

Гидрохимические исследования............186

Извлечение из методик гидрохимических исследований проб из рыбохозяйственных водоемов...........186

Вода для рыбоводных хозяйств. Обшие требования и нормы.

ОСТ 15.372—87     207

Рекомендации по санитарно-бактериологической опенке воды при содержании рыбы в зимовальных прудах..........215

Методические указания по санитарной оценке воды, используемой в карповом рыбоводстве, путем определения биохимического потребления кислорода за пять суток (БПКз).........222

Диагностика отравлений рыб и токсичности водной среды. Извлечение из Методических указаний по диагностике отравлений рыб и токсичности

водной среды ................226

Извлечение из Методических указаний по диагностике отравлений рыб пестицидами................238

I.    Хлорорганические соединения..........238

Извлечение из Методических указаний по диагностике и профилактике отравлений рыб полихлоркамфеном и лолндофеном    239

Метод определекия полнхлоркамфена и иолндофена в органах

рыб к воде хроматографией в тонком слое......240

Извлечение из Методических указаний по диагностике н профп-лактике отравлений рыб кельтаком........243

II.    Фосфорорганические соединения.........244

Извлечения из Методических указаний по диагностике и профилактике отравлений рыб инсектицидами и ларвицндами (трп-

хлорметафсс-3, Фосфамид и метилнктрофос)......245

Извлечения из Методических указаний по диагностике отравления

рыб гардоной..............249

Извлечения из Методических указаний по диагностике и профилактике отравлений рыб фозалоном, фталофосом, кланом и про*

панидом................253

Ш. Производные тиокарбэминовой кислоты.......256

Извлечения из Указаний по диагностике отравления рыб бентио-карбом............. 257

IV.    Производные карбамнновой кислоты.......260

Извлечения из Методических указаний по диагностике отравления

рыб пестицидами.............260

V.    Производные карбоновых кислот.........260

Извлечения из Методических указаний по диагностике и профилактике отравлений рыб фозалоном, фталофосом, яланом и про-панидом................260

VI.    Производные днхлорфенокснуксусных кислот.....263

Извлечения из Методических указаний по диагностике отравлений

рыб 2,4-дихлорфеиоксиуксусной кислотой.......263

VI!. Фторсодержащие ядохимикаты ........2б9

Извлечения из Методических указаний по диагностике отравлений рыб пестицидами............269

Тигрометрический метод определения фтор-иона в воде .    .    270

Методика определения метиленового синего в комбикорме    271

Извлечения из дополнительного перечня Хг 1 предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов к приложению Л& 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения

сточными водами от 16.05.74 г............272

Извлечения из дополнительного перечня № 2 предельно допустимых концентраций вредных веществ к приложению № 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения сточными водами от 16.05.74 г.    276

Извлечения из дополнительного перечня № 3 предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов к приложению Ni 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения

сточными водами от 16 05.74 г............277

Извлечения, из дополнительного перечня .N? 4 предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов к приложению .V? 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения

сточными водами от 16 05.74 г............278

Извлечения из дополнительного перечня Л* 5 предельно допустимых концентраций вредных веществ для волы рыбохозяйственных водоемов к приложению № 3 Правил охраны поверхностных вол от загрязнения

сточными водами от 16.05.74 г.............280

Извлечения из дополнительного перечня .N? 6 предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов к приложению Л» 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения сточными водами от 16.05.74 г............281