^Г :'5S '• '^:V; -c\' •.;

ЩШ1

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ

БИОХИМИЧЕСКИЕ И МИКОЛОГИЧЕСКИЕ

Под редакцией Б. И. АНТОНОВА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ МЕЛАНОЗА ПЧЕЛ

(Утверждены 12 декабря 1986 г.)

1.    Общие положения.

1.1.    Меланоз — инфекционная болезнь пчелиных маток, вызываемая грибом Aureobasidium puliulans, сопровождающаяся поражением яичников, прекращением яйцекладки. Яичники окрашены в черный цвет. Кроме яичников, могут быть поражены прямая кишка с образованием каловой пробки, ядовитые железы и мышцы. Больные матки имеют увеличенное брюшко, неактивны, малоподвижны. Болезнь чаще проявляется во вторую половину лета.

1.2.    Диагноз на меланоз ставят на основании эпизоотологнческих данных, характерных признаков болезни и результатов лабораторного исследования.

1.3.    При подозрении на меланоз в ветеринарную лабораторию направляют погибших пчеломаток в 50%-ном водном растворе глицерина.

2.    Лабораторные исследования.

2.1.    Лабораторные исследования включают микроскопическое исследование патологического материала и выделение чистой культуры возбудителя.

2.2.    Трупы маток обрабатывают 70%-ным йодированным спиртом и вскрывают у них брюшко. Из пораженных янчннков и других внутренних органов готовят препараты для микроскопического исследования.

С этой целью на предметное стекло наносят каплю трофелола (20 г кристаллического фенола, 16 мл молочной кислоты, 31 мл глицерина), вносят в нее небольшой кусочек пораженного органа и расщепляют его двумя препаровальными иглами на отдельные фрагменты. Стекло слегка подогревают на слабом огне, накрывают покровным стеклом и микроскопируют под малым и средним увеличением микроскопа.

В пораженных органах в начале болезни обнаруживают спороцисты — округлые клетки гриба с коричневой цитоплазмой и двухконтурной оболочкой, а в поздней стадии заболевания — черную зернистую массу. В яичниках обнаруживают большое количество трубочек желтого, коричневого или черного цвета в виде темных пятен (меланин), что является характерным признаком болезни (у здоровой матки в возрасте до 2 лет яичники белого цвета).

2.3.    Для выделения культуры возбудителя из яичников и внутренних органов готовят суспензию на стерильном физиологическом растворе. Суспензию засевают на сусло-агар и культивируют при 28 °С в течение 5— 7 дней. Рост гриба появляется на 3-и сут.

Колонии возбудителя сначала плоские, гладкие, белые, в дальнейшем — складчатые от темно-коричневого до черного цвета. В препаратах из культуры гриба выявляют желто-коричневые гифы, овальные оидии и темно-коричневые круглые или овальные хламидоспор , которые при прорастании образуют псевдомицелнй и дрожжевидные клетки, расположенные цепочками или группами.

3.    Диагноз на меланоз считается окончательно установленным при положительных результатах микроскопического и микологического исследований.

4.    Срок исследования Ъ—7 дней.

Предисловие ...     3

Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследований крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях    .    .    .     5

Отбор и подготовка    проб крови......... 5

Определение общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом .     6

Определение общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции    .    .     7

Определение белковых фракций в сыворотке крови нефелометриче-

ским методом    .     8

Определение мочевины в сыворотке крови с диацетилмонооксимом 9 Определение глюкозы в безбелковом фильтрате крови по цветной

реакции с ортотолуидином    .     10

Определение глюкозы в безбелковом фильтрате крови по методу

Сомоджи    .    .     11

Определение мочевины в сыворотке крови с диацетилмонооксимом

(вариант 2)    .     13

Определение общих липидов в сыворотке крови по Бауман .    .    14

Определение общего холестерина по Ильку .    .    .    14

Определение общего количества кетоновых тел в безбелковом

фильтрате крови йодометрическим методом .....15

Определение общего кальция в сыворотке крови комплексометрн-ческим методом по Уилкинсону ...    ....    16

Определение неорганического фосфора в безбелковом фильтрате крови с ванадат-молибдатным реактивом    .    ...    17

Определение неорганического магния в безбелковом фильтрате

крови с титановым желтым     18

Определения калия и натрия в плазме, крови пламенной фотометрией .     .19

Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови по гидролизу бета>глнцерофосфата    .    .    21

Определение щелочного резерва в плазме крови диффузионным

методом    .     22

Определение витамина А и каротина в плазме (сыворотке) крови

спектрофотометрическим методом .     23

Определение витамина А в плазме крови колориметрическим методом    .     24

Определение каротина в плазме (сыворотке) крови фотометрическим

методом    .    .    ...     26

Определение витамина С в плазме крови.......27

Определение йода, связанного с белком, в сыворотке крови по Ак-

ланду в модификации С. В Силаевой........28

Определение общих липидов в сыворотке крови с сульфофосфова-нилииовым реактивом .    ♦     29

Определение кобальта в крови по методу С. И. Гусева в модификации А. А. Титовой .     *    30

Определение марганца в крови пернодатным методом ....    32

Определение меди и железа в крови по Сейделу в модификации

С. Г. Кузнецова .     33

Определение цинка в крови с дитизоном по Я Л    Чеботаревой    .    34

Методика определения витамина Е в биологическом    материале .    .    37

Методические указания по групповой диагностике и профилактике Е-вк-

таминной недостаточности у птиц .     39

Методические указания по групповой диагностике и профилактике К*ги-

повитамнноза у птиц..............43

Методы биохимических исследований ........45

Определение витамина В? (рибофлавина) в органах н тканях по

Б. А. Лаврову................45

Определение витамина В* в органах и тканях.......46

Микробиологический метод определения витамина B_J2 в крови (по

Н. я. Пушкиной)...............47

Определение кальция в сыворотке крови трилояометрнческим методом

с флюорексоном .....*..........50

Определение меди, марганца, цинка, кобальта и железа в одной навеске 50 Определение содержания железа (с салнциловокислым    натрием)    51

Определение меди с помощью диэтилдитиокарбамата    по Тауцнню    .    51

Определение содержания марганца персульфатным методом ...    53

Определение кобальта в крови с помощью нитрозо-И-соли .    53

Определение молибдена в биологических объектах по    Тауцнню    55

Определение концентрации калия в сыворотке крови.....56

Определение кетоновых тел в крови животных в сдвоенных колбах по

методу Р. Я. Трубки..............56

Определение неорганического фосфора в сыворотке крови по В. Ф. Ко-

ромыслову и Л. Л. Кудрявцевой.......... 58

Определение витамина Bi в крови птиц по пировиноградной кислоте

/косвенный метод)...............59

Диагностика недостаточности витамина D по содержанию лимонной кислоты в сыворотке крови птиц ...........60

Определение витамина В_с (фолиевой кислоты) в печени птиц .    .    61

Колориметрический метод определения натрия в плазме (сыворотке)

крови по Олбенису и Лейну............62

Исследование молока.............63

Исследование мочи ....     64

Определение концентрации хлоридов в крови.......67

Определение остаточного азота в крови с реактивом Несслера ...    67

Определение молочной кислоты в крови колориметрическим методом (по

Баркеру а Саммерсону).......... 68

Определение серы в биологическом материале (С.    Г.    Кузнецов)    69

Методика флюориметрического определения селена в органах и тканях

животных и продуктах животноводства.........70

Методические указания по диагностике, лечению и профилактике гипо-гаммаглобулинемии у молодняка сельскохозяйственных    животных    72

Микологические и микотоксикологические исследования    ...    .73

Методические указания по лабораторной диагностике возбудителей дерматомикозов животных.......„    .    73

Временные методические указания по лабораторной диагностике дерма-

тофилеза сельскохозяйственных животных........80

Методические указания по лабораторной диагностике аспергиллеза пчел 83 Методические указания по лабораторной диагностике аскосфероза пчел и выделению возбудителя из пыльцы (перги).......84

Методические указания по    лабораторной диагностике меланоза пчел .    86

Методические указания по лабораторной диагностике мускардины тутового шелкопряда..... .........87

Методические указания по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов..............88

Извлечения из Методических указаний о ветеринарно-санитарном контроле импортных кормовых    средств..........107

Извлечение из Указания № 435-2 о ветеринарно-санитарных требованиях при импорте в СССР фуражного зерна, тапиоки и соевых бобов для кормовых целей, шротов    из арахиса, сои и семян рапса ....    108

Методика определения токсичности фуражного зерна, продуктов его

переработки и комбикормов............108

Методика определения токсичности шротов, жмыхов и кормовых дрожжей ..................Ш

Методика определения токсичности комбикормов на куриных эмбрионах 112 Методика определения токсичности кормов микробиологического синтеза 114 Методика микробиологического определения токсичности культур грибов 115 Методические указания по микологическому исследованию фузариозного

зерна пшеницы ..............«116

Методика качественного определения микотоксина Т-2 в зернофураже 119 Методические указания по количественному определению T-2-токснна

в зерне и комбикормах     .........122

Методика определения микотоксина зеараленона (Ф-2) в фуражном зерне и комбикормах ............... 125

Извлечения из Методических указаний по диагностике и профилактике

зсараленонтоксикоза свиней и    птиц    .     126

Методика количественного определения афлатоксинов Bi и Gi в кормах 127 Методические указания по определению афлатоксинов (Bj, Вг, Gj, G2)

в кормах для рыб ..............130

Методика определения охратоксина А в зернофураже, продуктах его

переработки и комбикормах............133

Извлечения из рекомендаций по диагностике и профилактике охратокси-

коза у свиней................135

Методика определения стеригматоцистина в зернофураже, продуктах его

переработки и комбикормах    .    ..........136

Методика определения в кормах микотоксина патулина ....    138

Извлечение из'Методических указаний по диагностике и профилактике

патулинотоксикоза у свиней    ............ 141

Методические указания по микробиологическому способу выявления

комплекса микотоксинов в зерне,    отрубях и муке......142

(Методические указания по организации микотоксикологического контроля фузариозного зерна и продуктов его переработки фуражного назначения ............*......144

Рекомендации по использованию пораженного фузариозом зерна пшеницы, ячменя, продуктов их переработки — отрубей, мучки, побочных продуктов, лузги и зерноотходов для кормления сельскохозяйственных животных и птицы...............149

Методика определения микотоксика Ф-2 (зеараленона) в органах и тканях животных................151

Методика определения охратоксина А    в    органах    и    тканях    животных    .    153

Временное наставление № 117-11 по применению стандарта зеараленона при микотокснкологических исследованиях    ........    155

Временное наставление по применению стандарта патулнпа при мико-

токсикологических исследованиях..........157

Наставление по применению стеригматоцистина при микотоксикологи-ческих исследованиях............. 159

Наставление по применению охратоксина при микотоксикологических

исследованиях................162

Временное наставление по применению T-2-токсина при микотоксикологических исследованиях............-    164

Методика одновременного определения микотоксинов Т-2, Ф-2, афлаток-

сина Bi и стеригматоцистина в фуражном    зерне......166

Методические указания по определению содержания T-2-токсина в биологических тканях и экскретах...........171

Санитарно-микологическое исследование    спермы......174

Методика микологического исследования и оценки спермы, применяемой при искусственном осеменении сельскохозяйственных животных ..................174

Гидрохимические исследования...........*    186

Извлечение из методик гидрохимических исследований проб нз рыбохозяйственных водоемов...........186

Вода для рыбоводных хозяйств. Общие требования и нормы.

ОСТ 15.372—87     207

Рекомендации по санитарно-бактериологической оценке воды при содержании рыбы в зимовальных прудах..........215

Методические указания по санитарной оценке воды, используемой в карповом рыбоводстве, путем определения биохимического потребления кислорода за пять суток (БПКб).........222

Диагностика отравлений рыб н токсичности водной среды. Извлечение из Методических указаний по диагностике отравлений рыб и токсичности

водной среды................226

Извлечение из Методических указаний по диагностике отравлений рыб пестицидами................238

I.    Хлорорганические соединения..........238

Извлечение из Методических указаний по диагностике и профилактике отравлений рыб полихлоркамфеном и полидофеном    239

Метод определения полихлоркамфена и полндофена в органах

рыб и воде хроматографией в тонком слое ......    240

Извлечение из Методических указаний по диагностике и профилактике отравлений рыб кельтаном........243

II.    Фосфорорганические соединения.........244

Извлечения из Методических указаний по диагностике и профилактике отравлений рыб инсектицидами и ларвицидами (три-

хлорметафос-3. фосфамид и метилнитрофос)......245

Извлечения из Методических указаний по диагностике отравления

рыб гардоной..... 249

Извлечения из Методических указаний по диагностике и профилактике отравлений рыб фозалоном, фталофосом, планом и про-панидом................253

III.    Производные тиокарбаминовой кислоты.......256

Извлечения из Указаний по диагностике отравления рыб бентио-карбом............. .    .    257

IV.    Производные карбаминовой кислоты.......260

Извлечения из Методических указаний по диагностике отравления

рыб пестицидами.............260

V.    Производные карбоновых кислот.........260

Извлечения из Методических указаний по диагностике и профилактике отравлений рыб фозалоном, фталофосом, яланом и про-панидом................260

VI.    Производные дихлорфеноксиуксусных кислот.....263

Извлечения из Методических указаний по диагностике отравлений

рыб 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой.......263

VII. Фторсодержащие ядохимикаты .    .    ,.....

Извлечения из Методических указаний по диагностике отравлений рыб пестицидами............

Титрометрический метод определения фтор-иона в воде Методика определения метиленового синего в комбикорме Извлечения из дополнительного перечня № 1 предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов к приложению Л® 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения

сточными водами от 16.05.74 г............

Извлечения из дополнительного перечня Л^г® 2 предельно допустимых концентраций вредных веществ к приложению № 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения сточными водами от 16.05.74 г.

Извлечения из дополнительного перечня № 3 предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов к приложению № 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения

сточными водами от 16 05.74 г............

Извлечения из дополнительного перечня № 4 предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов к приложению Л^р® 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения

сточными водами от 16 05.74 г............

Извлечения из дополнительного перечня Л® 5 предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов к приложению Л? 3 Правил охраны поверхностных вод. от загрязнения

сточными водами от 16.05.74 г............

Извлечения из дополнительного перечня Л® 6 предельно допустимых концентраций вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов к приложению Л® 3 Правил охраны поверхностных вод от загрязнения сточными водами от 16.05.74 г............

Справочное издание

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ

БИОХИМИЧЕСКИЕ И МИКОЛОГИЧЕСКИЕ

Справочник

Составители: Антонов Борис Иванович, Яковлева Татьяна Федоровна, Дерябина Валентина Ивановна,

Сухая Наталья Александровна

Зав. редакцией В. Г. Федотов Художественный редактор И. А. Никонова Технический редактор В. А. Зорина Корректоры Т. И. Кононенко, Н. Н. Смолина

ИБ № 7286

Сдано в набор 10.09.90. Подписано в печать 05.12.90. Формат 60 x 88Vi«. Бумага кн.-журиальная. Гарнитура Литературная. Печать офсетная. Уел. печ. л. 17,64. Уел. хр.-отт. 17,64. Уч.-изд. л. 26,40. Изд. № 100. Тираж 15 000 экз. Заказ Л« 484. Цена 1 р. 40 к.

Ордена Трудового Красного Знамени ВО «Агропромиздат», 107807, ГСП-6, Москва, Б-78, ул. Садовая-Спасская, 18.

Московская типография № 11 Госкомпечати СССР 113105, Москва, Нагативская ул., д. 1,