Мн1шстерстоо сельского хозяйства Российской Федерации (Минсельхоз России) Департамента Ветеринарии 03.04 01 г N* 13-50г005<)

Утверждаю

Заместитель руководителя F..A. 11еиоклонов 03 апреля 2001 г.

1.    ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1.    Пари туберкулез (паратуберкулезмыи энтерит. Со лезн1. Johne) — инфекционная, хронически протекающая болезнь жвачных, преимущественно, крупного м мелкого рогатого скота, верблюдов, северных оленей, вызываемая Myrdwclcrium paralubeiculojis и характеризующаяся поражением кишечника н мезентериальных лммфст1ческит узлов

Нолезиь протекает, в основном, я латентной форме, при переходе в клиническую стадию сопровождается диареей, анемией, истощением и заканчивается, как irpamuio, ruGc-ПЫО животных.

1.2.    У зараженных животных рязеивается состояние по выщеной чувствительиостп (сенсибилизация) к туберкулн-ну для птиц II в кропи поя ял я юте х специфические анти те ла.

13. Иоследояанис на паратуберкулез в благополучных хозяйствах проводят при обняруженмп у животных признаков. вызывающих подозрение на заболевание, в неблагополучных хозяйствах — для выявления больных животных.

Диагноз на наратуберКулсз устияышвлют нл осмопл вил результатов клинического осмотра животных, аллергического. серологического, бактерлосколического. пато-лсиоамагомнчегкого н гистологического методов исследования с учетом зпизоотологпчеолх данных.

1.4. Диагноз ни иаратуберкулеэ считается уагневленным:

-    при наличии у животных характерных клинических признаков болезни н получении одновременно положительных результатов бактеряюсконичссКиго пли ГосТОЛо-гнческого иесяедования бпоматернала от этих животных:

-    при обнаружении характерных питодогсаиатомичес-клх изменении я кмшечннхе и мезентериальных лимфатических углах животных с гистологическим илп боктерио-скопическим подтверждением болезни. независимо от наличии пли отсутствия клинических признаков заболевания.

L5. В неблагополучных по паратуберкулезу хозяйствах стоил*.фермах, дворах) больными считают животных:

Крупный рогатый скот:

-    с выраженными КАШШчеекямл признаками болезни независимо от результатов аллергического II серолошчес-кого нсеяедоияишй;

-    при слабо выраженных клинических признаках болезни н одновременно положительном результате серологического или бактериоскопического исследования:

-    при отсутствии клинических признаков. 1Ю соипадлю-щих положительных результатах аллергического и ссроло-гического исследований.

Овцы и козье

-    при наличии клиничегких признаков болезни, или при положительных результатах аллергического к серологического, или актсрмоскплмчсского исследовании.

Верблюды:

' при наличии клинических признаков бопе-знн. п при по Ложителыюм результате аллергического или бдктериосконического исследования.

Crmjmw олеин

• при наличии клинических признаков болезни и положительном результате, бактсриоскоглчссксят) исс л с до влияя.

2.    КЛИНИЧЕСКИЙ осмотр

2.1. У крупного рогатого скота клинические признаки

болезни прояпляются я нозрасте не ранее 3 лет в виде дна реп и негощенкя. у Дойных коров наблюдается снижение молочной продуктивности.

По мере разлития болезни резко снижаете* упитанность при сохранении аппетита, глаза западают в глазных впадинах. возникает диарея, п начале перемежающаяся, а затем все более стойкая я изнуряющая С следствие постоянных сильных потуг позвоночник ютнбается. мышцы таза атрофируются («пшлозадостъ»). Фекалии жидкие, зеленовато-желтые или коричневы с, с пузырьками газа и слизью, иногда с кровью. ЗЛОВОННОГО запаха. При параличе сфинктера прямом кишки дефекация происходит самопроизвольно, за I |м попотел хвост, вымя, тазовые конечности Часто наблюдаются отскн в подчелюстном пространстве и в области подгрудка. езъерошсииость волосяного покрова.

2-2. У овец И коз клинические Признаки болезни развиваются медленно, основными из них являются сильное истощение при нормальном аппетите с возможным развитием перемежающейся диареи. При отсутствии диареи фекалии менее плотные и не формируются в шарики. Отмечаются подтянутость живот, бледность слизистых сбояочек. отеки подчелюстного пространства, подгрудка и живота.

При выраженных клинических признаках животное погибает.

2J. У верблюдов клинические признаки болезни проявляются, в основном, в возрасте 1-3 лез И характеризуются диареей, сил milim цсто11(е]1ием.ашюшнистыо слизистых оболочек.тусклостью волосяного покрои*, аздутпем живота, увеличением печени. Кал зловонного запаха, темно-коричневого пли землистого цвета, с пузырьками ia3a. Тазовые конечности и хвост испачканы жидкими каловыми массами, анус вывернут.

Повышения температуры тела не наблюдается. Больные животные стонут, часто ложатся.

2.4. У северных оленей клиническое проявление болезни начинается в возрасте 1.5-2,5 лет с постеленного исхудания. Больные животные подбирают задние ноги иод живот. позднее появляется постоянная или перемежающаяся диарея.

3. АЛЛЕРГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

3.1. Аллергическое нссг.едование животных на парату-беркулез проводят сухим очм1ценным (ППД) туберкулином для птиц

Аллергическому исследованию подвергают Крупный рогатый скот с 6 мес . овец и коз — с 3 мсс.. верблюдов — с годовалого возраста.

Нс разрешается нсслелоиать туберкулиновой пробой животных в течение трех недель после вакцинации.

32. Крупному рогатому скоту ППД-тубсркулми применяют я дозе 2500 ME в 0.7. мл раствора. Для этого содержимое флакона с туберкулином (500 000 ME) растворяют в двух флаконах растворителя микибактернлльимх аллергенов.

В месте инъекции волос выстригают, кожу детицфици руют 70% этиловым спиртом. Раствор туберкулина вводят животный (кроме быков) внутрндожно в середине щей.быкам — и под хвост оную складку.

Для виутрикожного введения туберкул в на используют бг|ЫГОльиЫе НПЬсктиры йлН шприцы с бегунком вместимостью 1-2 мл и иглы для аиутрнкожиых инзускиий.

Учет н щенку реакция проводят через 7? часа, при этом у каждого животного прощупывают место введения тубер-

кулика При обнаружении припухлости измеряют кутнчет-ром толщину Кожной складки в месте инъекции и определи кг< величину ее утолщения в миллиметрах сравнением с толщиной складки неизмененной кожи вблизи от места вне Пети туберкулина.

Реагирующими на туберкулин считают животных ори образовании отечной болезненной припухлости и При угол щс)1Н11 кожной складки но 6 мм п более.

33. Ояодм и котам ППД-тубсркулии применяют в розе 5 ООО МВ в 03 мл раствора. Для этого содержимое флахоил г туберкулином (500 ООО ME) растпоряют * одном флаконе рнсгнорнтеля микобак сериальных аллергенов.

Раствор туберкулина плодят только шприцем с бегум ком вместимостью 1-2 мл и иглами для инутрмкожных инъекций в толщу нижнего векл. отступя от его края но 1,5-2 см Место пии-кцин пргдплрмтел14Ю дезинфицируют 70% этиловым спиртом.

Учет и оценку реакции проводит через 48 часов, ира игом У каждого животного Прощупывают место введения туберкулина н сравнивают веки левого ■ правого глаза.

Реагирующими на туберкулин считают животных при образовании ощутмой припухлости п месте пнедеиня препа рата.

3.4 Верблюдам ППД-туберкулии вводят, как овцам и котам, в дозе 5 ООО WF. и 03 мл рагпюра. Луберкулнм вводят безыгопкнмм инжектором или шпрнцем с бегунком вместимостью 1-2 мл н иглами для внутрикожиых инжекций в кожу бесшерстого участка брюшной стенки в обяасти паха на уровне горизонтальной линии седалищного бугра. Место инз-екдны предварительно дезинфицируют 70% зтнло-пым спиртом.

Учет и оценку реакции проводят через 72 чага, при злом у каждого животного прощупывают место введения губер-кулпна. При обнаружении припухлости измеряют кутммет-ром толщину кожной складки л определяют величину ее утолщения я миллиметрах сравнением с толщиной складки неизмененной кожи вблизи от места инъекция прегарата.

Реагирующими считают животных при образовании отечной болезненной припухлости я утолщения кожной еклддкл нл 7 мм и более.

4. СЕРОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Серологическую диагностику паратуберкулеза осуществляют у крупного и мелкого рогатого скота с помощью реакции связывания комплемента (РСК).

4.L Компоненты peaKipui:

•    сыворотка крови обследуемых животных свежая влг консгрвировашиоц

-    aimireH паратуберкулетиый для РСК;

•    сыворотки плратуберь.улетная для РСК (позитивная);

-    сыворотка крови здорового крупною или мелкого рогатого скота (негативная);

-    комплемент сухой для РСК;

•    сыворотка гемолитическая для РСК (гемолизин);

-    Эритроциты Оараиа. 2J5% взвесь.

-    раствор физиологический, pH бД-^2 (физраствор).

4.1.1 Некписсрвированмая сыворотка крови пригодна

для исследования о течение 5 суток со дня взятия крови с со-хранением сс при температуре от 4" С До S" С

Сыворотка, консервированная Кристаллами борной кислоты до насып (енмя. пригодна для исследования я течение 10 суток.

Мутные, проросшие, гемо-лпзпрованиыс пробы сыворог-ки крови исследованию нс подлежат.

Испытуемые пробы сыворотки крови а также позитив кую и негативную сыворогкм, разводят физраствором 1:10 И инактивируют в Течение 30 мин.. KpyiBcoro рогатого скота — при темпеуятуре 59-60” С, овец и КОЗ — при температуре 63-64" С

4.1.3. Антиген парптуберку-г.езный для РСК приготаилияа

ют к рели;н;| в соответствии с наставлением г,о его применению н используют и рабочем р>ззвсдекии 1:100 Для полу чения рабочего разведения одни объем антигена нз ампулы переносят сухой мерной пипеткой ыл дно сухой колбы и добавляю г по каплям 90 объемов физраствора при посто янпом покачивании колбы. Растворенный шпиген останля ют для созревания на 20-30 мин при комнатной температуре. Зятем по стсикс Колбы при пос-зомцном перемешивании вносят 90 объемов физраствора.

4.1.3. Для получения п»вссн эритроцитов дефабриннро ваьмую или консервированную кровь бирпнп центрифугируют в течение 10 мин прп 2500-3000 об/мин и отмывают эритроциты физраствором с помощью дяух- четырех крат иого центрифугирования при таком же режиме до полного обегцпечивлнпя н.здосадочной жидкости. Надосадочиую жидкость сливают. Из осадка »рмтрищггоп ГОТОВЯТ 7,5% взвесь иа физиологическом растворе.

41.4. Сыворотку гемолитическую для РСК яспользуют в реакции я удвоенном титре (при лггрс г смол и »лни 1:1500 готоивт разведение 1:750, при титре 1:1750 — разведение 1:875 я т.д,).

4.J.5. Из полненной 2.5% ювеси эрш-роцнтов и рас тоора гемолизина и удвоенно*» тзггрс готовят гсыпл1пячсс-кую систему путем смсиптаннв этих компонентой в рагавпх ебз^гмэх Дня этого в колбу со взвесью эритроците мед леино вливают раствор гемолизина прн постоянном пер мешивянкл содержимого, затем гемсмстему выдерживая п водяной бвне при 37-ЯК® С в течение 70 мпн.

4.1.6. Приготовление рабочею раствора комплсмета.

'Изтроявнне комплемента пропорет п гемолитической системе перед каждой постановкой реакции. Отбирают необходимое для данного объема количество ампул (флаконов) с компяеме»гтом (из примерного расчета одна ампула или флакон комплемента иа 250 пробирок реакции объемом 1Д) мл), растворяют препарат в физрастворе,количество которого указано на ампуле (флаконе), сливают в одну емкость и осторожно перемешивают.Таким образом получают основной раствор комплемента, который хранят при температуре от 4^е С до 6^е С до постановки реакции.

Для титровлили из основною раствора комплемента готовят разведение 1:20, дли чею берут 0.1 мл раствора н разводят его 1.9 мл физраствора.

Комплемент в разведении 1:20 разливают в ряд пробирок дозами от 0Ш до 020 мл.увеличивая дозу в каждой следующей пробирке на ОШ мл в соответствии с таблицей.

Затем я пробирки добавляют физраствор до 0.60 мя общего обьема жидкости, после чего в каждую пробирку ено сят по 0,40 мл гемолитической системы.

Штотвя с пробирками встряхивают и помещают в водяную банк» прн температуре 37-38" С.' на 10 мин.

Штатив с пробирками извлекают нз бвки и немедлен! проводят учет результатов реакции в ироходяп;см свете.

Примечание. Для удобства в работе и получения более точной дозировки вначале можно припл овить исобходи мыс разведения комплемента н десятикратных объемах. Для этого в дополнительный ряд пробирок пносят комплемент. разведенный 120. в дозах 02; 0,4; 0.6 и т.д. до 2.0 мл н Добавляют в каждую пробирку недостающее до 2J0 мл количество физраствора, то есть соответственно 1)<;1Д 1,4 мл и т.д Из каждой пробирки дополнительного ряда переносят по 02 мл жндкостм я соответствующую пробирку ряда для

-лпролампя (из первой пробирки — ■ первую, из второй — во 1П«РУЮ И TJ1.). Данный перенос жидкости можно ЙЫПОЛ нить аппаратом Флоринского.

Затем в пробирки добавляют физраствор по 0.4 мл и да Лее продолжают работу как описано ишле

"Петром комаяеме.нга считают наименьшее его коли-честио (наибольшее разведение), при котором о течение. 10 мин. при температуре 37-38° С наступает полный гемолиз ОД мл 2^% вчвесм эритроцитов барана я присутствии ОД мл гемолитической сыворотки в общем объеме жидкости tfl ми. В приметит представлением ■ таблице, гнтр комплемента равен (1.10

В реакцию берут комплемент в доче, большей его титра на одни и и-repeal t (например. при титре 0,10 берут 0,12).

Количество комплемента для постаноякн реакции опрс делают 1ю формуле:

X — количество основного раствора комплемента, необходимое для потиойкиреакиии.мл;

Д — дон» Комплемситл. большая его ипуа на один пи терквл.мя;

II — количество пробирок в реакции;

20 — кржтногть разведения комплеметга при титрлцки Например. в реакции ди-икао быть 200 пробирок, тигр мп г смен тя (по табл.) равен 0,10. Следовательно, кодичсс--эо основного раствора комплемента для постановки реакции равно:

^0,104^0^00. _им„

Необходимое количество рабочего раствора комплемента для пмпигаки реакции равно 40 мл (по ОД мл рабочего раствора в каждую ИЗ 200 пробирок), отсюда — к 1.2 мл основного раствора комплемента следует добавить 38,8 мл физраствора.

4Д. Постановка реакции

Каждую пробу инактивированной сыворотки кроен в разведении 1:10 исследуют и двух рядах пробирок' с антигеном и без антигена Для этого в первый и второй ряд пробирок ипвтнвя вносят no 0J02 мл испытуемой сыворотки и добавляют по 0.18 мл физраствор», затем в пробирки первого ридв вносят по ОД мч рабочего раствора антигена.■ пробир ки второго |«да — по ОД мл физраствора.

Одновременно ставят следующие коигрояи: позитивная и негативная сыворотки в разведении 1:10 с антигеном о без антигена, антиген без сыворотки, антиген без сыворотки и комплемента, гемсистема с физраствором. Штатив с пробирками встряхивают, и во вес пробирки, та исключением пробирки контроля без комплемента, вносят по ОД мл рабочего распора комплемента. Штатив встряхивают н номе лог в водяную баню при температуре 37-38° С на 20 мин. Затем во все пробирки вносят по 0.4 мл гемснстемы. встряхивают и кноиь помешают в и од я кую баню при той же температуре на 20 мин.

Штатив с пробирками извлекают из бани и оставляют при температуре 4- 8" С на 14-16 Час.

43.Учет и оценка результатов реакции.

Реакцию учитывают по степени гемолиза эритроцита* в крестах.определяемых по шкале гемолиза эритроцитов.

• »««♦» — полная задержка гемолиза аритроцитов (0% Гемолиза);

•+Т-*-» — гемолиз 25% эритроцита»;

•+-+» — гемолиз 50% -зрктроцитов:

«♦» - гемолиз 75% эритроцитаи.

*-» — полный гемолиз эритроцитов (100%).* Учитывают результаты РСК проб сыворопся кроен в пробирках без антигена. При любой степени задержки гемолиза в пробирке без антигена проба сыворотки кроил не учитывается н подлежи! повторному исследованию

Реакцию считают пол ож1гтгльной при задержке гемолиза я «+♦«» или    »», к сомнительной при реакции в «♦*».

Реакция считается отрицательной при задержке гемолиза ■ •*» ИЛИ ПОЛНОМ ГСМПП1ГЗС эритроцитов Кровь от животных с сомнительней реакцией нет л сдуют повторно через 2 ³ недели. 11ри углы животных неблагополучных по парггу-^еркулезу хозяйств, с сывороткой крови которых получен

дважды сомнительный результат РСК, считают положи теиьно реагирующими. а благополучных - отрмцательно-1*езультаты ГСК отмечают в ведомости проб сыворотки кроен словами : положительная, отрицательная или сом К1ггез1ьмая. В случае Получения положительно! о результата РСК далм1ей|иие мероприятия проводятся я соответствии с п. ЗД.. 5.1.1 к 5Д.1 Привит по профилактике и ликвидации пвратуОсркулсэа животных.

s пА'гологолпАТомичйхзсо!: исследование

Пптологоанятомичсскне измене!гая при парэггуберку-лезе обнаружителей преимущественно к заднем учаегке тонкого отдел я кишечника, реже в толстых кишках, а также в мезентериальных лимфатических узлах.

Степень патологических изменений не всегда соотнетс-твует тяжести клинического проявлемия болезни, а при наличии изменений возбудитель не все!да обнаруживается г.ри бдктерипскол и четком исследопаиии материала. Возможны резко выражеинме патологические изменения у животных, не имеющих клинических признаков болезни.

51. У крупного рогатого скота патологические измене -мня махццят. гпашп.1М образом, в заднем отрезке Тощей и подвздошной кишках. Стейк и книшк плотные, утолщены, просвет сужен, на разрезе выступает выраженная продольная и поперечная складчатость слизистой оболочки, отце льиьк- складки гиперемкрованы, на других поверхность может быть бугристая, покрыта вязкой слизью. В кишках содержится небольшое, количество желтоватой жидкости.пищевых масс почти нет. Илеоцекальная заслонка набухшая, тсмло-вишиевого или багрово-красного цвета. В слепой кишке изменения выражены слабее, ободочная кишка Поражается редко, в прямой кашке изменений нет. Мезентериальные лимфатические узлы и лимфатические узлы области илеоцекального соединения увеличены. набухшие, на разрезе влажные. Поверхность разреза бсло-жслтяя. Иногда иаблюдакггся отеки серозной оболочки кишечника п брыжейки. Лимфатические сосуды утолщены.

5.2. У овец и коз в тощей п подвздошной кишках угол щенке стенки м складчатость слизистой оболочки отмеча-етгя непостоянно, измспгмня могут быть выражены о*»ем». елвбо. Серозные оболочки кишечник» и брыжейки могут быть отечны, я лимфатические посуды плотные, в виде тяжей. Мезентериальные лимфатические узлы увеличены, ня разрезе сочные,белого или желтанато-белоги цвета. D лимфатических узлах могут быть инкапсулироваиньк: очаги, иногда обызвествленные.

53- У верблюдов изменения сходны с таковыми у крупного рогатого скота, но могут быть более распространенными и тяжелыми. Наблюдается атрофия тонкого отдела кишечника, особенно двенадцатиперстной кишки, стенка которой сильно истончена. Вместе с тем, отмечаются оча-I оные утолщения стенки тонких кишок и диффузное угол шение CTeiBcu всего толстого отдела кишечника. В патоло гичсскиы процесс вовлекаются сычуг и сетка.

Мезс.итерналы!ЫС лимфатические узлы сильно увеличены (до размера кулака взрослого человека). У отельных животных обнаруживают изменения на слизистой оболочке глоточного кольцо и гортани, на слизистой сетки в виде плотных узепков. Под'юлюстные. заглоточные и паховые лимфатические узлы могут быть также енльмо увеличены В селезенке под капсулой и в толще паренхимы обнаруживают большое количсстио плотных узелков серо-бе лого песта. Печень несколько умеличена, глинистого цветя. Селезенке л печень могут быть пронизаны тяжами

6. БАКТЕРИОСКОПИИ 1ЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

6.1. Для прижизненного бактериоскопического носледо-ванмя готовит по 4-6 мазкие из комочков слизи и обрывков слизистой оболочки кншечипкл, обнаруживаемых в фекалиях животных, педофхевасмих в злболевлнин

От уб«ггъи или павших животных готовят по 4-6 мазков из участков кишечника или мезентериальных лимфоузлов, имеющих изменения.сходные с парвтуберкулезными.

6J2. Мазки подсушивают на воздухе,фиксируют над пламенем горелки н окрашивают по методу Циля-Нильсеиа. Микобактерии парюуберкудезд в мазках Гфедстлаляют со бой мелкие тонкие палочки красного цветя, располагающиеся кучками, частокол я mi* по три п белее.

ЕЛ. При обнаружении хоти бы о одном ш мшкоп красных пилочек характерною строении и расположении, результаты бактериоскопии считают положительными

В случае отсутствия и мазках красных палочек, или нрн обнаружении единичных, отдельно нежмщпл палочек, результаты бактериоскопии считают отрицательными.

7. БАКтеРИО.ТОПГКСКОК ИССЛЕДОВАНИЕ Лабораторный диагноз ня маратуберкулез ставят на основании положптелыгых результатов бактерноскопическо го и гнетолоюческою нсслсдоиакня. При необходимое! к проводят бактериологическое, исследование.

7.1. Кусочки лимфатически* узлов и отдельно соскобы (ткань) слизистой оболочки и подслизистого слеш кишечника в количестве 4-Л г измельчают ножницами на кусоч КИ ПО ? 1 N4. помещают о разные стерильные ступки, покрытые стерильной, пертментной Сумы ой. Лимфатические узлы заливают 3% раствором серной кислоты в соотиоше нии 1:10. а слизистую оболочку кишечника 6% раствором атом же кислоты и выдерживают 10-15 минут. Затем рас-тпор кислоты сливают, а материал заливают в зависимое тн от концентрации серной кислоты на 5 или 10 минут соответственно стерильным физиологическим раствором в таком же об-ьеме. Физиологический раствор сливают, кусочки материала растирают и суспендируют ц небольшом количестве стерильного физиологического раствора.

Материал высевают на одну нз следующих питательных сред с добавлением 2% фактора роста (экстракта из М. ptilei): модифицированную казеиновую С(*сду Дюбо-Смитл, яичные среды Петраньяни, ЛевсипгтейиаЙенеена и ФАСТ-ЗЛ. Посевы выдерживают в термостате при 38x0,5" С в течение 3 мес.

Прм сильном обсеменении тканей М. partfuberculosis рост возбудителя появляется через 18-20 суток, при слабом - через 45-90. Культуры вырастают в виде мельчайших плоских Колоний светло-Кремового или снетло желто-го цьета с неровными краями. В дальнейшем они увеличиваются к принимают бугристый вид.

Для идешифякацин выделенную культуру ш.иееают на нышеухазаиные ерцды с фактором роста и без него. Возбудитель паратуберкулеза в первых генерациях размножается на питательных средах только Ь Присутствии фактора роста.

Микобактерии пора туберкулеза не патогенны для лабораторных животных

Z2 Питательные среды для бактериологического исследования.

Приготовление спиртового экстракте М. phlei по методу Смшгш (модификация В ГИКИ)

М. phlei выращивают ип синтетической питательном среде Сото на или 2А и течение 10-14 суток до получения пышного роста па поверхности среды. Затем культуру отделяют от жидкой части среди путем пропускания через двойкой бумажный фильтр, громы га ют ?.-3 раза стерильной дистиллированной водой, отжимают фильтровалыюй бумагой, обрабатывают и аппарате Коха 30 мин. при КО" Си подсушивают н термостате и течение 10-12 часов

Нысутисииую культуру микобактерий в количестве 20 г помещают в стерильную ступку и тщательно растирают, затем приливают 150 мл этилового спирта Полученную смесь переливают в круглодоммую колбу и проводят спиртовую экстракцию фактора роста (микобактииа) кипячением иа водяной бане с обратным холодильником. Полученный экстракт (примерно 100-130 мл) ярко желтого цвета сливают в сборную колбу, а к бикмассг дважды приливают гю 150 мл спирта м отгонку повторяют. Полученный экстракт (300-350 мл) оставляют на ночь для осаждения, на следующий день к ад осадочную жидкость пропускают через бумажный фолы р и сливают о колбу. Затем провод яг отгонку спирта из экстракта путем кишек-мия в водяной бане с прямым холодильником Полученную вязкую крааювато-орвнженую жидкость (обьсмом примерно 3-Е мл) смешивают с 50% раствором глицерина из расчета к 2 мл «концепт рата» приливают 40 мл глицеряна У<танавлинакггрП — 26. жидкость прогреялюг к кипящей водяной бане 10 мин., за тем гончий раствор г.ерелмиают в делительную воронку и оставляют на яочь.

На следующий дьиь нэ делительной воронки слипают нижнюю светлую часть жидкости (pH — 7,0). ряхлнвиюг в ампулы и стерилизуют при 120“ С в течение 20 мин Экстракт (мякобактян) хранится длительное время.

Синтетическая среда Сотона (ингредиенты и приготовление)

Аспарагин — 5 г

Аммоний лимоннокислый днузлмсшейный — 2 г Килек фосфорнокислый двузамещенпый - 5 г Магний сернокислый — 05 г Железо сернокислое закиснос — 0.05 г ГЬицсрлн — 50 мл Лимонная кислота — 4 г Цинк Сернокислый - 0,1 г Дистиллированная вода — до 1 л

В днетллцроааиной воде, подогретой до 70-80® С, последовательно растворяют аспарагин, аммоний яимоико-кнелый дяузлмещенный. калий фосфорнокислый двуза-Mc»KHii!jfi. герно-кислый магний, железо сернокислое за-кисное, глицерин. Затем добавляют водный 25 % раствор аммиака до pH — (0 н кипятят 1 час. после чего добаиля-ют лимонную кислоту и сернокислый цинк, аммиаком ус-таиаолиизют pH 72■ ХЗ. Питательную среду охлаждают до 5(Т С. пропускают через бумажный фильтр, разливают в 0.5 литровые флаконы и стерилизуют при 120® С о течение 30 мин.

Среда 2А (ингредиенты и приготовлены г)

Аспарагин — 5 г Сернокислая магнезия — 05 г Капни фосфат диузамещеииын — 15 г ! (и грат железа — 0Я5 г Ци грат натрия — 15 г Сиокоза — 5 г Пшцернн - 50 г Крахмал - 0.1 г Нитрат аммония — 15 г Дистиллированная вода — до 1000 мл Вещества растворяют в днетмялиутванной иоде, подог рстой до температуры 60-70Г С. я П|ЮП:<польном порядке, устанавливают pH — 5.6-5.Н, среду стерилизуют при 120“ С в течение 30 мил.

Модггфицироаакиая калеамооая типатглыкгя среда Дюбо-Смита

а)    Состав среды:

Одноэамеьцсиный фосфорнокислый калии — 1 г Дву1 лме'.ценный фосфорнокислый натрий — 6Д5 г Сернокислый магнии — 0.01 г Хлористый калий — OjOOGS г Сернокислый цинк — 0,0001 г Сернокислая медь —0.0001 г Лимоннокислое аммонийное железо - 0/15 г Аспарагин — 1 г Шдропизат казенна — 80 мл

СПиртовый экстракт микобактерий Тимофеевой травы -20 мл

Дистиллированная вода - -до ЮООмл АгарДифко — 15%

Стерпл1.мях инактянмрованная сыворотка крупного рО гатого скота - 20%

Пенициллин — 50 ЕДТмл

б)    Приготовление гидролизата казеина.

Нагревают до 28^е С I я водопроводной воды и добавляют S'⁵ г казенна. Едким калием устанавливают pH раствора равный 8.0. Раствор подогревлкгг мл водяной Сане при температуре 28“ С в течение 3 часов.снова доводят pH до 8,0, затем добаяляют 2 г панкреатина и 2 мл хлорофор ма. Полученную смесь перепивают я бутыль, закрывают резиновой пробкой и оставляют при комнатной температуре. Спустя 10 дней содержимое бутыли фильтруют через полотно, устинпвливиют pH 74. разливаю г по флаконам и стерилизуют При 120^е С н течение 30 мин. Гидролизат может хрниитьсм при комнатной температуре длительной время

в)    Приготовлемие соленых компонентов.

Взвешивают одиозныещегный фосфорно-кнслый калий. двузамещенный фосфорно-кнслый натрий. сериокис-

г.ый м;икий и растворяют я 100-250 мл дистиллированной воды н литровок колбе. В другой колбе, и таким же объеме воды при ПОДО!решили поочередно растворяют uiiuipauiH м лимоннокислое аммиачное железо, этот раегмор емгиш ваютс рас I ьором укащнных выше го пей. а Затем прнбавли-ют хлористый кальцкй, сернокислый цинк и сернокислую медь

г) Порядок составления цтеды.

В колбу с растворами солей н аспарагина добавляют 80 мл гидролизата казенна. 20 мл мккпбак-пщл. дпетиллиро ■аннон воды до 1 лмтра к полученный раствор пропускают через бумажный фильтр.

Устанавливают солянок кислотой pH — 6.5. разлива ют равномерно по флаконам.добавляют 1,5% агаря п стерилизуют при 12<Г С и течение 20 Н1Н.Ико0 полу<}ы0рякат дли тел who хранится при комнатной температуре.

Перед употреблением к расплавленному в водяной бакс полуфабриката добавляют 20% стерильной, иипокви ропамноп при 50° С в течение часа сыворотки кроям круп-ного рогатое»» саСота м пенициллин

[еловую среду разлнШ01 по пробиркам, скашивают и выдерживают при комнатной температуре в течение суток.

Яичные среды готовят только в стерильной посуде.^- до-бавлеши- яичной массы. фильТрнцию и разлив производя! в боксе. Для приготовления яичных питательных сред вс-•«льзуют только свежие куриные, яйца со сроком хрене-я не более S суток. Яйца предварительно тщательно мо ют щеткой и теплой моде с мылом, смачивакгг спиртом н обжигают, затем разбкплкгт стерильным пинцетом, выливают содержимое в стерильную банку (большую колбу) с бутами или битым стеклом и энергично встряхивают после внесения каждого яйцп.

С/жда Пстроныши (ингредиенты И приготовление) Молоко цельное — 300 мл Крахмал картофельный — 12 г Петом — 7 г

Картофель очищенный, мелко нарезанный — 2 клубня размером с яйцо.

Ингредиенты тщательно смешив акт в колбе и впрят на слабом oiHc до образования клейстера. К охлажденной до ЧГ С смеси добавляют 8 цельных яиц к 7 желтка.24 мл глн-церни* и 20 мл 2% стерильного модного раствора малахитовой зеленя. Хорошо смешивают, фильтру ют через воронку с двойным слоем марлн. разливают по пробиркам (4-5 мл в каждую) и стерилизуют при 120° С в течение 20 мин.

Среда Лсоснштпччг Начат (ингредиенты и прпготов лен не)

а)    Спи свой раствор

Оциозпмгщсннын фосфорнокислый калий — 2.4 г Сернокислый магния — 034 г Лимоннокислый магний — 0.6 г Аспарагин — 3.6 г измцернн х.ч. — 12 мл Нода дистиллированная — до 600 мл Соли растворяют в указанной яоследооазсльиосто, раствор стерилизуют 2 ч текучим паром или в автоклаве в течение 15 мин при температуре 120* С

б)    Яичная масса.

Приготавливают 1000 мл однородней суспензии из свежих яиц. Для этого вица, вымытые в проточной воде с мылом, в количестве. 20-25 штук кладут в 70% спирт на срок не менее 1 часа, затем разбивают в стерильную круглодоп иую колбу с бусами (из каждою десятка янц отбрасывают два белка), хорошо размешивают и фильтруют через стерильную марлю.

в)    Водный 2% растиор малахитовом зелени.

2 г малахитового зеленого растворяют в 100 мл дпетнл лмровянной воды. Стерилизуют в автоклаве и течение 30 мни. при 1ЛГС

г)    Приготовление среды.

В колбу содержащую 30 г картофельного крахмала, добавляют 600 мл солевого раствора, смесь нагревают, постоянно шСшлтикая. на кипящей Сане до юлкой консмстен-Чич. К охлажденной до температуры 45-60* С смеси добавляют 1 п яичной массы к 20 мл 2% водного раствора мала «хтовой згпени.тщательно псрсмс1нввви1т, избегая штиле

пня пузырьком воздуха, фильтруют через ватно мярпепын фильтр,разливают в пробирки по 4 5 мл.скашивают и сво-рачпнаигг дважды при 85" С в течение 21» мин

Среда ФЛС1'АЛ лмогрнлизщихитмар (способ приготовления)

Во флакон с лнофилнзировлнной средой ФАСГ-ЗЛ впв на ют 57 мл стерялыюй дистиллированной воды с pH 6.0 и U мл чнкибактш'а: энергично встряхивают и помещают о термостат с температурой нагрева 37-38* С на 30 мни. с периодическим цстряхиошшсм. Лнофилнзнровщпио! среда должка иолносп.ю раствориться и представлять собой однородную жидкость светло-зеленого цвета консистенция молока.

После растворения сухом среды (30-40 мин) се разливают При периодическом Остряхчиашш флакона в стерильные бактериологические пробирки 1Ю 5 мл и укупоривают стермльнымн (лтно-марлевыми пробками

Пробирки в наклонном положении помещают в аппарат Коха с температурой ши-рева 85* С на 30 мин. для свертывания среды ч.-пгм пробирки в том же положении выдержи на ют в термостате при темпс|кггурс 37 38“ С в течение 18-21) часов и повторно прогревают прн температуре 85^е С в течение 20 мин.

8. ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

8.1.    Для гистологического исследования отбирают пора-жеиные участки кшпгшика и лимфатические узлы, кото рые фиксируют в 10% растворе формалина

8.2.    Пкгтологмческме изменения при паратуберкулезе характеризуются наличием пролиферптов из звнтелионд-ных клеток, располагающихся диффузно и я виде гранулем в слизистой оболочке кишечника, а иногда и я подслизнс том слое. Среди них штотда псгречаюпя и гигантекпе клет кв топа Лхнланса.

Ворсинки СЛЮ1КТОЙ оболочки увеличены, часто сливаются и лмеют вид колбообразных вздутой. Некоторые ворсинки едпнлеиы II атрофированы Либеркюновые железы также подвергаются атрофии.

В брыжеечных лимфатических узлах эпителиоидаыс клетки располагаются преимущестясяио н краевых п ueirr-рнлышх синусах, л в лимфатических сосудах — в их стенках (продуктивным знДолрмфангит)

У верблюдов аналогичные эпнтелнондмыс прилифера-TiJ выявляют также в печемв в селезенке.

В срезах, окрашенных по методу Цпля-Няльсена. мл коблктерлн паратуберкулеза обнаруживают п эпителионд-ных и гигантских клетках н реже вне шх. В отдельных случаях микобактерии обнаружить не удается.

83. Изменения при пярвтуберкулече следуетднфферен пировать от туберкуле за.-нсспецнфнческого катара, паре зтарных очагов.

Туберкулез кишечипка характеризуется обычно язвен кымн поражгммммм кишечной стенки и образованием в брыжеечных лимфатических узлах очагов с творожистым или обызвествленным содержимым, окруженных грануляционном тканью из эпитслиоидных. лимфоидных и гигантских клеток. При окраске по методу Циля-Нильсена в содержимом очага могут быть обнаружены единичные красные палочки.

Паразитарные узелки определяют по нахождению паразита н эозннофнльноклеточной пролиферации. При не специфическом катаре кишечника отсутствуют пролкфе-раты из эпителвонаш-тх клеток о стейке кишки и лммфо

узлах.

С утверждением деитого Наставления утрачивают силу «Наставление во диагностике наратуберкулезшого энтерита (паратуберкулеза) крупною рогатою слота» (приложение М 1 к Инструкция о мероприятиях па тро-фияактике и ликвидации нирсипуберкуяезного энтерита {парат уЬ еркулела), утвержденное ГУ В МСХ СССР Hi августа 197S г., чНаставление во аллергической диагностике паратуберкулеза у овец», утвержденное ГУВ МСХ СССР JJ августа 1981 ь, «Временное наанаалемие по постановке реакции связывания комплемента для диагностика па/нгтуберкулеза крупного рогатого скота и овец с

антенном Cu6up<h<jto чисти апм^ивмемотго omic-рмнаргюго к я ста am v/по-, утверждению* ГУВ МСХ СССР 3/ мая 1968 г.

*м

Гтрибогп V мл /»-•

Всероссийский научно исследовательский институт зксяеры ментальной аетерпнории (ВИЭВ);

Всероссийский икударипаетсый штучно исспедооа

шельский институт контроля, сгпандчрпшлщии и серти-fpru.ai<im arm ерш tap ныс препаратов (В/ ПКИ). Департамент оеггигримприи Mutter лихо ли РФ.

Цеморальная ипучно-мегподичеекап ветеринарная па борапюрия.

Начальник отделе вапеаноксперпниы и лабораторной диагностики В. И Велоусоо