ГОСКОМИССИЯ по ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МИНСЕЛЬХОЗЕ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Часть XV-я

Москва — 1984 г.

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С НРЩТЕНЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЯ И СОЮПСАМИ ПРИ МСХ СССР

ШЮДОЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКСЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕ11 СРЕДЕ

Данные методики апробированы и рекомендовали в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссяи по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР

Москва - 1984 Г

174

Вата стеклянная Секундомер Скальпель Линейка

2.4.Подготовка к определении

2.4.1.Отбор проб Отбор проб производится в соответствия с "Унифицировании ми правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,пищевых продуктов и обьектов окружающей среди для определения микроколичеств пестицидов",утвержденным» заместителем Главного Государственного санитарного врача СССР 21.00.1979 г. за & 2051-79.

2

2.4.2. Получение чистого препарата

К эмульсии технического препарата добавить равные количества петролейного эфира и воды для разделения слоев.Пстро-леймо-Эрирную вытяжку смыть несколько раз водой и высудить, пропуская се через бумажный фильтр с безводным сернокислым натрием (50-70 г).Фильтрат упарить под вентилятором на водяной бане (35-40°С) и полученные кристаллы для повторной очистки растворить в этиловом спирте.Полученный раствор пропустить через бумажный фильтр,выпарить,образовавшиеся кристаллы препарата досушить на часовом стекле.

2

2.4.3. Приготовление пластинок с тонким слоем сорбента

Для приготовления сорбционной массы берут Х00 г окиси алюминия просеянной через сито 100 неш и 10 г сернокислого кальиия. Окись алюминия тщательно растирают в фарфоровой ступке с сернокислым кальцием,переносят в коническую колбу с притертой пробкой, прибавляют 100 мл дистиллированной воды и встряхивают до образования однородной массы.Полученную массу наносят тонким слоем на пластинку.Пластинку сугаат в течении 12-15 часов при комнатной температуре,активируют в течении 30 мин под УФ-лам-пой.Готовые пластинки хранят в эксикаторе.

3

2.4.4#Приготовление хроматографической колонки •

В стеклянную колонку (диаметр 10 мм) помещают ватный тампон и последовательно 4 г безводного сернокислого натрия,10 г силикагеля марки ИСК,затем снова 2 г безводного сернокислого натрия.

17b

2.5.Проведение определения

2.5Л.Экстракция стомпа из исследуемых проб, з

Вода.Вариант I. В делительную воронку емкостью 500 мл помещают 200 мл исследуемой води и экстрагируют стомп н-гекса-ном,трижды,порциями по 20-25 мл,встряхивая каждый раз содержимое воронки в течение 2-8 минут.Гексановые экстракты объединяют в другой делительной воронке,приливают 25 мл дистиллированной воды,перемеиивают.После четкого разделения фаз водный слой отбрасывают,гексановый экстракт фильтруют через безводный сернокислый натри-; /8 - 10 г/ в химической воронке в колбу ротационного испарителя или фарфоровую чашку.Растворитель испаряют на водяной бане при температуре 50-60°С до объема 2 мл.Остаток растворителя удаляют досуха с помощью резиновой груши.

Вариант 2^.Препарат экстрагируют из 200 мл воды н-гсксаном или хлороформом по 20-25 мл трижды,встряхивал пробу каждый раз 15-20 мин на аппарате для встряхивания.Экстракты объединяют, фильтруют через слог, безводного сернокислого натрия (50-70 г) в колбу для отгонки раствирителя,выпаривают до обьема 0,1-0,3 мл.

Почрв.Вариант I³. 25 г воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу на 250 мл трехкратно экстрагируют в течении 30 мин хлороформом по 50 мл.Экстракты объединяют,выпаривают до 5-10 мл на ротационном испарителе или водяной бане при температуре 35-'»0°С.Затем экстракт пропускают через колонку с силикагелем КСК,предварительно промытым хлороформом,в другую выпаритель ную колбу и выпаривают досуха на ротационном испарителе или водяной бане.

Вариант 2г. 100 г воздушно-сухой почвы,просеймной через сито с отверстиями 0,5 мм,помещают в колбу на 250 мл,заливают ацетоном с насыщенным раствором поваренной соли OVaCI) в отношении 8 : 2 до покрытия пробы и ставят на 2 часа на аппарат для встряхивания .Зкстракт отфильтровывают через слой ваты,переносят в делительную воронку и добавляют хлороформ.Последним извлекают трижды ( по 25 мл),экстракты объединяют,отфильтровывают через бумаг.?-

176

ныД фильтр со слоем безводного сернокислого натрия и упаривают на ротационном испарителе.

2

Чеснок . 50 г измельченного в ступке чеснока заливают петролейным эфиром (20-25 мл) и,слегка растирая,сливают декантацией в коническую колбу.Эту манипуляцию повторяют 2-3 раза. Обьсдинсниие экстракты без очистки ставят на выпаривание.

Если нет ротационного испарителя,можно пробу поместить в небольшую фарфоровую чашку и под вентилятором в водяной бане (35-*|0^оС) выпаривать до небольшого объема (0,2-0,3 мл) или сухого остатка.

2

Капуста,лук . 50 г полученной из указанных обьектов мяэги заливают петролегным эфиром до покрытия пробы и ставят на качалку на 30 мин.Экстракцию проводят еще дважды по 25 ил и встряхивают I0-I5 мин.Полученные петролейно-эфирные экстракты объединяют и выпаривают.Очистку от восков и других коэкстрактивных веществ можно провести одним из следующих способов:

1)    к сух ему остатку добавляют 15 мл Н^^О^ (Юд), оставляют на 2 часа,после чего препарат извлекают небольпиии порциями пет-ролейного эфира (10-15 ил) триады,выпаривают до 0,2-0,3 мл объема и хроматографируют.

2)    к сухому остатку добавляют 15 мл спирта,75 мл 0,1 М HCI и держат 30 мин на водяной бане при ^0-50°С,последующие операции те яе,что и в пункте I.

о

Зеленый лук,томаты . Продукты тщательно измельчают,отбирается навеска в 50 г.Экстракцию проводят трехкратно хлороформом по 50 мл.Полученные экстракты объединяют и выпаривают до объема 5-10 мл на ротационном испарителе или на водяной бане при температуре 35-<<0⁰С .Экстракт пропускают через колонку с силикагелем КСК,предварительно промытым хлороформом.Колбу из под экстракта несколько раз ополаскивают небольшими порциями хлороформа и смывы пропускают через колонку.Общий объем хлороформа, пропущенного через колонку,должен составлять 60-70 мл. Очищенный на колонке экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе или водяной бане.

3

Соя . Из измельченной проба,усредненной,отбирают 10 г, заливают ацетоном и встряхивают 1-2 мин.Затем приливают 10 мл

177

этилового спирта и продолжают встряхивиние в точение 1-1,5 часа.Эту операция повторяют трижды.Экстракты объединяют и фильтруют через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл.Фильтр промизают смесью ацетон-этиловы;; спирт в соотношении 2 : 2 СЮ мл).

После завершения фильтрации,п экстракт приливают Х00 мл 2$*осА. раствора сернокислого натрия и 2 - 3 мин взбалтывают.Содержимое колбы переносят в делительную воронку на 250 мл и оставляют до полного расслоения.Затем раствор осторожно фильтруют через бумажны ;1 фильтр в колбу на 250 мл.Полученный фильтрат выпаривают на ротационном испарителе или водяной бане до удаления ацетона. Оставшуюся водную фракция экстракта сливают в делительную воронку на 250 мл и триады экстрагируют хлороформом по 25 мл в течении 10 мин.Экстракт фильтруют через безводный сернокислый натрий и выпаривают досуха на ротационном испарителе или водяной бане.

2

Яблоки . 50г измельченной мязги заливают хлороформом до покрытия пробы и оставляют на ночь.Затем выпаривают на ротационном испарителе.На сухо;', остаток добавляют 25 мл 20/5 H^SO^ на 30 мин .после чего препарат извлекают пстроле.лшм эфиром по 25мл трижды.Петролей.ныН эфир отмывают 2-3 раза произвольным количеством воды, высушивают, пропуская через безводны." сернокислый натрий (50-70 г), выпаривают.

ь    ь    Oh

Свекла .картофель .морковь⁴** . Образец мелко нарезают скальпелем.25 г средней пробы помещают в коническую колбу емкостью 100 мл,заливают 35 мл н-гексана и оставляют на 30 мин,периодически перемешивая содержимое колбы.Гексановый экстракт фильтруют через слой безводного сернокислого натрия ( 7- 10 г) в химической воронке в фарфоровую чашку.Остеток пробы в колбе промывают трижды гексаном порциями по 10,10 и 5 мл,отфильтровывают в ту же чашку.Растворитель испаряютдосуха при комнатной температуре в токе воздуха.Остаток в чашке с пробой моркови после испарения растворителя смывают со стенок 5-6мл н-гексана и помещают чашку под Уф- лучи на расстоянии 25-27 см от источника излучения для обесцвечивания раствора (выдерживают 7-10 минут).Остаток

растворителя испаряют.

о

Морковь.Вариант . К 50 г измельченной на тепке моркови добавляют 20$    (до    покрытия    пробы)    и    оставляют на ночь.Лля

178

лучшей очистки экстракт следует провести через бумажный фильтр со слоем активированного угля и затем извлекать из него петро-лейным эфиром .препарат.Фильтрат выпаривают на ротационном испа ритсле или в фарфоровой чашке до небольшого обьема ( 0,2-0,4мл)

2.5.2.Анализ методом ГСХ.

Сухой остаток в колбе или чашке растворяют в I мл н-гек-сана (анализ воды) или в 4 мл (анализ картофеля,свеклы) и аликвоту раствора (5л) анализируют на газовом хроматографе с использованием детектора постоянной скорости^- рекомбинации.

Для подготовки к проведению анализа хроматографическую колонку заполняют хроматономЛ/-Аи/- ДМС$(0,16-0,20 мм) с 5%

$Е-30 с применением вакуума,концы колонки закрывают стекловато; и кондиционируют при скорости азота 60 мл/мин при температуре 230^ в течение 6 ча;ов без подсоединения к детектору.Общую подготовку прибора проводят согласно инструкции.

Условия определения на хроматографе:

Колонка стеклянная спиральная,длина - I м,диаметр - 3 мм Твердый носитель хроматон/V - AW- Д14С5 /0,16 - 0,20 мм/

Жидкая фаза SE-30 /Ъ%/

Температура колонки - 2Ю°С Температура испарителя - 200°С Температура детектора - 230°С

Скорость потока азота для продувки колонки 60 мл/мин Скорость потока азота для продувки детектора 150 мл/мин Скорость диаграммой ленты самописца 240 мм/час Рабочая шкала электрометра 20.10“а

Абсолютное время удерживания стомпа в указанных выше условиях хроматографирования составляет 3 мин 7 с.

Количественное определение пестицида проводят сравнением высот пиков исследуемого вещества из экстракта и стандартного раствора.

I? 9

Содержание стомпа в анализируемое пробе в мг/кг иг/л вычисляют по формуле

v _ а Л2 Уг _л *оо

Hj . V_L. р . К *

где X - содержание стомпа в анализируемой пробе,мг/кг(мг/л),

А - содержание препарата в обьеие стандартного раствора, введенном в хроматограф, н.г Нj— высота пика стандартного раствора,мм

Но- высота пика анализируемоИ пробы,мм

Vj- обьем аликвоты экстракта,введенный в хромтограф,мкл

^2 -конечный обьем экстракта пробы, <чд Р - навеска Собьем) анализируемого образца, г(мл),

К - среднее значение определения препарата,2 (см.табл.1)

2.5.3.Анализ методом ТСХ

Сухой остаток в фарфоровой чайке или колбе растворяют в 0,2 - 0,3 мл н-гексана и количественно наносят микропипеткой на стартовую линию пластинки.Рядом с пробой наносят по 0,1 мд каждого рабочего стандартного раствора стомпа,чтобы получить шкалу с содержанием 0,5; 1,0; 3,0;5,0 мкг стомпа в пятне.Пластинку помещают в хроматографическую камеру,куда за 10-15 мин до хроматографирования наливают одну из смесей растворителей указанных в таблице в таком количестве,чтобы глубина погружения слоя сорбента в растворитель составила 0,5 см.После подъема фронта растворителя от линии старта на высоту 10 см хроматографирование прекращают.0 наличии стомпа в пробе свидетельствует появление на хроматограмме желтого пятна препарата.

Величины ft/ стомпа приведены в таблице Если на хроматограмме присутствуют пигменты,особенно при анализе моркови,то для более четкого проявления пятен препарата можно пластину опрыснуть 0,1£ водным раствором индигокарми-на⁴* ( 5-7 мл).Пигменты при этом исчезают,препарит приобретает желто-зеленую окраску.Рекомендуется также пластинку поставить под УФ на 3-5 мин.

Настоящие методические указания предназначены дчя санитарно-эпидемиологических станинЛ к научно-псследователь-ских учреждений Минздрава СССР, а также встерпнапных,агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств л ведомств,занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и био-препарахов в продуктах питания, кормах п внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомисспи по химическим средства?.! борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР (председатель Группы экспертов д.б.н. М.^.Клисенко).

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования еднэпидслужбы ИМПиТМ им.Марок-новского В.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

РШКЦИОШШТ КОЛЛЕГИЯ

Л.Г.Ллекса^дроваД.Г.Гиренко, б.В.Допатко Секретарь), М.Л.Клисенко (председатель),Г.И.Короткова, В.В.Крпвончук,

М.В.Писпленная (зам.председателя),Г.Л.Хохолькова.

167

"УТВЕР2ДАЮ"

ЗАМЕСТИТЕЛЬ ГЛАВНОГО ГОЗУДАРСТ ВЕННОГО САНИТАРНОГО ЯРАЧА СССР А.И.ЗАЙЧЕНКО " Й "мая 1983 г.

№ 2787-83

Временные методические указания по определения стомпа в воде,почве и растительных объектах методами газожидкостной, тонкослойной хроматографии и УФ - спектрофотометрии.

Настоящие методические указания составлены на основании следующих разработок авторских коллективов:

1. Временные методические указания по определению отомпа в воде методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии.-Л.М.Шмигидина,М_гА.Клисенко,Д.Б.Гире!!Ко (ВНИИГИНТОКС,Киев).

2. Временные методические указания по определению стомпа в воде,почве и растительных обьектах методом тонкослойной хроматографии.- Н.В.БажановаД.А.Арутюнян (НИИ защиты растений МОХ Арм.ССР,г.Ереван).

3. Временные методические указания по определению стомпа в зеленом луке,моркови,томатах,сое,воде и почве методами тонкослойной хроматографии и УФ - спектрофотометрии.-К.Б.Баратов,

X.А.Касимов,А.3.Меньшикова,И.И.Бабаев (Таджикский НИИ эпидемиологии и гигиены, г.Душанбе).

4. Временные методические указания по определению стомпа

в картофеле,свекле,моркови методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии.- А.М.Шмигидина,М.А.Клисенко,Д.Б.Гиренко, Л.Л.Соломко (ВНИИГИНТОКС,г.Киев).

В настоящих методических указаниях даны ссылки на выше-перечисленные методики.

169

ной,тонкослойной хроматографии и УФ - спектрофотометрии после извлечения препарата из пробы органическим растворителем и очистки экстракта.

2.1,2.Метрологическая характеристика методов.

См.табл.1.2.3.

2.1.3.Избирательность метода.

Определении метрит трефлан и нитро фен.

2.2.Реактивы и растворы Стомп.х.ч.

н-тГексан.хч.ТУ 6-09-3375-78 Бензол,чда,ГОСТ 5955-75

Спирт этиловый,ректификат,ТУ 1911-39-69,96#

Ацетон,ч.д.а.,ГОСТ 2603-79.

Окись алюминия,ч.д.а.,11 степени активности.

Хлороформ,ч.д.а.,Г0СТ 20015-74.

Кальций сернокислый,ч.д.а.,ГОСТ 3210-76 (медицинский гипс просушивают 5 ч в сушильном шкафу при 225°С;хранят в банке с притертой пробкой).

Силикагель марки 1C К,ТУ 6-09-2523-72,дробленный и просеянный через сито ТОО меш.

Индигокармин,индигодисульфонат натрия,чда,

0,1# водный раствор

Натрий сернокислый безводный,хч,ГОСТ 4166-76,2# водный р~р Пстролейннй эфир,ч.

Серная кислота,чда,ГОСТ 4204-66 Пластинки "Sltufcl*,15 х 15 см (ЧССР)

Натрии хлористый,ГОСТ 4233-77,нас швейный водный раствор Хроматон/^-АW- ДМС$/0,1 6-0.20 мм/ с 5# $Б-30 (ЧССР)

Азот газообразный особой чистоты,ГОСТ 9 293-74 /в баллоне с редуктором/

Дистиллированная вода,ГОСТ 7602-72

Стандартный раствор стоила /основной/,содержащий 100мкг/мл, готовят растворением 10 чг стомпа в н-гексане в мерной

колбе на 100 мл.

Таблица I.

Метрологическая характеристика истода определения стоила о помоцьо газожидкостное хроматографии ' .

Анализируемый обьект	Предел обнаружения мг/л; мг/кг	Число параллельных опре деленыР. п.	Размах варьк рованик,5 *	Среднее С значение опрсделе' кие,2х	Стандарт ное отк донские, % 6	Относительное стандартное :отклонение,%
Зода	0,00025	5	90,0 - 95,0	93.2	м	*.9
Картофель	0,0088	5	75,0 - 85.0	77.2	<9	5.9
Свекла	0,0068	5	75,0 - 86,0	75.4	6,0	7.2

►Ч

ё

Таблица 2. Четсологячсская характеристика истода определения стоила с помозьв тонкослойное хроматографии

лнализируоинй объект :Поедед обна-о ужения, :4г/л; аг/кг :Число пасал-лслъных опрс делений ^ : Разках варьи-: рОЗВКИЯ'З' Я. Среднее эна-: «тендартное ченле опус- отклонение, деления,!» с. S :Относительное /* стандартное отклонение,? Зода 0,0025 5 86.0 - S6.0 92,0 8.5 10,2 .'Саотсдель4 0,02 5 70.0 - 90,0 78,0 П. 0 13,2 Сзскда* 0.С2 5 70,0 - 90,0 80,0 10,0 2.0 *>?к=вь-* 0.2 /0.32 Зеленая дух2,3 0.1/0.02 6/5 6 75.0    - 95.0 70,0- 90,0 75.0    - 95.С 80,0/78,0 80,0/60.0 6,5/11,0 6.5/6.2 /13,2 6.5/7.4 Томата0 0.С2 6 — 84,0 5.1 7.2 Зоя3 9 0.32 6 — 89,0 5.0 5.7 Чеснок" 0.10 6 75.0 - 55,0 £0,0 6.5 6.5 Капуста^ 0,10 6 75.0 - 95.0 80,0 6.5 5,5 Яблоки. Почэа2'0 0,20 б 75,0 - 95,0 50.0 6.5 6.5 0,15 /0.01 6 75.0 - 95.0 60,0/«2.0 6,5/5.6 6,5/6,3

Четрологическая характеристика .метода определения. я воде приведена по даянии работы I. 3 числителе результаты по данник работы 2.в знаменателе - по данным работ 3,4.

Таблица 3.

Детролопгческая характеристика метода определения стоила с помоцьв УФ - спектрофотометрии

Анализируема?. : Предел обна-:Число пара*-: Разках    :    Среднее : Стандарт-:Относитель-

обьект    рутения    дельных    варьирования,    значение    кое откло нее стан-

кг/л;мг/кг определений %    £    определения,? некие,2 дартное откдо

___Я*     С__£_нение.2 £г

Зеленый лук	0,03	6	—	75,0	6.5	7.7
Морковь	0,03	6	—	8*4,0	6.3	7.5
Томаты	0.03	6	—	79,0	6.*	7,6
Соя	0.03	6	—	81,0	6.2	7.4
Почва	0.03	б	—	85,0	5.9	7.1
Ьода	0,03	6	—	90,0	5.8	6.9

г?

173

Стандартные растворы /рабочие/,содержание 0,05-50 мкг/мл стом-па, готовят в градуированных пробирках емкостью 10 мд соответствующим разбавлением гексаном основного стандартного раствора. Растворы можно хранить длительное время (30 дней) в Чклянках с пришлифованной, пробкой в холодильнике.

Вата гигроскопическая.

2.3.Приборы и посуда

Хроматограф "Цвет-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации или аналогичные прибор.

Спектрофотометр СФ-4а,ТУ 670601-74 Ротационный вакуумный испаритель,ИР-IM,ТУ 25-II-9I7-74 или аналогичный прибор для отгонки растворителей под вакуумом Облучатель настольный 0KH—IX.

Баня водяная,ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумный водоструйный насос,ГОСТ 10396-75 Воронки делительные,емк.250-500 мл,ГОСТ 10054-75 Воронки химические,диаметр 6 см,ГОСТ 8613-75 Посуда лабораторная мерная по ГОСТ 1770-74 Шкаф сушильный электрический ТУ 16-531-299-71 Аппарат для встряхивания проб ЛВУ-1,ТУ64-1-1081-73 Вентилятор

Весы равноплечие ручные (BP-I;B?-2;BP-100),ГОСТ 359-54 Набор сит (диаметр отверстий 0,15;0,50 мм)

Центрифуга

Пульверизатор

Каме г.а для опрыскивания

Колбы плоскодонные емкостью 100-250 мл,ГОСТ 10394-72

Микропипетки для нанесения проб и стандартов на 0,1 и

0,2 мл.ГОСТ 20292-74

Мельница для измельчения силикагеля

Пластинки стеклянные 9 х 12 см

Палочки стеклянные

Ступки фарфоровые

Колбы круглодоннне н/п емк.100 мл,ГОСТ 10394-72 Чашка фарфоровая,ГОСТ 9147-73 Камера хроматографическая,ГОСТ 10565-63 Микроиприц на 10 пкл