МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ПТИЧЬИ
МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ И ПОДГОТОВКА К МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2009
© Издательство стандартов, 1993 €> СТАНДАРТИНФОРМ, 2009
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства но техническому регулированию и метрологии
II
УДК 637.54:576.8.07:006.354 Группа II19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ПТИЧЬИ
Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям
Poultry meat, edible, offal ready-to-cook products.
Methods for sampling and preparing of microbiological examinations
МКС 07.100.30
67.120.20 ОКСТУ 9209
Дата введения 1994—01—01
Настоящий стандарт распространяется на предназначенные для реализации и промышленной переработки:
мясо птицы в виде потрошеных, полупотрошеных и потрошеных с комплектом потрохов и шеей тушек, частей, полученных при их разделке, а также обваленное и измельченное;
субпродукты и полуфабрикаты птичьи.
Стандарт устанавливает методы отбора проб и подготовку к микробиологическим исследованиям.
1 методы ОТБОРА ПРОБ
1.1 Методы отбора проб и подготовка их к исследованиям — по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669 со следующими дополнениями.
1.1.1 Для контроля качества тушек или иолутушек птицы из области грудной части, голени и бедра вырезают на всю глубину мышцы в равных количествах обшей массой не менее 150 г. измельчают их с соблюдением правил асептики с помощью ножниц, гомогенизатора в течение 2—2.5 мин или фарфоровой ступки с пестиком, перемешивают и получают объединенную пробу одной тушки или нолутушки.
1.1.2 Объединенную пробу обваленного, измельченного мяса, птичьих субпродуктов и полуфабрикатов отбирают по нормативно-технической документации на эти виды продуктов.
1.1.3 Для приготовления исходного разведения из объединенной измельченной пробы отбирают навеску не менее 10 г.
1.1.4 Для исследования микробного зафязнения поверхности тушек, их частей, обваленного мяса, субпродуктов, полуфабрикатов (кроме панированных и измельченных) пробы отбирают в виде смывов, полученных с помощью ватных тампонов по ГОСТ 26669. или стерильной жидкостью для смыва (пептонной водой, физиологическим раствором, водопроводной водой).
1.1.5 При отборе проб в виде смывов жидкостью в новый стерильный пакет одноразового пользования из полимерного материала помешают тушку птицы или ее части массой не более 1.5 кг. объединенную пробу обваленного мяса или субпродуктов массой не менее 150 г. добавляют жидкость для смыва в количестве, равном массе исследуемого продукта. Встряхивают содержимое пакета в течение 2 мин. Полученная смывная жидкость служит исходным материалом для последующих 10-кратных разведений.
1.1.6 При выявлении микроорганизмов из мяса птицы, субпродуктов и полуфабрикатов для посевов на питательные среды используют верхний слой надосадочной жидкости, а при определении их количества используют взвесь исходного разведения.
И мание официальное
2 ПОДГОТОВКА К МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ
2.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Автоклав.
Анаэростат.
Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру 20 °С—100 'С с отклонением до 1 'С от заданной.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 241041 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и пределом допускаемой погрешности ~2 мг для взвешивания реактивов.
Весы лабораторные общего назначения но ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания
1 кг и пределом допускаемой погрешности :10 мгдля взвешивания продукта.
Шкаф сушильный.
Термостаты электрические для выращивания бактерий с автоматическим терморегулятором до температуры 55 1С и с ценой деления 0.2 'С.
Стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 195692.
Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678.
Холодильник походный (сумка).
Центрифуга.
Электроплита по ГОСТ 14919.
Гомогенизатор бактериологический или аппарат для измельчения тканей с числом оборотов 8000—450(Х) об/мин.
Мешалки из нержавеющего металла.
Микроскоп световой биологический с увеличением в 900х—1000х раз.
Микроскоп люминесцентный.
Пробоотборник (буравчик или зонд) из нержавеющей стали. pH-метр с пределом допускаемой погрешности не более 0.05 ед.рН.
Дистиллятор.
Мясорубка но ГОСТ 4025.
Часы песочные по ОСТ 25—11—38 или часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.
Термометры жидкостные стеклянные с диапазоном температуры 0 °С—50 1С и 50'С—100'С по ГОСТ 28498 с пределом допускаемой погрешности г0,5 1С с ценой деления шкалы 0.5 "С. Шпатель 1—3 по ГОСТ 9147.
Шпатели, ложки, половник из нержавеющей стали.
Шприцы медицинские по ГОСТ 22967.
Штативы для пробирок.
Скальпели и ножи медицинские по ГОСТ 21240.
Ножи и проволока из нержавеющей стали.
Пинцеты по ГОСТ 21241.
Ножницы медицинские по ГОСТ 21239.
Пакеты из полимерных пленочных материалов но ТУ 63—102—115.
Кружка по ГОСТ 9147.
Кюветы разные для окрашивания препаратов.
Кастрюли.
Трафареты (шаблоны) из нержавеющей стали.
Фильтр бумажный.
Фильтры Зейтца.
Пластины асбестовые.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Вазелин.
Вата.
Марля по ГОСТ 11109.
Пробки ватные.
Капельница 1-50 ХС по ГОСТ 25336.
Колба Кп 1(2) или П(2) по ГОСТ 25336.
Воронка Бюхнера 3(5) по ГОСТ 9147.
ГОСТ 7702.2.0-95/ГОСТ Р 50396.0-92
Воронка ВФ 1(3)- 75(100) ХС по ГОСТ 25336.
Цилиндр но ГОСТ 1770.
Чашки ЧБН-2 по ГОСТ 25336.
Стакан В-1(2)-100( 150-1000) по ГОСТ 25336.
Стакан Н-2( 100-1000) по ГОСТ 25336.
Стекла предметные по ГОСТ 9284.
Стекла покровные но ГОСТ 6672.
Ступка 1. 2 но ГОСТ 9147.
Спиртовка СП-1(2) по ГОСТ 25336.
Палочки стеклянные.
Пестик 1—2 по ГОСТ 9147.
Петледержатель.
Петля бактериологическая.
Пипетки по НТД.
Поплавки (трубки Дархема).
Посуда с притертой пробкой.
Пробирки П1—16—150ХС или П2-10-90ХС или П2Т-10ТС но ГОСТ 25336.
Агар висмут-сульфитный.
Агар микробиологический.
Агар сухой питательный.
Желчь крупного рогатого скота, сухая или натуральная, медицинская по ТУ 6—09—10—364. Масло вазелиновое по ГОСТ 3164.
Масло иммерсионное по ТУ 81—05—79.
Пейтон но ГОСТ 13805.
Плазма нитратная кроличья.
Растворы буферные для pH-метра.
Сыворотки антилистерозные люминесцируюшие.
Сыворотки антисальмоне;ыезные поливалентные и моновалентные.
Экстракт дрожжевой сухой.
Экстракт мясной.
Яйца куриные по ГОСТ 27583*.
Аминопептид.
Аргинин.
Бриллиантовый зеленый по ТУ 6—09—4278.
Бромкрезоловый пурпурный по ТУ 6—09—1386.
Вода дистшыированная по ГОСТ 6709.
Генциан фиолетовый.
Глицерин х.ч. по ГОСТ 6824.
Глюкоза х.ч.. ч.д.а. но ГОСТ 6038.
Желатин пищевой по ГОСТ 11293.
Железа (III) аммония сульфат.
Железо треххлористое. 6 водное.
Железа (III) цитрат.
Калий гидрат окиси (гидроокись) технический по ГОСТ 9285.
Калий фосфорнокислый двузамещеиный (дигидрофосфат) по ГОСТ 2493.
Калий фосфорнокислый однозамешенный (гидрофосфат) по ГОСТ 4198.
Калия теллурит.
Кальций углекислый (карбонат) по ГОСТ 4530.
Лактоза.
Лизин.
Литий хлористый (хлорид).
Магний хлористый (хлорид) по ГОСТ 4209.
Метиленовый голубой.
Метиловый красный.
Мочевина по ГОСТ 6691.
Натрия азид.
Натрия гидрат окиси едкий (гидроокись) по ГОСТ 11078.
На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52121-2003.
3
Натрия пируват.
Натрий селенистокислый (гидроселенит).
Натрий серноватистокислый (тиосульфат).
Натрий сернистокислый (сульфит).
Натрий углекислый (карбонат).
Натрий фосфорнокислый двузамешенный (д и гидрофосфат) но ГОСТ 4172.
Натрий фосфорнокислый однозамешенный (гидрофосфат) но ГОСТ 245.
Натрий хлористый (хлорид) но ГОСТ 4233.
а-нафтол.
Орнитин.
Пероксид (перекись) водорода по ГОСТ 10929.
Розоловая кислота.
Сахароза ч.д.а. но ГОСТ 5833.
Свинец уксуснокислый (ацетат).
Спирт эгиловый по ГОСТ 18300 и ГОСТ 5962*. раствор с массовой долей 70 %, 96 %.
Триитон.
Трифенилтетразолий хлорид.
Фенилаланин.
Феноловый красный.
Цистин.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а реактивов по качеству не ниже указанных в стандарте.
2.2 Подготовка посуды и материалов
2.2.1 Вся посуда датжиа бьпъ вымыта, высушена. Перед стерилизацией «гробирки, колбы закрывают пробками из ваты в марлевой обертке, в концы пипеток вкладывают по кусочку ваты. Подготовленные пробирки, пипетки, чашки завертывают в бумагу или помешают в мегаиические пеналы. Горлышко колб с пробками, стаканов закрывают сверху бумажным колпачком, когорый обвязывают ниткой.
2.2.2 Стерилизация посуды, инструментов, материалов — но ГОСТ 26668.
2.3 Приготовление компонентов питательных сред и растворов
2.3.1 Пептонно-солевой раствор. В 1 дм-; дистиллированной воды растворяют при медленном нагревании 8,5 г хлористого натрия и 1,0 г пептона. Полученный раствор при необходимости фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают pH (7,0=0.1). стерилизуют (30=1) мин при температуре (121=1) ’С. Раствор хранят в темном месте при температуре (4=2) *С не более 1 мес.
2.3.2 Пентонная вода. Приготовление аналогично пептонно-солевому раствору (см. п. 2.3.1) без добавления хлористого натрия.
2.3.3 Физиологический раствор. В 1 дм3 дистиллированной воды растворяют 8.5 г хлористого натрия. Стерилизуют (20=1) мин при температуре (121=1) *С.
2.3.4 Агар голодный. 2.0 г агара растворяют в 98 см3 дистиллированной воды, стерилизуют (2=1) мин при температуре (121±1) *С.
2.3.5 Спиртовой раствор розоловой кислоты массовой концентрации 50 г/дм3.0,5 г розоловой кислоты заливают 10 см3 этилового ректификованного спирта с массовой долей 96 %. Через 24 ч раствор готов к употреблению. Хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 1 мес.
2.3.6 Раствор метиленового голубого массовой концентрации 1 г/дм3. 0.1 г метиленового голубого помешают в колбу вместимостью 100 см3, доливают до метки дистиллированную воду. Через 24 ч раствор готов к употреблению. Хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре. Срок хранения не ограничен.
2.3.7 Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 5 г/дм3 (или 1 г/дм3). 0.5 г (или 0.1 г) бриллиантового зеленого помешают в колбу вместимостью 100 см3, доливают дистилли-рованную воду до метки. Хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
2.3.8 Раствор Люголя — по ГОСТ 10444.1.
2.3.9 Бульон Хоттингера — но ГОСТ 10444.1.
2.3.10 Раствор натрия тиосульфата (Na2S20v5H20) массовой концентрации 500 г/дм3. 50 г натрия тиосульфата помешают в колбу, добавляют до 100 см3 дистиллированную воду. Раствор стерилизуют (20=1) мин при температуре (121=1) *С или (30=1) мин при температуре (112±1) *С.
• На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
4
ГОСТ 7702.2.0-95/ГОСТ Р 50396.0-92
2.3.11 Аминопентидный бульон. 250 см3 жидкого аминопситида, 5.5 г хлорида натрия. 750 см3 дистиллированной воды перемешивают, стерилизуют (20:1) мин при температуре (12Ы) еС. Срок хранения при температуре 4 *С—10 *С не ограничен.
2.3.12 Раствор натрия гидроселенита (NaHSe03) массовой концентрации 100 г/дм3. 10 г натрия гидроселенита помешают в стерильную колбу и добавляют асептически до метки 100 см3 стерильную дистиллированную воду. Готовят перед употреблением.
2.3.13 Раствор 1-цистина. 0.1 г /.-цистина. 15 см3 раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 1 моль/дм3 в стерильной колбе доводят до 100 см3, добавляя стерильную дистиллированную воду. Раствор стерилизации не подлежит.
2.3.14 Экстракт дрожжевой сухой готовят по прописи, указанной на этикетке, или но ГОСТ 10444.1.
2.3.15 Хлористый магний. 36 г кристаллического хлористого магния растворяют в 90 см3 дис-тиллированной воды.
2.3.16 Раствор мочевины массовой концентрации 400 г/дм3. 40 г мочевины помешают в колбу и добавляют стерильную дистиллированную воду до метки 100 см3. Растворяют, стерилизуют через фильгр Зейтца. Допускается «самостерилизация» раствора мочевины путем выдерживания его при комнатной температуре в течение 2—3 сут. Проверяют стерильность раствора мочевины контрольным посевом.
2.3.17 Раствор метилового красного. 0.1 г метилового красного растворяют в 300 см3 этилового ректификованного спирта с массовой долей 96 %, затем добавляют дистиллированную воду до метки 500 см3.
2.3.18 Спиртовой раствор а-нафтола массовой концентрации 60 г/дм3. 6 г а-нафтола растворяют в 100 см3 этилового ректификованного спирта с массовой долей 96 %.
2.3.19 Раствор гидроокиси калия массовой концентрации 400 г/дм3. 40 г гидроокиси калия помешают в колбу и доливают дистихтированную воду до метки 100 см3.
2.3.20 Реактив Ковача, реактив Эрлиха но ГОСТ 28560.
2.3.21 Индикаторная бумага для определения сероводорода. 20 г ацетата свинца. 1 г карбоната натрия растворяют в 100 см3 дистиллированной воды. Раствором пропитывают фильтровальную бумагу. высушивают ее при температуре 18 *С—25 *С и нарезают на узкие полоски. После приготовления бумага остается белой, при наличии сероводорода чернеет.
2.3.22 Раствор железа треххлористого 6-водного массовой концентрации 80 г/дм3. 8.0 г железа треххлорного 6-водного переносят в колбу вместимостью 100 см3, добавляют до метки дистиллированную воду.
2.3.23 Физиологический фосфат-буфсрный раствор. 8.5 г хлорида натрия, 0.45 г дигидрофосфата калия безводного. 5,34 г натрия гидрофосфата безводного помешают в мерную посуду, доливают до 1000 см3 дистиллированную воду, стерилизуют (30= 1) мин при температуре (121:1) °С.
2.3.24 Плазма крови кроличья сухая: готовят по прописи, указанной на этикетке. Плазма свежеприготовленная — по ГОСТ 10444.2*.
2.4 Приготовление питательных сред
2.4.1 Мясо-пе1ггонный агар. В 1 дм3 мясо-пептонного бульона по ГОСТ 10444.1 добавляют 15—20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. устанавливают pH 7,0—7.2 и стерилизуют (20:1) мин при температуре (121:1) *С.
2.4.2 Мясо-иетонный агар с глюкозой. К I дм3 мясо-пептонного агара перед стерилизацией добавляют 1 или 10 г глюкозы, устанавливают pH 7,0—7.2 и стерилизуют (20:1) мин при температуре (121:1) °С.
2.4.3 Мясо-пептонный агар с глюкозой и дрожжевым экстрактом. К 1 дм3 стерильного агара перед применением асептически добавляют 2 г дрожжевого экстракта.
2.4.4 Среда из сухого питательного агара: готовят по прописи, указанной на этикетке.
2.4.5 Среда из сухого питательного агара с глюкозой: в 975 см3 сухого питательного агара (см. и. 2.4.4) непосредственно перед применением асептически добавляют 25 см3 стерильного раствора глюкозы массовой концентрации 200 г/дм3.
2.4.6 Среда Кесслера (с лактозой): 10 г пептона. 5 г сухой желчи или 50 см3 натуральной стерильной желчи. 2,5 г лактозы, 0.01 г генциан фиолетового добавляют в 1 дм3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают, кипятят в течение 20—30 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7.3:0.2) при
На территории Российской Федерации действует ГСХ'Т Р 52815—2007.
5
температуре (25:1) 'С. Рахтивают к пробирки с ио1ыавками (трубками Дархема) дном вверх и стерилизуют (20:1) мин при температуре (114:1) °С. Если в поплавках остался воздух, среду не используют. Цвет среды фиолетовый. Срок хранения не более 14 сут при температуре (4:1) °С.
2.4.7 Среда Кесслера сухая. Готовят по прописи, указанной на этикетке.
2.4.8 Среда Хейфеца с лактозой. 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 5 г лактозы растворяют в 1 дм' дистиллированной воды, устанавливают pH (7.4—7,6), нагревают до кипения, фильтруют, добавляют 1 см- раствора розоловой кислоты, приготовленной но и. 2.3.5 и 2,5 см3 раствора метиленового голубого, приготовленного но и. 2.3.6. Рахтивают по 10 см ' в пробирки с поплавками. Стерилизуют (20:1) мин при температуре (112:1) *С. Цвет среды красно-фиолетовый. Срок хранения не более 14 сут при температуре (4:2) *С.
2.4.9 Бульон лактозный с бртилиантовым зеленым и желчью: 10 г пептона. 10 г лактозы. 20 г сухой говяжьей желчи или 200 см-' натуральной желчи, 2.66 см ’ бриллиантового зеленого, приготовленного по и. 2.3.7. добавляют к 1000 см'' дистиллированной воды, перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до температуры (50:5) 'С, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составил (7,2:0.1) при температуре (25:1) °С. Рахтивают по 10 см3 в пробирки с поплавками, стерилизуют (15:1) мин при температуре (121:1) *С. Хранят не более 14 сут при температуре (4:1) *С.
2.4.10 Среды Эндо. Левина, сухие: готовят по прописи, укахшной на этикетке.
2.4.11 Пептонно-буферная среда: 10 г пептона. 0.45 г калия дигидрофосфата безводного. 5,34 г натрия гидрофосфата безводного растворяют в 1000 см’ кипящей дистиллированной воды. Рахтивают в колбы вместимостью 500 см3 по 255 см3 среды. Стерилизуют (20:1) мин при температуре (121±1)*С. pH среды при температуре (25:1) *С составляет (7.0:0.!). Хранение при комнатной температуре не более 14 сут.
2.4.12 Среда Мюллера. 2.5 г стерильного карбоната кальция, приготовленного но ГОСТ 10444.1. помешают в стерильный флакон, добавляют 90 см3 бульона Хоттннгера. приготовленного но ГОСТ 10444.1. стерилизуют (30:1) мин при температуре (121:1) *С. pH 7,2—7.4. Хранят не более I мее при температуре (4:1) ’С. Перед использованием асептически добавляют 2 см3 раствора Люголя, приготовленного по ГОСТ 10444.1. и 10 см3 раствора тиосульфата натрия, приготовленного по и. 2.3.10. Готовая среда стерилизации не подлежит.
2.4.13 Среда Кауфмана. 100 см3 стерильной среды Мюллера (см. п. 2.4.12) с асептическим добавлением 10 см ' раствора бриллиантового зеленого массовой концентрации 1 г/дм3 (см. п. 2.3.7.), 10 г сухой желчи или 50 см'' натуральной говяжьей желчи перемешивают. Среда стерилихшии не подлежит. Хранят не более 7 сут при температуре (4:1) *С.
2.4.14 Селенитовая среда. 5 г пептона или триптона. 4 г лактозы. 10 г натрия дигидрофосфата безводного (допускается 7 г натрия гидрофосфата безводного и 3 г натрия дигидрофосфата безводного) растворяют в 100 см ' дисттылиро ванной воды, рахтивают в колбы, стерилизуют (30:1) мин при температуре (112=0.5) *С. pH 6.9—7.1. Хранят не более 2 мес при температуре (4:1) ’С. Эго служит основой среды. Для приготовления основы среды допускается вместо высококачественного пептона (триптона) и дистиллированной воды использовать 960 см3 аминонетонного бульона, приготовленного из жидкого аминопептида (см. и. 2.3.11). Перед использованием добавляют 40 см3 раствора гидроселенита (см. п. 2.3.12) на 1000 см' основы среды. Готовую смесь не стерилизуют. Хранению она не подлежит. pH (7.0=0.1).
2.4.15 Селенитово-цистиновая среда. В 1000 см3 селенитовой среды (см. п. 2.4.14) асептически добавляют 10 см3 раствора L-цистина (см. и. 2.3.13). Устанавливают pH таким образом, чтобы он составлял (7.0:0.1) при температуре (25:1) *С. Среда хранению не подлежит.
2.4.16 Магниевая или хлорнстомагниевая среда. 4.2 г пептона. 7.15 г хлорида натрия. 1.48 г д и гидрофосфата калия безводного. 9 см ' дрожжевого экстракта по ГОСТ 10444.1 растворяют в 900 см3 дистгылированной воды, добавляют раствор хлористого магния и 0.9 см3 раствора бртыли-антового зеленого массовой концентрации 5 г/дм3. Стерилизуют (30:1) мин при температуре (112:0,5) вС. Хранят не более 14 суг при температуре (4:1) °С.
2.4.17 Среды Плоскирева. висмут-сульфитный агар, сухие. Готовят но прописи, указанной на этикетке.
2.4.18 Aiap с феноловым красным и бртьыпантовым зеленым. 5 г мясного экстракта. 10 г пептона. 3 г дрожжевого экстракта. 1 г дигидро<|к>сфага натрия безводного. 0.6 г птдро<|>ос<|>ата натрия безводного. 15—18 г агара растворяют в 900 см' кипящей дистиллированной воды. Охлаждают до температуры (45—50) вС. доводят pH до такого уровня, чтобы он составлял (7.0=0.1) при температуре (25:1) *С. Стерилизуют (15:1) мин при температуре (121:1) *С. Хранят не более 1 мес при температуре (4:1) "С.
6
ГОСТ 7702.2.0-95/ГОСТ Р 50396.0-92
2.4.19 Среды Гисса с углеводами (глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом), сухие. Готовят но прописи, указанной на этикетке.
2.4.20 Агар Клиглера сухой, среда Ресселя сухая. Готовят но прописи, указанной на этикетке. При скашивании сред в пробирках оставляют столбик высотой 2—2.5 см.
2.4.21 Агар тройной сахарный с цитратом железа — по ГОСТ 28560.
2.4.22 Трехсахарный агар по Олькеницкому. 25 г сухого питательного агара, 10 г лактозы. 10 г сахарозы, 1 г глюкозы. 0.2 г железа (II) сульфата аммония. 10 г мочевины. 4 см3 0.4 %-ного раствора фенолового красного растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды. Предварительно растворяют соли в небольшом объеме дистиллированной воды. Углеводы и мочевину также растворяют в небольших объемах воды при подогревании в водяной бане. Сухой питательный агар расплавляют при нагревании в оставшемся объеме воды. Затем все ишредиенты соединяют, перемешивают с расшпиленным агаром, фильтруют через марлевый фильтр, устанавливают pH 7.2—7.4. добавляют индикатор и разливают в пробирки по 6—7 см3. Среду стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 2 мин и скашивают, оставляя столбик 2—2.5 см. Готовая среда бледно-розового цвета. Хранят при комнатной температуре не более 7 сут.
2.4.23 Агар с цитратом (Симмонса) сухой. Готовят по прописи, указанной на этикетке. Среду рахливают но 5—7 см3, оставляя столбик высотой 2—2.5 см при скашивании после стерилизации.
2.4.24 Агар с мочевиной (Кристенсена). I г пептона, 1 г глюкозы. 5 г хлорида натрия. 2 г калия дипшрофосфата безводного, 0,012 г фенолового красного. 15 гагара растворяют в 1000 см3 киняшей дистиллированной воды. pH устанавливают таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6.8=0.1) при температуре (25=1) 'С. Это составляет основу среды. Стерилизуют (20=1) мин при температуре (121=1) °С. Хранят не более 7 сут при температуре (4=1)°С. Перед употреблением асептически к 1000 см3 основы среды добавляют 50 см3 раствора мочевины.
2.4.25 Среда Кларка для реакции Фогес-Проскауэра. 7 г пептона, 5 г калия гидрофосфата безводного. 5 г глюкозы растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, кипятят 2—3 мин. фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фшльгр. устанавливают pH 6.9—7.0 рахливают в пробирки, стерилизуют 20 мин при температуре (115=1) 'С. Хранят не более 28 сут при температуре (4=1) *С.
2.4.26 Триптон-триитофановая среда Лютова — но ГОСТ 28560.
2.4.27 Среда для расцепления фенилаланина. В 1 дм3 дистиллированной воды при нагревании растворяют 15 см3 дрожжевого экстракта. 2 г /)/.-фенилаланина шли I г ^.-фенилаланина, 1 г натрия д и гидрофосфата безводного. 5 г хлорида натрия. 12 г агара. По 5 см3 среды рахливают в пробирки, стерилизуют (10=1) мин при температуре (121=1) 'С, дают застыть в наклонном положении. Среду хранят при температуре (4=1) *С не более 7 сут.
2.4.28 Среды с аминокислотами (лизином, орнитином. аргинином). 5 г одной из 1-аминокислот или 10 годной из ЛЛ-аминокислот. 3 г дрожжевого экстракта. 1 г глюкозы. 0.012 г бромкрезоло-вого пурпурного растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6.8=0.1) при температуре (25=1) 'С. Среды рахливают в агглютинационные пробирки. Стерилизуют (10=1) мин при температуре (121=1) *С или (30=1) мин при температуре (110=1) *С. Цвет среды светло-фиолетовый. Хранению среды не подлежат.
2.4.29 Полужидкий агар. 3 г мясного экстракта. 5 г пептона. 4—9 г агара растворяют при нагревании до кипения в 1000 см3 дистиллированной воды. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7.0=0.1) при температуре (25=1) "С. Стерилизуют (20=1) мин при температуре (121=1) *С. Хранение не более 28 сут при температуре (4=1) *С.
2.4.30 Мясо-пептонный бульон с глюкозой — по ГОСТ 10444.1.
2.4.31 Солевой бульон. К 100 см3 мясо-пегггонного бульона по ГОСТ 10444.1 добавляют 6.5 г хлорида натрия. Стерилизуют (20=1) мин при температуре (121=1) ’С. Хранят не более 28 сут при температуре (4=1) *С.
2.4.32 Агар Байрд-Паркер. В 1 дм3 дистиллированной воды вносят 10 г триптона, 5 г хлорида лития 6-водного, 20 г агара, 5 г мясного экстракта и 1 см3 дрожжевого экстракта. При отсутслши мясного экстракта вместо дистиллирован ной воды применяют 1 дм3 мясо-пептонного бульона или 1 дм3 бульона Хоттижера. Все компоненты, внесенные в 1 дм3 воды или бульона. на1ревают. помешивая до полного растворения, охлаждают до температуры 50—60 *С. Устанавливают pH 6.8—7.0, стерилизуют (20=1) мин при температуре (121 = 1) °С. К 90 ем3 основной среды добавляют асептически стерилизованные фильтрованием через мембранный фильтр растворы: 6.3 см3 раствора глицерина массовой концентрации 200 г/дм3. 5 см3 раствора пирувата натрия массовой концентрации 200 г/дм3. 1 см3 раствора те.ыурита калия массовой концентрации 10 г/дм3. 5 см3 желточной эмуль-
7
сии. Пекле тщательного перемешивания приготовленную среду рахтивают в чашки Петри. Хранят при температуре (4:1) СС не более 48 ч.
2.4.33 Яично-желточно-солевой агар. Перед анализом 1 дм3 мясо-пептонного агара расставляют и растворяют в нем 95 г хлорида натрия, охлаждают до температуры (45:1) *С и добавляют 100 см ' яично-же.гточной эмульсии по ГОСТ 10444.1. Смесь тщательно перемешивают и рахтивают в чашки Петри, хранят при температуре (4:1) 'С не более 5 сут.
2.4.34 Яично-желточный азидный агар. В 1 дм' дистсыированной воды растворяют при названии 10 г пептона. 3 г хлорида натрия. 0.2 г дигидрофосфата натрия безводного. 15 г агара. 5.5 г мясного экстракта. При отсутствии мясного экстракта используют мясную воду по ГОСТ 10444.1. при этом все компоненты растворяют в 1 дм ' мясной воды. Устанавливают pH (7,6:0,!), стерилизуют (30:1) мин при температуре (121:1) 'С. охлаждают до температуры 50—60 *С. добавляют 0.15 г азида натрия, смешивают, вновь стерилизуют (30:1) мин при температуре (121:1) *С. охлаждают до температуры (50:1) *С. добавляют 150 см' желточной эмульсии, смешивают и рахтивают в чашки Петри.
2.4.35 Желатин. 10—15 г измельченного нишевого желатина добавляют в 100 см3 мясо-пептонного бульона, растворяют при помешивании и медленном нагревании в водяной бане при температуре 40—50 *С. После полного растворения устанавливают pH 7.1—7,3. Фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, рахтивают в пробирки но 5—7 см3, стерилизуют текучим паром по 20 мин 2 дня подряд. Посте стерилизации среду охлаждают при строго вертикальном положении пробирок.
2.4.36 Среда Вильсон-Блера (агаризованная). измененная для анаэробов. I дм3 стерильно расплавленного и охлажденного до температуры (80:1) *С питательного агара добавляют 10 см3 раствора сульфита натрия массовой концентрации 100 г/дм3 и 1 см3 раствора железа (III) аммония сульфата массовой концентрацией 50 г/дм3. Среду хранят в защищенном от света месте при температуре (6:2) ’С не более 7 суг.
Допускается приготовление среды Вильсон-Блера следующим образом: к 100 см3 расплавленного питательного агара добавляют 4 см3 раствора сульфита натрия массовой концентрации 100 г/дм3 и 1 см3 раствора треххлористого железа массовой концен грации 80 г/дм3. Готовая среда хранению не подлежит.
2.4.37 Железосульфитная среда. К I дм3 дистиллированной воды добавляют 10.0 г гриитона. 0.5 г сульфита натрия. 0.5 г железа (III) цитрата. 15.0 гагара (при приготовлении агаризованной среды) или 1.5 гагара (при приготовлении вязкой среды). Компоненты растворяют при названии, после чего охлаждают до темперагуры (50:5) ’С. Устанавливают pH (7.1:0.!). Среду рахтивают в пробирки по 10—12 см3 и стерилизуют (15:1) мин при температуре (121±1) 'С.
Триптон может быть заменен на равноценную навеску сухою панкреатическою гидролизата казеина или на десятикратный объем жидкого панкреатического гидролизата казеина. Трнпгон и I дм3 воды могут быть заменены на 1 дм ’ мясной воды по ГОСТ 10444.1.
2.4.38 Среда Кип-Тароцци — по ГОСТ 10444.1 со следующим дополнением. Перед упогреб-лением среду регенерируют. Для этого пробирки со средой помещают в водяную баню и прогревают (20:1) мин при температуре (100:1) "С. Затем их охлаждают водопроводной водой.
2.5 Окраска препаратов по Граму, бактериальных спор и микроскопирование — но ГОСТ 30425.
8
1
С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).
2
На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002 (ЕН 285—96).
2
