Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

15 страниц

Купить ГОСТ 34461-2018 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на соковую продукцию (соки, концентрированные соки, нектары, сокосодержащие напитки), произведенную на основе или с добавлением цитрусовых фруктов (апельсина, грейпфрута, мандарина, лимона и лайма), и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения содержания (массовой концентрации и массовой доли) гесперидина и нарингина.

Диапазон измерений массовой концентрации нарингина в готовой соковой продукции (соки, нектары и сокосодержащие напитки) составляет от 30 до 1000 мг/дм в кубе, а гесперидина-от 100 до 1000 мг/дм в кубе

  Скачать PDF

Показать даты введения Admin

Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ

Определение содержания гесперидина и нарингина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

ГОСТ 34461 — 2018

Издание официальное


Москва

Стандартинформ

2018


Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией «Российский союз производителей соков» (РСПС) при участии Общества с ограниченной ответственностью «Люмэкс-маркетинг» (ООО «Люмэкс-маркетинг»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 августа 2018 г. No 111 -П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166)004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Киргизия

KG

Кыргыэстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 октября 2018 г. № 755-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34461-2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 ноября 2019 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или от-моны настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (mvw.gost.ru)

© Стандартинформ. оформление. 2018

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

9 Обработка и оформление результатов измерений

9.1 Если подготовка пробы была проведена по 8.1.2. то массовую концентрацию гесперидина (на-рингима) в пробе С. мг/дм3, вычисляют по формуле

(8)

где Сх — массовая концентрация гесперидина (нарингина) (см. 8.2.2). мг/дм3;

V2 — вместимость мерной колбы, используемой при подготовке пробы по 8.1.2. см3 (25 см3);

Q — коэффициент дополнительного разбавления подготовленной пробы по 8.2.3. Если подготовленная проба дополнительно не была разбавлена, то О = 1;

Vj — объем аликвоты исходной пробы, см3 (5 см3).

За результат измерений массовой концентрации гесперидина (нарингина) в пробе принимают среднеарифметическое значениеС. мг/дм3. результатов двух параллельных измерений С, и С2. мг/дм3. при выполнении условия

Ю0.!^Д!5 W    (9)

с

где готн — предел повторяемости (см. таблицу 2). %.

Результат измерений округляют до целого числа.

9.2 Если подготовка пробы была проведена по 8.1.3. то массовую долю гесперидина (нарингина) в пробе X, млн ’. вычисляют по формуле

(10)

у с, V4 Vfc-Q mVз

где Va — объем подготовленной по 8.1.3 пробы, равный 50 см3; т— масса пробы, г.

10oi^l,w

За результат измерений массовой доли гесперидина (нарингина) в пробе принимают среднеарифметическое значение X. млн-1, результатов двух параллельных измерений X, и Х2. млн при выполнении условия

(11)

где готн — предел повторяемости (см. таблицу 2). %.

Таблица 2 — Метрологические характеристики метода при Р = 0.95

Наименование

показателя

Диапазон

измерений

Границы

относительной

погрешности

*&.%

Предел повторяемости (допускаемое относительное расхождение результатоа двух параллельных измерений) гти. %

Предел воспроизводимости (допускаемое относительное расхождение результатов двух единичных измерений)

«огм-%

Гесперидин

Массовая концентрация. мг/дм3

От 100 до 1000 включ.

13

8

18

Массовая доля, млн-1

От 500 до 5000 включ.

Нарингин

Массовая концентрация. мг/дм3

От 30 до 1000 включ.

10

7

13

Массовая доля. млн~’

От 150 до 5000 включ.

Результат измерения округляют до целого числа.

При невыполнении условий (9) или (11) получают еще два результата измерений в соответствии с разделом 8 и затем устанавливают результат измерений в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-6 (подраздел 5.2).

ГОСТ 34461-2018

9.3 Результаты измерений регистрируют в протоколе испытаний согласно ГОСТ ИСО/МЭК17025 с указанием настоящего стандарта. В протоколе испытаний результат измерений представляют в следующем виде (с указанием компонента)

(С ± Дс), мг/дм3 (Р = 0.95)    (12)

(X ± Ах). млн 1    (Р = 0.95).    (13)

гдеС(Х) — среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений (см. 9.1 и 9.2), мг/дм3 (млн1);

Ас — значение границ абсолютной погрешности измерений массовой концентрации для доверительной вероятности Р = 0,95. мг/дм3. вычисляемое по формуле

Ac    (14)

^100    у '

где 5 — значение границ относительной погрешности измерений массовой концентрации (массовой доли) для доверительной вероятности Р = 0.95 (см. таблицу 2), %:

6-Х 100 '


Ау


(15)


Дх — значение границ абсолютной погрешности измерений массовой доли для доверительной вероятности Р = 0.95. млн'1, вычисляемое по формуле

9.4    Результат измерений при содержании гесперидина (нарингина) менее нижней границы диапазона измерений представляют в протоколе в виде: «Менее Сн. мг/дм3» или «менее Хм, млн1». Результат измерений при содержании гесперидина (нарингина) выше верхней границы диапазона измерений представляют в протоколе в виде: «Более С„. мг/дм3» или «более Х„. млн 1», где Снм) и Св (Х„) — нижняя и верхняя границы диапазона измерений массовой концентрации (массовой доли) гесперидина (нарингина) (см. раздел 1).

9.5    Результаты измерений, полученные в двух лабораториях, признают совместимыми при выполнении условий

(16)

Ц т ^2

где С, и С2 — результаты измерений массовой концентрации компонента в первой и второй лабораториях соответственно, полученные по 9.1, мг/дм3;

CDq 95 — критическая разность, %. или

2    's0-01ctW    0П

Xi Хг

где X, иХ2 — результаты измерений массовой доли компонента в первой и второй лабораториях соответственно. полученные по 9.2. млн'1.

Значение критической разности вычисляют по формуле

со«.5 *    (’8)

1 п\ п2

где Я?отн — предел воспроизводимости (см. таблицу 2). %; rotH — предел повторяемости (см. таблицу 2). %;

л, и п2 — число параллельных измерений в первой и второй лабораториях соответственно.

Если условия (16) и (17) не выполняются, то лабораториям рекомендуется провести процедуры, предусмотренные ГОСТ 5725-6 (пункты 5.3.3 и 5.3.4).

10 Контроль качества результатов измерений

Контроль качества результатов измерений осуществляют, используя методы контроля стабильности среднеквадратического отклонения повторяемости и контроля стабильности среднеквадратического отклонения промежуточной прецизионности с применением контрольных карт Шухарта по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункты 6.2.2. 6.2.3).

Периодичность контроля и процедуры контроля стабильности результатов измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории в соответствии с ГОСТ ИСО/МЭК 17025 (пункт 4.2).

9

11    Требования безопасности

При выполнении измерений следует соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. требования пожарной безопасности — по ГОСТ 12.1.004.

Требования электробезопасности при работе с приборами — по ГОСТ 12.1.019 и в соответствии с руководством по эксплуатации используемого оборудования.

12    Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное образование, опыт работы в химической лаборатории, изучившие руководство по эксплуатации жидкостного хроматографа и освоившие метод. Первое применение метода в лаборатории должно проводиться под руководством специалиста, владеющего теорией ВЭЖХ и имеющего практические навыки в этой области.

10

ГОСТ 34461-2018

Приложение А (справочное)

Примеры хроматограмм

А.1 Примеры хроматограмм, полученных на колонке Alltima С18 (внутренний диаметр 2.1 мм. длина 120 мм. размер частиц 5 мкм), приведены на рисунках А.1, А.2.

Время, мин

1 — пик марингина; 2 — пик гесперидина Рисунок А.1 — Хроматограмма градуировочного раствора № 2 (см. 7.3.5)

1 — пик марингина. 2 — пик гесперидина

Рисунок А.2 — Хроматограмма пробы соковой продукции — нектара из соков цитрусовых фруктов (апельсина, лимона, лайма), подготовленной по 8.1.2

А.2 Пример хроматограммы, подготовленной по 8.1.2 пробы соковой продукции, полученной на колонке Agilent ZORBAX SB-C18 (внутренний диаметр 4.6 мм. длина 250 мм. размер частиц 5 мкм). приведен на рисунке А.З.

11

ГОСТ 34461-2018

1 — пик кариигина, 2 — пик гесперидииа

Рисунок А.З — Хроматограмма подготовленной пробы сокосодержащего напитка из апельсинов и грейпфрутов

УДК 543.544.52:664.863:006.35    МКС    67.080.01

Ключевые слова: продукция соковая, гесперидин, наримгин. метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, массовая концентрация, массовая доля

БЗ 10—2018/30

Редактор В.Н. Шмельков Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор О.В. Лазарева Компьютерная верстка Е.О. Асташина

Сдано в набор 12 10.2018. Подписано в печать 25.10.2018. Формат 60*84'/^ Гарнитура Ариал.

Уел. веч. л. 1.86. Уч.-изд. п. 1.68 Подготовлено на основе электронной версии, предоставленном разработчиком стандарта

Создана в единичном исполнении ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» для комплектования Федеральною информационною фонда стандартов. 117418 Москва. Нахимовский лр-т. д. 31. к. 2. www.gos1info.fu info@gostinfo.ru

ГОСТ 34461-2018

Содержание

1    Область применения....................................................................................................................................1

2    Нормативные ссылки....................................................................................................................................1

3    Сущность метода........................................................................ 2

4    Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, посуда и материалы......................2

5    Отбор проб...................................................................................................................................................3

6    Условия проведения измерений............... 3

7    Подготовка к проведению измерений ........................................................................................................4

8    Проведение измерений............. 7

9    Обработка и оформление результатов измерений....................................................................................8

10    Контроль качества результатов измерений..............................................................................................9

11    Требования безопасности .......................................................................................................................10

12    Требования к квалификации операторов ..............................................................................................10

Приложение А (справочное) Примеры хроматограмм ..............................................................................11

ГОСТ 34461-2018

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ

Определение содержания гесперидина и нарингина методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии

Juice products.

Determination of hesperidin and naringin content by HPLC method

Дата введения — 2019—11—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на соковую продукцию (соки, концентрированные соки, нектары, сокосодержащие напитки), произведенную на основе или с добавлением цитрусовых фруктов (апельсина, грейпфрута, мандарина, лимона и лайма), и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения содержания (массовой концентрации и массовой доли) гесперидина и нарингина.

Диапазон измерений массовой концентрации нарингина в готовой соковой продукции (соки, нектары и сокосодержащие напитки) составляет от 30 до 1000 мг/дм3. а гесперидина — от 100 до 1000 мг/дм3.

Диапазон измерений массовой доли нарингина в концентрированных соках составляет от 150 до 5000 млн а гесперидина — от 500 до 5000 млн* \

Примечание — 1 млн'’ соответствует 1 мг/кг.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79“ Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ ISO 3696-2013" Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроля

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 5712-78 Реактивы. Аммоний щавелевокислый 1-водный. Технические условия

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».

Издание официальное

ГОСТ ИСО 5725-1-2003' Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ИСО 5725-6-2003" Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ИСО/МЭК 17025—2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ 20289-74 Реактивы. Диметилформамид. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-2014 Продукты переработки фруктов и овощей. Правила приемки и методы отбора

проб

ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущею года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Метод основан на экстракции геслеридина и нарингина из проб соковой продукции смесью N.N-диметилформамида и водного раствора щавелевокислого аммония с последующим измерением массовой концентрации указанных соединений в экстракте методом ВЭЖХ с фотометрическим детектированием в ультрафиолетовой области спектра.

4    Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, посуда и материалы

4.1    Хроматограф жидкостный со спектрофотометрическим детектором, обеспечивающим проведение измерений при 287 нм или диодно-матричным детектором в диапазоне длин волн от 190 до 600 нм. снабженный программным обеспечением для сбора и обработки данных, со следующими метрологическими характеристиками:

-относительное среднеквадратическое отклонение выходного сигнала по высоте и площади пика — не более 3 %:

-относительное среднеквадратическое отклонение выходного сигнала по времени удерживания — не более 1.0 %.

Предел детектирования геслеридина и нарингина (при соотношении сигнал/'шум, равном трем) должен быть не более 0,2 мг/дм3.

Рекомендуется использование термостата колонок.

4.2    Колонка хроматографическая"*, заполненная обращенно-фазовым сорбентом С18. обеспечивающая число теоретических тарелок по пикам геслеридина и нарингина не менее 3000.

4.3    Колонка защитная (предколонка), заполненная обращенно-фазовым сорбентом.

4.4    Весы неавтоматического действия специального класса точности с пределом допускаемой абсолютной погрешности измерений ± 0.0001 г. 1 2

ГОСТ 34461-2018

4.5    Весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1, пределом допускаемой абсолютной погрешности измерения ± 0.001 г.

4.6    Пипетки градуированные 2-1-2-1, 2-1-2-2, 2-1-2-5 и 2-1-2-10 по ГОСТ 29227.

Примечание — Допускается использование дозаторов с метрологическими характеристиками, соответствующими ГОСТ 28311.

4.7    Колбы мерные 2-25-2. 2-50-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

4.8    Цилиндры мерные вместимостью 50. 100. 250. 1000 см3 4. 2-го класса точности, исполнений 2 или 2а по ГОСТ 1770.

4.9    Центрифуга лабораторная с частотой вращения не менее 83 с-1 (5000 об/мин), обеспечивающая фактор разделения (g-фактор) не менее 1000.

4.10    Шкаф сушильный с диапазоном рабочих температур от 50 °С до 200 °С.

4.11    Насос лабораторный вакуумный, мембранный или водоструйный по ГОСТ 25336. обеспечивающий разрежение от 2.5 до 10 кПа.

4.12    Баня водяная с регулятором температуры, обеспечивающая поддержание температуры в диапазоне от 40 °С до 100 °С.

4.13    Стаканы любого типа исполнения 1 вместимостью 50, 100 см4 по ГОСТ 25336.

4.14 Колбы плоскодонные П-1-1000-29/32 или конические Кн-1-250-29/32. Кн-1-1000-29/32 по ГОСТ 25336.

4.15    Сосуды стеклянные с завинчивающимися крышками (виалы) с инертным материалом септы вместимостью от 10 до 20 см4.

4.16    Пробирки одноразовые из полимерного материала типа Эппендороф или аналогичные вместимостью от 1 до 2 см4.

4.17    Пробирки полимерные центрифужные конические с завинчивающейся крышкой вместимостью 15 см4.

4.18    Фильтры мембранные с диаметром пор 0.20 и 0.45 мкм.

4.19    Вода дистиллированная поГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа по ГОСТ ISO 3696 1-й степени чистоты (далее — вода для анализа).

4.20    Ацетонитрил для жидкостной хроматографии (оптическая плотность при 200 нм относительно дистиллированной воды должна быть не более 0,05 единиц оптической плотности), ос. ч.

4.21    N.N-Диметилформамид по ГОСТ 20289. х. ч.

4.22    Аммоний щавелевокислый 1-водный по ГОСТ 5712. х. ч.

4.23    Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61. х. ч.

4.24    Кислота серная по ГОСТ 4204. х. ч. или ч. д. а.

4.25    Гесперидин' с массовой долей основного вещества не менее 95 %.

4.26    Нарингин" с массовой долей основного вещества не менее 95 %.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательного оборудования, посуды, материалов с техническими характеристиками не ниже вышеуказанных и химических реактивов аналогичной квалификации.

5    Отбор проб

Отбор проб соковой продукции — по ГОСТ 26313.

6    Условия проведения измерений

При подготовке к проведению измерений и проведении измерений в лаборатории соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха.................................(20    ±    5)    °С;

-    атмосферное давление...................................................от    84.0    до    106,7 кПа;

-    влажность воздуха.........................................................не    более    80 %.

В лабораторных помещениях не должно быть загрязненности воздуха рабочей зоны пылью и агрессивными веществами, должны отсутствовать вибрация или другие факторы, влияющие на результаты измерений.

ГОСТ 34461-2018

7 Подготовка к проведению измерений

7.1    Подготовка стеклянной посуды

Посуду для приготовления и хранения подвижной фазы моют только серной кислотой (см. 4.24) без применения других моющих средств, тщательно промывают водопроводной водой и ополаскивают водой для анализа.

Остальную стеклянную посуду моют горячей водой с моющим средством, тщательно ополаскивают водой для анализа и сушат в сушильном шкафу при температуре 105 “С.

7.2    Приготовление вспомогательных растворов

7.2.1    Приготовление раствора уксусной кислоты молярной концентрации 0.2 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают приблизительно 200 см3 дистиллированной воды, добавляют 12 см3 концентрированной уксусной кислоты, разбавляют дистиллированной водой до метки и перемешивают.

Срок хранения раствора в стеклянном сосуде при температуре (4 ± 2) °С — 3 мес.

7.2.2    Приготовление подвижной фазы

Подвижную фазу готовят смешиванием 200 см3 ацетонитрила (см. 4.20) и 800 см3 раствора уксусной кислоты (см. 7.2.1) в плоскодонной колбе вместимостью 1000 см3 (см. 4.14).

Срок хранения подвижной фазы в стеклянном сосуде при температуре (4 ± 2) °С — 14 сут.

Перед использованием подвижную фазу дегазируют и фильтруют в соответствии с указаниями изготовителя хроматографа и (или) колонки.

Примечания

1    В зависимости от типа сорбента и типоразмера применяемых колонок допускается варьирование состава подвижной фазы с целью разделения пиков гвсперидина и нарингина и их отделения от пиков компонентов матрицы пробы.

2    Допускается приготовление иных объемов подвижной фазы в зависимости от потребности.

7.2.3    Приготовление раствора щавелевокислого аммония молярной концентрации 0,025 моль/дм3

В химическом стакане вместимостью 50 или 100 см3 взвешивают (3.55 ± 0,05) г щавелевокислого аммония 1-водного (см. 4.22) и растворяют приблизительно в 30 см3 воды для анализа. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3. Доводят до метки водой для анализа и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора в стеклянном сосуде при температуре (20 ± 5) :’С — 3 мес.

Примечание —Допускается изменять объем приготавливаемого раствора в зависимости от потребности.

7.3    Приготовление градуировочных и контрольных растворов

7.3.1    Общие положения

Растворы гесперидина и нарингина следует хранить в темном месте при температуре от 2 °С до 6 СС в герметичной посуде, исключающей возможность испарения растворителя и контакт раствора с материалами иными, чем стекло. Растворы каждой концентрации готовят по потребности.

7.3.2    Приготовление основного раствора гесперидина номинального значения массовой концентрации 500 мг/дм3

В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают (25.0±0.5) мг гесперидина (см. 4.25). добавляют 10 см3 N.N-диметилформамида (см. 4.21). тщательно перемешивают до полного растворения (при необходимости нагревают на водяной бане при температуре от 40 °С до 45°С). Содержимое колбы доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по 7.2.2, и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора в условиях по 7.3.1 — 4 сут.

7.3.3    Приготовление основного раствора нарингина номинального значения массовой концентрации 1000 мг/дм3

В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают (25.0 ± 0.5) мг нарингина (см. 4.26). добавляют 5 см3 N.N-диметилформамида (см. 4.21) и перемешивают до полного растворения нарингина. Содержимое колбы доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по 7.2.2, и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора в условиях по 7.3.1 — 4 сут.

4

ГОСТ 34461-2018

7.3.4 Фактическое значение массовой концентрации геслеридина (нарингина) в основном раство-ре Сосн, мг/дм3, вычисляют по формуле

(1)

М 1000 0 V, 100

где М — масса геслеридина (нарингина), мг;

1000 — коэффициент согласования размерности единиц объема:

9 — массовая доля основного вещества в исходном реактиве, использованном для приготовления основного раствора (указано в паспорте изготовителя). %.

У, — объем основного раствора, см3;

100 — коэффициент для перевода массовой доли основного вещества из процентов в безразмерную величину.

7.3.5 Приготовление градуировочных растворов

7.3.5.1 Приготовление градуировочного раствора N8» 1

В стеклянный сосуд с завинчивающейся крышкой (виалу) вместимостью от 10 до 20 см3 помещают пипеткой или дозатором 2 см3 основного раствора геслеридина (см. 7.3.2) и 1 см3 основного раствора нарингина (см. 7.3.3), добавляют пипеткой или дозатором 7 см3 подвижной фазы, приготовленной по 7.2.2, и тщательно перемешивают.

Номинальное значение массовой концентрации компонентов в градуировочном растворе № 1 составляет 100 мг/дм3. Фактическое значение массовой концентрации компонентов С,, мг/дм3, вычисляют по формуле

С, , С~и Voc”    (2)

Ко

где — фактическое значение массовой концентрации компонента в основном растворе (см. 7.3.4), мг/дм3;

^осн объем основного раствора компонента, использованный для приготовления градуировочного раствора Ne 1, см3;

V|p — объем приготовленного градуировочного раствора Ne 1, см3 (10 см3).

Раствор используют в день приготовления.

7.3.5.2 Приготовление градуировочных растворов Np 2—5

В стеклянные сосуды с завинчивающейся крышкой (виалы) вместимостью от 10 до 20 см3 помещают пипеткой или дозатором градуировочный раствор № 1 (см. 7.5.3.1). добавляют пипеткой или дозатором подвижную фазу, приготовленную по 7.2.2 (см. таблицу 1). и тщательно перемешивают.

Таблица 1

Номер

раствора

Объем аликвоты градуировочного раствора Ns 1. см3

Объем подвижной фазы, приготовленной по 7.2.2. си3

Массовая концентрация (номинальное значение) геслеридина (нарингина). мг/дм3

2

4

6

40

3

2

8

20

4

1

9

10

5*

0.5

9.5

5

* Раствор № 5 используют только при установлении градуировочной характеристики для нарингина.

Фактическое значение массовой концентрации компонента в приготовленном градуировочном растворе С. мг/дм3. вычисляют по формуле

Су -    (3)

где С, — фактическое значение массовой концентрации компонента в градуировочном растворе No 1 (см. 7.3.5.1). мг/дм3;

5

ГОСТ 34461-2018

Van — объем аликвоты градуировочного раствора № 1. использованный для приготовления данного градуировочного раствора (см. таблицу 1). см3;

V,— объем приготовленного градуировочного раствора, см3 (10 см3).

Растворы используют в день приготовления.

7.4    Подготовка хроматографа к работе

Включение и подготовку хроматографа к работе, вывод его на рабочий режим, включая кондиционирование колонки, а также промывку гидравлической линии хроматографа и выключение хроматографа по окончании работы осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации.

7.5    Условия хроматографического анализа

При проведении хроматографического анализа создают и поддерживают следующие условия:

-    температура колонки — 25 °С (при наличии термостата колонок):

-длина волны детектирования при использовании спектрофотометрического детектора — 287 нм:

-    объем дозирования пробы — полное заполнение дозирующей петли (от 10 до 20 мм3);

-    режим элюирования — изократический. подвижная фаза — по 7.2.2:

-    объемную скорость потока подвижной фазы определяют типоразмерами хроматографической колонки. Рекомендуемое значение составляет 1.0 см3/мин для колонок длиной 250 мм и внутренним диаметром 4.6 мм и 0,2 см3/мин — для колонок длиной 150 мм и внутренним диаметром 2.1 мм.

7.6    Градуировка хроматографа

Для градуировки хроматографа регистрируют по две хроматограммы градуировочных растворов № 1—5 (см. 7.3.5) и. используя программное обеспечение к хроматографу, находят площади пиков компонентов, а затем устанавливают градуировочную характеристику для каждого компонента в виде функциональной зависимости площади пика от массовой концентрации компонента.

Градуировку проводят при освоении метода и далее — при смене оборудования, колонок, условий хроматографического анализа, при значительном изменении параметров хроматографического процесса (времени удерживания, эффективности, разрешения и асимметрии пиков), после ремонта хроматографа или при неудовлетворительных результатах контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 7.7).

Примечание — После длительного перерыва в работе рекомендуется проверить стабильность градуировочной характеристики в нескольких точках (не менее двух) диапазона.

7.7    Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят ежедневно перед началом работы, используя заново приготовленный градуировочный раствор № 2.

Регистрируют не менее двух хроматограмм этого раствора, идентифицируют пики компонентов, внося при необходимости коррекцию времен удерживания и принимая во внимание параметры хроматографического процесса (эффективность колонки, время удерживания пиков, разрешение пиков, асимметрию пиков), и вычисляют массовую концентрацию геслеридина и нарингина с использованием действующей градуировочной характеристики.

Проверяют сходимость времен удерживания

|f,-f2|s0.05?:    (4)

где /, и t2 — время удерживания пика компонента на первой и второй хроматограммах соответственно, мин:

I— среднеарифметическое значение времен удерживания /, и f2. мин.

Проверяют сходимость значений массовой концентрации компонентов

|Ce1-CJSO,06CK,    (5)

где Ск1 и Ск2 — измеренное значение массовой концентрации компонентов в пробе для контроля по первой и второй хроматограммам соответственно, мг/дм3;

Ск — среднеарифметическое значение массовой концентрации Ск, и Ск2, мг/дм3.

Градуировочная характеристика признается стабильной, если выполняется условие

6


K “ CJ S 0,08 ск0.

(6)

где Ск — фактическое значение массовой концентрации компонента в растворе, используемом для контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 7.3.4). мг/дм3;

— фактическое значение массовой концентрации компонента в растворе, используемом для контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 7.3.4), мг/дм3.

Если условие (6) не выполняется, то процедуру контроля повторяют и при получении неудовлетворительного результата градуировку хроматографа проводят заново.

8 Проведение измерений

8.1    Подготовка проб к измерениям

8.1.1    Измерения проводят два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1.

8.1.2    Пробу соков, нектаров или сокосодержащих напитков интенсивно перемешивают и в две мерные колбы вместимостью 25 см3 (V2) отбирают аликвоты объемом 5 см3 (V3) для проведения параллельных определений (см. 8.1.1).

Примечание — Аликвоты для параллельных определений должны быть отобраны одна за другой без задержки.

В каждую мерную колбу вместимостью 25 см3 добавляют по 5 см3 раствора щавелевокислого аммония, приготовленного по 7.2.3. 5 см3 N.N-диметилформамида (см. 4.21). Содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, доводят до метки водой для анализа и тщательно перемешивают.

Нагревают в течение 10 мин на водяной бане при температуре от 90 °С до 100 °С и охлаждают до комнатной температуры.

Приблизительно 1.5 см3 полученного раствора помещают в одноразовую пробирку (см. 4.16). центрифугируют при скорости вращения 5000 об/мин (фактор разделения не менее 1000) в течение 5 мин и подвергают хроматографическому анализу по 8.2.

Примечание —Допускается замена центрифугирования фильтрованием через мембранные фильтры с диаметром пор 0.20 или 0.45 мкм. Не допускается использование мембранных фильтров из лолисульфона. так как они не устойчивы к ацетонитрилу, а также на основе политетрафторэтилена (PTFE) и его аналогов, поскольку эти материалы адсорбируют нарингин и гесперидин.

8.1.3    Концентрированные соки предварительно разбавляют. В стакане вместимостью 50 см3 взвешивают от 4.5 до 5,5 г пробы концентрированного сока, добавляют от 5 до 10 см3 воды для анализа и перемешивают. Полученный раствор количественно (многократно ополаскивая стенки стакана водой для анализа) переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 (V4). доводят водой для анализа до метки и тщательно перемешивают. Затем проводят все процедуры, предусмотренные 8.1.2.

8.2 Проведение хроматографического анализа

8.2.1    Подготовленную по 8.1 пробу дозируют в хроматограф и регистрируют две хроматограммы в тех же условиях, в которых были зарегистрированы хроматограммы градуировочных растворов (см. 7.5). На полученных хроматограммах идентифицируют пики определяемых компонентов, установив ширину окна идентификации 5 %. используя значения площадей пиков. Вычисляют значения массовой концентрации идентифицированных компонентов при помощи градуировочных характеристик, установленных по 7.6.

8.2.2    Проверяют выполнение условия (5). Если это условие выполняется, то в качестве значения массовой концентрации компонента в подготовленной по 8.1 пробе принимают среднеарифметическое полученных значений. Если условие не выполняется, находят и устраняют причины нестабильности, после чего ввод подготовленной пробы повторяют.

8.2.3    Если массовая концентрация гесперидина (нарингина) в подготовленной по 8.1.2 или 8.1.3 пробе превышает верхнюю границу диапазона градуировочной характеристики (100 мг/дм3), то подготовленную пробу разбавляют водой для анализа. Коэффициент разбавления Q вычисляют по формуле

(7)

где Vp — объем разбавленной пробы, см3;

Va — объем аликвоты подготовленной по 8.1 пробы, взятый для разбавления, см3.

8.2.4 Примеры хроматограмм приведены в приложении А.

7

1

’ В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002.

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.

**’ Например, хроматографические колонки Nucleosil 100-5С18 и Agilent ZORBAX SB-C18. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является поддержкой указанных продуктов. Допускается использование аналожчных хроматографических колонок, в том числе с иными типоразмерами при соблюдении указанных требований.

2

3

* CAS 520-26-3 (CAS — код соединения в американской реферативной системе по химии (Chemical Abstracts).

** CAS 10236-47-2.

4