МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

МЕД НАТУРАЛЬНЫЙ

Методы определения гидроксиметилфурфураля

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2014

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением «Научно-исследовательский институт пчеловодства» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ«НИИП» Россельхозакаде-мии) и Обществом с ограниченной ответственностью «Аналитический центр Апис»

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстан-

дарт)

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 15 ноября 2012 г. № 42)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК(ИСО 3166)004—97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан Киргизия KG Кыргызстандарт Молдова MD Молдова-Стандарт Россия RU Росстандарт Таджикистан TJ Т аджикстандарт Узбекистан UZ Узстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. № 1664-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31768-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.

5    Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52834-2007

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

©Стандартинформ, 2014

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Таблица 6 —Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг Предел повторяемости (для двух результатов параллельных определений) г, % отн. Предел воспроизводимости (значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R, % отн. 1,0—85,0 10 30

3.2.6 Форма представления результата

Результат измерения в документах, предусматривающихего использование, представляют в виде

(М_ср + Д), мг/кг, Р = 0,95,

где + Д— границы характеристик абсолютной погрешности результатов измерения для данного содержания ГМФ, мг/кг;

+ Д = + 5М_ср/100, значение относительной погрешности + 5представлено в таблице 5.

3.3 Определение содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ) по методу Винклера

Метод основан на колориметрическом определении окраски, полученной в результате взаимодействия ГМФ с барбитуровой кислотой и п-толуидином, относительно раствора сравнения. Диапазон измерений содержания ГМФ в меде от 1,0 до 85 мг/кг.

3.3.1    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

3.3.1.1    Колориметр фотоэлектрический, снабженный светофильтром с максимумом пропускания при длине волны (540 + 10) нм.

3.3.1.2    Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.

3.3.1.3    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом абсолютной погрешности однократного взвешивания+0,1 мг.

3.3.1.4    Баня водяная.

3.3.1.5    Секундомер.

3.3.1.6    Электроплитка, шкаф сушильный по ГОСТ 14919.

3.3.1.7    Термометр ртутный стеклянный лабораторный до 100 °С по ГОСТ28498.

3.3.1.8    Колбы мерные исполнений 1, 2, вместимостью 50, 100 см³, 2-го класса точности по ГОСТ 1770.

3.3.1.9    Стаканы стеклянные исполнения 1 вместимостью 50 см³ по ГОСТ 25336.

3.3.1.10    Пробирки стеклянные с притертой пробкой вместимостью 10 см³ по ГОСТ 25336.

3.3.1.11    Пипетки 2-2-1-1,2-2-1-2,2-2-1-5 по ГОСТ29227, ГОСТ 29228.

3.3.1.12    Пипетки по 2-2-10,2а-2-20,2а-2-50 по ГОСТ 29169.

3.3.1.13    Фильтры обеззоленные.

3.3.1.14    Барбитуровая кислота.

3.3.1.15    п-толуидин.

3.3.1.16    Изопропиловый спирт по ГОСТ 9805.

3.3.1.17    Кислота уксусная ледяная, х. ч., поГОСТ61.

3.3.1.18    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709, освобожденная от кислорода путем кипячения.

3.3.1.19    Калий железистосинеродистый 3-водный [K₄Fe(CN)₆ ЗН₂0],х. ч., по ГОСТ 4207.

3.3.1.20    Цинкуксуснокислый2-водный[2п(СН₃СОО)₂-2Н₂0],х. ч., по ГОСТ5823.

3.3.1.21    Спирт этиловый технический поГОСТ 17299.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

3.3.2 Подготовка к испытанию

3.3.2.1    Отбор проб — по ГОСТ 19792.

3.3.2.2    Подготовка пробы — по 3.1.4.

3.3.2.3    Приготовление раствора барбитуровой кислоты

(0,500 + 0,01) г барбитуровой кислоты (см. 3.3.1.14), высушенной в сушильном шкафу (см. 3.3.1.6) при 105 °С в течение 1 ч, быстро смешивают с 70 см³ дистиллированной воды (см. 3.3.1.18), количественно переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см³, растворяют при нагревании на водяной бане, охлаждают до 20 °С и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят в

9

ГОСТ 31768-2012

3.3.5 Точность метода

Статистический анализ результатов испытаний по оценке точности метода проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ISO 5725-1 и ГОСТ ISO 5725-6.

3.3.5.1    Повторяемость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений М_ШФ1 и М_ШФ 2, которые получены в условиях повторяемости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, одна и та же лаборатория, один и тот же оператор, одно и то же оборудование, короткий промежуток времени), не должно превышать предела повторяемости г=2,8 ст_г 0,01 М_гмфср. Значения г и а_г представлены в таблицах 7 и 8.

3.3.5.2 Воспроизводимость результатов    _    _

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых измерений М_ШФ1 иМ_{ГМФ 2}, которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости

|Мгмф,1 — Мгмф,2| <R, R - 2,8 or 0,01 МгмФср.

Значения R и a_R представлены в таблицах 7 и 8.

3.3.5.3 При соблюдении всех регламентируемых методикой условий проведения измерений характеристики погрешности результата измерения с вероятностью Р = 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблицах 7 и 8.

Таблица 7 — Диапазон измерений, значения характеристик погрешности и ее составляющих при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости) аг, % Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) aR, % Показатель точности (границы относительной погрешности) + 5, % 1,0—85,0 6,0 12,0 28,0

Таблица 8 — Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг Предел повторяемости (для двух результатов параллельных определений) г, % отн. Предел воспроизводимости (значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R, % отн. 1,0—85,0 11 29

3.3.6 Форма представления результата

Результат измерения в документах, предусматривающихего использование, представляют в виде

(М_ср ± А), мг/кг, Р = 0,95,

где + Д— границы характеристик абсолютной погрешности результатов измерения для данного содержания ГМФ, мг/кг;

+ Д = +5 М_ср/100, значение относительной погрешности + 5представлено в таблице 7.

3.4 Реакция Селиванова-Фиге на гидроксиметилфурфураль (ГМФ)

Метод основан на образовании в кислой среде продукта взаимодействия ГМФ с резорцином, окрашенного в вишнево-красный цвет.

Диапазон определения массовой доли ГМФ в меде: не более 25,0 мг/кг — реакция отрицательная, не менее 25,0 мг/кг — реакция положительная.

3.4.1    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

3.4.1.1    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания+0,1 мг.

3.4.1.2    Ступки фарфоровые диаметром 70 мм с пестиком по ГОСТ 9147.

3.4.1.3    Чашки фарфоровые диаметром 50 мм по ГОСТ 9147.

3.4.1.4    Эфир для наркоза стабилизированный.

11

3.4.1.5    Резорцин по ГОСТ 9970.

3.4.1.6    Кислота соляная концентрированная, х. ч., поГОСТ3118.

3.4.2 Подготовка к испытанию

3.4.2.1    Приготовление раствора резорцина

(1,00 + 0,10) г резорцина (см. 3.4.1.5) растворяют в 100 см³ концентрированной соляной кислоты (см. 3.4.1.6). Раствор должен быть бесцветным. Раствор хранят в прохладном месте в склянке из оранжевого стекла с притертой пробкой.

3.4.2.2    Проведение испытания

(3,00 + 0,10) г меда, подготовленного по 3.1.3, и 15 см³ эфира (см. 3.4.1.4) тщательно перемешивают пестиком в сухой фарфоровой ступке (см. 3.4.1.2) в течение 2—3 мин. Эфирную вытяжку переносят в сухую фарфоровую чашку по 3.4.1.3. В фарфоровую ступку добавляют 15 см³ эфира и повторяют перемешивание меда с новой порцией эфира. Эфирные вытяжки объединяют, эфиру дают испариться под тягой при комнатной температуре. К остатку добавляют две-три капли раствора резорцина по 3.4.2.1 и наблюдают изменение окраски в течение 5 мин.

Зеленовато-желтое, желтое или темно-желтое окрашивание свидетельствует о содержании гид-роксиметилфурфураля не более 25 мг/кг. Реакция отрицательная.

Вишневое окрашивание свидетельствует о содержании гидроксиметилфурфураля не менее 25 мг/кг — реакция положительная.

12

УДК 638.16:006.354    МКС    67.180.10    С52

Ключевые слова: мед натуральный, гидроксиметилфурфураль, высокоэффективная жидкостная хроматография, спектрофотометрический метод по Уайту, фотоколориметрический метод по Винклеру, реакция Селиванова-Фиге

13

Редактор Л.В. Коретникова Технический редактор Е.В. Беспрозванная Корректор Е.Д. Дульнева Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 17.08.2014. Подписано в печать 23.10.2014. Формат 60x84}^. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 1,86. Уч.-изд. л. 1,27. Тираж 93 экз. Зак. 4382.

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru    info@gostinfo.ru

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕД НАТУРАЛЬНЫЙ Методы определения гидроксиметилфурфураля

Natural honey. Methods for determination of hydroxymethylfurfural

Дата введения — 2013—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на натуральный мед (далее — мед) и устанавливает следующие методы определения гидроксиметилфурфураля:

-    высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (диапазон измеряемого содержания гидроксиметилфурфураля от 1,0 до 85,0 мг/кг);

-    спектрофотометрический по Уайту (диапазон измеряемого содержания гидроксиметилфурфураля от 1,0 до 85,0 мг/кг);

-    фотоколориметрический по Винклеру (диапазон измеряемого содержания гидроксиметилфурфураля от 1,0 до 85,0 мг/кг);

-    реакция Селиванова-Фиге на гидроксиметилфурфураль.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4207-75 Калий железистосинеродистый 3-водный. Технические условия ГОСТ ISO 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ISO 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ 5823-78 Цинк уксуснокислый 2-водный. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия ГОСТ 9805-84 Спирт изопропиловый. Технические условия ГОСТ 9970-74 Резорцин технический. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия

ГОСТ 19792-2001 Мед натуральный. Технические условия

ГОСТ 24104-2001* Весы лабораторные. Общие технические требования

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».

Издание официальное

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Методы определения содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ)

Методы позволяют определять содержание гидроксиметилфурфураля [б-(гидроксиметил-)-фуран-2-карбальдегида (ГМФ)] в натуральном меде.

3.1    Определение содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

Метод основан на применении обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Содержание ГМФ фиксируется спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области спектра.

Метод включает следующие этапы:

-    построение калибровочной прямой;

-    растворение навески меда в дистиллированной воде;

-    добавление к раствору меда растворов Карреза I и II для осаждения протеинов и стабилизации ГМФ в водном растворе;

-    фильтрацию полученного раствора;

-    определение содержания ГМФ на жидкостном хроматографе, снабженном УФ-детектором. Диапазон определения содержания ГМФ в анализируемом меде от 1,0 до 85,0 мг/кг.

Метод применяют при возникновении разногласий в оценке качества продукции.

3.1.1    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

3.1.1.1    Хроматограф для жидкостной хроматографии, состоящий:

-    из градиентного насоса высокого давления с подачей элюента от 0,1 до 5,0 см³/мин;

-    термостата колонок;

-    инжектора или автосемплера;

-    спектрофотометрического УФ-детектора;

-    системы для сбора и обработки данных.

3.1.1.2    Колонка хроматографическая с силикагелем (С18) с привитыми октадецил ьными группами типа Eclipse XDB-C18 с размером частиц 5 мкм, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм.

3.1.1.3    Предколонка с картриджем Phenomenex С18 (ODS) 4x3 мм.

3.1.1.4    Спектрофотометр, позволяющий проводить измерение оптической плотности при длине волны 210—380 нм.

3.1.1.5    Кюветы кварцевые с толщиной слоя раствора, поглощающего свет, равной 1 см.

3.1.1.6    Микрошприцы вместимостью от 10 до 50 мкл для жидкостной хроматографии (в случае использования инжектора).

3.1.1.7    Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С.

3.1.1.8    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +1,0 мг.

3.1.1.9    Система получения воды квалификации для ВЭЖХ МММроге Simplicity или аналогичная.

3.1.1.10    Колбы мерные наливные 2-50-1,2-100-1 поГОСТ 1770.

3.1.1.11    Пипетки 2-1-1-1 по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228.

2

ГОСТ 31768-2012

3.1.1.12    Пипетки 2-2-25 по ГОСТ 29169.

3.1.1.13    1-канальные механические дозаторы с варьируемыми объемами дозирования 10—100 мкл, 100—1000 мкл, 1—5 см³ 1-го класса точности.

3.1.1.14    Фильтр нейлоновый импортный на шприце с размером пор 0,45 мкм (13 mm Nylon 0,45 pm (Waters)).

3.1.1.15    Баня водяная или шкаф сушильный по ГОСТ 14919.

3.1.1.16    Сито лабораторное из металлической сетки.

3.1.1.17    Шпатель лабораторный.

3.1.1.18    Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

3.1.1.19    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.1.1.20    Вода для лабораторного анализа категории 1.

3.1.1.21    Калий железистосинеродистый 3-BOflHbm[K₄Fe(CN)₆ -3H₂0],x. ч., поГОСТ 4207.

3.1.1.22    Цинк уксуснокислый 2-водный [Zn(CH₃COO)₂ • 2Н_гО], х. ч., по ГОСТ 5823.

3.1.1.23    5-Гидроксиметилфурфураль (ГМФ) с содержанием основного вещества не ниже 99 %, Aldrich, каталожный номер № Н4080-7.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

3.1.2    Условия хроматографического анализа:

-    колонка Eclipse XDB-C18,5 мкм, 150 х 4,6 мм по 3.1.1.2;

-    предколонка с картриджем PhenomenexС18 (ODS) 4x3 мм по 3.1.1.3;

-    температура — (30 ± 1) °С;

-    элюирование (градиент):

-    0—7 мин — вода/ацетонитрил 97/3,

-    7,0—7,5 мин — вода/ацетонитрил 97/3 — вода/ацетонитрил 0/100,

-    7,5—12,0 мин — вода/ацетонитрил 0/100,

-    12,0—12,5 мин — вода/ацетонитрил 0/100-вода/ацетонитрил 97/3,

-    12,5—17,0 мин — вода/ацетонитрил 97/3;

-    скорость потока — 1,0 см³/мин;

-    объем вводимой пробы — 20 мкл;

-    детектор — диодная матрица: диапазон одновременно детектируемых длин волн 210—380 нм с шагом 2 нм, рабочая длина волны — 283 нм;

-    время удерживания ГМФ (7,0 + 0,3) мин.

3.1.3    Отбор проб

3.1.3.1    Отбор проб — по ГОСТ 19792.

3.1.4    Подготовка пробы меда к испытанию

3.1.4.1    Закристаллизованный мед предварительно размягчают на водяной бане или в сушильном шкафу (см. 3.1.1.15) при температуре не выше 40 °С и продавливают шпателем (см. 3.1.1.17) через металлическое сито (см. 3.1.1.16).

3.1.4.2    Сотовый мед распечатывают и отделяют от сот при помощи металлического сита без нагревания.

Анализируемую пробу меда тщательно перемешивают не менее 3 мин. При перемешивании обращают внимание на то, чтобы в мед попало меньше воздуха.

3.1.5    Подготовка к проведению анализа

3.1.5.1    Приготовление основного стандартного раствора ГМФ массовой концентрацией 500 мкг/см³ (раствор А)

(0,050 ± 0,001) г ГМФ (см. 3.1.1.23) взвешивают и растворяют в воде для лабораторного анализа по 3.1.1.20, количественно переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см³, доводят до метки водой для лабораторного анализа и тщательно перемешивают. Получают раствор А. Срок хранения раствора А в холодильнике при температуре 4 °С — не более 3 мес.

3.1.5.2    Приготовление рабочего стандартного раствора ГМФ массовой концентрацией 2 мкг/см³ (раствор Б)

Аликвоту 0,2 см³ раствора А переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см³, доводят до метки водой для лабораторного анализа и тщательно перемешивают. Получают раствор Б, который используют при калибровке хроматографа.

Срок хранения раствора Б при комнатной температуре — не более 1 сут.

3

3.1.5.3 Определение точной массовой концентрации ГМФ в растворе Б

Определение точной массовой концентрации ГМФ в растворе Б проводят с помощью УФ-спектро-фотометра (см. 3.1.1.4), измеряя оптическую плотность при длине волны 285 нм, раствором сравнения служит вода для лабораторного анализа (см. 3.1.1.12).

Точную массовую концентрацию гидроксиметилфурфураля в рабочем стандартном растворе С, мг/дм³ или мкг/см³, рассчитывают по формуле

_с _ 7Ш-1000 _ /4-1000 LE 1-133,57’

где Л — оптическая плотность раствора;

М — молекулярная масса ГМФ (М = 126 г/моль);

10ОО — коэффициент пересчета мг в мкг;

L — толщина слоя раствора в кварцевой кювете (см. 3.1.1.5), равная 1 см;

Е — коэффициент молярной экстинкции для водного раствора (Е = 16830 см²/ммоль).

Значение относительной погрешности определения массовой концентрациии ГМФ в растворе с помощью УФ-спектрофотометрии не должно превышать 5% при вероятности Р= 0,95.

3.1.5.4    Приготовление раствора Карреза I

В мерной колбе вместимостью 100 см³ растворяют в дистиллированной воде (см. 3.1.1.19) (15,00 + 0,01) г калия железистосинеродистого 3-водного (см. 3.1.1.21), доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают. Срокхранения при комнатной температуре — 6 мес.

3.1.5.5    Приготовление раствора Карреза II

В мерной колбе вместимостью 100 см³ растворяют в дистиллированной воде (30,00 + 0,01) г цинка уксуснокислого 2-водного (см. 3.1.1.22), доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают. Срокхранения — 6 мес.

3.1.5.6    Построение калибровочного графика

В мерных колбах вместимостью 50 см³ готовят растворы ГМФ массовой концентрацией 0,02; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5 и 2,0 мкг/см³ путем доведения до метки водой для лабораторного анализа соответствующих количеств раствора Б в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1

Концентрация калибровочного раствора, мкг/см3 0,02 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0 Объем раствора Б, см3 0,5 2,5 12,5 25,0 37,5 50,0

Каждый раствор хроматографируют не менее трех раз. При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают концентрацию рабочего стандартного раствора в мкг/см³, а по оси ординат — средние значения площадей пиков. Калибровочный график должен быть линейным в заданном диапазоне концентраций с коэффициентом корреляции 0,99. Воспроизводимость результатов проверяют следующим образом: вводят не менее пяти инжекций раствора ГМФ с концентрацией 0,5 мкг/см³, относительная среднеквадратичная ошибка S_r(x) не должна превышать 2 %.

3.1.5.7 Подготовка пробы

(1,000 ± 0,001) г меда, подготовленного по 3.1.4, взвешивают в стакане по ГОСТ 25336 и растворяют в 25 см³ воды для лабораторного анализа, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³, тщательно перемешивают до растворения и вносят последовательно по 10 мкл растворов Карреза I и II по 3.1.5.4, 3.1.5.5, каждый раз перемешивая смесь. Доводят до метки водой для лабораторного анализа и тщательно перемешивают. Полученную смесь фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 3.1.1.14). Срокхранения пробы при комнатной температуре — 8 ч.

3.1.6 Выполнение измерений и обработка результатов анализа

3.1.6.1 Выполнение измерений

Фильтрованный раствор пробы, приготовленный по 3.1.5.7, хроматографируют не менее трех раз. Хроматограмма раствора меда, содержащего ГМФ, представлена на рисунке 1.

Разрешение между соседними с ГМФ пиками рассчитывают по формуле

ГОСТ 31768-2012

и W₂ — ширина пиков у основания, мин;

R_s должно быть не менее 1,0.

По калибровочному графику, зная площадь пика ГМФ, находят концентрацию ГМФ в анализируемой пробе меда.

3.1.6.2 Обработка результатов анализа

Содержание гидроксиметилфурфураля в анализируемом меде М_ШФ, мг/кг, рассчитывают по формуле

где С_ГМФ — концентрация ГМФ, найденная по калибровочному графику, мкг/см³;

V_o6p — объем, в котором растворена анализируемая проба, см³; ^тмада — масса анализируемой пробы меда, г.

Примечание — Объемы инжекции раствора пробы меда и калибровочного раствора ГМФ должны быть одинаковыми.

Вычисления проводят с записью результата до второго десятичного знака. Окончательный результат записывают с точностью до первого десятичного знака.

За окончательный результатопределения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, если выполняется условие приемлемости

Мгмф,1 — Мгмф,2^ г, г = 2,8 а_г0,01 /ИгмФср .

3.1.7 Точность метода

Статистический анализ результатов испытаний по оценке точности метода проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ISO 5725-1 и ГОСТ ISO 5725-6.

3.1.7.1 Повторяемость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений М_ШФ1 и М_ШФ 2, которые получены в условиях повторяемости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, одна и та же лаборатория, один и тот же оператор, одно и то же оборудование, короткий промежуток времени), не должно превышать предела повторяемости ст_г=2,8ст_г0,01 М_ШФср. Значения г и а_г представлены в таблицах 2 и 3.

5

3.1.7.2 Воспроизводимость результатов    _    _

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых измеренийМ_ГМФ1 иМ_ГМФ2, которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости \М_ШФ/[ -М_ШФ 21 <R, R = 2,8 a_R 0,01 М_гмфср.

Значения R и <т_к представлены в таблицах 2 и 3.

3.1.7.3    При соблюдении всех регламентируемых методикой условий характеристики погрешности результата измерения с вероятностью Р = 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблицах 2 и 3.

Таблица 2 — Диапазон измерений, значения характеристик погрешности и ее составляющих при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости) % Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) aR, % Показатель точности (границы относительной погрешности) + 5, % 1,0—85,0 4 11 25

Таблица 3 — Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг Предел повторяемости (для двух результатов параллельных определений) г, % отн. Предел воспроизводимости (значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R, % отн. 1,0—85,0 10 30

3.1.8 Форма представления результата

Результат измерения в документах, предусматривающих его использование, представляют в

виде:

(М_ср ± А), мг/кг, Р = 0,95,

где + А — границы характеристик абсолютной погрешности результатов измерения для данного содержания ГМФ, мг/кг;

+ д= + 5Л4_ср/100, значение относительной погрешности + 8представлено в таблице 2.

3.2 Спектрофотометрический метод определения содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ) по Уайту

Метод основан на определении оптической плотности ГМФ в УФ-диапазоне при длине волны 1= 284 нм. Чтобы исключить влияние других компонентов в данной области спектра, определяют:

-    оптическую плотность водного раствора меда по сравнению с таким же раствором после добавления в него 0,2 %-ного раствора бисульфита натрия при длине волны 284 нм;

-    оптическую плотность техже растворов при длине волны 336 нм.

Содержание ГМФ вычисляют после вычитания оптической плотности фона, измеренной при длине волны 336 нм.

3.2.1    Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

3.2.1.1    Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения при длинах волн 284 и 336 нм с допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1 %.

3.2.1.2    Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.

3.2.1.3    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±1,0 мг.

3.2.1.4    Стаканы стеклянные исполнения 1 вместимостью 50 см³ по ГОСТ 25336.

3.2.1.5    Пипетки 2-1-1-1 по ГОСТ 29227, ГОСТ29228.

3.2.1.6    Пипетки 1-1-5,2-2-25 по ГОСТ29169.

3.2.1.7    Фильтры обеззоленные.

3.2.1.8    Колбы мерные исполнения 1 вместимостью 50 и 100 см³ по ГОСТ 1770.

ГОСТ 31768-2012

3.2.1.9    Пробирки вместимостью 15 см³ по ГОСТ 1770.

3.2.1.10    Баня водяная.

3.2.1.11    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.2.1.12    Калий железистосинеродистый 3-водный [K₄Fe(CN)₆ • ЗН₂0], х. ч., по ГОСТ 4207.

3.2.1.13    Цинкуксуснокислый 2-водный [Zn(CH₃COO)₂ • 2Н₂0], х. ч., по ГОСТ5823.

3.2.1.14    Натрия бисульфит [NaHS0₃] с содержанием основного вещества не ниже 99 %, Acros Organics, каталожный номер № 7631-90-5.

3.2.1.15    Спирт этиловый технический поГОСТ 17299.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

3.2.2 Отбор и подготовка проб

3.2.2.1    Отбор проб — по ГОСТ 19792.

3.2.2.2    Подготовка проб — по 3.1.4.

3.2.3 Приготовление рабочих растворов

3.2.3.1    Приготовление растворов Карреза I и II

3.2.3.2    Приготовление растворов Карреза I и II осуществляют по 3.1.5.4,3.1.5.5.

3.2.3.3    Приготовление раствора бисульфита натрия

В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см³ переносят (0,20 + 0,01) г бисульфита натрия (см. 3.2.1.14), добавляют 20—30 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения. Объем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор готовят перед началом определения.

3.2.4 Проведение анализа и обработка результатов анализа

3.2.4.1 Проведение анализа

(5,00 + 0,1) г меда, подготовленного по 3.1.4, взвешивают в стакане (см. 3.2.1.4) вместимостью 50 см³, растворяют в 25 см³ свежекипяченой и остывшей дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³. Пипеткой добавляют две капли (~ 0,05 см³) раствора Карреза I по 3.1.5.4, перемешивают, добавляют две капли (~ 0,05 см³) раствора Карреза II по 3.1.5.5, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. Для подавления пенообразования пипеткой можно добавить одну каплю этанола (см. 3.2.1.15). Затем раствор фильтруют через бумажный фильтр (см. 3.2.1.7), первые 10 см³ фильтрата отбрасывают и получают раствор В.

В две пробирки (см. 3.2.1.9) пипеткой вносят по 5,0 см³ раствора В. В первую пробирку добавляют 5 см³ дистиллированной воды и тщательно перемешивают (анализируемый раствор). Во вторую пробирку добавляют 5 см³ 0,2 %-ного раствора бисульфита натрия, приготовленного по 3.2.3.2, и тщательно перемешивают (раствор сравнения).

Приготовление анализируемого раствора и раствора сравнения проводят в соответствии с таблицей 4.

Таблица 4

Растворы Анализируемый раствор, см3 Раствор сравнения, см3 Раствор В 5,0 5,0 Вода дистиллированная 5,0 — 0,2 %-ный раствор бисульфата натрия — 5,0

3.2.4.2 Измерение оптической плотности

В течение часа измеряют оптическую плотность анализируемой пробы меда относительно раствора сравнения при длинах волн 284 и 336 нм. Если оптическая плотность при длине волны 284 нм превышает значение 0,6, то для получения более низкого значения оптической плотности и повышения точности измерения анализируемый раствор разбавляют дистиллированной водой, а раствор сравнения — бисульфитом натрия в равных объемах.

В случае разбавления применяют формулу

3.2.4.3 Обработка результатов измерений

Содержание гидроксиметилфурфураля в анализируемом меде А4_ГМФ, мг/кг, рассчитывают по формуле

Л4гмф ⁼ (^284 — >4ззб) • 149,7 • D ■ 5//7?_меда,    (5)

где Л₂₈₄ — оптическая плотность при 284 нм;

А₃₃₆ — оптическая плотность при 336 нм;

_{14д 7} _126-1000-1000 ’    16830-10-5    ’

где 126 — молекулярный вес ГМФ, г/моль;

16830 — коэффициент молярной экстинкции водного раствора при 1= 284 нм, см²/ммоль;

10 — перевод 5 см³ в 50 см³;

1000 — перевод г в мг;

1000 — перевод г меда в кг;

5 — объем раствора В, см³;

D — фактор разбавления;

5 — теоретическая номинальная масса пробы, г; m а — масса анализируемой пробы меда, г.

Вычисления проводят с записью результата до второго десятичного знака.

Окончательный результат записывают с точностью до первого десятичного знака.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, если выполняется условие приемлемости

|Л4_Гмф,1 - Л4_Гмф,2 \^г, г = 2,8 а_г 0,01 М_гмф_Ср.

3.2.5 Точность метода

Статистический анализ результатов испытаний по оценке точности метода проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ISO 5725-1 и ГОСТ ISO 5725-6.

3.2.5.1    Повторяемость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений М_ШФ1 иЛ4_ГМФ2, которые получены в условиях повторяемости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, одна и та же лаборатория, один и тот же оператор, одно и то же оборудование, короткий промежуток времени), не должно превышать предела повторяемости г=2,8 а_г 0,01 М_гмфср. Значения ги ^представлены в таблицах 5 и 6.

3.2.5.2    Воспроизводимость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых измерений Л4_ГМФ1 иМ_{гаф 2}, которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости

|Л4гмф,1 - Л4гмФ,г| £R, R - 2,8 or 0,01 Л//_ГмФср.

Значения R и a_R представлены в таблицах 5 и 6.

3.2.5.3 При соблюдении всех регламентируемых методикой условий проведения измерений характеристики погрешности результата измерения с вероятностью Р= 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблицах 5 и 6.

Таблица 5 — Диапазон измерений, значения характеристик погрешности и ее составляющих при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений содержания ГМФ, мг/кг Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости) аг, % Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) gr, % Показатель точности (границы относительной погрешности) + 8, % 1,0—85,0 5,0 11,0 27,0