Купить ГОСТ 31653-2012 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
Устанавливает иммуноферментный метод определения содержания микотоксинов (афлатоксина В1, роридина А, охратоксина А, стеригматоцистина, Т-2 токсина, зеараленона, фумонизина В1) в кормах.
Стандарт распространяется на зерновые корма, зернобобовые кормовые культуры, искусственно высушенные и грубые корма, продукцию комбикормовой промышленности (комбикорма полнорационные, комбикорма-концентраты), сырье для производства кормов и кормовые добавки, за исключением кормовых добавок минерального происхождения и продукции органического синтеза.
Рекомендуется использовать вместо ГОСТ Р 52471-2005 (ИУС 12-2012)
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Термины, определения, обозначения и сокращения
4 Сущность иммуноферментного метода определения
5 Прецизионность метода
6 Требования к условиям выполнения измерений
7 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы
8 Подготовка к выполнению определения
9 Определение микотоксинов
10 Обработка результатов измерений
11 Требования безопасности
Приложение А (обязательное) Сведения по комплектации тест-систем
Приложение Б (рекомендуемое) Форма для записи результатов
Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов анализа
Дата введения | 01.07.2013 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.09.2013 |
Актуализация | 01.01.2021 |
20.07.2012 | Утвержден | Межгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации | 50 |
---|---|---|---|
18.09.2012 | Утвержден | Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии | 336-ст |
Разработан | ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии | ||
Издан | Стандартинформ | 2012 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
ГОСТ
31653-
2012
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2012
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты
межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Россельхозакадемии
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 50 от 20 июля 2012 г.)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК(ИСО 3166)004—97 |
Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Беларусь |
BY |
Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан |
KZ |
Г осстандарт Республики Казахстан |
Кыргызстан |
KG |
Кыргызстандарт |
Российская Федерация |
RU |
Росстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 сентября 2012 г. № 336-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31653-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52471-2005
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе «Национальные стандарты».
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе «Национальные стандарты»
© Стандартинформ, 2012
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
Таблица 2 — Концентрации вспомогательных и рабочих растворов микотоксинов (значения десятичных логарифмов концентраций рабочих растворов) | ||||||||||||||||||||||||||||
|
Внесение растворов в ячейки проводят осторожно, не касаясь наконечником их дна и стенок. В три ячейки, обозначенные на контуре значками 0 и КО, дозатором вливают по 0,1 см3 раствора КО, а в ячейку 0 вливают дополнительно 0,1 см3 раствора Р2.
Дозатором отмеряют по 0,1 см3 растворов К1, К2, КЗ, рабочих растворов экстрактов и вносят в ячейки в соответствии с принятым размещением на контуре.
9.7.1 При определении афлатоксина В.,, роридина А, стеригматоцистина, Т-2 токсина, зеарале-нона и фумонизина В-! дозатором отмеряют по 2,0 см3 раствора Р2 и вливают их в пробирки. Дозатором отмеряют по 0,04 см3 реактива АТ, соответствующего определяемому микотоксину, вливают его в раствор, перемешивают, наносят маркировку АТ.
9.7.2 При определении охратоксина А дозатором отмеряют 1,8 см3 раствора Р2 и 0,2 см3 реактива АНС, вливают их в пробирку. Дозатором отмеряют 0,04 см3 реактива АТ, соответствующего охратокси-ну А, вливают его в раствор, перемешивают и наносят маркировку АТ.
Дозатором отмеряют по 0,1 см3 раствора АТ, вливают во все ячейки, кроме одной, обозначенной на контуре значком 0.
Планшет аккуратно встряхивают, накрывают крышкой и выдерживают 1 ч при температуре от 22 °С до 25 °С, встряхивая через каждые 10—15 мин. Отмывку проводят по 8.6.5.
Дозатором отмеряют 4,0 см3 раствора Р2 и вливают его в пробирку. Дозатором отмеряют 0,02 см3 реактива ФК, вливают его в раствор, перемешивают, наносят маркировку ФК. Дозатором отмеряют по 0,17 см3 раствора ФК и вливают во все ячейки.
Инкубацию и отмывку ячеек планшета проводят по 9.9.
Дозатором отмеряют 3,2 см3 воды и вливают в пробирку. Дозатором отмеряют 0,8 см3 реактива СУБСТРАТ и 0,02 см3 реактива ФДА, добавляют их в воду, перемешивают. Дозатором отмеряют по 0,17 см3 полученного рабочего раствора и вливают его в каждую ячейку.
Планшет накрывают крышкой и выдерживают 45 мин в темноте при температуре от 22 °Сдо25°С.
Дозатором отмеряют по 0,05 см3 раствора для остановки ферментативной реакции по 8.4.1 и добавляют во все ячейки, планшет аккуратно встряхивают и оставляют на 10 мин при той же температуре.
Измерение оптической плотности проводят согласно инструкции к данному типу прибора. Значения ОП считывают с точностью до второго десятичного знака и заносят их в журнал сначала в правую рамку формы для записи результатов (см. 8.5.1) и затем в таблицу (см. 8.5.2), располагая в соответствии с номерами вариантов.
10.1 Рассчитывают среднеарифметическое значение оптической плотности для ячеек-дублей КО (ОП0) и затем среднеарифметические значения для ячеек-дублей всех остальных вариантов (ОП). Далее вычисляют значения ОП/ОП0 с точностью до 0,01 и выражают их в процентах.
10.2 В подготовленной системе координат точки пересечения найденных значений ОП/ОП0-100 % для вариантов К1, К2 и КЗ и значений логарифмов концентраций рабочих растворов микотоксина К1, К2 и КЗ соединяют. По значениям ОП/ОП0 • 100% для рабочего экстракта каждой пробы с помощью полученного графика определяют значения логарифмов концентраций микотоксина. Вычислением антилогарифмов этих значений с помощью микрокалькулятора находят соответствующие массовые концентрации микотоксина в рабочих растворах экстрактов в мкг/см3 с точностью до 0,00001.
10.3 Содержание микотоксина в каждой параллельной пробе X), мг/кг, вычисляют по формуле
(1)
Х,=
CVK
где С — массовая концентрация микотоксина в рабочем растворе экстракта, мкг/см3;
/л — навеска пробы, взятая для анализа, г;
V — объем смеси ацетонитрила и воды, взятый для экстракции, см3;
К — кратность разбавления экстракта при приготовлении рабочего раствора.
10.4 За результат определения принимают среднеарифметическое значение результатов изме^ рений, полученныхдля двух параллельных проб, если выполняется условие приемлемости:
(2)
100 < г01
2\Х,-Х2
гдеХ, иХ2 — результаты измерений содержания микотоксина для двух параллельных проб; готн — предел повторяемости, приведенный в таблице 1.
Числовое значение результата определения должно содержать не более двух значащих цифр.
10.5 Результат определения содержания микотоксинов в анализируемой пробе в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:
Х± (1,96 • Бцюе) ) мг/кг при доверительной вероятности Р = 0,95,
где X — содержание микотоксина в анализируемой пробе, мг/кг;
S/(TOa — стандартное отклонение промежуточной прецизионности, мг/кг.
Значение S/(TOE) рассчитывают по формуле
S/(TOE) = 0,01- Si (TOE) отн -X, (3)
где S/(TOE)0TH — относительное стандартное отклонение, приведенное в таблице 1.
При выполнении аналитических измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами.
Электробезопасность при работе с электроустановками — по ГОСТ 12.1.019.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения поГОСТ 12.4.009.
Выполнение измерений проводит лаборант или химик-аналитик, владеющий техникой ИФА и изучивший инструкцию по эксплуатации используемой аппаратуры.
9
Сведения по комплектации тест-систем
А.1 Реактив АТ — антитела к определяемому микотоксину.
А.2 Реактив АГ — белковый конъюгат соответствующего микотоксина.
А.З Реактив ФК — антивидовой ферментный конъюгат.
А.4 Реактив БУФЕР-ОТ (двадцатикратный концентрат) — солевой фосфатный буферный раствор с добавлением твина 20.
А.5 Реактив БУФЕР-Р1 (пятикратный концентрат) — карбонат-бикарбонатный буферный раствор.
А.6 Реактив БУФЕР-Р2 (десятикратный концентрат) — солевой фосфатный буферный раствор с добавлением твина 20 и бычьего сывороточного альбумина.
А.7 Реактив СУБСТРАТ (пятикратный концентрат) — фосфат-цитратный буферный раствор с добавлением пероксида водорода.
А.8 Реактив ФДА — о-фенилендиамин, 8 %-ный раствор.
А.9 Реактив АНС — аммонийная соль 8-анилин-1-нафталинсульфокислоты, 0,5 %-ный раствор.
Форма для записи результатов | |||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Приложение В (рекомендуемое)
Таблица для записи результатов анализа
Таблица В.1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
11
УДК 636.086.001.4:006.354 МКС 65.120 С19
Ключевые слова: корма, микотоксины, метод определения массовой концентрации, непрямой твердофазный иммуноферментный анализ
Редактор Н.В. Таланова Технический редактор Н.С. Гоишанова Корректор М.С. Кабашова Компьютерная верстка И.А. Напейкиной
Сдано в набор 03.10.2012. Подписано в печать 30.10.2012. Формат 60x84%. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 1,86. Уч.-изд. л. 1,35. Тираж 150 экз. Зак. 971.
ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru
Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.
1 Область применения...................................................1
2 Нормативные ссылки..................................................1
3 Термины, определения, обозначения и сокращения...............................2
4 Сущность иммуноферментного метода определения..............................2
5 Прецизионность метода.................................................3
6 Требования к условиям выполнения измерений..................................4
7 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы..............4
8 Подготовка к выполнению определения.......................................5
9 Определение микотоксинов..............................................7
10 Обработка результатов измерений.........................................9
11 Требования безопасности...............................................9
Приложение А (обязательное) Сведения по комплектации тест-систем...................10
Приложение Б (рекомендуемое) Форма для записи результатов.......................10
Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов анализа................11
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
КОРМА
Метод иммуноферментного определения микотоксинов
Feedstuffs.
Method of immunoenzyme mycotoxin determination
Дата введения — 2013—07—01
Настоящий стандарт устанавливает иммуноферментный метод определения содержания микотоксинов (афлатоксина В1, роридина А, охратоксина А, стеригматоцистина, Т-2 токсина, зеараленона, фумонизина В1) в кормах.
Настоящий стандарт распространяется на зерновые корма, зернобобовые кормовые культуры, искусственно высушенные и грубые корма, продукцию комбикормовой промышленности (комбикорма полнорационные, комбикорма-концентраты), сырье для производства кормов и кормовые добавки, за исключением кормовых добавок минерального происхождения и продукции органического синтеза.
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 8.315-97 Государственная система обеспечения единства измерений. Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 6709-72 Реактивы. Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13586.3-83 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 13979.0-86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 27262-87 Корма растительного происхождения. Методы отбора проб ГОСТ 27668-88 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб.
Издание официальное
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю «Национальные стандарты», составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.
3.1.2 основной раствор: Раствор реактива, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.
3.1.3 вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно из основного раствора и необходимый для приготовления других типов растворов.
3.1.4 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа.
3.2 В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:
ИФА — иммуноферментный анализ;
ОП — оптическая плотность;
АГ — антиген;
АТ — антитела;
АНС — 8-анилин-1-нафталинсульфокислота;
ФДА — о-фенилендиамин;
ФК — антивидовой ферментный конъюгат;
МСО — межгосударственный стандартный образец;
БУФЕР-ОТ — солевой фосфатный буферный раствор с добавлением твина 20;
БУФЕР-Р1 — карбонат-бикарбонатный буферный раствор;
БУФЕР-Р2 — солевой фосфатный буферный раствор с добавлением твина 20 и бычьего сывороточного альбумина;
СУБСТРАТ — фосфат-цитратный буферный раствор с добавлением пероксида водорода
Иммуноферментный метод основан на измерении содержания микотоксинов в пробах с помощью непрямого твердофазного конкурентного ИФА рабочих растворов экстрактов (рисунок 1).
Непрямой ИФА основан на способности микотоксинов взаимодействовать со специфичными антителами в условиях конкуренции с белковым конъюгатом микотоксина, нанесенным на поверхность ячеек планшета, — твердофазным антигеном.
Аналитический сигнал (регистрируемое значение оптической плотности), измеряющий степень взаимодействия АТ с АГ, обратно пропорционален массовой концентрации микотоксина в рабочем растворе.
2
Рисунок 1 — Основные этапы иммуноферментного метода определения
Показатели прецизионности метода представлены в таблице 1.
Таблица 1 — Показатели прецизионности иммуноферментного метода определения микотоксинов | ||||||||||||||||||||||||||||||
|
Расхождение между результатами двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, может превышать предел повторяемости г не более одного раза из двадцати.
Расхождение двух результатов анализа, полученных в условиях промежуточной (внутрилабора-торной) прецизионности (разное время, разные операторы, разное оборудование), может превышать значение предела промежуточной прецизионности RJ(TOE) не более одного раза из двадцати.
з
Измерения проводят в лабораторных условиях при температуре окружающего воздуха (23 ± 5) °С, атмосферном давлении (97 + 10) кПа, относительной влажности (65 ±15) %, частоте переменного тока (50 ± 5) Гц, напряжении в сети (220 + 10) В.
Фотометр вертикального типа фотометрирования, с диапазоном измерения оптической плотности от 0 до 2,5, с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного измерения не более ± 0,005 в комплекте с интерференционным светофильтром для длин волн от 490 до 492 нм.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104, высокого класса точности, с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более + 0,0002 г.
Шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры (130 ± 5) °С.
Шкаф холодильный любого типа, обеспечивающий среднюю температуру в холодильной камере не выше 10 °С.
Дистиллятор любого типа.
Калькулятор любого типа с логарифмической функцией.
Цилиндры 1-25(100,1000) поГОСТ 1770.
Колбы мерные 2-100 по ГОСТ 1770.
Дозаторы пипеточные для объемов доз 0,005—0,05; 0,02—0,2; 1 —5 см3 в комплектах со сменными одноразовыми наконечниками.
Микрошприц МШ-10 вместимостью 0,01 см3.
Микрошприцы вместимостью 0,1 см3 (категории Z 10,895-2) и 0,5 см3 (категории Z10,897-9) фирмы «Алдрич».
Планшет 96-ячеечный полистироловый наборный.
Пробирки П1-10 по ГОСТ 1770.
Колба коническая Кн-2-100(500,1000) по ГОСТ25336.
Воронки В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.
Флаконы вместимостью 2 см3 фирмы «Сигма» (категории Z 11,508-8).
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Бумага масштабно-координатная марки Н-1 по ГОСТ 334.
Допускается использование другого оборудования и средств измерений, позволяющих воспроизводить метрологические характеристики, указанные в настоящем стандарте. Могут быть использованы МСО по ГОСТ 8.315 состава растворов микотоксинов с аттестованными значениями массовых концентраций и предназначенные для выполнения ИФА.
Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204.
Натрий сернистокислый по нормативному документу.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Ацетонитрил, ч. д. а.
Препараты микотоксинов фирмы «Сигма»:
- афлатоксина В1 (категории А 6636);
- роридина А (категории R 7502);
- охратоксина А (категории О 1877);
- стеригматоцистина (категории S 3255);
- Т-2 токсина (категории Т 4887);
- зеараленона (категории Z 2125);
- фумонизина В1 (категории А1147).
Тест-системы для непрямого твердофазного конкурентного ИФА в комплектации с реактивами АТ, АГ, ФК, БУФЕР-ОТ, БУФЕР-Р1, БУФЕР-Р2, СУБСТРАТ, ФДА (приложение А), предназначенные для определения микотоксинов:
- афлатоксина В1 в диапазоне концентраций от 0,00004 до 0,001 мкг/см3;
- роридина А в диапазоне концентраций от 0,00004 до 0,001 мкг/см3;
- охратоксина А в диапазоне концентраций от 0,00008 до 0,002 мкг/см3;
- стеригматоцистина в диапазоне концентраций от 0,00008 до 0,002 мкг/см3;
4
- Т-2 токсина в диапазоне концентраций от 0,0004 до 0,01 мкг/см3;
- зеараленона в диапазоне концентраций от 0,0004 до 0,01 мкг/см3;
- фумонизина В1 в диапазоне концентраций от 0,001 до 0,1 мкг/см3.
Допускается использовать другие реактивы и материалы, по качеству не хуже указанных в данном стандарте.
Отбор проб и их подготовку к определению следует проводить по методам, указанным в нормативных документах на конкретную продукцию: комбикорма — по ГОСТ 13496.0, зерно — по ГОСТ 13586.3, жмыхи и шроты — по ГОСТ 13979.0, мука и отруби — по ГОСТ 27668, искусственно высушенные и грубые корма — по ГОСТ 27262. Средние пробы следует измельчать до порошкообразного состояния, размол средних проб рассыпных и гранулированных кормов проводить по ГОСТ 13979.0.
При проведении аналитических измерений одновременно используют две параллельные пробы.
Лабораторную стеклянную посуду следует мыть хромовой смесью, многократно промывать водопроводной водой и один раз ополаскивать дистиллированной водой. Высушивать посуду необходимо в сушильном шкафу.
Подготовку и проверку фотометра проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации и техническим описанием к прибору.
1,26 г безводного сернистокислого натрия помещают в колбу вместимостью 500 см3. Цилиндром отмеряют 80,0 см3 воды, вливают в колбу и перемешивают до полного растворения. Цилиндром отмеряют 20,0 см3 концентрированной серной кислоты, осторожно вливают кислоту в раствор, перемешивают и колбу закрывают пробкой.
Срок годности раствора при температуре (23 + 5) °С в вытяжном шкафу — 6 мес.
Цилиндром отмеряют 600 см3 ацетонитрила и переносят в коническую колбу вместимостью 1000 см3. Затем тем же цилиндром отмеряют 100 см3 дистиллированной воды, переносят ее в колбу, смесь перемешивают несколькими вращательными движениями и колбу закрывают пришлифованной пробкой. Хранят при температуре (23 ± 5) °С.
Срок годности смеси — 6 мес.
По 1 мг кристаллических микотоксинов количественно переносят в мерные колбы вместимостью 100 см3 смесью ацетонитрила и воды по 8.4.2.
Содержимое колб тщательно перемешивают до полного растворения микотоксинов, после чего объем в колбах доводят до метки той же смесью, содержимое колб вновь тщательно перемешивают, переносят в колбы вместимостью 100 см3 и закрывают пробкой. Массовые концентрации полученных растворов микотоксинов составляют 0,01 мг/см3 (10 мкг/см3). Основные растворы хранят в холодильнике в колбах, обернутых алюминиевой фольгой.
Срок годности основных растворов микотоксинов — 1г.
8.4.4.1 Вспомогательные растворы микотоксинов хранят в холодильнике во флаконах вместимостью 2 см3, обернутых алюминиевой фольгой.
Срок годности вспомогательных растворов микотоксинов — 1г.
Приготовление вспомогательных растворов микотоксинов из основных растворов проводят по 8.4.4.2—8.4.4.5.
8.4.4.2 Для приготовления растворов афлатоксина В1 и роридина А микрошприцем вместимостью 0,01 см3 отмеряют по 0,001 см3 основных растворов микотоксинов и переносят их во флаконы вмести-
5
мостью 2,0 см3. Микрошприцем вместимостью 0,5 см3 добавляют по 1,0 см3 смеси ацетонитрила и воды по 8.4.2, плотно закрывают их крышками, тщательно перемешивают раствори наносят на флаконы маркировку. Концентрации вспомогательных растворов составляют 0,00001 мг/см3(0,01 мкг/см3).
8.4.4.3 Для приготовления растворов охратоксина А и стеригматоцистина микрошприцем вместимостью 0,01 см3 отмеряют по 0,002 см3 основных растворов микотоксинов и переносят их во флаконы вместимостью 2,0 см3. Микрошприцем вместимостью 0,5 см3 добавляют по 1,0 см3 смеси ацетонитрила и воды по 8.4.2, плотно закрывают их крышками, тщательно перемешивают раствор и наносят на флаконы маркировку. Концентрации вспомогательных растворов составляют 0,00002 мг/см3 (0,02 мкг/см3).
8.4.4.4 Для приготовления растворов Т-2 токсина и зеараленона микрошприцем вместимостью 0,01 см3 отмеряют по 0,01 см3 основных растворов микотоксинов и переносят их во флаконы вместимостью 2,0 см3. Микрошприцем вместимостью 0,5 см3 добавляют по 0,99 см3 смеси ацетонитрила и воды по 8.4.2, плотно закрывают их крышками, тщательно перемешивают раствор и наносят на флаконы маркировку. Концентрации вспомогательных растворов составляют 0,0001 мг/см3 (0,1 мкг/см3).
8.4.4.5 Для приготовления раствора фумонизина В1 микрошприцем вместимостью 0,1 см3 отмеряют 0,1 см3 основного раствора микотоксина и переносят его во флакон вместимостью 2,0 см3. Микрошприцем вместимостью 0,5 см3 добавляют 0,9 см3 смеси ацетонитрила и воды по 8.4.2, плотно закрывают флакон крышкой, тщательно перемешивают раствор и наносят на флакон маркировку. Концентрация вспомогательного раствора составляет 0,001 мг/см3 (1,0 мкг/см3).
8.5.1 В рабочем журнале вычерчивают контур, состоящий из двух одинаковых рамок со столбцами по восемь клеток в каждом, число которых соответствует числу полосок планшета, взятых в работу.
Целесообразно анализировать число проб, кратное четырем, поскольку в этом случае требуется целое число полосок.
В клетках левой рамки значками 0, КО, К1, К2, КЗ и цифрами, обозначающими номер пробы, указывают расположение вариантов, при этом для вариантов 0 и К1 берут по одной клетке, для остальных — по две и придерживаются хаотического их расположения. Клетки правой рамки оставляют свободными. Форма для записи результатов и пример расположения вариантов приведены в приложении Б.
8.5.2 В рабочем журнале вычерчивают таблицу для записи результатов измерений (приложение В).
На масштабно-координатной бумаге вычерчивают перпендикулярные оси координат, наносят на оси абсцисс три разграничительных метки на расстоянии 35 мм друг от друга с цифровыми обозначениями, соответствующими десятичным логарифмам значений массовых концентраций калибровочных растворов микотоксинов К1, К2, КЗ, и общее обозначение оси — lg С, мкг/см3; на оси ординат — девять разграничительных меток на расстоянии 10 мм друг от друга с цифровыми обозначениями от 10 до 90 и общее обозначение оси — ОП/ОП0 • 100, %.
8.6.1 Для приготовления рабочих растворов реактивов используют дистиллированную воду.Нако-нечник меняют на другой (сменный) для приготовления каждого рабочего реактива и раствора. Здесь и далее приведены расходы реактивов на две полоски планшета, для другого числа полосок смешиваемые объемы пропорционально изменяют.
Дозатором отмеряют 3,2 см3 воды и вливают в пробирку, затем отмеряют 0,8 см3 реактива БУФЕР-Р1 и добавляют в ту же пробирку с водой. Дозатором отмеряют 0,02 см3 реактива АГ, вливают его в раствор, перемешивают и наносят маркировку АГ. Дозатором отмеряют по 0,165 см3 раствора АГ и вливают во все ячейки.
Ячейки, заполненные раствором АГ, накрывают стеклянной или пластиковой крышкой, соответствующей размеру планшета, и оставляют на 16 ч в холодильной камере холодильного шкафа.
Цилиндром отмеряют 57 см3 воды и переносят в коническую колбу вместимостью 100 см3. Дозатором добавляют 3,0 см3 реактива БУФЕР-ОТ, закрывают колбу пробкой, перемешивают, наносят маркировку ОТ.
6
Раствор из ячеек планшета, оставленный для инкубации в холодильной камере на 16 ч, сливают вытряхиванием. Дозатором отмеряют по 0,25 см3 раствора ОТ, вливают во все ячейки, оставляют на 2 мин и сливают вытряхиванием. Процедуру повторяют еще три раза.
Пробы массой 10 г помещают в конические колбы вместимостью 100 см3. Цилиндром отмеряют и добавляют к навескам грубых кормов (сено, солома) по 100 см3 смеси ацетонитрила и воды по 8.4.2, к пробам всех остальных кормов — по 50 см3 этой смеси. Колбы закрывают пробками, интенсивно встряхивают 3 или 4 раза круговыми движениями, не допуская разбрызгивания и попадания содержимого на горлышко и пробку, и оставляют на 16 ч при температуре от 18 °С до 22 °С. Затем содержимое колб с навесками проб интенсивно встряхивают 3 или 4 раза и фильтруют в другие колбы через бумажный фильтр, помещенный на воронку.
После окончания фильтрования колбы закрывают и наносят маркировки, соответствующие номерам проб. Полученные фильтраты именуются далее экстрактами.
Дозатором отмеряют 9,0 см3 воды, переливают в пробирку, добавляют 1,0 см3 реактива БУФЕР-Р2, перемешивают, наносят маркировку Р2.
Дозатором отмеряют по 0,27 см3 раствора Р2 и вливают их в пробирки. Дозатором отмеряют по 0,03 см3 экстрактов, вливают в пробирки, перемешивают и наносят маркировки, соответствующие номерам проб. Кратность разбавления экстрактов равна 10. При необходимости может быть использована кратность разбавления экстрактов более 10.
Рабочий раствор КО используют для дальнейшего разбавления рабочих растворов экстрактов и для приготовления рабочих растворов микотоксинов.
Дозатором отмеряют 1,35 см3 раствора Р2 и вливают его в пробирку. Дозатором отмеряют 0,15 см3 смеси ацетонитрила и воды (см. 8.4.2). Раствор перемешивают и наносят маркировку КО.
Объемы рабочих растворов не изменяют в зависимости от числа полосок планшета, взятых в работу.
Дозатором в одну пробирку отмеряют 0,27 см3 раствора Р2 и в две пробирки — по 0,24 см3 раствора КО. Шприцем вместимостью 0,1 см3 отмеряют 0,03 см3 вспомогательного раствора микотоксина и вливают в первую пробирку, раствор перемешивают и наносят маркировку К1.
Дозатором отмеряют 0,06 см3 раствора К1, вливают во вторую пробирку, раствор перемешивают и наносят маркировку К2.
Дозатором отмеряют 0,06 см3 раствора К2, вливают в третью пробирку, перемешивают и наносят
маркировку КЗ.
Дозатором в одну пробирку отмеряют 0,27 см3 раствора Р2 и в две пробирки — по 0,27 см3 раствора КО. Шприцем вместимостью 0,1 см3отмеряют 0,03 см3 вспомогательного раствора микотоксина и вливают в первую пробирку, раствор перемешивают и наносят маркировку К1.
Дозатором отмеряют 0,03 см3 раствора К1, вливают во вторую пробирку, раствор перемешивают и наносят маркировку К2.
Дозатором отмеряют 0,03 см3 раствора К2, вливают в третью пробирку, перемешивают и наносят маркировку КЗ.
Концентрации рабочих растворов микотоксинов, приготовляемых по 9.4, и соответствующие им значения десятичных логарифмов приведены в таблице 2.